第九章 其他结晶技术
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•
•
• •
溶析结晶脱盐过程： 在溶析结晶温度下，反溶剂与水完全互溶，而在另一 温度下（如常温）反溶剂与水部分互溶、甚至完全不 互溶，可改变温度以产生液液分相来回收萃取剂。 2 个设备：即溶析结晶器和反溶剂再生器。
•
•
溶析结晶器在结晶温度下工作，加入的反溶剂与水互 溶，使盐形成晶体，而反溶剂携带大量水进入反溶剂 再生器，在再生温度下产生液液分相。将两液相分离， 除掉水。再生的反溶剂回到结晶器后可循环使用。
在某些场合聚集体的发生有明显的负面作用，因 此也构成溶析结晶的一个研究焦点。
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•
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• •
产生上述问题的原因在于溶析剂入口处的混合。 为改善混合状况，新型喷射进料装置已成功应用 于溶析结晶的工业生产中，主要有两种操作模式： 一是带外循环的喷射进料模式，另一种是直接喷 射进料模式，如图1 和图2 所示。 直接喷射模式形成的晶体结构缺陷较多；外循环 喷射模式提供的湍动强度大，晶体生长速率小， 成核多。
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•
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•
⑶ 利用一定温度下各种异构体钠盐或镁盐等溶解 度的差异，通过盐析温度的控制，达到异构体分 离的目的。 综上所述，盐析在中间体工业生产中是较为重要 的操作工序。但盐析也同时带来了大量无机盐母 液，除一部分在生产中循环套用之外，大部分母 液还有待于进一步处理和综合利用。
•
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蛋白质的盐溶与盐析现象的解释
•
蛋白质是亲水胶体，带有羧基解离的负电荷和氨基 成盐的正电荷，其极性基团使分子间排斥，同时与 水分子形成水膜。这些因素使蛋白质形成溶于水的 溶胶状态。
当加入少量无机盐时，增加了蛋白质分子上的极性 基团，因而增大了在水中的溶解度，出现盐溶现象。 当盐浓度到一定程度时，一方面盐同大量水分子结 合，使蛋白质没有足够的水维持溶解状态，破坏了 水膜，容易沉淀出来。一方面加入的离子中和了蛋 白质的电荷，使相互聚集沉淀出来，出现盐析现象。
SO3H SO3Na OH
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（4）脱硫酸钙法
•
利用氢氧化钙中和，使生成的硫酸钙沉淀与可溶
性的磺酸钙分离，此法适于某些多磺酸。
•
此法操作复杂，三废多，且生成的大量石膏要妥 善处理等原因，故工业化受到限制。
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9.2 盐析法过程中的一些因素
1. 过饱和度的控制
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•
•
盐析现象图示
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4
2. 蛋白质盐析原理
①
蛋白质在高浓度盐的溶液中，随着盐浓度的逐渐增 加，由于蛋白质水化膜被破坏、溶解度下降而从溶 液中沉淀出来。 各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的 盐溶液来沉淀分离各种蛋白质。 优点：简单、经济、较少变性。 缺点：分辨率不高，要除盐。
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•
•
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（1）酸析法
•
依靠某些芳磺酸在一定浓度的稀硫酸中的溶解度
很小这个特性，而将磺化物料加水稀释，磺酸即 可析出。
•
例如4-硝基-2-氯-苯磺酸、4-硝基-2-甲基-苯磺酸， 1，5-蒽醌二磺酸等均可用此法分离。
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（2）直接盐析法
•
向稀释后的磺化物中直接加人食盐、氯化钾或
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SO3H OH HO3S G OH HO3S R SO3H OH
