ABO 血型鉴定操作规程
试管法鉴定ABO血型标准操作规程
试管法鉴定ABO血型标准操作规程
1、目的
为规范输血科ABO血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。
2、适用范围
本文件适用于本院输血科ABO血型鉴定的操作过程的规范化管理。
3、方法及原理
3.1方法：试管凝集法
3.2原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。
4、试剂
4.1血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）；
4.2 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；
4.3受检者血清或血浆；
4.4受检者5%红细胞盐水悬液;
5、样本采集及处理
用一次性EDTA-K2真空采血管抽取静脉血1ml，将标示有患者姓名、性别、年龄、住院号、病室/门急诊、床号等信息的标签贴在标本管上，。
ABO和RH血型鉴定操作规程4
ABO和RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和RH(D)血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D)血型鉴定三、所需材料和设备:1、材料：抗—A、抗—B、抗—D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞,生理盐水，滴管，患者标本。
2、设备：离心机，显微镜.四、操作规程1、试管法:（1）取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D,分别加入抗A、抗B及IgM抗D 单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5％红细胞生理盐水悬液1滴,轻摇混匀。
（2）另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴,轻摇混匀。
（3）立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(溶血）现象。
如肉眼不见凝集,应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。
（4）观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度，有助于A、B亚型,类B或嵌合体血型的发现。
2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴,混匀。
(2）标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴,再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀.（3）轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀,连续15分钟以肉眼观察有无凝集(溶血)反应。
有需要时也可用低倍显微镜观察结果.(4) Rh（D）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。
3、结果判断:4、凝集强度判断:4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰;2+ 红细胞凝块分散成许多小块,背景可见到游离红细胞；1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；+—镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；-阴性镜下未见凝集，红细胞均匀分布.5、报告实验结果，并保存受检标本：一般保存一周以上6、注意事项6。
实验七ABO血型鉴定
实验七、ABO血型鉴定一、实验原理血型是指红细胞膜上特异的抗原（凝集原）类型，常用血型系统有ABO系统、Rh系统。
血清中存在能与红细胞膜上相应抗原发生反应的抗体，称为凝集素。
ABO血型鉴定原理是血清中抗体（或凝集素）与红细胞的相应抗原起反应，产生凝集反应，而后发生血溶现象。
各种血型抗原与抗体分布：血型红细胞抗原（凝集原）血浆中抗体（凝集素）A A 抗BB B 抗AAB AB 无O 无抗A、抗B二、实验步骤1、双凹载玻片加两种血清：黄色抗B；蓝色抗A；2、消毒、采血（灭菌牙签）；3、静置10分钟，观察。
三、实验结果ABO血型系统根据红细胞表面有无特异性抗原（凝集原）A和B来划分的血液类型系统。
根据凝集原A、B的分布把血液分为A、B、AB、0四型。
红细胞上只有凝集原A的为A 型血，其血清中有抗B凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血清中有抗A的凝集素；红细胞上A、B两种凝集原都有的为AB型血，其血清中无抗A、抗B凝集素；红细胞上A、B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。
具有凝集原A的红细胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的红细胞发生凝集。
如上表所示，当与抗A试剂反应为阳性，与抗B反应为阴性时，血型为A；当与抗A试剂反应为阴性，与抗B试剂反应为阳性时，血型为B；当与抗A、抗B试剂反应均为阳性时，血型为AB；而当与抗A、抗B试剂反应均为阴性时，血型则为O。
输血时若血型不合会使输入的红细胞发生凝集，引起血管阻塞和血管内大量溶血，造成严重后果。
所以在输血前必须作血型鉴定。
正常情况下只有ABO血型相同者可以相互输血。
在缺乏同型血源的紧急情况下，因O 型红细胞无凝集原，不会被凝集，可输给任何其他血型的人。
AB型的人，血清中无凝集素，可接受任何型的红细胞。
但是异型输血输入量大时，输入血中的凝集素未能被高度稀释，有可能使受血者的红细胞凝集。
所以大量输血时仍应采用同型血。
ABO血型及Rh血型鉴定 卡式法(审)
ABO血型及Rh血型鉴定操作规范（卡式法）
1、用抗凝（EDTA—K2）血，取40ul放入2ml生理
盐水中，配制成10%红细胞悬液，混匀备用。
2、取血型鉴定卡，撕开封条，编号。
3、分别取10ul 10%红细胞悬液，加入A、B和Rh
孔。
注意加红细胞悬液时不能直接加到孔内有试剂的液面。
4、将加好红细胞悬液的血型卡平衡放入专用离心
机中，以转/分的速度，离心5分钟。
5、5分钟后离心机提示音响，打开离心机，取出观察结果。
6、结果观察：
