实验方法总结(2):细胞实验部分

合集下载

初中生物实验知识点

初中生物实验知识点

初中生物实验知识点生物实验是初中生物课程中不可或缺的一部分,通过实验,学生可以更好地理解生物的基本原理和概念。

以下是一些初中生物实验的知识点:1.细胞实验:细胞是生命的基本单位,通过显微镜观察细胞的结构,可以了解细胞的基本组成和功能。

常见的细胞实验包括细胞的染色实验、细胞的大小和形态实验等。

2.呼吸实验:呼吸是生物体获取能量的关键过程,通过呼吸实验可以了解不同条件下生物体的呼吸过程。

常见的呼吸实验包括呼吸消耗氧气、产生二氧化碳的实验等。

3.光合作用实验:光合作用是植物获取能量的过程,通过光合作用实验可以了解植物如何利用光能进行合成。

常见的光合作用实验包括植物的生长实验、叶绿素的含量实验等。

4.遗传实验:遗传是生物的一个重要特征,通过遗传实验可以了解基因的传递和表达。

常见的遗传实验包括遗传性状的观察实验、基因的分离实验等。

5.生态实验:生态是生物与环境相互作用的领域,通过生态实验可以了解生物在不同环境条件下的适应性和相互关系。

常见的生态实验包括物种多样性实验、食物链实验等。

6.植物生长实验:植物的生长过程受到光、水、温度等因素的影响,通过植物生长实验可以了解这些因素对植物生长的影响。

常见的植物生长实验包括植物对光的反应实验、植物对水的需求实验等。

7.动物行为实验:动物的行为受到内部和外部因素的影响,通过动物行为实验可以了解动物的行为模式和生存策略。

常见的动物行为实验包括动物的觅食行为实验、动物的社会行为实验等。

8.病原体实验:病原体是导致疾病的微生物,通过病原体实验可以了解病原体的特性和传播途径。

常见的病原体实验包括细菌培养实验、真菌培养实验等。

以上是一些初中生物实验的知识点,通过实验的亲身体验,学生可以更好地理解生物的相关概念和原理,培养观察和实验能力,提高科学素养。

细胞生物学实验报告

细胞生物学实验报告

实验一细胞的形态观察及其大小测量【实验目的】1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察,了解细胞的形态及其显微结构;2、学习显微测量的方法,对细胞的大小有一直观认识。

【实验用品】普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片等。

【实验材料】小白鼠肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;洋葱。

【实验内容和方法】(一)细胞形态观察l、动物细胞的观察(1)人肝细胞切片:在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。

注意肝细胞之间的界限、细胞的形状、细胞核的形状和数量、核仁的形状和数量、细胞质的形态构造以及细胞质和细胞核染色的区别。

(2)鸡血细胞涂片的观察:注意观察血细胞的组成;红细胞、白细胞、血小板的形态特点。

2、植物细胞的观察(1)取蚕豆叶片横切片的观察:注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。

(2)洋葱表皮细胞的形态观察:用镊子撕取洋葱表皮,滴一滴蒸馏水,盖上盖玻片。

在显微镜下观察的形态和结构。

(二)细胞的大小和测量1、测微尺的使用目镜测微尺是一块圆形玻片,中心刻有一尺,长5~10mm,分成50~100格。

每格的实际长度因不同物镜的放大率和不同镜筒长度而异。

镜台测微尺是在一块载玻片中央,用树胶封固一圆形的测微尺,长1mm或2mm,分成100格或200格,每格的实际长度0.01mm(10μm)。

当用目镜测微尺来测量细胞的大小时,必须先用镜台测微尺核实目镜测微尺每一格的长度。

方法如下:(1)卸下目镜的上透镜,将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上,再旋上目镜的上透镜。

(2)将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好,使测微尺分度位于视野中央。

调焦至能看清镜台测微尺的分度。

(3)小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊,可转动目镜上透镜进行调焦),使两尺左边的一直线重合,然后由左向右找出两尺另一次重合的直线(如图所示)。

(4)记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。

按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm:123测定目镜测微尺每格实长的图解 上尺:目镜测微尺;下尺:镜台测微尺镜台测微尺的格数目镜测微尺每格的微米数= —————————×10 目镜测微尺的格数例如,图中镜台测微尺1格=目镜测微尺6格,代入公式得:目镜测微尺每格=1/6×10μm=1.66μm(5)取下镜台测微尺,换上需要测量的玻片标本,用目镜测微尺测量标本。

