醋酸纤维素薄膜电泳法
醋酸纤维素薄膜电泳原理
醋酸纤维素薄膜电泳原理醋酸纤维素薄膜电泳是一种常见的电泳技术，它利用醋酸纤维素薄膜作为分离介质，将带电粒子在电场作用下进行分离。
其原理如下：1. 醋酸纤维素薄膜制备首先需要制备醋酸纤维素薄膜。
通常采用将醋酸纤维素溶解于有机溶剂中，然后涂布在玻璃板或硅片上，通过挥发有机溶剂使得溶液中的醋酸纤维素形成均匀的薄膜。
2. 薄膜上形成静电场接着，在制备好的醋酸纤维素薄膜上形成一个静电场。
通常使用高压直流电源将两个金属极板连接到两端，然后将极板放置在离玻璃板或硅片一定距离的位置上。
这样就可以在玻璃板或硅片表面形成一个强大的静电场。
3. 样品准备样品需要经过处理才能进行分离。
通常需要将样品溶解在缓冲液中，并加入适量的表面活性剂以保持样品的稳定性。
此外，还需要将样品进行染色以便于观察。
4. 样品注入将处理好的样品注入到醋酸纤维素薄膜上，让其在静电场作用下进行分离。
通常使用注射器或微量泵进行样品注入。
5. 分离过程在静电场作用下，带电粒子会受到电场力的作用，向着极板移动。
不同大小、不同电荷的粒子会受到不同的力，从而发生分离。
这个过程需要一定时间，通常需要几十分钟到几小时才能完成。
6. 结果分析通过观察醋酸纤维素薄膜上的色带可以得到分离结果。
不同大小、不同电荷的粒子会形成不同位置和形状的色带。
通过比对标准样品可以确定待测物质的种类和浓度。
总之，醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于静电场作用下带电粒子分离原理的技术。
它具有高效、高灵敏度、高分辨率等优点，被广泛应用于生物学、化学、环境科学等领域。
醋酸纤维素薄膜电泳法分离鉴定三种腺苷酸
醋酸纤维素薄膜电泳法分离鉴定三种腺苷酸一、目的掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离带电颗粒原理；观察核苷酸类物质的紫外吸收现象。
二、原理带电粒子在电场中向着与其自身带相反电荷的电极移动的现象，称为电泳。
控制电泳条件（如pH 等），使混合试样中的不同组分带有不同的净电荷，各组分在电场中移动的速度或方向各不相同，从而达到分离各组分的目的，这就是电泳分析法。
以醋酸纤维素薄膜作支持物进行电泳分析的方法称为醋酸纤维素薄膜电泳法。
在pH4.8 电泳缓冲液条件下，带有不同量磷酸基团的AMP、ADP、ATP 解离之后，带有负电荷量的顺序为：ATP＞ADP＞AMP，它们在电场中移动速度不同，从而得到分离。
又利用核苷酸类物质的碱基具有紫外吸收性质，将分离后的电泳醋酸薄膜放在紫外灯下，可见暗红色斑点，参照标准样品在同样条件下的电泳情况，对混合试样分离后的各组分进行鉴定。
三、仪器与试剂1．仪器（1）电泳仪、电泳槽（平板式）（2）紫外灯（3）电吹风、医用镊子（4）醋酸纤维素薄膜（8 cm×12cm）（5）微量进样器（10μl 或50μl）2．试剂（1）柠檬酸缓冲液（pH4.8）：称取柠檬酸8.4g，柠檬酸钠17.6g，溶于蒸馏水，稀释到2000ml。
（2）标准腺苷酸溶液：用蒸馏水将纯AMP、ADP、ATP 分别配成100mg/ 10mL 溶液。
其中AMP 需略加热助溶。
置冰箱备用。
（3）混合腺苷酸溶液：分别取上述标准液AMP、ADP、ATP 各1 份等量混匀。
置冰箱备用。
四、操作步骤1．点样：将醋酸纤维素薄膜放入pH4.8 柠檬酸缓冲液中，待膜完全浸透（约0.5h）后用镊子取出，夹在清洁的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，仔细辨认薄膜无光泽面，用微量进样器在无光泽面上点样。
点样点距薄膜一端1.5cm，样点之间距离1.5cm。
点样量为2～3μl，按少量多次原则分2~3 次点完。
2．电泳：向两个电泳槽内注入pH4.8 的柠檬酸缓冲液，缓冲液的高度约为电泳槽深度的3/4。
醋酸纤维素薄膜电泳
各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点 及形状不同，在电场中的迁移速度不同。 以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在 pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条主 要区带。其中清蛋白的泳动速度最快，其余依 次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。
三、实验材料
醋酸纤维薄膜（2×8 cm） 镊子
5. 放薄膜的时候毛面朝下，要注意放平，与 滤网充分接触，但不要接触点样端。 6. 电泳时应选择合适的电流强度，一般电流 强度为0.4～0.6mA/cm膜宽度。电流强度高， 则热效应高；电流过低，则样品泳动速度慢 且易扩散。
7. 操作过程为防止指纹污染，应戴手套。
采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为 醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素薄膜具有均一的泡沫状的结构，厚 度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动 阻力很小，该法具有微量、快速、简便、分辨 力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种 血清蛋白。