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（3）中和盐析法
•
利用芳磺酸在中和时生成的硫酸钠或其他无机盐， 而由于芳磺酸盐类在上述无机盐水溶液中的溶解度 大大小于在水中的溶解度，因而促使芳磺酸盐析出 来。
•
例如β-萘酚生产过程中的β-磺酸钠的盐析就用氢氧 化钠中和。
HO3S H2N
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•
NH2 SO3H
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•
⑵ 温差过大或冷却速度过快会发生温度的激荡，而 在局部区域产生高度的过饱和，引起过量的成核。 因此，盐析结晶应适当控制冷却速率和盐析前后温 度差。 通常将热溶液充分搅匀后，快速冷却到过饱和状态, 然后放慢冷却速率，结晶开始后，溶液温度由于结 晶热的放出而有所上升，此时则控制较慢的冷却速 度匀速降温，待大部分溶质在晶种表面上成长以后， 再增加冷却速率以达到最终温度，让溶液饱和度始 终处于介稳状态，从而控制产品结晶。
对溶质的溶解性差；
与溶解溶质的溶剂能够互溶。 常用的溶剂有乙醇、丙酮、甲醇、水等。 ⑵ 加料方式： 将反溶剂加入到溶液中，即正加法； 另一种是将溶液加入到反溶剂中，即反加法。
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（3）过饱和度控制
•
溶析结晶的过饱和度是通过溶析剂的加入产生的。
•
溶析结晶特别是间歇溶析结晶，溶析剂加入点处 的过饱和度很高，容易在瞬间产生大量初级晶核 并形成聚集体。这是溶析结晶有别于其它结晶方 式的一个显著特点。由于高过饱和度下快速的成 核与生长以及聚集体的形成，很容易大量包藏母 液，影响晶体产品的质量。
②
• •
球蛋白的选择性沉淀
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3. 影响盐析的因素
⑴ 无机盐的种类
•
盐析能力：半径小的高价离子在盐析时的作用较 强，阴离子的盐析效果比阳离子好，尤其以高价
阴离子更为明显。
• • •
PO4 3-＞SO42-＞CH3COO-＞Cl-＞NO3-＞INH4+＞K+＞Na+＞Li+ 盐析用盐要考虑几个因素：常用氯化钠、硫酸铵
主要内容
盐析法 溶析结晶法 反应结晶法
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9.1 盐析结晶 （一） 盐析在蛋白质提纯中的应用
1. 蛋白质在盐溶液中的特性 ⑴ 盐溶 蛋白质在纯水或低浓度盐溶液中，溶解度低， 若稍加一些无机盐则溶解度增加。 ⑵ 盐析 当加入的无机盐浓度继续增加，蛋白质溶解度 又反而减小，从而沉淀出来。
•
在搅拌中因磨损而产生的细晶，可通过适当提高盐析
温度重新溶解加以消除。
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3. 盐析温度对结晶的影响
•
⑴ 有机中间体一般均具正溶解度，温度对产品盐析影 响较大。通常高温有助于消除细晶，有助于产品溶解， 低温有助于溶质在晶面上长大（生成粗晶）, 有助于产 品析出。 例如中间体DSD酸（4，4‘-二氨基二苯乙烯-2，2’二磺酸），盐析温度急冷至50℃时，溶液变浊开始析 出，再慢冷到25 ℃，析出量明显增加。
•
β
pH
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4. 蛋白质盐析方法
•
①分步盐析法：通过改变盐的浓度达到分离目的， 将盐的浓度准确地分步提高到各种蛋白质所需的 浓度。 一般情况下，加入沉淀剂，分子量大的首先沉淀 出来，随着沉淀剂用量的增加，各个大分子化合 物按分子量由大到小的顺序陆续沉淀出来。 ②重复盐析法 ③反抽提法： 一定的盐浓度下将目的蛋白夹带一 定量的杂蛋白一同沉淀。将沉淀用较低浓度盐溶 液平衡，溶解其中的杂蛋白。
硫酸钠等无机盐类，可使某些磺酸成盐析出； 也可利用其盐类在不同的无机盐溶液中的溶解 度不同的特性，而将他们的各种同分异构体分 离。
•
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Hale Waihona Puke Baidu
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•
由2-萘酚用20%发烟硫酸在约80℃二磺化制取G酸 （7-羟基-1,3-萘二磺酸 ）时。向稀释的磺化物中先 加入KCl溶液，使G酸以钾盐形式析出，滤出G盐 后，再向滤液中加入NaCl溶液，即可获得其副产R 盐(钠盐，2-萘酚-3,6-二磺酸二钠盐)。用氯化钾、 氯化钠直接盐析时，有氯化氢气体放出，对设备腐 蚀性强，因此这种方法的应用受到一定的限制。
