实验四、基因组DNA的提取和检测(阳成伟)
dna提取与鉴定实验报告
dna提取与鉴定实验报告《DNA提取与鉴定实验报告》DNA提取与鉴定是一项重要的实验技术，它在生物学、医学、犯罪学等领域都有着广泛的应用。
本实验报告将介绍DNA提取与鉴定的实验过程以及结果分析。
首先，我们需要准备实验所需的样本。
在本次实验中，我们选择了番茄作为实验样本。
番茄的细胞中含有丰富的DNA，是进行DNA提取的理想材料。
我们先将番茄样本切碎并加入提取液中，通过离心等步骤将DNA从细胞中分离出来。
经过提取过程，我们成功地获得了番茄DNA的提取物。
接下来，我们对提取得到的DNA进行鉴定。
通过PCR扩增和电泳分析，我们成功地对番茄DNA进行了鉴定。
PCR扩增是一种常用的DNA复制技术，它可以将DNA扩增成大量的复制物，从而方便后续的分析。
电泳分析则是通过电场作用将DNA分子按大小进行分离，从而得到DNA的特征条带。
通过PCR扩增和电泳分析，我们确认了提取得到的DNA样本的纯度和完整性。
最后，我们对实验结果进行了分析。
通过实验，我们成功地提取并鉴定了番茄DNA，证明了提取与鉴定实验的可行性。
这项实验为我们提供了一个重要的技术平台，可以在日后的研究中应用到DNA提取与鉴定的相关领域，为生物学、医学和犯罪学等领域的研究工作提供了重要的技术支持。
总的来说，DNA提取与鉴定实验是一项重要的实验技术，它在生物学、医学、犯罪学等领域都有着广泛的应用前景。
通过本次实验，我们对DNA提取与鉴定的实验过程有了更深入的了解，为今后的研究工作提供了重要的技术支持。
希望通过我们的努力，可以为相关领域的研究工作做出更大的贡献。
基因组DNA的提取及电泳鉴定
1) 破碎细胞； 2) 去除蛋白质，糖类等等生物大分子；由于 真核细胞基因组较大，在纯化出的ＤＮＡ的操 作中应注意动作轻柔，且在低温下进行，以最 大限度地减少机械和化学作用对ＤＮＡ的剪切， 从而获得相对完整的ＤＮＡ 3) 沉淀核酸
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SDS裂解 蛋白酶K消化
酚氯仿抽提
琼脂糖电泳 PCR
乙醇沉淀
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二、 常用试剂
上样液成份： 1．0.25%溴酚蓝或/和0.25%二甲苯青（样品指示剂） 2．40%蔗糖 或 30% 甘油（增加样品比重），利于加样。 电泳缓冲液： TAE 为例 T: Tris碱 A: 冰醋酸 E: EDTA 提供有一定缓冲能力的pH值(8.0), EDTA可抑制DNase 的作用。 致癌剂 溴化乙锭（EB）：染色剂 一种荧光染料，分子呈扁平型，可嵌入到DNA或RNA 的碱基之间。在紫外光激发下能发出红色的荧光。
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取下硝酸纤维素膜
实验第四部分、 DNA质量检测 －－－琼脂糖电泳
一、 原理
DNA分子在 pH 8.0 的电泳环境中，带负电 荷，在一定强度电场力的作用下，从负极向正极 迁移。 电泳样品载体琼脂糖是一种线性多糖聚合物， 煮沸冷却后形成网格样结构，电泳中起分子筛作 用。通常情况下，分子量大的 DNA 电泳过程中由 于受到的阻力较大，泳动速率较慢，反之，分子 量较小的DNA片段跑在前面。
55抬起加样器抬起加样器估计体积是否正确估计体积是否正确将外壁液体用容器口引流回去将外壁液体用容器口引流回去6吸头内有液体时不能将加样器倒置或平放以防液体倒流损吸头内有液体时不能将加样器倒置或平放以防液体倒流损贴容器内壁将液体贴容器内壁将液体匀速匀速打出加样器推到打出加样器推到第二挡第二挡
分子生物学实验
注意事项：
DNA提取与测序实验报告
DNA提取与测序实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取 DNA 的基本原理和方法。
2、熟悉 DNA 测序的操作流程和数据分析。
二、实验原理DNA 提取原理DNA 在细胞中以与蛋白质结合的形式存在。
提取 DNA 的基本原理是利用化学试剂和物理方法，破坏细胞膜和核膜，使蛋白质变性，从而将 DNA 从细胞中释放出来，然后通过离心等方法将 DNA 与其他杂质分离。
DNA 测序原理DNA 测序是指测定 DNA 分子中核苷酸的排列顺序。
目前常用的测序方法是 Sanger 双脱氧链终止法。
在测序反应中，DNA 聚合酶在模板的引导下，将脱氧核苷酸（dNTP）逐个加到引物的3’OH 末端，合成新的 DNA 链。
当加入双脱氧核苷酸（ddNTP）时，由于其3’位置没有羟基，不能继续延伸，导致 DNA 链合成终止。
通过在不同的反应管中分别加入不同的 ddNTP，产生一系列长度不同的 DNA 片段。
这些片段经过电泳分离和检测，根据片段的长度和末端碱基，就可以确定 DNA 的序列。
三、实验材料与设备实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）或植物组织（如叶片、幼嫩茎尖等）。
2、蛋白酶 K、RNase A、TrisHCl、EDTA、NaCl、SDS、酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇、70%乙醇等。
实验设备1、高速冷冻离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、电泳仪5、凝胶成像系统6、 DNA 测序仪四、实验步骤DNA 提取1、样品处理取适量的新鲜动物或植物组织，放入液氮中迅速冷冻，然后用研钵研磨成粉末。
