TORCH检测方法
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原或抗体的量直接相关，用合适的分光光 度计或酶标仪进行比色，根据颜色反应的 深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化 效率很高，一般1分子酶在1min内可催化
数十万乃至上千万分子底物变为产物，故
可极大地放大反应结果，从而使测定方法 具有很高的敏感度。
我们实验室检测抗体的具体步骤是:先 将已知的可溶性抗原吸附于某一种固相载
Baidu Nhomakorabea
二、TORCH病原体的检测方法与结果分析 1、检测方法 检测TORCH病原体，临
床常用方法是聚合酶链反应（ PCR ），又称
体外酶促基因扩增法。
（1）标本采集 TOX采集EDTA防凝血 2ml，利用低渗法提取白细胞；RV、CMV采 取自凝血，离心提取血清；HSV、CT、UU、 NG、HPV等采取宫颈分泌物。
荧光定量基因扩增技术的优点是 特异性强，克服了假阳性的主要来源， 可准确定量出低至1个拷贝/微升的病
原体，真实地反映了病人体内病毒存
在与复制的情况，可减少血清学所致 的假阴性诊断。
2、结果分析
病原体DNA或RNA的
存在是病原体体内复制的直接标志，可
用于确定病原体感染。 阳性定量范围为103 —109 copies/ml，
底物经酶催化变为有色产物，产物的量
与标本中受检物质的量直接相关，用酶 标仪进行比色，根据颜色反应的深浅进 行定性分析。
2、结果分析
抗体中的IgM和IgG以
高浓度遍布全身，是全身性体液免疫反应
的主要效应分子。IgM是初次体液免疫应
答早期阶段产生的主要免疫球蛋白，主要 分布于血液中，抗全身感染的作用较强。 IgG是再次体液免疫应答产生的主要免疫 球蛋白，在血浆和组织液中各占50%左右，
抗原抗体的反应。这类检测技术的优点是
特异、灵敏、快速、能够定性和定量、易 于观察结果等。我们实验室检测TORCH抗 体采用的方法是酶免疫测定中的酶联免疫 吸附试验（ELISA），它是用酶标记抗体
或酶标记抗抗体进行的抗原抗体反应。
（1）标本采集和处理 病人无需
空腹，通过无菌性静脉穿刺采集自凝
血样本2ml，离心后留取血清，最好
故几乎分布于全身各组织及体液中。IgG
是唯一能通过胎盘的免疫球蛋白，故对新 生儿抗感染起重要作用。
TORCH感染后，一般首先
出现的是IgM，然后才产生IgG，
感染后5～6天IgM＞IgG，20～ 30天IgM达到高峰。感染后4～8
周IgG达到高峰，并维持多年至
终生。
抗体实验结果解释参考表
IgM
－ ＋ － ＋
性等问题，使其临床应用受到限制。实时荧光
定量PCR就是利用荧光信号检测整个PCR扩增 过程，获得在线描述PCR过程动力学曲线。其 原理是在常规PCR扩增体系中，加入一个与靶 基因序列特异互补的双荧光标记探针。探针的
5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基
团。当探针完整时，由于淬灭基团的淬灭作用， 荧光报告基团不能产生荧光发射。
减少不良妊娠结局的发生，对减少先天性
感染儿及病残儿的出生极为重要。
TORCH 感染临床检测最常用的
方法包括两种： TORCH抗体的检测 TORCH病原体的检测
一、TORCH抗体检测方法与结果分析
1、检测方法 用于测定液体标本中的 微量物质，最常用的是免疫标记技术，是 指用荧光素、酶、放射性同位素、发光剂 或电子致密物质标记抗体或抗原后进行的
也引起学者重视。
孕期TORCH感染通常无症状，但对胎
儿可造成危害，可导致自然流产、胎儿畸 形、死胎、胎儿生长受限（FGR）、早产及 新生儿疾病等严重并发症。虽然TORCH感染 对胎儿、新生儿能够产生不利影响，但经 积极治疗后再次受孕仍可分娩正常婴儿。 因此在孕前监测TORCH 感染，争取在孕前
进行干预，选择适宜的妊娠时机受孕，可
（2）技术原理 PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程，是在模板
DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在的
条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。 PCR由高温变性—低温退火—中温延伸三 个基本反应步骤构成：① 模板DNA的变 性：通过加热使模板DNA双螺旋的氢键断