（1）A型：A试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集），B试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集）；
（2）B型：B试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集），A试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集）；
（3）AB型：A试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集），B试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集）；
（4）O型：试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集），B试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集）；
（5）Rh阴性：Rh试剂孔位红细胞沉降到液面底端（不
凝集）；
（6）Rh阳性：Rh试剂孔位红细胞在试剂液面上端（凝集）。
注意：观察结果时，要反复查对结果，以免报告错误。
7、打印结果，报告。
ABO血型鉴定操作规程
ABO血型鉴定操作规程ABO血型鉴定是一种常见的血液学检验方法，用于确定个体的血型类型。
ABO血型鉴定操作规程是指在进行ABO血型鉴定时应该遵循的步骤和操作规范，以确保检验结果的准确性和可靠性。
下面将介绍一份ABO血型鉴定操作规程，供参考。
一、实验室准备2.确保实验室环境清洁整洁，工作台面干净无异物。
3.检查试剂盒和试剂的有效期和保存条件，确保试剂的质量良好。
4.对实验室设备进行日常检查和维护，确保设备正常工作。
二、标本采集与处理1.根据要求收集患者的血样，确保标本采集过程无菌无误。
2.将标本装在标本采集管中并进行标注，确保标本不被混淆。
3.采用标本离心的方法分离血浆和红细胞，准备好把血浆和红细胞分开的离心管。
三、试剂的稀释与标记1.根据试剂盒的说明书和标准操作规程对试剂进行稀释和标记。
2.确保试剂的标记清晰明确，不混淆。
3.标记好试剂的试管，准备好用于分析的试管。
四、ABO血型鉴定实验过程1.将患者的血浆和稀释后的抗体试剂混合均匀。
2.通过凝集试验和沉淀试验等方法对混合后的血浆进行判断，确定患者的血型类型。
3.记录检验结果并进行复核，确保结果的准确性。
五、实验数据的记录和存储1.记录实验的时间、地点、操作人员等基本信息。
2.记录检验结果和分析过程，确保数据的完整和准确。
3.存储检验数据和样本，确保数据的可追溯性和保密性。
六、结果解读与报告1.根据实验结果进行血型鉴定，判断患者的血型类型。
2.根据实验结果填写并发放血型鉴定报告，包括患者姓名、血型类型、检验日期等信息。
以上就是一份ABO血型鉴定操作规程的简要介绍，希望对实验室工作人员在进行ABO血型鉴定时提供一定的参考。
在进行实验操作时要严格按照规程和标准操作程序进行，确保检验结果的准确性和可靠性。
ABO血型鉴定操作规程
1 目的指导工作人员进行ABO血型实验。
2 适用范围血型检验岗位工作人员3 职责负责送检标本ABO血型的检测工作。
4 【原理】ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。
同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。
【标本】1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。
【器材】载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。
【试剂】1.1 抗-A、抗-B试剂1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液1.3 受检者血清1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管【操作步骤】2.1 试管法2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。
2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。
用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。
2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。
2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。
主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23 第页共5页2.1.5 凝集强度判断标准4+=红细胞凝集成一大块,血清清晰透明；3+=红细胞凝集成几大块,血清尚清晰；2+=红细胞成中等大凝块,游离红细胞<1/2；1+=红细胞成小凝集块，游离红细胞>1/2；±=红细胞成微小凝集块，周围有很多游离红细胞。
ABO鉴定操作规程
ABO血型鉴定标准操作程序
[方法原理]：利用抗原抗体反应的原理，用已知抗体型特异性的试剂血清检查红细胞表面的抗原（正向定型），从而确认病人的血型。
[样本要求]
1.抽取受血者静脉血3-4ml，于EDTA（2Na）抗凝的试管中。
2.受血者和供血者的血液样本必须密封，每次输血后，2-6℃保存7天。
1.试剂
4.1抗A、抗B分型血清
4.2保存条件：2-8℃保存2年
4.3使用条件：使用前试剂室温预温0.5小时。
4.4试剂提供：上海血液生物医药有限公司。
2.仪器和材料：
5.1血库专用离心机、37℃水浴箱。
5.2试管架、试管、吸管等。
3.操作程序：
制备RBC悬液：试管中加盐水1ml,压积RBC40ul，混合均匀。
取试管2支，分别加入抗A、抗B各2滴。
加样：在试管中分别加RBC悬液2滴，摇匀。
离心：将试管放入专用离心机中离心1000转/分，离心1分钟后判读结果。
结果判定：
ABO血型结果报告见下表：
8.1试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
8.2离心时间不宜过长过短，速度不宜过快过慢，以防止假阳性或假阴性结
果。
8.3为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温（20-24℃）内进行试验，37℃可
使反应减弱。
对含有较多自身冷凝集素的受血者，需用37℃NaCl溶液洗涤受检者红细胞2-3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素.
