病毒中和试验测定法
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
病毒中和试验测定法
1.固定病毒稀释血清法(α法) 本法用于抗血清的中和价。试验需先滴定病毒
毒价，试验时将其稀释成每一单位剂量含200个TCID
50
，再将待检血清倍比稀释
加等量200个TCID
50
/ml的病毒液，混匀后37℃1h，每一稀释度接种24孔细胞
培养板4孔，每孔。5%C0
2
培养箱培养一定时间后，记录出现CPE孔数，以不出现CPE数和接种数的比为中和比值。按Karber法计算中和价。其公式如下：
Log TCID
50
=L+d（）
（TCID50用对数计算，L为病毒最低稀释度的对数。d为组距，即稀释系数，在10倍系列稀释则为-1，S为各组CPE与接种数比值之和）
50%中和试验举例
每一接种剂量含病毒 100TCID50或 100LD50或100EID50或100ID50
L=-1，d=，S=4/4+4/4+4/4+4/4+2/4=
代入Karber公式：LogND
50= -1－* 该抗血清ND
50
(半数中和单位)为，即1/160，
则其中和价为160 ND
50
/ml，可以简写成160。
2.固定血清稀释病毒法(β法) 本法用于测定抗血清的中和指数。将病毒原液10倍系列稀释，分列于2排无菌管，第一排加等量正常血清（对照组）；第二排加待检血清（中和组），混匀后，置37℃1h，分别接种细胞板孔（或鸡胚、实验
动物）进行培养，记录CPE（鸡胚、动物死亡数），计算TCID
50（或LD
50
），按下
式计算中和指数。
中和组TCID
50（或LD
50
）
中和指数= ————————————
对照组TCID
50（或LD
50
）
查反对数，即得该待检血清的中和指数。通常中和指数>50者判为阳性，
10-49为可疑，<10者为阴性。例如：
对照组滴度的LD
=
50
=
中和组滴度的LD
50
中和指数=10 中和指数的对数Log=Log100=
一般来说，以10倍稀释进行滴度测定，Log10=1。因此小于10（1