•
加盐过多，溶液密度高，析出速度快，晶细且易
形成晶簇，增加了洗涤等后道工序的操作难度， 同时带入过多无机盐杂质，影响产品纯度和使用 质量。
•
加盐量通常为溶液体积百分之几的比例。
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•
①
工业生产中：
盐析采取搅拌条件下长时间缓慢加盐或分步加盐 的方法，以防止在局部范围产生过饱和度的波动， 维持稳定的过饱和度； 料液稀释时通常用盐析母液，利用母液中已有的 产品细晶的诱导作用，晶核逐渐长大并诱导产生 新的晶核，使结晶过程持续不断，同时在接近饱 和状态时，一些极其微小的晶体将自动地溶解， 而已形成的一些较大晶体则自动地长大。
7
②
③
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⑵ 蛋白质种类的影响
•
不同的蛋白质分子，离子强度对蛋白质的溶解度 影响的程度不同，表现为斜率的不同。
拟球蛋白 0.50 血清白 蛋白
log S
0
碳氧肌 红蛋白
-0.50 碳氧血 红蛋白
-1.00 0 2
血纤维 蛋白原 4
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μ
6
8
10
8
⑶ 蛋白质浓度的影响
•
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3. 溶析结晶分离无机盐水溶液
•
加盐精馏、加盐萃取等盐效分离是分离有机溶剂与水 形成的共沸物、近沸物的有效方法。但得到高纯有机 溶剂的同时会产生浓盐水溶液，如何从中回收利用盐 是一个亟待解决的问题。 溶析结晶是回收浓盐水溶液中的无机盐的有效方法。 具有广阔的应用前景。 回收盐的通常方法是将盐水溶液蒸发得到盐的结晶。 但一些盐的结晶水与固体结合得比较牢固，需要很高 的温度才能完全除去结晶水，常压下难以实现。即使 能够实现，蒸发过程的能耗也非常大，而且不适用于 热稳定性差的盐。
25
9.2 溶析结晶
1. 概念
•
溶析结晶：是利用被分离物质与溶剂分子间相互作用 力的差异，通过改变溶剂的性质来选择性地溶解杂质， 而使目标组分最大限度地从溶剂中晶析出来的过程。
过程特点：是溶质首先被溶解于一种溶剂中（主溶剂） 形成饱和溶液，然后通过添加另一种能与主溶剂完全 互溶而与溶质不互溶的第二溶剂（反溶剂），来显著 降低溶质的溶解度，使溶质晶析出来达到分离的目的。
•
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•
主溶剂的作用：是选择性的溶解杂质，以提高产
品的纯度；反溶剂的作用则是降低溶质溶解度，
形成过饱和溶液，提高收率。
•
利用溶析结晶可以生产超微细无定形药物，也可 以用来分离盐溶液，以降低能耗。
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2. 影响溶析结晶的因素
•
⑴ 反溶剂的选择：
①
② • • ① ②
pH6.6
1
0℃
•
0
25℃
2
3 μ
10
4
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⑸ pH的影响
•
当溶液的pH在蛋白质 等电点附近时，由于其 净电荷为零，在水中溶 解度减小，可以用来分 级沉淀蛋白质。 但等电点时析出的沉淀， 由于颗粒较细，难于过 滤，只能用离心机分离。
7 6 5 4 3 碳氧血红蛋白 2 1 0 3 4 5 6 7 8 卵清蛋白
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•
• •
（二） 有机中间体生产中盐析过程的探讨
盐析方法
•
有机中间体含硫化合物中的磺酸及其盐类，大多 是固体，易溶于水，且没有特定的熔点，加热至 高温时易于分解。 这类产品在生产过程中，要想得到它，就不能采 用精馏、结晶等方法来实现； 要依靠酸析法、直接盐析法、中和盐析法、脱硫 酸钙法、萃取分离等方法来完成。
②
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2. 搅拌对盐析结晶的影响
•
结晶未开始时搅拌强度大，开始析出时搅拌强度适当 小些。生产中通常根据不同形式搅拌器，控制不同的
搅拌速度、时间来达到预期的搅拌效果。一般来说，
盐析时适当延长搅拌时间，可使盐析过程完成得较好。
•