裂，双链解离成单链，以便它与引物结合；
并保持其免疫活性；②抗原和抗体与酶结
合成的标记物，既能保持抗原或抗体的免 疫活性，又能保持酶的活性；③受检物中 的抗原或抗体与固相表面的抗体或抗原发 生免疫反应并结合在固相表面，此抗原抗
体复合物又能结合相应的酶标记物 ,
用洗涤方法除去未结合而游离的酶标记物， 继而加入酶反应的底物后，底物被酶催化
为有色产物，显色的程度与受检物中的抗
的变化。
其定量原理是：首先根据PCR扩增过程中， 产物信号（荧光）尚未出现前本底荧光 信号平均值加3个标准差确定为荧光阈值。 在PCR反应中设置原始已知定量膜板管进 行扩增，这样不同定量膜板管经过不同 循环次数达到荧光阈值，此时的循环次 数(Ct值：也称循环阈值) 就被记录下来。 该循环参数和PCR 体系中起始DNA量的 对数值之间有严格的线性关系，根据循 环参数Ct 值就可以准确计算出起始DNA 的数量。即能得出待测样品原始膜板的 数量，从而实现样品膜板的定量。
体表面，并保持其免疫活性。加入待检血
清，患者血清与固相载体表面的抗原接触 起反应，如血清中有相应特异性抗体存在， 则抗体会与抗原结合在固相载体上，形成 抗原—抗体复合物，洗涤去除过多的抗体。
然后加入用辣根过氧化物酶标记的抗体复
合物，后者将会与抗原—抗体复合物结合。
通过洗涤，洗去未反应的酶标记抗体， 这样结合在固相载体上的酶量与标本中 受检物质的量成一定的比例。加入酶反 应的底物四甲基联苯胺（TMB）后，
是新鲜血清用于测定，如不能立即测
定可保存于-20℃，不能反复冻融。溶 血、高脂血症、黄疸可能影响检测结 果。
（2）检测原理 酶联免疫吸附试验
（ELISA）是根据酶免疫测定原理发展的 一种固相免疫酶技术，目前广泛应用于各 种抗原和抗体的检测。ELISA的基本原理 是：①抗原和抗体能与固相载体表面结合
＜103 copies/ml为阴性。
谢谢
TORCH感染检测方法 与结果分析
1971 年Nahmias 等首先描述了病原体 感染对胎儿的致畸作用，他将数种能引起孕 期宫内感染，甚至造成先天缺陷或发育异常 的病原体英文名词的第一个字母组合而成 “TORCH”，即弓形虫 ( TOX) 、风疹病毒 (RV) 、巨细胞病毒(CMV) 、单纯疱疹病毒 (HSV)、其他(OTH)。其他病原体感染包括 细小病毒（B19）、沙眼衣原体（CT）、解 脲支原体（UU）等。近几年人乳头瘤病毒 （HPV）、淋球菌（GC）感染率明显上升，
：
IgG
－ － ＋ ＋
结 果 解 释
从未感染过。易感人群 两周后复查，结果相同， 考虑为近期感染 远期感染过，近期无感染 原发性感染或再感染
孕妇血清中IgM 阳性是诊断活动性感染重 要而可靠的指标，但由于它实际检测的是人体 对TORCH感染的免疫反应状态，因此对那些处 于潜伏状态不排毒的孕妇，或免疫系统发育不 完善的孕妇，易出现漏检。 随着分子生物学技术的发展，根据检测病 原体DNA 或RNA 的水平对感染进行诊断就更 为直接，并越来越受到围产医学界的关注。 TORCH抗体的检测一般用于孕前和孕早期 病原体感染的筛查，IgM阳性妇女需进一步作 病原体DNA或RNA检测以明确感染的存在。
PCR 产物可用凝胶电泳分析法分
析结果。常用的是琼脂糖凝胶电泳，
在配制琼脂糖时加入 0.5μg/ml 的溴 化乙锭（EB），或在电泳后凝胶用 电泳缓冲液配制的同样浓度的EB液 染色 15-30min ，紫外灯下观察结果 并拍照记录。
我们实验室采用的是实时荧光定量PCR方
法，常规PCR存在着不能定量和产物污染假阳
当有靶基因存在时，在PCR的复性延伸期， 标记探针即与靶基因互补结合，新合成链
从引物开始，沿膜板延伸，当新链延伸至
标记探针结合部时，DNA聚合酶具有5’— 3’的外切酶活性，将探针5’端荧光报告基 团切下。从而，荧光报告基团淬灭作用被 解除，产生荧光发射。通过荧光光谱分析
仪连续不断地检测反应体系中的荧光信号
② 模板DNA与引物的退火（复性）：引 物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
当温度突然降低时由于模板DNA的分子结 构较引物要复杂的多，而且反应体系中引 物DNA的量大大多于模板DNA，使引物和 其互补的模板在局部形成杂交链，而模板 DNA之间互补的机会较少。③ 引物的延伸： 在DNA聚合酶和四种脱氧核糖三磷酸底物 及Mg2存在的条件下，模板-引物结合物， 合成一条新的与模板DNA链互补的半保留 复制链。以上三步为一循环，每一循环的 产物可以作为下一个循环的模板。这样反 复循环以上反应过程就能将待测目的基因 数量呈指数倍数扩增放大几百万倍。