8.4在有效期内使用，出现浑浊或变色不能使用。
2.临床意义：
输血是治疗与抢救生命的重要措施。
输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血完全相和才能输血。
输血科ABO疑难血型鉴定标准操作规程
输血科ABO疑难血型鉴定标准操作规程1.目的为规范ABO疑难血型鉴定操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7（1）条款的要求制定本规程。
2.适用范围适用于医疗机构输血科对ABO血型鉴定正反定型不相符，常规方法不能确定ABO血型的进一步确认试验。
3.职责医疗机构输血科技术人员负责ABO疑难血型鉴定。
4.原理ABo血型鉴定正反定型不相符时，通过采用单克隆抗-A、抗-B、抗-Ai、抗-AB、抗-H试剂与受检者红细胞反应监测ABH抗原，A、B、。
型试剂红细胞及自身红细胞与受检者血清（血浆）反应监测血型抗体，红细胞洗后放散试验监测弱A、弱B抗原，凝集抑制试验监测唾液ABH血型物质，血清（血浆）吸收试验排除ABO血型以外的抗体对鉴定的影响，从而获得确定受检者ABO血型的依据，确定ABo血型。
5.检测环境条件室温应控制在18-27βC,湿度应保持30%—70%。
6.步骤与方法6.1收集受检者临床资料当执行《试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程》鉴定ABO血型出现正反定型不相符，并已排除试剂及操作因素时，应调查受检者的疾病史、输血史、药物治疗情况、组织或器官移植史、孕产史及以前的血型记录，分析可能影响ABO血型鉴定的临床资料。
6.2根据受检者正反定型的反应结果及临床资料，初步分析引起正反定型不符的可能原因。
6.2.1当正定型红细胞与抗-A和（或）抗-B物凝集，而反定型未检出预期的凝集反应时，应首先确实是否因红细胞表达弱A和（或）弱B,与抗-A和（或）抗-B不凝集。
经吸收放散等试验确认红细胞不表达A和（或）B抗原后，可考虑是否为低免疫球蛋白血症、免疫抑制等致血型抗体异常。
当反定型检出了与正定型不相符的凝集时（如反定型与0型试剂红细胞凝集）6.2.2应考虑血清（血浆）中是否存在红细胞不规则抗体。
6.2.3出生3个月内的婴儿ABO血型鉴定只做正定型，不做反定型，具体执行《试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程》。
医院人ABO血型正定型标准操作程序
人ABO血型正定型标准操作程序
【项目名称】抗A、抗B血型鉴定
【实验用途】专用于鉴定人ABO血型
【标本种类】新鲜全血
【仪器和材料】抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）
【试剂稳定性】：原装试剂在2~8℃避光保存，有效期24个月【操作步骤】
①平板法（玻片法）：本品与受检者全血或10％红细胞生理氯化钠悬液按1:1使用，不必再稀释，按照有无凝集判定结果。
②试管法：本品与受检者5％红细胞生理氯化钠悬液按1:1使用，不必再稀释，摇匀，1000r/min离心1分钟或室温静置1小时，按
【注意事项】
①、对含有较多自身冷凝集素的受检者，在鉴定血型时往往被误定为AB血型，遇到此种情况，需用37℃生理氯化钠溶液洗涤受检者红细胞2-3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。
②、在做配型试验时，如发现有不配现象，则取受检者血清，用已知A或B血型红细胞进行反定型试验，以核实原鉴定的血型是否正确。
③、用立即试管法不能测出亚型（如Ax），需延长作用时间。
④、本品如出现浑浊或变色则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知A、B、O血型红细胞检查结果是否与已知血型相符，以防制品污染、变质失效，而造成鉴定错误。
⑤、试剂应在有效期内使用。
S006红细胞ABO血型(反定型)鉴定标准化操作规程
红细胞ABO血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（反定型）。
三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。
6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。
2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表4、ABO血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。
ABO血型鉴定操作规程
ABO 血型鉴定操作规程1. 原理根据红细胞上和血清(或者血浆)中有无 A 抗原和(或者)B 抗原及其抗体，将血型分为A 型、B 型、AB 型及O 型。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABO 血型。
正定型是指用已知抗正定型-A、抗-B 血清来检测受检红细胞上有无相应的 A 抗原和(或者) B 抗原；反定型是指用已知反定型A1 型、B 型红细胞来检测受检血清 (或者血浆) 中有无相应的抗-A 和(或者)抗-B。
2. 原始样品要求5 mL 静脉全血。
3. 样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂真空试管，EDTA.K2 抗凝/普通试管，不抗凝。
4. 检测环境要求检测环境要求检测环境要求检测环境要求温度：18℃~27℃，湿度：30%~70%。
5. 所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备5.1 设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。
