实验四-酶的竞争性抑制作用

实验四酶的竞争性抑制作用

一、目的要求：

通过实验加深对酶的竞争性抑制作用的了解

二、实验原理：

与底物化学结构类似的抑制剂，能与底物竞争和酶活性中心的结合、抑制酶的活性，这种类型的抑制为竞争性抑制。竞争性抑制的程度由抑制剂与底物相对浓度决定。如果底物浓度不变，酶活性被抑制的程度随抑制剂的浓度增加而增强。反之，如果抑制剂浓度不变，则酶活性随底物浓度的增加而逐渐恢复。

本实验观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响。琥珀酸脱氢酶的活性，在隔绝空气的条件下，可从加入的甲烯蓝褪色情况来观察。

COOH COOH

︳︳

CH2 琥珀脱氢酶CH

︳+ 甲烯蓝——————→‖+ 甲烯白

CH2 CH

︳︳

COOH COOH

三、实验材料

1、试剂：

（1）0.2 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸23.618g，用蒸馏水配成约600ml ,用5mol/L NaOH 调pH至7.4，再加水至1000ml

（2）0.02mol/L琥珀酸：用0.2 mol/L 琥珀酸稀释10倍

（3）0.2 mol/L 丙二酸：称取丙二酸22.92g ，用蒸馏水配成约600ml ，5mol/L NaOH调pH 至7.4，再加水至1 000ml

（4）0.02mol/L丙二酸：用0.2 mol/L丙二酸稀释10倍

（5）0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）：取0.2 mol/L Na2HPO4 19ml ，加蒸馏水至200ml (6) 0.02%甲烯蓝

（7）液体石蜡

2、器材

（1）小试管及试管架（2）吸量管（10ml *1）及滴管（8支）（3）研钵

四、实验方法

1、心肌匀浆的制备：取动物（鼠、猪等）心肌1g，置研钵中，剪碎，研磨成匀浆，再加入0.1mol/L 磷酸盐缓冲液10ml ，磨匀，备用

2、取小试管5支并编号，按下表操作：

液体石蜡 5 5 5 5 5

甲烯蓝褪色情况

加入液体石蜡后

时间记录

甲烯蓝褪色时间

记录

所用时间：

加入液体石蜡后，室温放置。观察各管甲烯蓝褪色情况。

五、结果处理

记录各管甲烯蓝褪色情况，并解释结果。

六、注意事项

1. 心肌要用新鲜的

2.注意各种试剂加入的顺序，混匀各管已加入的试剂后马上加入液体石蜡

3.及时、仔细观察颜色变化

4．观察结果过程中，不要摇动试管，以免溶液与空气接触而使甲烯白重新被氧化变蓝七、思考题

在此实验基础上，如何设计实验来观察“增加底物浓度，酶的竞争性抑制作用可以降低或消除”的现象？