数十万乃至上千万分子底物变为产物，故
可极大地放大反应结果，从而使测定方法 具有很高的敏感度。
我们实验室检测抗体的具体步骤是:先 将已知的可溶性抗原吸附于某一种固相载
Baidu Nhomakorabea
二、TORCH病原体的检测方法与结果分析 1、检测方法 检测TORCH病原体，临
床常用方法是聚合酶链反应（ PCR ），又称
体外酶促基因扩增法。
（1）标本采集 TOX采集EDTA防凝血 2ml，利用低渗法提取白细胞；RV、CMV采 取自凝血，离心提取血清；HSV、CT、UU、 NG、HPV等采取宫颈分泌物。
荧光定量基因扩增技术的优点是 特异性强，克服了假阳性的主要来源， 可准确定量出低至1个拷贝/微升的病
原体，真实地反映了病人体内病毒存
在与复制的情况，可减少血清学所致 的假阴性诊断。
2、结果分析
病原体DNA或RNA的
存在是病原体体内复制的直接标志，可
用于确定病原体感染。 阳性定量范围为103 —109 copies/ml，
底物经酶催化变为有色产物，产物的量
与标本中受检物质的量直接相关，用酶 标仪进行比色，根据颜色反应的深浅进 行定性分析。
2、结果分析
抗体中的IgM和IgG以
高浓度遍布全身，是全身性体液免疫反应
的主要效应分子。IgM是初次体液免疫应
答早期阶段产生的主要免疫球蛋白，主要 分布于血液中，抗全身感染的作用较强。 IgG是再次体液免疫应答产生的主要免疫 球蛋白，在血浆和组织液中各占50%左右，
抗原抗体的反应。这类检测技术的优点是
特异、灵敏、快速、能够定性和定量、易 于观察结果等。我们实验室检测TORCH抗 体采用的方法是酶免疫测定中的酶联免疫 吸附试验（ELISA），它是用酶标记抗体
或酶标记抗抗体进行的抗原抗体反应。
（1）标本采集和处理 病人无需
空腹，通过无菌性静脉穿刺采集自凝
血样本2ml，离心后留取血清，最好
故几乎分布于全身各组织及体液中。IgG
是唯一能通过胎盘的免疫球蛋白，故对新 生儿抗感染起重要作用。
TORCH感染后，一般首先
出现的是IgM，然后才产生IgG，
感染后5～6天IgM＞IgG，20～ 30天IgM达到高峰。感染后4～8
周IgG达到高峰，并维持多年至
终生。
抗体实验结果解释参考表
IgM
－ ＋ － ＋
性等问题，使其临床应用受到限制。实时荧光
定量PCR就是利用荧光信号检测整个PCR扩增 过程，获得在线描述PCR过程动力学曲线。其 原理是在常规PCR扩增体系中，加入一个与靶 基因序列特异互补的双荧光标记探针。探针的
5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基
团。当探针完整时，由于淬灭基团的淬灭作用， 荧光报告基团不能产生荧光发射。
减少不良妊娠结局的发生，对减少先天性
感染儿及病残儿的出生极为重要。
TORCH 感染临床检测最常用的
方法包括两种： TORCH抗体的检测 TORCH病原体的检测
一、TORCH抗体检测方法与结果分析
1、检测方法 用于测定液体标本中的 微量物质，最常用的是免疫标记技术，是 指用荧光素、酶、放射性同位素、发光剂 或电子致密物质标记抗体或抗原后进行的
也引起学者重视。
孕期TORCH感染通常无症状，但对胎
儿可造成危害，可导致自然流产、胎儿畸 形、死胎、胎儿生长受限（FGR）、早产及 新生儿疾病等严重并发症。虽然TORCH感染 对胎儿、新生儿能够产生不利影响，但经 积极治疗后再次受孕仍可分娩正常婴儿。 因此在孕前监测TORCH 感染，争取在孕前
进行干预，选择适宜的妊娠时机受孕，可
（2）技术原理 PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程，是在模板
DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在的
条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。 PCR由高温变性—低温退火—中温延伸三 个基本反应步骤构成：① 模板DNA的变 性：通过加热使模板DNA双螺旋的氢键断
裂，双链解离成单链，以便它与引物结合；
并保持其免疫活性；②抗原和抗体与酶结