5.2 材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水(NS)、干净空试管。
6. 检测操作过程检测操作过程检测操作过程检测操作过程6.1 将受检标本以1000g 离心5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用NS 洗涤三次后，配成3%~5%红细胞悬液。
6.2 取6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。
6.3 在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各50 μL ，其余管加入受检血浆/血清各100 μL 。
6.4 在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者3%~5%红细胞悬液各50 μL ，摇匀。
6.5 在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入A1、B、O 红细胞试剂各50 μL ，摇匀。
6.6 1000g 离心15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。
6.7 根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在4℃、37℃下观察结果。
ABO血型鉴定操作规程(玻片法)
宁晋县中西医结合医院ABO血型鉴定操作规程
一．项目名称ABO 血型鉴定（正定型）
二．方法玻片法
三．检验原理根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B型、O型和AB型。
根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。
四．试剂上海血液生物医药有限公司
抗A血型定型试剂和抗B血型定型试剂（单克隆抗体）
五．标本采集抗凝或不抗凝的末梢血或静脉血均可，用生理盐水做成10%红细胞悬液六．操作
1 取洁净的玻片一张，用记号笔将玻片分为左右两部分，分别标注抗A和抗B。
2 分别滴加抗A和抗B试剂一滴于玻片的抗A和抗B处。
3 再加一滴做好的10%的红细胞悬液在玻片的抗A和抗B处。
4 缓慢摇晃玻片，使试剂与10%的红细胞悬液充分混合，2分钟左右用肉眼判读结果，
并记录。
5 检验结果的解释
ABO血型反应格局表
正定型
血型抗A试剂抗B试剂
+ - A
- + B
- - O
+ + AB
七．检验方法的局限性
与反定型一起进行，正反定型不一致须进一步检查。
八．注意事项
1 对含有较多自身冷凝剂素的受检者，需要37℃的生理盐水溶液洗涤受检者红细胞2-3
次，去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后在鉴定血型。
2 新生儿的血样中抗体含量较低，抗原发育不完全。
同时可能含有母亲血液中的抗A
或抗B抗体，可能导致假阳性或假阴性的出现。
3 出现ABO正反定型不符，须查明原因并解决问题后在记录结果。
ABO血型鉴定操作规程
【操作】
（1）正定型：检测红细胞上的A或B 抗原。①加1滴抗A到一支洁净试管中并标记；②加1滴抗B到一支洁净试管中并标记；③如果需要，可选做加1滴抗A,B在第3支试管，并标记；④向每一支试管滴加1滴2%～5%的待检红细胞悬液；⑤轻轻混匀，按照校准速度和时间离心，通常（900～1000）×g离心15秒；⑥轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与血清（血浆）试验结果对照
（2）反定型：检测血清或血浆中的抗体。①取2支洁净试管，分别标记A1和B，分别向其中滴加2～3滴血清或血浆；②加1滴A1试剂红细胞到标记A1的试管；③加1滴B型试剂红细胞到标记B的试管；④如果需要，加1滴A2试剂红细胞到一支已加入2～3滴血清或血浆的试管中，并做好标记；⑤轻轻混匀，按照校准速度和时间离心，通常（900～1000）×g离心15秒；⑥检测是否有溶血现象，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与红细胞试验结果对照。
1.试管法 试管法是ABO定型试验的经典方法。
【样本】抗凝或不抗凝的样本均可用于ABO鉴定试验。红细胞可悬浮在自身血清、血浆或盐水中，也可以洗涤后悬浮于盐水中。通常情况下，试管法正定型被检样本与反定型中试剂红细胞悬液浓度皆为2%～5%。
【试剂】（1）抗A血清
（2）抗B血清
（3）2%～5%的A1型、B型红细胞盐水悬液
（2）试管法定型反应快，需时短，特别是紧急输血时，可立即离心观察结果；通过离心增强凝集，可发现亚型和较弱的抗原-抗体反应，结果准确可靠，是ABO定型的常规方法。
2.玻片法
【样本】用玻片法进行ABO正定型时，待检红细胞悬液的浓度是10%～15%。玻片法一般只能做正定型。
ABO血型鉴定标准操作规程
ABO血型鉴定标准操作规程1.检验原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B 型、AB型及0型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗一A和抗一B分型血清来测定红细胞上有无相应的A 抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一A或/和抗一B2.试剂和材料：1、抗一A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（0型血）分型血清，2、5%A、B及。
型试剂红细胞盐水悬液。
3、受检者血清；4、受检者5%红细胞盐水悬液。