血清中各主要蛋白质的等电点均低于pH8.6， 在该缓冲液中均带负电荷，在电场中向正极移 动。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、 γ-球蛋白和各种脂蛋白等。
2. 点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸 吸去，以免引起样品扩散。但不宜太干，否则 样品不易进入膜内，造成点样起始点参差不起， 影响分离效果。
3. 点样时，点样不要过多，恰到好处，动作 要轻、稳，用力不能太大，以免损坏膜片或 印出凹陷影响电泳区带分离效果。 4. 醋酸纤维素薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥－ 巴比妥钠缓冲液,其浓度为0.05～0.09 mol/L。 (选择何种浓度与样品和薄膜的厚薄有关。缓 冲液浓度过低，则区带泳动速度快区带扩散 变宽；缓冲液浓度过高，则区带泳动速度慢， 区带分布过于集中，不易分辨。)
醋酸纤维素薄膜电泳
12～2９
缓冲液pH=8.6
pI＜pH
血清蛋白均带负电荷,在电场中向正极移动
在醋酸纤维素薄膜分为五条带。电泳迁移率最大的是白蛋 白，其后为α1球蛋白，α2球蛋白，β球蛋白和γ球蛋白
+
白蛋 α α β
γ
白(A) 1
2
实验器材
电泳仪，电泳槽，滤纸，醋酸纤维素薄膜 脱色摇床，染缸，点样器
血清中几种主要蛋白组分：
血清蛋白质 等电点
分子量
白蛋白 α1球蛋白 α2球蛋白 β球蛋白
4.８白 6.85～7. ５０
69,000
200,000
300,000
90,000～ 150,000 156,000～ 950,000
占总蛋白的 ％
57～72 2～5 4～9
步骤
４、平衡 将膜条无光泽向下置于电泳槽支架上
，点样端靠近负极。薄膜两端要紧贴滤纸，（点
样线不要压在滤纸上）中间平直悬空，加盖密封
，平衡５min。
５ 、电泳
将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上 （点样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上(见下图)。 要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直，中间不能下垂。连接好电泳 仪。在室温下电泳，打开电源开关，调节电流强度 0.5mA/cm膜宽度，通电50min后，调节旋钮使电流为零，关 闭电泳仪切断电源。
试剂
４x电极缓冲液：1.5mol/L Tris-HCl(pH 8.6)
（Tris三羟甲基氨基甲烷）
染色液：称取0.5g氨基黑，甲醇50ml，冰醋
酸10ml，蒸馏水加至100ml。
漂洗液：取甲醇45ml，冰乙酸5ml和蒸馏水
50ml，混匀置塞试剂瓶内贮存。
实验操作
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳是一种高效、快速和准确的分离和鉴定分子的技术。
这种技术被广泛应用于生物化学、医学、环境科学等领域。
醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离技术。
该技术将醋酸纤维素质地的薄膜作为分离介质，样品通过电泳移动分离在薄膜的表面。
这种技术具有高分辨率、高灵敏度、高通量和半制备规模的优点。
醋酸纤维素薄膜电泳技术的应用范围广泛，包括但不限于以下方面：
1、蛋白质分离和鉴定。
醋酸纤维素薄膜电泳技术可以对蛋白质进行高分辨率的分离和鉴定，对于寻找新的蛋白质、筛选生物标志物和新药物的作用非常重要。
2、核酸分离和鉴定。
醋酸纤维素薄膜电泳技术还可以高效地分离和纯化核酸，对于对基因筛选和遗传学研究非常重要。
3、药物分析和质量控制。
对于药物制剂的分析和质量控制，醋酸纤维素薄膜电泳技术可以快速准确地检测出药物中的有效成分和有害成分。
4、环境分析。
醋酸纤维素薄膜电泳技术也可以用于环境分析，例如分析水体中的有机物和无机物质。
在应用这种技术时，需要注意以下几点：
1、选择合适的样品前处理方法，以保证样品的纯度和完整性。
2、选择合适的运行条件，如电场强度、分离介质pH值、电泳时间等，以获得最佳的分离效果。
3、选择合适的检测方法，如荧光检测、吸收光谱检测等，以达到最优的检测灵敏度和选择性。
总之，醋酸纤维素薄膜电泳技术在生物化学、医学、环境科学等领域中具有广泛的应用前景。
我们需要不断地探索和创新，以推动这种技术的发展和应用。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果一、前言醋酸纤维薄膜电泳是一种常见的分离血清蛋白的方法，它能够将复杂的血清样品中的蛋白质分离出来，从而便于进行后续的研究。
本文将详细介绍醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果。