将粉末转移至离心管中，加入适量的裂解缓冲液（含蛋白酶 K），在 55℃水浴中孵育 1-3 小时，直至组织完全裂解。
2、去除蛋白质和 RNA加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25:24:1），轻轻颠倒离心管混合均匀，然后在高速冷冻离心机中以 12000 rpm 离心 10 分钟。
吸取上清液至新的离心管中，加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1），再次颠倒混合均匀，以 12000 rpm 离心 10 分钟。
dna提取及测定实验报告
dna提取及测定实验报告DNA 提取及测定实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是掌握从生物样本中提取 DNA 的方法，并对提取的 DNA 进行浓度和纯度的测定，以了解样本中 DNA 的质量和数量。
二、实验原理DNA 是遗传信息的携带者，存在于细胞核和线粒体等细胞器中。
在提取 DNA 的过程中，需要破碎细胞，使 DNA 释放出来，然后通过一系列的化学和物理方法去除蛋白质、RNA 等杂质，从而获得纯净的DNA 。
DNA 在 260nm 处有特征性的吸收峰，其吸收值与 DNA 的浓度成正比。
同时，通过测定 260nm 和 280nm 处的吸光度比值（A260/A280），可以评估 DNA 的纯度。
纯 DNA 的 A260/A280 比值约为 18。
三、实验材料和仪器1、实验材料新鲜的动物肝脏组织裂解液（包含 TrisHCl、EDTA、NaCl 等）蛋白酶 K无水乙醇氯仿：异戊醇（24:1）RNA 酶TE 缓冲液（TrisHCl、EDTA）2、实验仪器高速冷冻离心机移液器恒温水浴锅紫外分光光度计微量移液器离心管玻璃棒四、实验步骤1、样本处理称取约 05g 新鲜的动物肝脏组织，用剪刀剪碎后放入匀浆器中，加入适量的裂解液，充分匀浆。
2、消化蛋白质将匀浆液转移至离心管中，加入蛋白酶 K 至终浓度为100μg/ml，在 55℃水浴锅中孵育 1-2 小时，期间不时轻轻搅拌，以充分消化蛋白质。
3、去除蛋白质和 RNA加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），轻轻颠倒离心管充分混匀，然后在 4℃下以 12000rpm 离心 15 分钟。
吸取上清液至新的离心管中，加入 2 倍体积的无水乙醇，轻轻颠倒离心管，可见白色的 DNA 沉淀出现。
4、洗涤 DNA将沉淀用 70%的乙醇洗涤 2 次，每次在 4℃下以 12000rpm 离心 5 分钟，去除上清液。
5、溶解 DNA待乙醇挥发干净后，加入适量的 TE 缓冲液溶解 DNA ，置于 4℃冰箱保存备用。
植物基因组DNA的提取与检测
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日题目：植物基因组DNA的提取与检测一．实验目的:1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
二．实验原理1.液氮研磨：液氮能迅速将植物组织温度降到零度以下，使组织细胞变得脆而易碎，此时对植物组织进行研磨，能大大提高研磨的效率，植物组织迅速变为粉末状，增大表面积，提高提取植物DNA的效率。
2.SDS等离子型表面活性剂处理：SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来，且使DNA保持溶解溶液状态，易于分离3.苯酚和氯仿处理：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4.异丙醇处理：上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，离心后DNA沉淀于离心管底部，便于移去提取液。
而后将沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶液；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。
DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。
DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。
因此，要有效地分离不同大小的DNA片生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。
三．实验材料及设备1.实验材料：新鲜的植物幼嫩叶片2.实验仪器：（1）研磨皿，10、100、1000μL取液器各一支，台式高速离心机，漩涡器；（2）电泳仪，电泳槽，样品槽模板（梳子），有机玻璃内槽，水平仪，取液器，微波炉，凝胶成像系统。
3.实验试剂：（1）植物DNA提取a.细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl, 1.25% SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）；b.氯仿:异戊醇（24:1）；c.其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液；作用：氯仿可使蛋白质变性，有助于液相与有机相的分离。
DNA提取与测序实验报告
DNA提取与测序实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取 DNA 的基本原理和方法。
2、熟悉 DNA 测序的基本流程和操作要点。
3、学会对 DNA 提取和测序结果进行分析和评估。