3.方法3.1.试管法（1）取洁净小试管（内径IommX60mm）3支，分别标明抗一A、抗一B和抗-分型血清各1滴于试管底部，再A十B,用滴管分别加抗一A、抗一B和抗一A十B以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混合。
（2）另取洁净小试管（内径IOmlnX60mm）3支，分别标明A、B和0细胞。
用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和0型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。
（3）立即以100Or/min离心Inlino（4）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。
如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
（5）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或CiSAB的发现。
（6）凝集强度判断标准4十红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3十红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2十红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。
1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞MF混合凝集外观（mixedfield）是指镜下可见少数红细胞凝集,而绝大多数红细胞仍呈分散分布。
一表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
3.2.玻片法（1）取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔画成方格，标明抗X、抗-B 和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗f和抗-A十B分型血清1滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。
ABO和RH血型鉴定操作规程4
ABO和RH血型鉴定操作规程4ABO和RH血型鉴定操作规程4一、实验目的1.学习和掌握ABO和Rh血型的鉴定方法；2.学会正确操作相关试剂和仪器设备；3.提高实验操作的准确性和规范性。
二、实验原理ABO血型系统是血浆中存在的A抗原、B抗原和漏斗性E抗原在红细胞膜上的表达情况的不同所决定的。
Rh血型系统是Rh抗原在红细胞膜上的表达情况所决定的。
实验中采用“直接添加法”和“间接抗人球蛋白试剂法”进行ABO和Rh血型的鉴定。
ABO血型鉴定根据红细胞与抗A血清、抗B血清的凝集反应情况判断，Rh血型鉴定根据红细胞与抗D血清的凝集反应情况判断。
三、所需试剂及仪器设备1.10%的牛血清白蛋白溶液；2.抗A血清、抗B血清、抗D血清、抗人球蛋白试剂；3.输血细胞和被检血液样本；4.显微镜及玻璃制品。
四、实验步骤1.取一小号试管，用P3琼脂糖盐水洗涤试管内壁。
2.分别取少量被检血液样本和输血细胞加入试管中。
3.加入3滴抗A血清到试管1中，3滴抗B血清到试管2中。
4.试管1和试管2每个都加入一滴抗人球蛋白试剂。
5.用试管架将试管在室温下静置20分钟。
6.观察试管1和试管2的凝集情况，并比较。
7.根据凝集情况判断被检血液的ABO血型。
五、结果判断1.如果试管1发生凝集，试管2不发生凝集，即为A型血；2.如果试管2发生凝集，试管1不发生凝集，即为B型血；3.如果试管1和试管2都发生凝集，即为AB型血；4.如果试管1和试管2都不发生凝集，即为O型血。
六、Rh血型的鉴定1.取一小号试管，用P3琼脂糖盐水洗涤试管内壁。
2.分别取少量被检血液样本和输血细胞加入试管中。
3.加入1滴抗D血清到试管中。
4.用试管架将试管在室温下静置20分钟。
5.观察试管的凝集情况。
七、结果判断如果试管发生凝集，即为Rh阳性；如果试管不发生凝集，即为Rh阴性。
八、实验注意事项1.实验过程中，要注意操作规范，避免交叉感染；2.抗人球蛋白试剂需保存在2-8摄氏度，使用前应在室温下放置30分钟；3.实验前，应检查试剂的有效期和质量；4.实验完成后，及时清理实验台面和试管，做好垃圾分类处理。
ABO血型鉴定操作规程
ABO血型鉴定操作规程 SXYJ-GZ-02021目的规范ABO血型鉴定操作，正确进行ABO血型正、反定型。
2适用范围对献血者、患者进行检测。
3职责检测者负责按此程序进行ABO血型鉴定操作。
4材料与设备抗A、抗B、抗AB血清；A、B、O型试剂红细胞；0.9%无菌生理盐水；一次性使用滴管、试管、玻片；KUBOTA KA-2200型离心机、CH20BIMF200型电子显微镜等。
5操作方法5.1待检标本的准备及要求5.1.1待检标本准备两管血样，一管用EDTA抗凝，另一管不抗凝5.1.2血清：待检的不抗凝标本应退缩充分，用离心机离心并分离出血清5.1.3细胞：从待检的抗凝标本中吸出少量红细胞，用0.9%生理盐水充分洗涤三遍，配制成约3%红细胞盐水悬液（注：红细胞悬液的制备见注意事项7.1）5.2试验步骤5.2.1试管法5.2.1.1取洁净小试管2－3支，分别标明抗A、抗B（和抗AB），滴加相应抗血清各2滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者约3%红细胞盐水悬液1滴，混匀5.2.1.2另取洁净小试管3支分别标明Ac、Bc和Oc，分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别加入A、B和O型试剂红细胞悬液1滴，混匀5.2.1.33400转/分，离心15秒（KA-2200型离心机Ⅱ档）5.2.1.4将试管轻轻摇动，悬浮管底的红细胞，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象，如肉眼未见凝集，应将反应物倒在玻片上，以低倍镜观察。