二、实验方法1. 样品制备将血清样品加入到离心管中，并进行离心处理，去除其中的颗粒物和红细胞等杂质。
然后取出上清液，进行下一步处理。
2. 薄膜电泳将制备好的样品加入到电泳槽中，并在两端接上电极。
然后通过调节电场强度和时间等参数，使得不同分子量的蛋白质在电场作用下向不同方向移动，并最终被分离开来。
3. 银染将分离好的样品进行银染处理，使得其中存在的蛋白质能够被显色。
然后观察显色效果，并对其进行记录和分析。
三、实验结果经过以上实验步骤，我们成功地得到了血清样品中的蛋白质分离结果。
具体结果如下：1. 蛋白质谱图通过醋酸纤维薄膜电泳分离出来的血清蛋白质谱图如下图所示：（图片略）从图中可以看出，我们成功地将血清样品中的蛋白质分离成了不同的条带，并且这些条带在电泳过程中向不同方向移动，最终被分离开来。
2. 蛋白质种类通过对分离出来的蛋白质进行银染处理后，我们可以看到其中存在多种不同种类的蛋白质。
具体包括：（1）白蛋白（2）球蛋白（3）免疫球蛋白（4）转铁蛋白等。
3. 调整实验参数对结果的影响在实验过程中，我们还尝试了调整一些实验参数，以观察其对结果的影响。
具体包括：（1）电场强度：当电场强度较大时，不同分子量的蛋白质能够更快地向两端移动，并且更容易被分离开来。
但是，如果电场强度过大，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
（2）电泳时间：当电泳时间较长时，不同分子量的蛋白质能够更充分地被分离开来，并且条带也更加清晰。
但是，如果电泳时间过长，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
四、结论通过以上实验结果的观察和分析，我们可以得出以下结论：1. 醋酸纤维薄膜电泳是一种有效的血清蛋白质分离方法。
醋酸纤维素薄膜电泳
清蛋白 前清蛋白
制备。
临床意义：
白蛋白：主要在肝脏合成，所以与肝脏疾患密切相关。
α球蛋白的增加与发热有关，与炎症有关。 β球蛋白增加常伴随血中脂质的增加。
γ球蛋白含有抗体成分，在许多慢性感染、免疫性疾病中有异常。
例如：多发性骨髓瘤病人在β球蛋白与γ球蛋白之间出现一个尖峰：M蛋白
肝硬化病人γ球蛋白增加，白蛋白降低。
红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎 蛋白、类固醇及同工酶等。它具有简单快
-球蛋白
-球蛋白
速、对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”
现象，染色后蛋白质区带更清晰等优点， 电渗作用虽然较高但很均一 ，不影响样
品的分离效果。不足之处是分辨率比聚丙
烯酰胺凝胶电泳低，由于薄膜厚度小（约 10～100μm），样品用量很少，不适于
思考题
P2：1、2、3
预习：实验五、六
• 凝胶层析分离蛋白质混合物的原理？何谓分子筛
效应？ DNS—氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析中，各种氨 基酸是怎样得到分离？
•
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
——根据迁移率分离
操作步骤
标记 用铅笔在薄膜无光泽面(毛面)一端2cm处
轻画一细线 ，并在右上角做好标记。
浸泡 将醋酸纤维素薄膜毛面向下，在缓冲溶液中浸泡，使其充分浸透。 点样
用镊子将薄膜置于滤纸上，吸收多余的液体(不要太干），利用载玻片 一侧蘸取样品，45度角于毛面细线处点样。
(有效长度)
设：混合物中有A、B两物质：
• 物质A在电场中移动的距离为: dA= AVt/l
物质B的移动距离为：dB= BVt/l 则两物质移动距离之差为： Δd=(dA-dB)=(A-B)Vt/l 即：物质A、B能否分离取决于两者的迁移率
醋酸纤维薄膜电泳实验
醋酸纤维薄膜电泳实验实验目的1.了解电泳仪的结构及工作原理2.初步掌握电泳仪的基本操作。
3.了解常用的蛋白质显色方法。
实验器材醋酸纤维薄膜，pH8.6巴比妥缓冲液：称取巴比妥钠10.30g，巴比妥1.84g，溶于1000ml蒸馏水中，或者称取10.3g巴比妥钠，加1mol/L盐酸8ml，加蒸馏水至1000ml。
染色液：氨基黑10B1g溶于10ml冰醋酸与90ml甲醇的混合液中。
洗涤液：冰醋酸10ml加甲醇90ml,或者甲醇50ml，冰醋酸10ml加蒸馏水40ml.透明液：甘油溶液，或用苯甲醇，水杨酸甲醇等溶液。
微量注射器，蛋白质样品液和电泳仪一台。
实验原理以醇酸纤维等制成薄膜作为支持体的电泳仪称为薄膜电泳。
在一定酸碱度条件下，蛋白质分子由于基团电离而带有一定的电荷，在含有缓冲液的薄膜上，受电场力作用以一定的速度向一定的方向移动。
不同的蛋白质分子，由于所带电荷的不同，移动的速度和方向也不同，从而达到分离。
这种薄膜对蛋白质样品的吸附作用小，几乎完全消除纸蛋白质电泳中出现的拖尾现象，又因为薄膜的亲属性比较小，它所容纳的缓冲液也少。
电泳是的电流大部分是样品在传导，因此具有简单，快速，区带清晰，灵敏度高，易于定量和便于保存的特点。
本方法样品用量少，5ug的蛋白质就能得到满意的结果。
因此特别适合于病理情况下微量蛋白检测。
以广泛用于蛋白质和同工酶的分离分析，也可以用于免疫电泳等方面。