直接法生产R盐，国内一些厂家只搅拌15-30min结束 盐析过程；德国拜耳公司搅拌15h，盐析收率能达到 67-68%，国内只达到45-50%。
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硫酸铵优点
①
溶解度大：每升水可溶解767克之多。在这一高溶 解度范围内，许多蛋白质和酶都可以被盐析沉淀 出来。 温度系数小：硫酸铵的溶解度受温度影响不大。 对于需要在低温条件下进行酶的纯化来说，应用 硫酸铵是有利的。
硫酸铵不易引起蛋白质变性，对于很多种酶还有 保护作用，且价格低廉，容易获得。
•
中间体的盐析过程大多通过测定溶液密度，直接控 制溶液过饱和度。 起始溶液密度一般较高，通常都需要用水稀释调整 到规定密度。 如果溶液密度低，需用密度高的溶液进行混配，否 则就必须在盐析时多加盐，以保证晶浆总体密度。
•
•
•
如间接法生产R盐是用R盐滤液盐析而得。
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•
盐析加盐过少，溶液密度低，盐析得率低；
•
蛋白质浓度提高，盐用量减少。
10 9 8 7 30g/L 3g/L
- dS dP
6 5 4 3 2 1 0 40 50 60 P 70 80
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⑷ 温度的影响
2
•
log S
在无盐或稀盐溶液中， 大多数蛋白质溶解度是 随温度升高而增大的。 在高盐溶液中随温度升 高，溶解度减小。因此 在高温下，同浓度的蛋 白质所需的盐量小。
•
•
• •
溶析结晶脱盐过程： 在溶析结晶温度下，反溶剂与水完全互溶，而在另一 温度下（如常温）反溶剂与水部分互溶、甚至完全不 互溶，可改变温度以产生液液分相来回收萃取剂。 2 个设备：即溶析结晶器和反溶剂再生器。
•
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溶析结晶器在结晶温度下工作，加入的反溶剂与水互 溶，使盐形成晶体，而反溶剂携带大量水进入反溶剂 再生器，在再生温度下产生液液分相。将两液相分离， 除掉水。再生的反溶剂回到结晶器后可循环使用。
在某些场合聚集体的发生有明显的负面作用，因 此也构成溶析结晶的一个研究焦点。
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产生上述问题的原因在于溶析剂入口处的混合。 为改善混合状况，新型喷射进料装置已成功应用 于溶析结晶的工业生产中，主要有两种操作模式： 一是带外循环的喷射进料模式，另一种是直接喷 射进料模式，如图1 和图2 所示。 直接喷射模式形成的晶体结构缺陷较多；外循环 喷射模式提供的湍动强度大，晶体生长速率小， 成核多。
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⑶ 利用一定温度下各种异构体钠盐或镁盐等溶解 度的差异，通过盐析温度的控制，达到异构体分 离的目的。 综上所述，盐析在中间体工业生产中是较为重要 的操作工序。但盐析也同时带来了大量无机盐母 液，除一部分在生产中循环套用之外，大部分母 液还有待于进一步处理和综合利用。
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蛋白质的盐溶与盐析现象的解释
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蛋白质是亲水胶体，带有羧基解离的负电荷和氨基 成盐的正电荷，其极性基团使分子间排斥，同时与 水分子形成水膜。这些因素使蛋白质形成溶于水的 溶胶状态。
当加入少量无机盐时，增加了蛋白质分子上的极性 基团，因而增大了在水中的溶解度，出现盐溶现象。 当盐浓度到一定程度时，一方面盐同大量水分子结 合，使蛋白质没有足够的水维持溶解状态，破坏了 水膜，容易沉淀出来。一方面加入的离子中和了蛋 白质的电荷，使相互聚集沉淀出来，出现盐析现象。
SO3H SO3Na OH
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（4）脱硫酸钙法
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利用氢氧化钙中和，使生成的硫酸钙沉淀与可溶
性的磺酸钙分离，此法适于某些多磺酸。
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此法操作复杂，三废多，且生成的大量石膏要妥 善处理等原因，故工业化受到限制。
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9.2 盐析法过程中的一些因素