5.2.1.5观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，有助于亚型、类B或cisAB等特殊血型的发现。
5.2.1.6凝集强度判断标准4+ 红细胞凝集成一个结实的凝集块，血清清晰透明3+ 红细胞凝集成几个大的凝块，血清尚清晰2+ 红细胞凝集成中等大的凝集块，背景清晰，周围可见到游离红细胞1+ 肉眼可见小凝集块，背景混浊，周围有较多游离红细胞±微小凝集，背景混浊mf 即混合凝集外观，指红细胞凝集大块与游离红细胞共存θ阴性，无凝集或溶血，镜下红细胞均匀分布PH 表示部分溶血，有一些细胞残留H 表示完全溶血，无残留细胞5.2.2玻片法5.2.2.1取清洁玻片一张（或血型纸一张）。
输血科ABO血型鉴定操作规程
ABO血型鉴定标准操作规程【目的】正确鉴定血型，保障患者的输血安全。
【范围】所有送检需要鉴定ABO血型的标本。
【职责】配发血室负责临床患者的血型鉴定。
【原理】根据ABO血型分类原则，即红细胞上带有什么抗原就称什么血型、同一个体内抗原与抗体互补。
根据含某抗原的红细胞与含相应抗体的血清混合可使红细胞发生凝集，反之不发生凝集的原理，利用分型血清或分型红细胞鉴别血型，前者称为正定型（又称红细胞定型），后者称为反定型（又称血清定型）。
通过正反定型可准确鉴别ABO血型。
【标本采集和处理】1、标本采集：EDTA-K2或EDTA-K3抗凝静脉血2mL。
标本保存：室温放置不超过6小时，4℃保存不超过72小时，无溶血,无凝块及明显乳糜。
【设备与试剂】1、人ABO血型反定型用红细胞试剂盒①包装规格：每盒内装有Al,B,0试剂各1支，IOml/支②主要组成成分：Al型、B型、。
型红细胞。
③储存条件及有效期：2-8°C储存，不能冰冻；有效期2个月。
2、ABO>RhD血型检测卡（微柱凝胶）①包装规格：2人份/卡，12卡/盒。
②储存条件及有效期：18-25℃避光保存，自检定合格之日起12个月。
3、抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体）①包装规格：10ml。
②储存条件及有效期：2-8℃避光保存；储存条件下有效期为24个月。
4、红细胞悬液：取标本离心后压积红细胞与生理盐水配制（试管法为3%-5%；微柱凝胶法为0∙5%-0∙8%）.5、BaSo2005-2>BaSo2002-2型医用低速离心机：珠海贝索生物技术有限公司。
6、TD-3A型血型血清学用离心机：长春博研科学仪器有限责任公司。
【操作步骤】1、试管法①正定型：a）取洁净小试管（内径IOnIm义60mm）3支，分别标明抗-A,抗-B。
b）抗-A,抗-B管中分别按标记加入相应抗体血清1滴，并加入受检者3%~5%红细胞悬液1滴，混匀。
c）放入BaSo2002-2型离心机以3400r∕min离心15秒。
ABO血型鉴定操作规程
ABO血型鉴定操作规程引言：一、实验室准备1.准备所需试剂和材料：血清抗体试剂（抗A、抗B和抗Rh）、实验室标本盒、玻璃杯、试管、乳胶管、离心机等。
2.验证试剂的有效性：每次使用前，检查试剂是否超过有效期，并进行质量控制测试，确保试剂的有效性和准确性。
二、标本采集和处理1.选择合适的采血点：应选择适宜的静脉采血点，减少人为操作引起的误差。
2.采血时注意：a)用干净的注射器为被测个体采集2-3mL的静脉血液；b)避免空气污染，在采血时小心移液，不得将血液弄洒或溅出。
3.血样处理：a)采集的血样应立即转移到试剂盒中的气管中进行轻轻搅拌，使血液与抗体试剂充分接触；b)观察血浆和抗体试剂的反应情况，注意是否出现凝集现象。
三、凝集反应和结果判定1.凝集反应：a)查看血浆与抗A和抗B试剂的反应，记录观察到的凝集和沉淀现象；b)将反应混合物在滴管上进行抖动和旋转观察，直到发觉无明显变化为止。
2.结果判定：a)凝集现象出现在与抗A试剂反应的血液中，可判定为A型血；b)凝集现象出现在与抗B试剂反应的血液中，可判定为B型血；c)凝集现象同时出现在与抗A和抗B试剂反应的血液中，可判定为AB型血；d)未出现凝集现象，即观察到的是均匀的液相，可判定为O型血。
四、Rh血型的鉴定1.取凝集反应呈阴性结果的血浆，加入抗Rh试剂进行反应，观察是否出现凝集反应。
2.若出现凝集反应，可判定为Rh阳性；若未出现凝集反应，则判定为Rh阴性。
五、结果记录和报告1.根据观察到的凝集反应和结果判定，记录每个样本对应的血型结果。
2.将结果报告注明被测个体的姓名和样本编号，并送交有关部门或个人。
六、质量控制1.每次进行ABO血型鉴定前，进行试剂的质量控制，确保试剂的准确性和可靠性。
结论：以上所述为ABO血型鉴定的操作规程，包括实验室准备、标本采集和处理、凝集反应和结果判定、Rh血型的鉴定、结果记录和报告、质量控制等环节。
遵循本规程可确保ABO血型鉴定的准确性和可靠性，为血型鉴定提供指导和支持。
1.ABO血型鉴定操作规程
9.2.3受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤）以及类B或cisAB等。
9.2.4受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。
9.2.5受检者血清中缺乏应有的抗—A和抗—B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。
8.2血浆成分异常
8.3抗体减弱或丢失
8.4抗原减弱或变异
8.5亚型
9.超出范围结果处理:
9.1红细胞自凝：冷凝集系增高是最为常见原因。应用37℃-40℃的生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷集素。
9.2正反定型结果不一致原因
9.2.1分型血清效价太低、亲和力不强。如抗—A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。
11.2进行组织器官移植时，供、受器官者的ABO系统血型必须相同。
11.3母、子ABO系统血型不合可以造成ABO系统新生儿溶血病。
11.4ABO血型在人群中的分布，可作遗传学的研究。
12.最常见的误差来源:
12.1标本采集错误
12.2标本信息登记错误
12.3红细胞和血清比例不当
12.4离心过度或不足
9.3.5如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4℃放置30min，用显微镜检查核实。
9.3.6如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗A或抗—B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对90％HAB分泌型的人有用。
9.3.7如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴，混合。往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。
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1.0 原理
ABO 血型鉴定操作规程
2.0
3.0
4.0
5.0 5.1 5.2
6.0 6.1
6.2 6.3
6.4 6.5 6.6
6.7
7.0 7.1 根据红细胞上和血清（或血浆）中有无 A 抗原和（或）B 抗原及其抗体，将血型分为
A 型、
B 型、AB 型及 O 型。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定 ABO 血
型。
正定型正定是指用已知抗-A、抗-B 血清来检测受检红细胞上有无相应的 A 抗原和（或）
B 抗原；反定型反定是指用已知 A1型、B 型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相
应的抗-A 和（或）抗-B。
原始样品要求
5 mL 静脉全血。
样品容器和添加剂
真空试管，EDTA.K2抗凝/普通试管，不抗凝。
检测环境要求
温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。
所需材料和设备
设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。
材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水
（NS）、干净空试管。
检测操作过程
将受检标本以 1000g 离心 5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用 NS
洗涤三次后，配成 3%～5%红细胞悬液。
取 6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。
在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各 50 L ，其余管加入受检血浆/血清各100 L 。
在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者 3%～5%红细胞悬液各 50 L ，摇匀。
在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入 A1、B、O 红细胞试剂各 50 L ，摇匀。
1000g 离心 15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。
根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在 4℃、37℃下观察结果。
结果判断
凝集强度判断标准见表 1。
表1 凝集强度判断标准表
凝集强度
4+
3+
2+
1+
±
-或θ
MF
pH
H
判断标准
红细胞凝集成一大块，液体背景透明，无游离红细胞
数个大凝集块，液体背景透明，无游离红细胞
有很多小凝集块，液体背景透明，无游离红细胞
有许多很小的凝集块，肉眼可见，液体背景不透明，有游离红细胞微小的凝集块，肉眼很难看清，需要用显微镜观察
无凝集，无溶血，全是游离红细胞
混合凝集外观，镜下可见少数红细胞凝集，而大部分是游离红细胞部分溶血
完全溶血
7.2 ABO 血型结果判断见表
2：
正定型
抗-A 血清血抗-B 血清血Ac
表 2 2 血型结果判断表
反定型定
Bc Oc
自身对照血型
＋――＋―
＋
―
＋
―
＋
＋
―
＋
―
＋
―
―
―
―
―
―
―
―
―
A
B
O
AB
7.3
7.4
8.0
9.0
10.0注：“＋”表示凝集或溶血；“―”表示不凝集。
正反定型不一致、ABO 抗原减弱、抗-A 或抗-B 减弱、O 细胞凝集时，排除人为操作
错误后，执行《疑难血型鉴定操作规程》进行最终确认。
根据上述判断标准，作出结论并记录在《免疫血液学检查实验记录》。
结果报告
根据实验结果，打印《免疫血液学实验报告》。
报告的形式为：A 型/B 型/O 型/AB 型。
实验结果解释
实验结果为 A 型、B 型、AB 型，O 型，说明受检者 ABO 血型分别属于 A 型、B 型、AB 型，O 型。
红细胞上分别有 A 抗原、B 抗原、皆有 A 抗原和 B 抗原、皆无 A 抗