二、实验原理DNA 提取原理DNA 在细胞中以与蛋白质结合的状态存在。
提取 DNA 的基本思路是通过裂解细胞，使细胞膜和核膜破裂，释放出 DNA，然后去除蛋白质、RNA 等杂质，得到纯净的 DNA。
常用的裂解方法包括物理方法（如研磨、超声破碎）、化学方法（如使用去污剂）和酶解法（如使用蛋白酶K）。
去除杂质的方法则包括使用酚/氯仿抽提、乙醇沉淀等。
DNA 测序原理目前常用的 DNA 测序技术是 Sanger 测序法。
其基本原理是在DNA 合成过程中，通过掺入特定的双脱氧核苷酸（ddNTP）来终止DNA 链的延伸。
由于 ddNTP 缺少3’OH 基团，一旦掺入到 DNA 链中，链的延伸就会终止。
通过在多个反应中分别加入不同的 ddNTP，可以得到一系列不同长度的 DNA 片段。
这些片段经过电泳分离，根据条带的位置可以读取 DNA 的碱基序列。
三、实验材料与设备实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）或植物组织（如叶片）。
2、细胞培养物（如细菌、酵母）。
实验试剂1、细胞裂解液（包含去污剂、蛋白酶 K 等）。
2、酚/氯仿/异戊醇混合液（25:24:1）。
3、无水乙醇、70%乙醇。
4、 TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）。
5、 DNA 测序试剂盒（包含引物、dNTP、ddNTP、DNA 聚合酶等）。
实验设备1、离心机。
2、移液器。
3、恒温水浴锅。
4、电泳仪。
5、凝胶成像系统。
6、 DNA 测序仪。
四、实验步骤DNA 提取步骤1、样本处理对于动物组织，将其剪碎后加入适量的裂解液，在匀浆器中匀浆。
对于植物组织，先在液氮中研磨成粉末，然后加入裂解液。
对于细胞培养物，离心收集细胞，加入裂解液重悬。
提取和分析DNA实验报告
提取和分析DNA实验报告DNA提取是生物学实验中的重要步骤，有助于从各种生物组织中分离出DNA并进行后续分析。
本实验旨在提取DNA样本，并通过凝胶电泳等方法对提取得到的DNA进行分析，以验证提取的DNA质量和纯度。
1. 实验材料与仪器实验所需材料包括DNA提取试剂盒、离心管、显微管、琼脂糖凝胶、电泳槽等。
实验仪器包括显微镜、电泳仪等。
2. 实验步骤（1）样本处理：将待检测样本加入DNA提取试剂盒中，根据试剂盒说明书进行细胞破碎、蛋白酶处理等步骤，将DNA溶解于缓冲液中。
（2）DNA沉淀与收集：通过离心加速DNA沉淀的过程，最终在离心管底部形成DNA沉淀。
（3）洗涤与溶解：分离DNA沉淀后，进行多次洗涤，并最终将DNA溶解于适量缓冲液中。
（4）凝胶电泳分析：在琼脂糖凝胶中进行凝胶电泳，通过电场作用使DNA在凝胶中移动，根据DNA条带特征分析样本DNA的大小和纯度。
3. 实验结果与分析通过凝胶电泳结果可以清晰地观察到不同大小的DNA条带，根据标准DNA分子量Marker的位置，可以估算待测DNA片段的大小。
如果实验操作正确，提取得到的DNA应具有良好的纯度和完整性，且无附加杂质。
若实验存在操作失误或污染等问题，则可能导致DNA提取不完整或DNA受损，影响到后续结果的准确性。
4. 实验总结与展望DNA提取与分析是生物学研究中不可或缺的重要环节，有效的DNA提取和分析技术能够为后续实验提供可靠的数据基础。
在今后的实验中，我们将进一步完善实验操作技巧，提高DNA提取的效率和准确性，以应对更复杂的研究需求。
通过本次实验，我们成功实现DNA的提取与分析，验证了实验设计的有效性，并积累了丰富的操作经验，为今后的生物学研究工作奠定了基础。
DNA提取实验的重要性在于为科研和临床诊断提供了坚实的理论支持和实验数据，为生命科学领域的发展和进步发挥着重要作用。
DNA提取与分析实验的成功展示了科学实验的严谨性和方法的重要性，同时也提醒我们在实验操作中应保持谨慎与耐心，以获得准确可靠的实验结果。
生化 实验四 植物DNA的提取和鉴定
实验四 植物DNA的提取与鉴定
实验原理
真核生物的DNA与组蛋白结合，以 DNA核蛋白的形式存在于细胞核内。
在提取DNA时，通过研磨破坏细胞壁 和细胞膜，释放出DNA核蛋白。
实验原理
在1.4 mol/L NaCl中，DNA核蛋白 的溶解度大，RNA核蛋白的溶解度 小。
在0.14 mol/L NaCl中，DNA核蛋白 溶解度小，RNA核蛋白溶解度大。
液氮：研磨 氯仿-异戊醇：蛋白质变性 异丙醇：沉淀DNA 70%乙醇：脱盐
TE缓冲液
10 mmol/L Tris-HCl （pH7.4） 维持弱碱性
1.0 mmol/L EDTA 抑制DNA酶活性
思考题
本实验中CTAB、EDTA、巯基乙醇 各有什么作用？ 吸取样品、抽提时应注意什么？为 什么？ 在提取DNA时，有哪些方法可以除 去蛋白质？
试剂
CTAB提取液
2.0% CTAB （十六烷基三甲基溴化 铵） 1.4 mol/L NaCl 20 mmol/L EDTA 100 mmol/L Tris-HCL（pH8.0） 0.2% 巯基乙醇
CTAB
CTAB是阳离子去污剂,能使蛋白质变 性，还能与核酸形成特异的核酸CTAB复合物。
核酸-CTAB复合物可溶于≥0.7 mol/L NaCl的高盐缓冲液。
③酶的作用：DNA酶降解DNA分子。
紫外光吸收法鉴定DNA纯度和浓度
核酸的紫外吸收260 nm,蛋白质280 nm DNA的A260/A280约1.8，RNA的约2.0 50 ug/mL DNA溶液，A260 = 1.0 40 ug/mL RNA溶液，A260 = 1.0
实验步骤