1. 过饱和度的控制
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盐析现象图示
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2. 蛋白质盐析原理
①
蛋白质在高浓度盐的溶液中，随着盐浓度的逐渐增 加，由于蛋白质水化膜被破坏、溶解度下降而从溶 液中沉淀出来。 各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的 盐溶液来沉淀分离各种蛋白质。 优点：简单、经济、较少变性。 缺点：分辨率不高，要除盐。
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（1）酸析法
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依靠某些芳磺酸在一定浓度的稀硫酸中的溶解度
很小这个特性，而将磺化物料加水稀释，磺酸即 可析出。
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例如4-硝基-2-氯-苯磺酸、4-硝基-2-甲基-苯磺酸， 1，5-蒽醌二磺酸等均可用此法分离。
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（2）直接盐析法
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向稀释后的磺化物中直接加人食盐、氯化钾或
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SO3H OH HO3S G OH HO3S R SO3H OH
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（3）中和盐析法
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利用芳磺酸在中和时生成的硫酸钠或其他无机盐， 而由于芳磺酸盐类在上述无机盐水溶液中的溶解度 大大小于在水中的溶解度，因而促使芳磺酸盐析出 来。
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例如β-萘酚生产过程中的β-磺酸钠的盐析就用氢氧 化钠中和。
HO3S H2N
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NH2 SO3H
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⑵ 温差过大或冷却速度过快会发生温度的激荡，而 在局部区域产生高度的过饱和，引起过量的成核。 因此，盐析结晶应适当控制冷却速率和盐析前后温 度差。 通常将热溶液充分搅匀后，快速冷却到过饱和状态, 然后放慢冷却速率，结晶开始后，溶液温度由于结 晶热的放出而有所上升，此时则控制较慢的冷却速 度匀速降温，待大部分溶质在晶种表面上成长以后， 再增加冷却速率以达到最终温度，让溶液饱和度始 终处于介稳状态，从而控制产品结晶。
对溶质的溶解性差；
与溶解溶质的溶剂能够互溶。 常用的溶剂有乙醇、丙酮、甲醇、水等。 ⑵ 加料方式： 将反溶剂加入到溶液中，即正加法； 另一种是将溶液加入到反溶剂中，即反加法。
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（3）过饱和度控制
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溶析结晶的过饱和度是通过溶析剂的加入产生的。
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溶析结晶特别是间歇溶析结晶，溶析剂加入点处 的过饱和度很高，容易在瞬间产生大量初级晶核 并形成聚集体。这是溶析结晶有别于其它结晶方 式的一个显著特点。由于高过饱和度下快速的成 核与生长以及聚集体的形成，很容易大量包藏母 液，影响晶体产品的质量。
②
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球蛋白的选择性沉淀
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3. 影响盐析的因素
⑴ 无机盐的种类
•
盐析能力：半径小的高价离子在盐析时的作用较 强，阴离子的盐析效果比阳离子好，尤其以高价
阴离子更为明显。
• • •