原和 B 抗原；血浆中分别有抗-B、抗-A、抗-AB、皆无抗-A(B)。
质量控制
当受检标本与正、反定型试剂反应，凝集强度少于 2+时，取标准抗-A、抗-B 或 A、
B、O 红细胞与正、反定型试剂反应，以验证试剂效能是否下降。
精品
11.0 11.1 11.2 11.3 11.4 11.5
11.6 11.7 11.8 注意事项
试管必须清洁、干燥，防止溶血。
加样顺序一般先加血清，再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
分型血清效价太低，抗原抗体比例不适当，可使反应不明显误判为阴性反应。
用立即试管法可能不能测出亚型（如 A X），需延长作用时间。
观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于亚型、类 B 或 cisAB 的发现。
各种原因引起的红细胞溶解，容易误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体，也会造成不凝集。
受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（多见于白血病或恶性肿瘤）以及类 B 或 cisAB 等，易被误判为不凝集。
ABO 正反定型不一致常见原因
11.8.1 分型血清效价太低，亲和力不强。
11.8.2 漏加、错加试剂或标本，试剂被污染或失效。
11.8.3 红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显误判为阴性结果。
11.8.4 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（多见于白血病或恶性肿瘤）
以及类 B 或 cisAB 等。
11.8.5 受检者血清蛋白紊乱（高球蛋白血症）或实验温度过高，常引起细胞呈缗钱状排列。
11.8.6 受检者血清中缺乏应有的抗-A 或抗-B，如丙种球蛋白缺乏症。
11.8.7 各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和了相
应的抗体。
11.8.8 由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。
11.8.9 血清中有意外抗体，如抗-I 等，常干扰定型。
11.8.10 患者近期曾输过异型血，使其血液标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混
合外观凝集”现象。
11.8.11 嵌合体血型，体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集”现象。
11.8.12 获得性类 B 的影响：由于革兰氏阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。
11.8.13 药物等因素的影响：药物、右旋糖酐及静脉注射某些造影剂聚集而类似凝集。
11.8.14 老年人血清中抗体水平大幅度下降。
11.8.15 新生儿尚未形成 ABO 同种抗体，故三个月内的新生儿只要求做正定型来确定血型。
11.9 红细胞在保存期内会逐渐变为暗红色，只要其未被细菌污染，抗原性不受任何影响。
精品
11.10
12.0 每次使用前，检查试剂有无明显溶血发生，明显溶血者弃掉。
标本保存不当、试剂过期变质、试剂被污染、不同批号的试剂混用、离心力或离心时间不符合要求、孵育时间不准确、孵育温度未达试剂实验要求等均可出现较大的变异。
相关文件
单克隆抗-A、抗-B 血型定型试剂说明书
ABO 标准抗原红细胞试剂说明书
全国临床检验操作规程（第三版）
临床输血技术规范
中国输血技术操作规范（1997 年版）
为什么ABO血型鉴定要正、反定型都做？原因如下：
正定型属于细胞抗原定型，反定型属于血清抗体定型。
ABO 血型鉴定必须正、反定型都要做，
有相互印证的作用。
因为单做正定型来鉴定 ABO 血型，在某些情况下不可靠，易造成 ABO 血
型误判。
如：
1. 抗-A、抗-B 血清效价低时（试剂失效、被污染或被稀释），可使正定型反应不明显误判为阴
性反应。
则 A、B、AB 型会误判为 O 型。
2. 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（多见于白血病或恶性肿瘤），可使
正定型反应不明显误判为阴性反应。
则 A、B、AB 型会误判为 O 型。
3. 各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗
体。
可使正定型反应不明显误判为阴性反应。
则 A、B、AB 型会误判为 O 型。
4. 由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集。
则 A、B、O 型会误判为 AB 型。
5. 获得性类 B 的影响：由于革兰氏阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。
则 A 型
会误判为 AB 型。
ABO 血型误判，对于临床输血来说风险极大，会造成 ABO 血型异型输血，易引起急性溶血性输血反应的发生，对患者的生命安全造成威胁。
ABO 血型鉴定要正、反定型都做的法规支持：
1. 全国临床检验操作规程（第三版）P246-249
2. 临床输血技术规范（第十五条输血科（血库）要逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，
复查受血者和供血者 ABO 血型（正、反定型），并常规检查患者 Rh（D）血型（急诊抢救患者紧急输血时 Rh(D)检查可除外），正确无误时可进行交叉配血。
）
3. 中国输血技术操作规范（1997 年版）
.。