实验步骤1醋酸纤维薄膜的准备将醋酸纤维薄膜切成10cm*2.5cm的膜条，用镊子夹住缓慢放入巴比妥缓冲液中30分钟，充分浸透，取出用滤纸吸去多余的缓冲液。
2点样用微量吸管将5ug但白字样品点在薄膜中英。
3电泳仪湿润的薄膜条置于电泳仪的长条架子上，薄膜条两端与滤纸相接触，拉直膜条，将滤纸条的另一端浸入缓冲液中，缓冲液两槽的液面要水平，以避免虹吸现象。
加盖密封，注意防止缓冲液蒸发并避免水滴落在膜条上。
静止10分钟。
接通电源开始电泳，调节好电压使之稳定，以20mv/cm的电场强度电泳1小时左右。
实验七 醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白
实验七醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白一.目的掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。
二、原理蛋白质是两性电解质。
当PH>PI时，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动；当PH<PI时，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动。
血清中含有数种蛋白质，在同一PH值时，因所带电荷不同，而在电场中的移动速度也不相同，故可用电泳法将其分离。
本试验以牛血清为材料，醋酸纤维薄膜为支持物，通过点样、电泳、染色、脱色从而得到血清中蛋白质的分离图谱，再进行观察和定量分析。
血清中含白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等。
其等电点低于pH7.0，在缓冲液中（pH8.6）中，电离成负离子，在电场中向阳极移动。
用醋酸纤维薄膜作蛋白电泳有简便，快速，分离清晰，容易定量等优点。
三、实验仪器1、牛血清2 、醋酸纤维薄膜3 、镊子4 、电泳仪5 、电泳槽6 、盖玻片四、实验试剂1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液（离子强度，PH8.6）：称取巴比妥1.66g 和巴比妥钠12.76g，溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
用pH计较正后使用。
2、染色液：氨基黑10B0.5g,甲醇50ml，冰乙酸10ml，蒸馏水40ml 混匀即可。
3、漂洗液：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml和蒸馏水50ml混匀即可。
五、实验步骤1、准备：用镊子取薄膜一条，浸入缓冲液中，完全浸透后（大约3-5分钟），用镊子取出，将无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，将滤纸对折，吸取多余的缓冲液（注意不要吸的太干）。
2、点样：取盖玻片一块，用玻璃棒将血清均匀的涂在盖玻片的一端面上，直直的在薄膜一端1/3处点样。
3、电泳：将薄膜平贴于放在电泳槽上并已浸透缓冲液的滤纸上，无光泽面要向下放置，点样端放在阴极，进行电泳。
电泳条件：电压90-110V，电流0.4-0.6A,通电60分钟。
4、染色：电泳完毕，将薄膜浸入染色液（回收）中10分钟，进行染色。
5、漂洗：染色完毕，将薄膜取出，放入漂洗液中漂洗至背景无色，在浸入蒸馏水中。
醋酸纤维素薄膜电泳实验报告
醋酸纤维素薄膜电泳实验报告引言：薄膜电泳是一种常用的分离和分析技术，它在生物医学、环境科学等领域得到广泛应用。
本实验旨在研究醋酸纤维素薄膜电泳的原理、操作步骤以及其在分离和分析中的应用。
一、醋酸纤维素薄膜电泳的原理醋酸纤维素薄膜电泳是利用醋酸纤维素薄膜作为分离介质，通过电泳电流的作用将待测物质分离出来的一种技术。
醋酸纤维素薄膜具有良好的电泳分离性能和化学稳定性，能够有效地分离样品中的离子或分子。
二、实验操作步骤1. 制备醋酸纤维素薄膜：将醋酸纤维素溶解于醋酸乙酯中，制备成一定浓度的醋酸纤维素溶液。
然后将溶液滴在玻璃基板上，待其自然干燥形成薄膜。
2. 准备电泳缓冲液：按照实验要求，配置适当浓度和pH值的电泳缓冲液。
3. 将待测样品加入电泳缓冲液中，并进行样品处理。
4. 将制备好的醋酸纤维素薄膜放置在电泳槽中，注入电泳缓冲液。
5. 将带电样品加入电泳槽中，通过施加电场，使样品在醋酸纤维素薄膜上进行电泳分离。
6. 根据实验要求，确定分离时间，停止电泳，取出醋酸纤维素薄膜。
7. 对分离的样品进行染色或检测，得到分离结果。
三、醋酸纤维素薄膜电泳的应用醋酸纤维素薄膜电泳在生物医学、环境科学等领域具有广泛的应用价值。
1. 生物医学应用：醋酸纤维素薄膜电泳可用于分离和检测生物样品中的蛋白质、核酸等生物大分子，对于研究基因表达、疾病诊断等具有重要意义。
2. 环境科学应用：醋酸纤维素薄膜电泳可用于水质和大气污染物的分析，能够对污染物进行快速、高效的分离和测定，为环境监测和治理提供了有效手段。
3. 食品安全应用：醋酸纤维素薄膜电泳可用于食品中有害物质的检测和分离，如农药残留、重金属等，为食品安全保障提供了技术支持。