PO4 3-＞SO42-＞CH3COO-＞Cl-＞NO3-＞INH4+＞K+＞Na+＞Li+ 盐析用盐要考虑几个因素：常用氯化钠、硫酸铵
主要内容
盐析法 溶析结晶法 反应结晶法
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9.1 盐析结晶 （一） 盐析在蛋白质提纯中的应用
1. 蛋白质在盐溶液中的特性 ⑴ 盐溶 蛋白质在纯水或低浓度盐溶液中，溶解度低， 若稍加一些无机盐则溶解度增加。 ⑵ 盐析 当加入的无机盐浓度继续增加，蛋白质溶解度 又反而减小，从而沉淀出来。
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在搅拌中因磨损而产生的细晶，可通过适当提高盐析
温度重新溶解加以消除。
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3. 盐析温度对结晶的影响
•
⑴ 有机中间体一般均具正溶解度，温度对产品盐析影 响较大。通常高温有助于消除细晶，有助于产品溶解， 低温有助于溶质在晶面上长大（生成粗晶）, 有助于产 品析出。 例如中间体DSD酸（4，4‘-二氨基二苯乙烯-2，2’二磺酸），盐析温度急冷至50℃时，溶液变浊开始析 出，再慢冷到25 ℃，析出量明显增加。
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4. 蛋白质盐析方法
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①分步盐析法：通过改变盐的浓度达到分离目的， 将盐的浓度准确地分步提高到各种蛋白质所需的 浓度。 一般情况下，加入沉淀剂，分子量大的首先沉淀 出来，随着沉淀剂用量的增加，各个大分子化合 物按分子量由大到小的顺序陆续沉淀出来。 ②重复盐析法 ③反抽提法： 一定的盐浓度下将目的蛋白夹带一 定量的杂蛋白一同沉淀。将沉淀用较低浓度盐溶 液平衡，溶解其中的杂蛋白。
硫酸钠等无机盐类，可使某些磺酸成盐析出； 也可利用其盐类在不同的无机盐溶液中的溶解 度不同的特性，而将他们的各种同分异构体分 离。
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由2-萘酚用20%发烟硫酸在约80℃二磺化制取G酸 （7-羟基-1,3-萘二磺酸 ）时。向稀释的磺化物中先 加入KCl溶液，使G酸以钾盐形式析出，滤出G盐 后，再向滤液中加入NaCl溶液，即可获得其副产R 盐(钠盐，2-萘酚-3,6-二磺酸二钠盐)。用氯化钾、 氯化钠直接盐析时，有氯化氢气体放出，对设备腐 蚀性强，因此这种方法的应用受到一定的限制。
•
加盐过多，溶液密度高，析出速度快，晶细且易
形成晶簇，增加了洗涤等后道工序的操作难度， 同时带入过多无机盐杂质，影响产品纯度和使用 质量。
•
加盐量通常为溶液体积百分之几的比例。
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①
工业生产中：
盐析采取搅拌条件下长时间缓慢加盐或分步加盐 的方法，以防止在局部范围产生过饱和度的波动， 维持稳定的过饱和度； 料液稀释时通常用盐析母液，利用母液中已有的 产品细晶的诱导作用，晶核逐渐长大并诱导产生 新的晶核，使结晶过程持续不断，同时在接近饱 和状态时，一些极其微小的晶体将自动地溶解， 而已形成的一些较大晶体则自动地长大。
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②
③
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⑵ 蛋白质种类的影响
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不同的蛋白质分子，离子强度对蛋白质的溶解度 影响的程度不同，表现为斜率的不同。
拟球蛋白 0.50 血清白 蛋白
log S
0
碳氧肌 红蛋白
-0.50 碳氧血 红蛋白
-1.00 0 2
血纤维 蛋白原 4
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μ
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⑶ 蛋白质浓度的影响
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3. 溶析结晶分离无机盐水溶液
