细菌培养的流程介绍

血培养是如何从标本中获得细菌培养及药敏报告的？

1、常规的血培养标本需采集两管，一份为需氧菌培养，一份为厌氧菌培养。血培养瓶为密封装置，其底部含有培养基、显色剂。当血液标本中有细菌生长时，细菌会产生二氧化碳，二氧化碳可造成密封样本内气压和PH值的改变，显色剂也会变色。因此血培养中获得阳性结果。若培养5天后显色剂没有变化，则提示样本中没有细菌生长，血培养获得阴性结果。

2、血培养标本出现阳性结果后，采集少量血培养样本，在玻片上进行图片进行革兰染色进行初步鉴定，并向临床出具初步报告。同时在培养皿中进行接种。接种方法为分区划线法。其原理是，在一个培养皿中，通过划线的方式将样本进行充分的不定量的倍比稀释，使得培养皿中生成可分离的单个细菌生成的单克隆菌落。若不进行分区划线，培养皿中的菌落会非常密集，不便于挑取菌落进行鉴定，鉴定后向临床出具二级报告。我院采用三区划线，某些医院要求高会采用五区划线，通常三区划线后就可获得有效的单克隆菌落。

培养皿中所使用的培养基会根据细菌的特征进行选择，常用的有普通“血琼脂培养基”、“巧克力培养基”。某些特殊细菌需要特殊的培养基。

3、培养皿中获取单克隆菌落后，需要根据经验鉴定哪种细菌为优势菌，哪种细菌为致病菌，哪种细菌为定植菌。选择致病菌进行再次培养，并将其定容为1个“麦氏浓度”。此时开始进行药敏鉴定。经典的药敏方法有2种。1、倍比稀释法：将某种抗生素进行精确的倍比稀释，观察在哪种浓度的抗生素培养基中细菌会出现生长与不生长的交界。此浓度为该种抗生素对该细菌的“最低抑菌浓度（MIC）”。该方法虽然精确定量，但耗时耗力，一种抗生素需要配置多个浓度，一种细菌需要选择多种抗生素进行药敏鉴定，在此基础上，发展出“纸片法”。2、纸片法：在固态培养皿中均匀进行细菌接种，以培养皿中心为界进行扇形分区。将含有某种抗生素的纸片放在一个区域中，多个区域可以放置多种抗生素纸片，因此在一个培养皿中就可以对多种抗生素进行药敏鉴定。要求每个抗生素纸片距离边界不少于10mm，每两个纸片间的距离，不少于14mm。经过一段时间培养，细菌生长至肉眼可见的菌落。若细菌对某种抗生素敏感，则在某种抗生素纸片的周边形成一个没有细菌菌落生长的圆形空白区域。该圆形空白区域的大小与该抗生素对于该细菌的最低抑菌浓度成负相关。最低抑菌浓度越低，空白区域越大。采用纸片法可以获得半定量的药敏结果，“敏感、中介、耐药”。本院采用的药敏鉴定方法为自动化的药敏鉴定卡。药敏鉴定卡的模式如下图，一个纵列中含有多种抗生素海绵，一个药敏鉴定卡含有多个纵列，即一个药敏鉴定卡可以对多个菌株同时进行药敏鉴定。1个麦氏浓度的菌液均匀的接种于每个抗生素海绵中，机器可以自动感知某种抗生素海绵中细菌的生长情况，从而获得药敏结果。