结论：醋酸纤维素薄膜电泳是一种重要的分离和分析技术，具有广泛的应用前景。
本实验通过制备醋酸纤维素薄膜，利用电泳原理对待测样品进行分离和分析，研究了醋酸纤维素薄膜电泳的操作步骤及应用。
该技术在生物医学、环境科学和食品安全等领域具有重要意义，能够为相关领域的研究和实践提供有效的技术支持。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳，是一种分析和测定蛋白质的方法。
下面将介绍一些相关的参考内容，以帮助您更深入了解这一方法。
1. 应用和原理血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳（SER-PAGE）是一种常用的蛋白质电泳分析方法，可以用于分离和检测血清蛋白及其亚类。
其原理是基于蛋白质在电场中的迁移速率与其电荷质量比有关。
在薄膜电泳中，蛋白质样品在醋酸纤维素薄膜上进行电泳分离，然后通过染色等方法进行定量或定性分析。
2. 薄膜电泳装置和操作步骤薄膜电泳装置包括电源、原电极、测电极、薄膜和样品槽。
操作步骤通常包括制备样品和电解液，加载样品和电解液到薄膜中，接通电源，进行电泳分离，然后进行染色和分析。
3. 应用领域SER-PAGE广泛应用于生物化学、生物医药和临床诊断等领域。
在生物化学中，SER-PAGE可用于研究蛋白质结构与功能的关系。
在生物医药中，SER-PAGE可用于血清蛋白分析、监测蛋白质药物的纯度和一致性。
在临床诊断中，SER-PAGE可用于检测血清中的异常蛋白质，辅助癌症、心脏和免疫系统相关疾病的诊断。
4. SER-PAGE与其他电泳方法的比较相比较传统的PAGE方法，SER-PAGE具有操作简单、不需要注入胶、迁移速度快等优点。
与SDS-PAGE相比，SER-PAGE适用于纯化量较小的样品，并且对样品中的蛋白质亚基分离效果更好。
与凝胶电泳相比，SER-PAGE不需要特殊仪器设备，成本较低。
5. 发展趋势与进展SER-PAGE作为一种传统的电泳技术，仍在不断发展和改进。
比如，一些新的薄膜材料和成像技术的引入，使得分离和检测的灵敏度得到提高。
同时，一些研究也在调整电解液组成和pH值，以优化蛋白质的分离和迁移。
总结起来，血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳是一种广泛应用于蛋白质分离和分析的方法。
通过了解其原理、操作步骤和应用领域，可以更好地理解和应用这一技术。
随着技术的不断进步和改进，SER-PAGE有望在生物化学、生物医药和临床诊断等领域发挥更大的作用。
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法一、原理醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。
带电颗粒在电场力作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。
由于各种蛋白质都有特定的等电点，如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中，则蛋白质将带正电荷而向负极移动。
反之，则向正极移动。
因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关，所以，可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。
血清中含有多种蛋白质，它们的等电点都在pH 7.5以下。
将血清放于pH 8.6的缓冲液电泳时，所有的血清蛋白都带有负电荷，在电场中将向正极移动。
由于各种血清蛋白在相同pH时所带电荷数量不等，分子颗粒大小不一，因而泳动速度不同，经电泳被分离开来。
血清蛋白质的等电点和分子量见下表。
本实验以醋酸纤维素薄膜（简称CAM）为支持物分离血清中的不同蛋白质。
它是一种良好的呈均一泡沫状疏松薄膜，厚约120μm具有一定的吸水性。
二、实验材料、仪器及试剂1．材料：健康人血清或鸡血清2．仪器：电泳仪电泳槽3．试剂：（1）醋酸纤维素薄膜；（2）pH8.6 巴比妥缓冲液（离子强度0.06～0.07）：取巴比妥0.83克，巴比妥钠6.38克，加蒸馏水加热溶解后，定容至500ml。
（3）染色液：取氨基黑10 B 0.5克，溶于50ml甲醇中，再加冰醋酸10ml，蒸馏水40ml混匀。
（4）漂洗液：95%乙醇4.5ml，冰醋酸 5ml，蒸馏水50ml混合。
（5）透明液：95%乙醇80ml，冰醋酸20ml混合。
三、实验方法1．准备薄膜：将切割整齐的2.5×6cm的薄膜条，浸入巴比妥缓冲液中浸透后，取出，用吸水纸吸去多余缓冲液。
2．点样：仔细辩认薄膜的粗糙面与光滑面，在粗糙面距离薄膜一端1.5cm处，用铅笔轻轻划一条直线。
用玻棒蘸上血清样品，涂于盖玻片边缘处（边缘长度应比膜条宽度窄），将此边缘按压在直线上。
注意：样品应点在薄膜的粗糙面一侧。
最新三血清醋酸纤维素薄膜电泳
4、培养皿（泡膜、染色和漂洗用）
5、滤纸
6、镊子
7、试管、试管架、吸量管 8、分光光度计
（定量用）
操作步骤
1、薄膜准备 ①将醋酸纤维素薄膜切成2×8cm的小条。 ②在薄膜粗面一端1.5cm处用铅笔轻轻画一横线。 ③在薄膜角上用铅笔作一标记。 ④将醋酸纤维素薄膜浸泡于缓冲液中20min。