10 mL CTAB提取缓冲液加入50 mL 离心管 中，65℃水浴中预热。 50-60 g植物叶片，置于预冷的研钵中，倒入 液氮，充分研磨10 分钟。（全班共用） 每组取约2 g叶片粉末，加入预热的CTAB提 取缓冲液中，轻轻混匀，65℃保温30分钟。 加10 mL氯仿-异戊醇，振荡2-3分钟。 5000 rpm离心5分钟。
基因组DNA的提取及实验方法
取下胶后，在染色液（1.0 g 考马斯亮蓝 R250，450 mL 甲醇，100 mL 冰醋酸，450 mL 双 蒸水）中染色 30 min，然后用脱色液（100 mL 甲醇，100 mL 冰醋酸，800 mL 双蒸水）脱色 1 d。
Rf 值及统计蛋白质亚基条带数
参照刘敏轩等（2006）的方法，根据电泳结果计算每个实验材料蛋白带的 Rf 值及统计 蛋白质亚基条带数。蛋白质的相对迁移率 Rf = 蛋白带迁移距离/溴酚蓝迁移距离。记录样品 中产生的多态性蛋白带，同一 Rf 值位置上有蛋白条带的记为 1，无蛋白带记为 0。输入计算 机，用 cluster 软件统计分析，根据 Main 方法构建表征树。
琼脂糖凝胶电泳检测结果。电泳时总电压为 120V，电泳 1h 左右，UV 检测扩增产物的多态
性。
PCR 扩增条件
二：
94℃ 94℃ X（按所用引物确定退火温度） 72℃ 72℃ 4℃
3min 30Sec 50Sec 1min 10min 保存
35 cycles
种子贮藏蛋白质样品的提取
按 Hurkman 和 Tanaka（1986）的苯酚为基准的总蛋白样品提取方法，并有所改进。将 0.5 g 成熟种子在液氮中研磨成粉末状，分别加入提取液 10mL [50% （v/v）苯酚, 0.45 M 蔗 糖, 5 mM EDTANa2, 0.2% （v/v）β-巯基乙醇, 50 mM Tris-HCl，pH 8.8]，充分混匀后将装有 匀浆液的离心管在 4℃条件下，摇床上振荡 30 min，然后 4℃ 5000 g 离心 15 min，吸取上清 液至新一离心管中加入 5 倍体积的-20℃的 0.1 M 乙酸铵（0.7708 g 乙酸铵溶解在无水的 100 mL 甲醇中），-20℃冰箱静置沉淀 16 h 或过夜。第二天 4℃ 5000 g 离心 10 min，沉淀的蛋白
DNA提取与测序实验方法总结
DNA提取与测序实验方法总结DNA提取与测序是现代生物学和基因研究的重要技术手段，可以用于遗传学研究、基因功能研究、疾病诊断等领域。
本文将总结DNA 提取与测序两个实验方法的基本步骤和常用技术。
一、DNA提取实验方法DNA提取是获取目标组织或细胞中的DNA分子，并将其纯化的过程。
以下是一种常用的DNA提取实验方法的步骤概述：1. 细胞裂解：首先需要将目标样本中的细胞进行裂解，使DNA从细胞溶液中释放出来。
常用的方法有机械切碎、胶体月牙钉研磨、高温、化学物质处理等。
2. 蛋白质去除：为了去除样本中的蛋白质等杂质，可以加入蛋白酶K等蛋白酶进行降解。
3. DNA沉淀：通过加入盐溶液、酒精等，可使DNA分子沉淀到溶液底部。
4. DNA纯化：将DNA沉淀物进行洗涤、去除杂质，最终获得纯净的DNA样本。
二、DNA测序实验方法DNA测序是指将DNA分子的核酸序列进行测定和分析的过程。
以下是一种常用的DNA测序实验方法的步骤概述：1. DNA扩增：为了增加DNA样本的数量，需要进行PCR扩增或其他扩增技术。
2. 准备测序模板：将扩增获得的DNA样本进行处理，得到测序所需的模板。
3. 测序反应：将DNA模板与引物、DNA聚合酶等反应物一起进行测序反应。
4. 分离和分析：利用凝胶电泳或其他分离技术，将测序反应产物进行分离，并进行终止子分析。
5. 数据解读和序列分析：利用测序仪器生成的数据进行基因序列解读和分析。
三、DNA提取与测序实验的注意事项1. 样本选择：样本的选择对实验结果有重要影响，要根据实验目的选择适当的样本来源。
2. 实验环境控制：DNA在实验过程中容易被外源DNA污染，需注意实验环境的洁净，避免交叉污染。
3. 序列分析软件：进行DNA测序实验后，需要使用序列分析软件对测序结果进行解读和分析。
4. 实验操作技巧：DNA提取和测序实验的步骤较多，实验人员需要掌握实验技巧和正确操作方法。
总结：DNA提取与测序实验是基因研究的重要步骤，通过DNA提取可以获取纯净的DNA样本，而DNA测序则可以获得目标DNA分子的序列信息。
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析实验报告：DNA提取实验步骤及结果分析一、引言DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一，能够从样本中纯化出DNA，用于后续的分析和实验。
本实验旨在探究DNA提取的步骤和方法，并对提取结果进行分析和评估。
二、实验步骤1. 样本准备：选择合适的样本进行DNA提取，如植物组织、动物组织或微生物培养物。
样本应储存于-80℃的冰箱中，以防止DNA降解。
2. 细胞破碎：将样本取出，加入细胞破碎缓冲液，使用均质机或研钵等方法将细胞破碎，使细胞膜被破坏，释放DNA。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶，将样本中的蛋白质降解，以去除蛋白质的干扰。
4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，混匀后离心，使混合液分为上下两层，上层为DNA上清液。
5. DNA沉淀：将DNA上清液转移至新离心管中，加入等体积的冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，待DNA逐渐沉淀出来。
6. 洗涤：使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除异丙醇和其他杂质。