合成的标记物，既能保持抗原或抗体的免 疫活性，又能保持酶的活性；③受检物中 的抗原或抗体与固相表面的抗体或抗原发 生免疫反应并结合在固相表面，此抗原抗
体复合物又能结合相应的酶标记物 ,
用洗涤方法除去未结合而游离的酶标记物， 继而加入酶反应的底物后，底物被酶催化
为有色产物，显色的程度与受检物中的抗
的变化。
其定量原理是：首先根据PCR扩增过程中， 产物信号（荧光）尚未出现前本底荧光 信号平均值加3个标准差确定为荧光阈值。 在PCR反应中设置原始已知定量膜板管进 行扩增，这样不同定量膜板管经过不同 循环次数达到荧光阈值，此时的循环次 数(Ct值：也称循环阈值) 就被记录下来。 该循环参数和PCR 体系中起始DNA量的 对数值之间有严格的线性关系，根据循 环参数Ct 值就可以准确计算出起始DNA 的数量。即能得出待测样品原始膜板的 数量，从而实现样品膜板的定量。
体表面，并保持其免疫活性。加入待检血
清，患者血清与固相载体表面的抗原接触 起反应，如血清中有相应特异性抗体存在， 则抗体会与抗原结合在固相载体上，形成 抗原—抗体复合物，洗涤去除过多的抗体。
然后加入用辣根过氧化物酶标记的抗体复
合物，后者将会与抗原—抗体复合物结合。
通过洗涤，洗去未反应的酶标记抗体， 这样结合在固相载体上的酶量与标本中 受检物质的量成一定的比例。加入酶反 应的底物四甲基联苯胺（TMB）后，
是新鲜血清用于测定，如不能立即测
定可保存于-20℃，不能反复冻融。溶 血、高脂血症、黄疸可能影响检测结 果。
（2）检测原理 酶联免疫吸附试验
（ELISA）是根据酶免疫测定原理发展的 一种固相免疫酶技术，目前广泛应用于各 种抗原和抗体的检测。ELISA的基本原理 是：①抗原和抗体能与固相载体表面结合
＜103 copies/ml为阴性。
谢谢
TORCH感染检测方法 与结果分析
1971 年Nahmias 等首先描述了病原体 感染对胎儿的致畸作用，他将数种能引起孕 期宫内感染，甚至造成先天缺陷或发育异常 的病原体英文名词的第一个字母组合而成 “TORCH”，即弓形虫 ( TOX) 、风疹病毒 (RV) 、巨细胞病毒(CMV) 、单纯疱疹病毒 (HSV)、其他(OTH)。其他病原体感染包括 细小病毒（B19）、沙眼衣原体（CT）、解 脲支原体（UU）等。近几年人乳头瘤病毒 （HPV）、淋球菌（GC）感染率明显上升，
：
IgG
－ － ＋ ＋
结 果 解 释
从未感染过。易感人群 两周后复查，结果相同， 考虑为近期感染 远期感染过，近期无感染 原发性感染或再感染
孕妇血清中IgM 阳性是诊断活动性感染重 要而可靠的指标，但由于它实际检测的是人体 对TORCH感染的免疫反应状态，因此对那些处 于潜伏状态不排毒的孕妇，或免疫系统发育不 完善的孕妇，易出现漏检。 随着分子生物学技术的发展，根据检测病 原体DNA 或RNA 的水平对感染进行诊断就更 为直接，并越来越受到围产医学界的关注。 TORCH抗体的检测一般用于孕前和孕早期 病原体感染的筛查，IgM阳性妇女需进一步作 病原体DNA或RNA检测以明确感染的存在。
PCR 产物可用凝胶电泳分析法分
析结果。常用的是琼脂糖凝胶电泳，
在配制琼脂糖时加入 0.5μg/ml 的溴 化乙锭（EB），或在电泳后凝胶用 电泳缓冲液配制的同样浓度的EB液 染色 15-30min ，紫外灯下观察结果 并拍照记录。
我们实验室采用的是实时荧光定量PCR方
法，常规PCR存在着不能定量和产物污染假阳
当有靶基因存在时，在PCR的复性延伸期， 标记探针即与靶基因互补结合，新合成链
从引物开始，沿膜板延伸，当新链延伸至
标记探针结合部时，DNA聚合酶具有5’— 3’的外切酶活性，将探针5’端荧光报告基 团切下。从而，荧光报告基团淬灭作用被 解除，产生荧光发射。通过荧光光谱分析
仪连续不断地检测反应体系中的荧光信号
② 模板DNA与引物的退火（复性）：引 物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
当温度突然降低时由于模板DNA的分子结 构较引物要复杂的多，而且反应体系中引 物DNA的量大大多于模板DNA，使引物和 其互补的模板在局部形成杂交链，而模板 DNA之间互补的机会较少。③ 引物的延伸： 在DNA聚合酶和四种脱氧核糖三磷酸底物 及Mg2存在的条件下，模板-引物结合物， 合成一条新的与模板DNA链互补的半保留 复制链。以上三步为一循环，每一循环的 产物可以作为下一个循环的模板。这样反 复循环以上反应过程就能将待测目的基因 数量呈指数倍数扩增放大几百万倍。