正常人约2-3%
操作流程
1、薄膜准备 2、电泳仪准备 3、点样 4、上槽 5、电泳 6、染色及漂洗
注意事项
1、最好选用同一批号、厚薄均匀、质量良好 的醋纤膜。
2、样品要新鲜。 3、点样要细窄、均匀、集中。 4、盐桥要平整。 5、电泳槽盖要密封。 6、室温不宜过高。
注意事项
7、选择合适的缓冲液离子强度。 8、两电泳槽内缓冲液面应在同一水平面。 9、要控制好电压、电流和电泳时间。 10、电泳槽内两极溶液要交替使用，操作时应
血清蛋白电泳
光密度扫描
乳酸脱氢酶同功酶电泳
同工酶：催化相同化学反应，而蛋白质分子结构不同的
一组酶。
乳酸脱氢酶
H 心肌型
M 骨骼型
HH HH
LDH1 (H4)
HH HM
LDH2 (H3M)
HH MM
LDH3 (H2M2)
HM MM
LDH4 (HM3)
MM MM
LDH5 (M4)
*生理及临床意义
同工酶谱的改变有助 于对疾病的诊断。
血浆蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱
电泳方向
－
＋
γ
β
α2 α1
A
纤维蛋白原
操作步骤
7、透明 薄膜完全干燥后，浸入透明液中20min后，
取出平贴在玻璃板上（不要留有气泡），完全 干燥后即成透明的薄膜图谱，要作扫描或照相 用。可长期保存。
醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质
醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质生物化学实验醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质一、实验目的掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法二、实验原理蛋白质是两性电解质。
在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。
也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。
肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。
肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。
三、实验器材1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿数只；4、点样器；5、竹镊子；6、玻璃棒；7、电吹风；8、试管六只；9、恒温水浴锅；10、电泳槽；11、直流稳压电泳仪；12、7220型分光光度计；13、剪刀四、实验试剂1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml 蒸馏水中；2、染色液，可反复使用；3、漂洗液：取乙醇45ml ，冰醋酸10ml ，混匀；4、浸出液：0.4mol/L NaOH 溶液；5、透明液：取冰醋酸25ml 、无水乙醇75ml ，混匀。
五、实验操作1、准备和点样取一条醋酸纤维薄膜，浸入缓冲液中，完全浸透后，用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液；用玻棒蘸取少量血清，涂在点样器上，然后轻轻于距纤维薄膜一端1.5cm 处接触，样品即呈一条状突于纤维膜上。
实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳【实验目的】（1）了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术。
（2）测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
【实验原理】带电荷的胶体粒子在电场中移动的现象称电泳。
醋酸纤维素薄膜电泳法是以醋酸纤维素薄膜作为支持物。
血清中含多种蛋白质，当在pH这8.6时，这些蛋白质均带负电，它们在电场中向阳极移动，由于各种蛋白质所带负电荷多少及颗粒大小不同，所以在同一电场，同一pH环境中涌动速度不同。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。
血清中含有清蛋白，α~球蛋白，β~球蛋白，γ~球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分，立体构象，分子量，等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
分子量小，等电点低，相同碱性pH。
表1 人血清中12种蛋白质的等电点及分子量缓冲体系中，带负电喝多的蛋白质颗粒在电场中移动速度快。
例如，以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清中pH=8.6的缓冲体系中电泳1h左右，染色后可显示5条区带。
清蛋白泳动最快，其余依次为α1~，α2~,β~及γ~球蛋白。