7. 重溶：将洗涤后的DNA沉淀物用适量的TE缓冲液重溶，使其溶解。
8. 定量和纯化：使用紫外可见分光光度计测定DNA的浓度，并使用凝胶电泳验证DNA的纯度和完整性。
三、结果分析通过以上步骤，我们成功提取了DNA，并进行了初步的纯化。
下面是对实验结果进行分析和评估：1. DNA提取效果评估：- 可见分光光度计测定DNA浓度：根据光度计读数，我们可以计算出DNA的浓度。
通常，越高的读数代表着更高的DNA浓度。
- 凝胶电泳：通过凝胶电泳，我们可以观察到DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况。
理想情况下，DNA应该呈现出清晰的条带，并且没有明显的降解现象。
2. 实验结果评价：- DNA浓度：根据光度计读数，我们可以评估DNA提取的效果。
如果浓度较高，说明提取效果较好；如果浓度较低，说明可能存在提取效果不佳或DNA被降解的情况。
- DNA完整性：通过观察凝胶电泳结果，我们可以评估提取的DNA是否完整。
DNA的提取及含量测定实验
[实验仪器及用品]
实验器材：猪肝、722型分光光度计、匀浆器、 离心机、恒温水浴锅。 实验试剂：0.1mol/l NaCL-0.05mol/l柠檬酸钠 溶液、0.015mol/L NaCL-0.0015mol/L柠檬酸 三钠溶液、95%乙醇、NaCl固体、5%SDS、 氯仿、DNA标准液、二苯胺试剂。
DNA的提取及含量测定
[实验目的及要求]
1.学习和掌握用浓盐法从动物肝脏中提取DNA 的原理和方法； 2.学习和掌握用二苯胺法测定DNA含量的原理 和方法。
[实验原理]
1．DAN的提取 核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形式存在，其中DNA主要存 在于细胞核中，RNA主要存在于核仁及细胞质中。动植物的 DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液，但在0.14mol/l的盐溶液 中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/l盐溶液，可利用不 同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中 分别抽提出来。 2 DAN的含量测定 DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮基戊 醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595nm）。在 DNA浓度为20-200μg/ml的范围内，吸光度与DNA浓度成正比， 可用比色法测定。
二、DNA的定量测定（二苯胺法） 1．标准曲线的绘制 按下表加入各种试剂，混匀，于60℃恒温水浴中保温45min，冷却 后，在595nm波长下，于722型分光光度计上比色测定，以吸光度 对DNA浓度作图，绘制标准曲线。
0 标准DNA 溶液/ml 0.0
1 0.4
2 0.8
3 1.2
4 1.6
5595nm
2.0 4.0
1.6 4.0
dna的粗提取与鉴定实验报告
dna的粗提取与鉴定实验报告DNA 的粗提取与鉴定实验报告一、实验目的1、了解 DNA 粗提取的原理和方法。
2、学习并掌握 DNA 鉴定的基本技术。
二、实验原理1、 DNA 在氯化钠溶液中的溶解度随氯化钠浓度的变化而改变。
在014mol/L 的氯化钠溶液中，DNA 的溶解度最低。
2、 DNA 不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质（如蛋白质）则溶于酒精。
3、 DNA 与二苯胺试剂在沸水浴条件下会呈现蓝色反应，从而可以鉴定 DNA 的存在。
三、实验材料和用具1、材料新鲜的鸡血细胞液（抗凝剂处理）2、用具（1）烧杯、玻璃棒、滴管、量筒、离心机、纱布、漏斗、铁架台、酒精灯、石棉网、三角架、火柴。
（2）体积分数为95%的酒精溶液、2mol/L 的氯化钠溶液、蒸馏水、二苯胺试剂。
四、实验步骤1、制备鸡血细胞液将新鲜的鸡血加入抗凝剂，静置一段时间后，离心处理，去除上清液，留下鸡血细胞液。
2、提取细胞核物质向鸡血细胞液中加入 2mol/L 的氯化钠溶液，搅拌均匀，使血细胞破裂，释放出细胞核物质。
3、溶解 DNA沿烧杯壁缓缓加入蒸馏水，并不断搅拌，直到溶液中氯化钠浓度降至 014mol/L 时，DNA 溶解度最小，此时会有白色丝状物析出。
4、过滤含 DNA 的黏性物用多层纱布过滤上述溶液，滤去杂质，留下含 DNA 的黏性物。
5、进一步提纯 DNA将上述黏性物再溶解于 2mol/L 的氯化钠溶液中，然后过滤，除去不溶的杂质。
6、析出 DNA向滤液中缓缓加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为 95%的酒精溶液，并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现白色的丝状 DNA。
7、 DNA 的鉴定取两支洁净的试管，分别编号为 1、2。
向 1 号试管中加入 2mol/L的氯化钠溶液 2mL，向 2 号试管中加入 DNA 丝状物和 2mol/L 的氯化钠溶液 2mL。
然后向两支试管中各加入 4mL 二苯胺试剂，混合均匀后，将试管置于沸水浴中加热 5 分钟，观察颜色变化。
dna的提取 实验报告
dna的提取实验报告DNA的提取实验报告引言：DNA（脱氧核糖核酸）是构成生命的基本遗传物质，它携带着生物个体的遗传信息。
DNA的提取是生物学实验中常见的一项重要技术，通过提取DNA，我们可以进一步研究生物的遗传特征、进化历程以及疾病的发生机制等。