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加盐精馏、加盐萃取等盐效分离是分离有机溶剂与水 形成的共沸物、近沸物的有效方法。但得到高纯有机 溶剂的同时会产生浓盐水溶液，如何从中回收利用盐 是一个亟待解决的问题。 溶析结晶是回收浓盐水溶液中的无机盐的有效方法。 具有广阔的应用前景。 回收盐的通常方法是将盐水溶液蒸发得到盐的结晶。 但一些盐的结晶水与固体结合得比较牢固，需要很高 的温度才能完全除去结晶水，常压下难以实现。即使 能够实现，蒸发过程的能耗也非常大，而且不适用于 热稳定性差的盐。
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9.2 溶析结晶
1. 概念
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溶析结晶：是利用被分离物质与溶剂分子间相互作用 力的差异，通过改变溶剂的性质来选择性地溶解杂质， 而使目标组分最大限度地从溶剂中晶析出来的过程。
过程特点：是溶质首先被溶解于一种溶剂中（主溶剂） 形成饱和溶液，然后通过添加另一种能与主溶剂完全 互溶而与溶质不互溶的第二溶剂（反溶剂），来显著 降低溶质的溶解度，使溶质晶析出来达到分离的目的。
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主溶剂的作用：是选择性的溶解杂质，以提高产
品的纯度；反溶剂的作用则是降低溶质溶解度，
形成过饱和溶液，提高收率。
•
利用溶析结晶可以生产超微细无定形药物，也可 以用来分离盐溶液，以降低能耗。
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2. 影响溶析结晶的因素
•
⑴ 反溶剂的选择：
①
② • • ① ②
pH6.6
1
0℃
•
0
25℃
2
3 μ
10
4
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⑸ pH的影响
•
当溶液的pH在蛋白质 等电点附近时，由于其 净电荷为零，在水中溶 解度减小，可以用来分 级沉淀蛋白质。 但等电点时析出的沉淀， 由于颗粒较细，难于过 滤，只能用离心机分离。
7 6 5 4 3 碳氧血红蛋白 2 1 0 3 4 5 6 7 8 卵清蛋白
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•
• •
（二） 有机中间体生产中盐析过程的探讨
盐析方法
•
有机中间体含硫化合物中的磺酸及其盐类，大多 是固体，易溶于水，且没有特定的熔点，加热至 高温时易于分解。 这类产品在生产过程中，要想得到它，就不能采 用精馏、结晶等方法来实现； 要依靠酸析法、直接盐析法、中和盐析法、脱硫 酸钙法、萃取分离等方法来完成。
②
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2. 搅拌对盐析结晶的影响
•
结晶未开始时搅拌强度大，开始析出时搅拌强度适当 小些。生产中通常根据不同形式搅拌器，控制不同的
搅拌速度、时间来达到预期的搅拌效果。一般来说，
盐析时适当延长搅拌时间，可使盐析过程完成得较好。
•
直接法生产R盐，国内一些厂家只搅拌15-30min结束 盐析过程；德国拜耳公司搅拌15h，盐析收率能达到 67-68%，国内只达到45-50%。
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硫酸铵优点
①
溶解度大：每升水可溶解767克之多。在这一高溶 解度范围内，许多蛋白质和酶都可以被盐析沉淀 出来。 温度系数小：硫酸铵的溶解度受温度影响不大。 对于需要在低温条件下进行酶的纯化来说，应用 硫酸铵是有利的。
硫酸铵不易引起蛋白质变性，对于很多种酶还有 保护作用，且价格低廉，容易获得。
•
中间体的盐析过程大多通过测定溶液密度，直接控 制溶液过饱和度。 起始溶液密度一般较高，通常都需要用水稀释调整 到规定密度。 如果溶液密度低，需用密度高的溶液进行混配，否 则就必须在盐析时多加盐，以保证晶浆总体密度。
•
•
•
如间接法生产R盐是用R盐滤液盐析而得。
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•
盐析加盐过少，溶液密度低，盐析得率低；
•
蛋白质浓度提高，盐用量减少。
10 9 8 7 30g/L 3g/L
- dS dP
6 5 4 3 2 1 0 40 50 60 P 70 80
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⑷ 温度的影响
2
•
log S
在无盐或稀盐溶液中， 大多数蛋白质溶解度是 随温度升高而增大的。 在高盐溶液中随温度升 高，溶解度减小。因此 在高温下，同浓度的蛋 白质所需的盐量小。