这些区带经洗脱后可用分光光度法定量，也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。
临床医学常利用它们异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。
此法由于操作简单，快速。
图1 正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图为清蛋白，2，3，4，5分别为α1,α2,β~及γ~球蛋白，6为点样原点（3）优点。
目前，已成为临床生化检验的常规操作之一。
【临床意义】清蛋白62-72% α1—球蛋白3-4% α2—球蛋白6-10% β~—球蛋白7-11% γ~—球蛋白9-18%血清蛋白电泳的病理改变多半是清蛋白降低和一种或二种以上球蛋白增加。
表2 血清蛋白的临床意义【试剂】1.巴比妥缓冲液（pH=8.6离子强度为0.06）：称取巴比妥纳12.76克，巴比妥1.66克，置于盛有200ml蒸馏水的烧杯中稍加热溶解后，移置100ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。
醋酸纤维素薄膜电泳指导
醋酸纤维素薄膜电泳指导醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和纯化生物大分子的方法。
本文将对醋酸纤维素薄膜电泳的操作步骤进行详细介绍，并提供实验指导。
一、实验材料准备1. 醋酸纤维素薄膜：可准备自制醋酸纤维素薄膜或购买商用的醋酸纤维素薄膜。
2. 缓冲液：根据需要选择适当的缓冲液，常用的有Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液等。
3. 模版DNA：准备需要分离和纯化的DNA样品。
4. 电泳仪和电源：确保电泳仪和电源的正常工作。
二、膜制备1. 制备醋酸纤维素溶液：将适量醋酸纤维素加入足够的乙醇中，并充分搅拌溶解。
2. 漏斗滴膜：将制备好的醋酸纤维素溶液倒入装有膜模的漏斗中，边转动漏斗边滴膜于预处理过的载玻片上，使其均匀涂布在玻片上。
3. 干燥膜：将滴膜后的载玻片在通风处自然干燥，确保膜完全干燥后再进行下一步操作。
三、电泳条件设定1. 调节电泳仪：按照电泳仪的设备说明书正确设置电泳仪的参数，如电压、时间等。
2. 准备缓冲液：根据实验需要选择合适的缓冲液，并按照比例配置好缓冲液。
3. 进行预电泳：将准备好的醋酸纤维素薄膜浸入缓冲液中，进行预电泳处理。
四、样品处理和装载1. DNA片段制备：将目标DNA打断成合适的片段大小，并使用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析确认打断效果。
2. 样品加载：将制备好的DNA样品加载到醋酸纤维素薄膜上，可采用直接加载或间接加载的方式。
五、电泳操作1. 启动电泳：将装有DNA样品的醋酸纤维素薄膜浸入缓冲液中，确保电泳液覆盖薄膜，并启动电源。
2. 电泳过程：根据需求设定合适的电源参数，进行电泳分离。
注意观察电泳过程，确保电泳效果和样品分离。
3. 停止电泳：根据实验需要设定合适的电泳时间，完成电泳后断开电源。
六、薄膜处理和分析1. 取出薄膜：将电泳结束的薄膜小心取出，避免扭曲或损坏。
2. 染色处理：可根据需要选择合适的染色方法染色薄膜上的DNA 样品，如乙锐亮绿、溴化乙锭等染料。
3. 分析结果：使用合适的分析工具，如UV-Vis分光光度计、荧光成像仪等，对薄膜上的DNA样品进行定量或定性分析。
实验五.血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳分离
四、电泳的分类 目前，电泳（electrophoresis）方法大致可分为三类 显微电泳、自由界面电泳（没有支持物）及区带电泳。以区 带电泳应用比较广泛。显微电泳是用显微镜直接观察细胞等 大颗粒物质电泳行为的过程。目前已用于研究膜结构及癌细 胞和正常细胞的差异性等方面。 自由界面电泳是被分离的溶质颗粒经电泳后与缓冲溶液之 间形成界面的电泳过程。利用适当的光学系统可观察到界面 的移动。在电泳过程中，每个移动界面（峰）相当于某一特 定的蛋白质。如：用于血浆蛋白成分的电泳。
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离子强度的计算公式为： I＝1/2Σ mizi2=1/2(m1z12+m2z22+…mnzn2) I－溶液的离子强度； mi－离子的摩尔浓度； zi－离子的价数 1，2，…n－代表各种离子。 （3）溶液粘度： 泳动度与溶液粘度是成反比关系。因此，粘度过大 或过小，必然影响泳动度。 4、电渗：当支持物不是绝对惰性物质时，常常会有一些离 子基团如羧基、磺酸基、羟基等吸附溶液中的正离子，使靠 近支持物的溶液相对带电。在电场作用下，此溶液层会向负 极移动。反之，若支持物的离子基团吸附溶液中的负离子， 则溶液层会向正极移动。这种溶液层的泳动现象称为电渗。
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A 清蛋白 B 1 2
清蛋白 1
2
血清蛋白电泳图谱
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（六）定量：