本实验旨在探究DNA的提取方法，并通过实际操作来加深对DNA结构和功能的认识。
材料与方法：1. 实验材料：- 鸡蛋白溶液- 酒精- 盐水- 洗洁精- 酶解液- 水浴- 离心机- 显微镜2. 实验步骤：1. 将鸡蛋白溶液倒入试管中，加入适量的盐水，并加入洗洁精，轻轻摇晃混合。
2. 将酶解液加入试管中，再次轻轻摇晃混合，使酶解液与鸡蛋白溶液充分接触。
3. 将试管放入水浴中，保持温度在50℃左右，进行酶解反应。
4. 取出试管，加入等体积的酒精，轻轻旋转试管，观察DNA的析出。
5. 使用离心机将混合液离心，分离出DNA。
6. 将离心后的上清液倒掉，加入适量的盐水，再次离心，以去除残留的酒精。
7. 使用显微镜观察提取得到的DNA。
结果与讨论：经过实验操作，我们成功地提取到了DNA，并观察到了DNA的析出现象。
在实验过程中，酶解液的作用是破坏细胞膜和核膜，使DNA从细胞内释放出来。
酒精的加入则通过与DNA中的水结合，使DNA分子在溶液中析出形成细长的纤维状物质。
DNA提取的关键步骤在于酶解反应的温度和时间的控制。
过高的温度或过长的反应时间会导致DNA的降解，从而影响提取效果。
同时，酒精的加入和离心的速度也会影响DNA的析出和分离。
实验中我们选择了适宜的条件，保证了DNA的提取效果。
DNA的提取方法不仅在实验室中有广泛应用，也在现实生活中有重要意义。
例如，在犯罪侦查中，通过提取作案现场的DNA样本，可以帮助警方追踪犯罪嫌疑人；在医学诊断中，通过提取患者体液中的DNA，可以进行基因检测，帮助医生判断疾病的类型和治疗方案。
总结：通过本次实验，我们深入了解了DNA的提取方法，并通过实际操作加深了对DNA结构和功能的认识。
实验四基因组DNA的提取和检测阳成伟
• 设备：移液器，高速离心机，水浴锅，培养箱 。
• 试剂：
1. CTAB组织消化液 2. 氯仿 3. 无水乙醇 4. TE缓冲液
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C TA B 溶 液 配 制
• 2%CTAB溶液：100mmol/L Tris -HCl, pH7.0 ；1.4mol/L NaCl；20mmol/L E D TA ； 2 % C TA B .
2. 加入700ul的氯仿，上下摇动2-3min (此步是萃取组 织液中的蛋白质；务必带上手套！）；
3. 12000rpm离心10min，取400ul上清液转移至一支 1.5ml离心管中（由于此时悬液已经分层，而我们需 要取最上层的溶液，所以注意千万不要使枪头触碰到 中间的杂质层，当然，更不能取吸取下层的萃取液
CTAB H2O
1 M Tris-HCl 5 M NaCl 0.5 M EDTA
10 ml
0.2 g 5.78 ml
final conc.（终浓度） 2%
1.0 ml 2.8 ml 0.4 ml
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100 mM 1.4 M 20 mM
实 验 原 理 （ C TA B 法 ）
• CTAB，十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子 去污剂，可使细胞破裂，释放出核酸；
1
材料质量
100
（mg）
所加TE体积 200 （ul）
260/280
2.03
260/230
2.10
浓度（ng/ul） 254.5
2
300
3
500
4
100
200
200
400
1.97 2.31 454.4
1.92
dna提取与鉴定实验步骤
dna提取与鉴定实验步骤嘿，咱今天就来讲讲这 DNA 提取与鉴定实验步骤，这可是个超有趣的事儿呢！先说说提取 DNA 吧。
就好像是在一个大宝藏里找宝贝一样，你得小心翼翼地把DNA 这个“小宝贝”给找出来。
第一步呢，得准备好材料，这就好比是战士上战场前要准备好武器一样。
然后，把含有 DNA 的样本放进去，比如细胞啦之类的。
接下来，就开始一系列神奇的操作啦，要让细胞破开，把里面的东西都释放出来。
这就好像是打开一个神秘的盒子，让里面的秘密都跑出来。
然后呢，就是要把其他乱七八糟的东西都去掉，只留下 DNA。
这可不容易哦，就像在一堆沙子里找金子一样，得有耐心。
你得用各种试剂和方法，把那些杂质都给赶走，让 DNA 能安安静静地待在那里。
提取完了 DNA，接下来就是鉴定啦！这就像是给 DNA 这个“小宝贝”贴上一个标签，让我们能清楚地知道这就是我们要找的那个。
可以用一些特别的试剂，让 DNA 显现出独特的颜色或者特征。
这感觉就像是变魔术一样，一下子就把 DNA 给认出来了。
想象一下，你通过自己的努力，成功地从样本里提取出了 DNA，还能准确地鉴定出来，那得多有成就感啊！就好像你找到了一个隐藏在世界背后的秘密一样。
在做这个实验的时候，可千万不能马虎哦！每一个步骤都要认真对待，就像对待一件珍贵的宝贝一样。
要是不小心弄错了，那可就前功尽弃啦。
做实验嘛，就像是一场冒险，有时候会遇到一些小困难，但只要我们不放弃，总能找到解决的办法。
就像爬山一样，虽然过程中会很累，但是当你爬到山顶，看到那美丽的风景时，一切都值得了。
所以啊，大家要是有机会，一定要去试试这个 DNA 提取与鉴定实验。
感受一下科学的魅力，体验一下探索的乐趣。
相信我，你一定会爱上这种感觉的！别犹豫啦，赶紧去试试吧！。
DNA的粗提取与鉴定实验报告
讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果， 导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等
