关于生物制药组实训实习报告及心得体会

生物制药组实训实习报告

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目录

一、实训主要内容： (3)

二、试剂的配制、培养基的配制 (5)

1. 试剂的配制 (5)

2. 培养基的配制 (6)

3. 醋酸钠-醋酸缓冲液pH (7)

4. 1%可溶性淀粉溶液 (7)

三、实验前的准备 (7)

1. 灭菌 (7)

2. 23号菌种的培养 (9)

3. 固体平板培养基的制备 (9)

四、实验内容及操作 (9)

1. 接种培养 (9)

2. 活菌数检测 (10)

3. 酶活检测 (12)

4. 菌液浊度检测 (14)

5. 酶蛋白的提取 (15)

6. 细菌的染色和镜检 (16)

五、数据分析 (17)

1. 活菌数随培养时间的变化 (17)

2. 酶活力随培养时间的变化 (17)

3. 菌液浊度随培养时间的变化 (17)

4. pH对提取的酶蛋白的变化 (17)

六、实验总结 (18)

实训主要内容：

活菌数的检测、酶活检测、菌液浊度的检测、酶蛋白的提取

表-1

根据实训时间，列出下列表格，以便后续的实验

表格1注：红色标记为未检测项目。

试剂的配制、培养基的配制

试剂的配制

表格2

由于这些母液上个班配的还没用完，所以也就没再配。

培养基的配制

表格3

表格4

醋酸钠-醋酸缓冲液pH

表格5

1%可溶性淀粉溶液

称取1.24g可溶性淀粉，用约15ml冷的蒸馏水充分溶解混匀，取约70ml沸腾的蒸馏水，将已经混匀的淀粉悬浮液倒入沸水中，边倒边用玻璃棒搅拌，使淀粉溶解。冷却后，用冷的蒸馏水定容到100ml，备用。

实验前的准备

灭菌

将配好的发酵培养基分装于15个规格为100ml锥形瓶，9ml/瓶

250ml锥形瓶+150ml蒸馏水5瓶

将配好的营养琼脂培养基分装于规格为250ml锥形瓶，2瓶置于高压蒸汽灭菌锅121℃，20min灭菌

图0-1

图0-2

23号菌种的培养

取23号菌种在超净工作台内进行接种，100ul/瓶，共3瓶，供后续实验菌种的来源。置于摇床中培养30℃，100rmp/min。

图0-3

图0-4

固体平板培养基的制备

取灭好菌的营养琼脂培养基，在超净工作台里倒入平板中，大约15ml/个。供后续检测活菌数使用。

图0-5

图0-6

注意事项：在配制营养琼脂培养基时，要先加少量水进行溶解搅拌，再加热水进行充分溶解，最后煮沸使琼脂全部溶解，否则琼脂没有溶解就分装，灭菌后就出现上图现象，有的培养基太硬，有的太软。

实验内容及操作

接种培养

根据表2时间表进行接种培养，100ul/瓶，置于摇床30℃，100rmp/min培养。

图0-1

活菌数检测

根据表2时间表进行操作，取菌液100ul+900ul无菌水于EP管中进行连续梯度稀释，然后取100ul在平板培养基上进行涂布。放于培养箱中培养，得下表数据。

表0-1

图0-2

图0-3

图0-4

图0-5（为6h失败平板）

注意事项:菌液稀释倍数要合理，在进行用涂布棒涂布的时候，涂布棒在酒精灯上灼烧后一定要冷却，否则会烫死菌种。涂布要均匀，多来回涂几次，否则就成上图6h失败平板

酶活检测

计算公式：酶活力（U）={[（A-空白）-（B-空白）-（对照-空白）]×V

标/t

反应

}×D（倍数

值）×103

根据表2时间表进行对应的时间段酶活的检测，,按照下表进行操作

表0-2根据上表进行操作得到以下数据

表0-3

图0-6

图0-7

图0-8

图0-9

注意事项：在使用仪器时，样品室使用完都要清洗，样品室的石英窗应保持清洁，样品室石英窗不应有污染。

菌液浊度检测

按照培养时间的不同对菌液稀释10倍操作是取0.5ml菌液+4.5ml水，共3只，所测结果取平均值。对菌液稀释50倍操作是取1ml菌液+4ml水，再从中取出0.5ml+4.5ml水，即得稀释50倍，共3只，所测结果取平均值。下表为所得数据

表0-4

图0-10

酶蛋白的提取

取培养菌液于离心管中，进行5000rmp，10min离心。取上清，加入50ml冰的无水乙醇，放入4℃冰箱1h。5000rmp，20min离心。弃上清，加入1ml蒸馏水，混匀溶解。改变醋酸钠-醋酸缓冲液pH进行酶活力检测，得以下数据

表0-5

图0-11

注意事项：加入的无水乙醇一定是要冰的，不然容易使酶失活。

细菌的染色和镜检

1. 滴加少量种子液于干净载玻片上，用镊子置于酒精灯上端干燥。

2. 待到种子液干燥后，滴加结晶紫染液于细菌涂抹处，使其布满菌膜，染色1min，用蒸馏水洗去多余染液，甩干载玻片上的积水。

3. 滴加碘液覆盖菌膜，维持1min，用蒸馏水洗去，将载玻片上的积水甩干。

4. 加95%酒精加于载玻片上脱色，左右摇动使其脱色均匀，脱色时间约为30s，脱色后立即用蒸馏水冲洗干净。

5. 滴加稀释复红染液于菌膜上，覆盖住菌膜，染色1min。用蒸馏水冲洗去染液，甩去载玻片上积水。

6. 待到载玻片上积水干燥后置于显微镜下观察细菌形态、颜色。