一般采用洗脱法或光密度扫描法，测定各蛋白 质组分的相对百分含量。 人血清中五种蛋白质的正常值范围： 清蛋白 54.0－73.0％； α1球蛋白 2.8－5.1％； α2球蛋白 6.3－10.6％： β球蛋白 5.2－11％： γ球蛋白 12.5－20.0％。
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血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
一、原理： 采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维 素薄膜电泳。醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的 纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯 乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤 维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120微 米，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。 醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力 高，对样品无拖尾和吸附现象等优点。已广泛应用于科学 实验、生化产品分析和临床化验，如：血清蛋白、血红蛋 白、脂蛋白、球蛋白、糖蛋白等的分离和鉴定。 二、操作要点
醋酸纤维素薄膜电泳-精品医学课件
5、时间：30-40min
（四）显色与脱色
1、显 色 氨基黑10B（1-2min） 2、脱色
5%冰醋酸漂洗3次
注意：用干净镊子夹电泳槽中的膜 污染镊子用于显色与脱色
( isoelectric point, pI)
当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白 质解离成正、负离子的趋势相等，即成 为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的 pH称为蛋白质的等电点。
3、血清蛋白质
1）依据电泳结果分类
清蛋白(69.000) 1-球蛋白(200.000) 2-球 蛋 白(300.000) -球蛋白(90.000-150.000) -球蛋白(156.000-950.000)
2）各血浆蛋白质的等电点
分类
pI
清蛋白
4.64
1-球蛋白 5.06 2-球蛋白
-球蛋白 5.12
-球蛋白
6.857.3
pH8.6
— — — — —
组成比例
56一62％ 4一7％ 9一11％ 11一15％ 12一16%
A
B
清蛋白 1 2
清蛋白 1 2
血清蛋白电泳图谱
[操作]
1．电泳介质 ——醋纤膜的准备
醋酸纤维素膜（2×8cm） 放入pH8.6的巴比妥缓冲液
2．样品 ^
1)γ-球蛋白 前面分离提纯、浓缩
2)血清:对照
3、点样
粗糙面点样
1.5c m
注意：点样量 适度 过多：拖尾和扩散 过少：则无法检出
4、电泳
将点好祥的醋纤膜点样端放进电泳 槽架负极（黑色）
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附录ⅣA醋酸纤维素薄膜电泳法
试剂（1)巴比妥缓冲液(pH8.6) 称取巴比妥2.76g、巴比妥钠15.45g，加水溶解使成1000ml。
（2)氨基黑染色液称取氨基黑10B 0.5g，溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。
（3)漂洗液量取乙醇45ml、冰醋酸5ml及水50ml，混匀。
（4)透明液量取冰醋酸25ml、无水乙醇75ml，混匀。
测定法取醋酸纤维素薄膜，裁成2cm×8cm膜条，将无光泽面向下，浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透，取出夹于滤纸中，轻轻吸去多余的缓冲液后，将膜条无光泽面向上，置含巴比妥缓冲液(pH8.6)的电泳槽架上，通过滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。
于膜条上距负极端2cm处，条状滴加蛋白含量约5％的供试品溶液2～3μl,在0.4～0.6mA/cm ［总电流量=电流量(mA/cm)×每条膜的宽度（cm）×膜条数］电流条件下电泳；同时取新鲜人血清作对照，电泳时间以白蛋白与丙种球蛋白之间的电泳展开距离约2cm为宜。
电泳完毕，将膜条取下浸于氨基黑或丽春红染色液中，2～3分钟后，用漂洗液浸洗数次，直至脱去底色为止。
将洗净并完全干燥的膜条浸于透明液中，待全部浸透后，取出平铺于洁净的玻板上，干燥后即成透明薄膜，可供测定纯度和作标本长期保存。
将干燥的醋酸纤维素薄膜用色谱扫描仪采用反射（未透明薄膜）或透射（已透明薄膜）方式在记录器上自动绘出各蛋白组分曲线图，以人血清作对照，按峰面积计算各蛋白组分的含量(%)。
附注：采用全自动电泳仪操作时，参考仪器使用说明书进行。