（三）去除滤液中的杂质 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？
答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质
2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水
3.溶解细胞核内的DNA
2 mo1／L 的 NaCl 溶液 40 mL
4.析出含DNA 的黏稠物
蒸馏水
5.滤取含DNA 的黏稠物
6.将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol／L 的 NaCl 溶液 20 mL
7.过滤含DNA 的 NaCl 溶液
8.提取含有杂质较少的DNA 9.DNA 的鉴定
冷却的 95％的酒精50 mL
A:(1)向试管中加入 2mol (2)加入 DNA (3)4 mL 二苯胺试剂
／L 的 NaCl 溶液 5mL
B:(1)向试管中加入 2mol ／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)4 mL 二苯胺试剂
目的 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧
⑨
①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三 利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离
（四） DNA的析出与鉴定
1、DNA的析出
DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95 ％） ，静置2－ 3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起 丝状物，并用滤纸吸取上面的水
【4】真核生物组织细胞基因组DNA的提取及含量和纯度测定
《分子生物学实验》实验报告实验名称：真核生物组织细胞基因组DNA的提取及含量和纯度测定姓名：陈杰学号：3140104666序号：25同组同学：唐晨曦带教教师：刘伟俞萍实验日期：2015年10月13日目录1.原理 (3)1.1真核生物基因组DNA的提取和含量测定 (3)1.2 二苯胺显色法测定DNA含量 (3)1.3 紫外吸收法测定基因组DNA的含量及纯度 (4)2.操作步骤 (4)2.1真核生物基因组DNA的提取和含量测定 (4)2.1.1 组织细胞的裂解 (4)2.1.2 裂解物中蛋白质的去除 (5)2.1.3 DNA的沉淀 (5)2.2 二苯胺显色法测定DNA含量 (5)2.2.1 DNA标准曲线的制作 (5)2.2.2 样品的测定 (5)2.2.3 DNA含量的计算 (5)2.3紫外吸收法测定基因组DNA的含量及纯度 (6)3.实验结果 (6)3.1 照片记录 (6)3.2数据处理 (7)3.2.1 二苯胺显色法测定DNA含量 (7)3.2.2紫外吸收法测定基因组DNA的含量及纯度 (7)4.讨论 (8)1.原理1.1真核生物基因组DNA的提取和含量测定制备具有生物活性的大分子核酸，必需采取温和的制备条件，避免过酸、过碱的反应环境和剧烈的搅拌，防止核酸酶的作用，并要求在低温下进行操作。
本实验选用小鼠肝脏细胞作为实验材料，采用匀浆法破碎组织细胞。
DNA在0.14mol/L NaCl中不溶解,而RNA可溶解。
用无菌水溶解沉淀，加入蛋白酶消化液（含有蛋白酶K和SDS）,蛋白酶K为温和的方法破碎细胞而不产生机械剪切以致破坏DNA的完整性，EDTA可以变性Dnase，SDS还可以去除部分的蛋白，使核蛋白体从DNA上解离。
然后加RNase以去除RNA，再用苯酚-氯仿抽提法反复抽提提取DNA。
苯酚-氯仿抽提法：酚、氯仿是有机溶剂，能有效地使蛋白质变性。
纯酚的比重为1.07，因此在与水混合时处于下层。
然而有机相和水相会难于分开，甚至当从溶质浓度较高的水相中抽提蛋白时会发生两相颠倒的情况。
dna实验设计方案玉米基因组dna的提取与转基因成分分析样本
《生化实验技术》实验设计方案一、1、掌握提取植物组织基因组DNA的基本方法。
2、掌握二苯胺法和紫外分光光度法测定DNA含量的原理和方法。
3、学会转基因植物转基因成分的分析4、学习DNA的水平式琼脂糖凝胶电泳并学会操作。
5、掌握高速冷冻离心机、微量移液枪、水平电泳仪等仪器设备的使用。
二、实验原理:核酸是生物有机物体重的重要组成成分, 在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起。
核酸分为DNA和RNA两大类, 前者主要存在于细胞核内, 后者主要存在于细胞质及核仁里。
在制备核酸时, 经过研磨破坏细胞壁和细胞膜, 使核蛋白被释放出来。
苯酚可使蛋白质变性, 蛋白质溶于酚相, DNA则溶于上层水相。
将氯仿与苯酚混合使用, 可减少酚相中因水的存在而造成DNA的少量溶解。
95%乙醇可使核酸从水相中沉淀出来, 用70%的乙醇洗涤能够除一些盐分, 经Rnase降解RNA, 可得较纯的DNA。
DNA含量与纯度测定, 当前常见紫外吸收法, 利用核酸在260nm有吸收峰, 根据公式[DNA(μg/mL)=A260*50*稀释倍数]可计算出核酸DNA的浓度。
由于蛋白质在280nm有吸收峰, 可根据比值判断DNA纯度: A260／A280＜1.8时, 表明蛋白质含量偏高; 1.8＜A260／A280＜1.9时, 表明样品较纯; A260／A280＞2.0时, 表明RNA或DNA碎片较多。
二苯胺法定量测定DNA的原理为: 在强酸、加热条件下, 能够使DNA中的嘌呤碱基与脱氧核糖间的糖苷键断裂, 产生嘌呤碱基、脱氧核糖与嘧啶核苷酸。
其中, 2’-脱氧核糖在酸性环境中成为w-羟基-r-酮基戊醛, 此物与二苯胺反应生成蓝色化合物, 在595nm处有最大吸收。
DNA在40-400ug范围内光吸收值与DNA含量成正比。
在转基因技术中, 外源基因导入到植物体中时, 一般使用花椰菜花叶病毒CaMV35S启动子启动下游编码基因的转录。
在染色体中, 一个转录单位由启动子序列, 编码序列和终止序列组成, 常见终止序列是胭脂碱合酶( NOS) 的编码序列的终止序列。
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7. 将DNA溶液置于37 ℃ 培养箱或水浴中30min（降解残留的 RNA） ；
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9
上样2ul M 1 2 34 56
上样8ul M 1 2 34 56
注：1-6序号分别与表中对应。
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10
核酸的贮存——DNA保存
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11
无水乙醇沉淀 沉淀前往往加入NaCl等盐离子，作用是中和核酸分子表 面的负电荷，减少分子间的排斥力，有助于分子之间的聚 集。 无水乙醇可以吸收分子之间的水，使DNA沉淀析出，
• CTAB溶液中含有1.4mol/LNaCl，有助于溶解释放出 来的DNA （ DNA在2mol/LNaCl中DNA具有较高的溶 解度）；
• 加入无水乙醇，可以使DNA从溶液中沉淀出来。
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5
实验步骤（常温操作，2人一组）
1. 取适量(300-500mg)植物组织，加入2ml CTAB抽提缓冲 液，充分匀浆2-3min，然后每人转移700ul的匀浆液至一 支1.5ml离心管中，65℃水浴45min（中间摇动2-3次）（ 裂解细胞，释放核酸和蛋白）；
实验四、基因组DNA的提取
准备：一次性手套、 65℃水浴锅、氯仿、无水乙 醇、1.5离心管、菜花
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1
实验目的：
1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理。 2.了解基因组DNA的实验用途。 3. 掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
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2
• 材料：花椰菜/昆虫组织
• 设备：移液器，高速离心机，水浴锅，培养箱 。
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基因P • 基因克隆Βιβλιοθήκη PCR）大家好13
下次课程
• 质粒DNA的提取及质量检测
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14
结束
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8. -20 ℃ 保存备用。
9. 取5~10ulDNA（加适量loading buffer）电泳检测；取 2ulDNA测定浓度和OD260/280（下次课电泳检测）。
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7
基因组DNA的检验（纯度）
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8
基因组DNA的检验（完整性）
凝胶电泳法： 基因组DNA电泳，在电场中泳动慢，如果发 生降解，可出现电泳图谱脱尾现象。
• 试剂：
1. CTAB组织消化液 2. 氯仿 3. 无水乙醇 4. TE缓冲液
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3
CTAB溶液配制
• 2%CTAB溶液：100mmol/L Tris-HCl, pH7.0 ；1.4mol/L NaCl；20mmol/L EDTA； 2%CTAB.
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4
实验原理（CTAB法）
• CTAB，十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污 剂，可使细胞破裂，释放出核酸；
4. 加入1/10体积的NaAc(3mol/L,pH5.2）（40ul），上下 颠倒3-4次混匀；然后再加入2倍体积的无水乙醇（ 0.9ml)，上下颠倒3-4次混匀（如DNA量大，此时可见絮 状DNA沉淀。（如果放置于大家-好20度过夜，DNA产率会更多 6
5. 12000rpm离心5min，缓缓倒掉上清液（剩余的液体可以用 移液器吸走），管底的沉淀即DNA（无色透明胶状物！） ；
2. 加入700ul的氯仿，上下摇动2-3min (此步是萃取组织液 中的蛋白质；务必带上手套！）；
3. 12000rpm离心10min，取400ul上清液转移至一支1.5ml 离心管中（由于此时悬液已经分层，而我们需要取最上 层的溶液，所以注意千万不要使枪头触碰到中间的杂质 层，当然，更不能取吸取下层的萃取液了）；