细胞工程实验总结

细胞工程实验总结

实验一、细胞培养实验器材和试剂的准备1、哪些物品适合于高压灭菌,并说明理由。

①材料:微孔滤膜(直径25 cm):孔径为0.22μm、微孔滤膜(直径90 cm):孔径为0.22 μm、过滤器(直径25 cm)。

②仪器和器材:眼科剪刀和镊子、长镊子、培养皿、培养瓶、试剂瓶(或盐水瓶)、移液枪、10毫升试管、10毫升离心管、巴氏吸管、5毫升(或10毫升)吸量管、不锈钢过滤器、塑料过滤器、注射器、超净工作台、干燥箱、高压灭菌锅、正压泵。

理由:适合于高压灭菌是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些耐高温的塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液(如Hanks液、PBS等)。

2、细胞培养常用液体如何配制和灭菌?1)PBS :8.0g NaCl、0.2gKCl、2.2gNa2HPO4、0.12gKH2PO4溶于1000 mL双蒸水,高压灭菌,4℃保存。

(准备试剂瓶)灭菌方法:高压灭菌。

2)干粉培养基过滤除菌(先准备好不锈钢过滤器及滤膜,安装后高压灭菌,适度烘干;铝盒4个,三角瓶2个,容量瓶,不锈钢过滤器一套,酒精灯,酒精棉球3瓶,吸耳球3个,吸量管10毫升和5毫升各5根,分装用瓶,血清,超纯水,抗生素)认真阅读说明书。

说明书都注明干粉不包含的成分,常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。

这些成分有些是必须添加的,如NaHCO3、谷氨酰胺,有些根据实验需要决定。

配制方法(1L):1)在一个尽可能接近总体积的容器中加入大约500mL双蒸水。

2)在室温(20℃到30℃)的水中加入干粉培养基。

3)水洗袋内残留培养基,全部转移到容器内,轻轻搅拌,不要加热。

4)完全溶解之后,1袋1L粉状DMEM加3.7g NaHCO3,1mmoL∕L丙酮酸钠,即0.11g/L,添加双抗。

5)用双蒸水定容到1L,搅拌溶解。

注意不要过分搅拌。

6)通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值培养基在过滤前要保持密封。

植物实验总结报告范文(3篇)

植物实验总结报告范文(3篇)

第1篇一、实验目的本次实验旨在通过观察和分析植物的生长发育过程,了解植物的基本生理特性,掌握植物实验的基本操作方法,提高学生的实验技能和科学素养。

二、实验内容1. 植物形态观察(1)实验材料:小麦种子、白菜种子、向日葵种子等。

(2)实验步骤:①将小麦种子、白菜种子、向日葵种子分别播种于装有土壤的盆中。

②观察并记录种子发芽、幼苗生长、叶片展开、花蕾形成等过程。

③测量并记录幼苗的高度、叶片长度等生长指标。

(3)实验结果与分析:通过观察,小麦种子发芽后长出细长的茎和绿色的叶片,叶片展开呈长条形;白菜种子发芽后长出细小的茎和圆形的叶片,叶片展开呈匙形;向日葵种子发芽后长出粗壮的茎和绿色的叶片,叶片展开呈掌状。

实验结果表明,不同植物的种子在发芽和幼苗生长过程中具有不同的形态特征。

2. 植物光合作用实验(1)实验材料:向日葵幼苗、遮光纸、光强计、CO2分析仪等。

(2)实验步骤:①将向日葵幼苗置于光照强度为1000勒克斯的环境中,测量并记录光合速率。

②用遮光纸将向日葵幼苗部分遮光,测量并记录光合速率。

③将向日葵幼苗置于黑暗环境中,测量并记录光合速率。

(3)实验结果与分析:实验结果显示,向日葵幼苗在光照条件下光合速率较高,遮光条件下光合速率降低,黑暗条件下光合速率几乎为零。

这表明植物的光合作用受到光照强度的影响,光照强度越高,光合作用越强。

3. 植物呼吸作用实验(1)实验材料:小麦种子、呼吸速率计、CO2分析仪等。

(2)实验步骤:①将小麦种子置于呼吸速率计中,测量并记录呼吸速率。

②将小麦种子置于黑暗环境中,测量并记录呼吸速率。

(3)实验结果与分析:实验结果显示,小麦种子在光照条件下呼吸速率较高,黑暗条件下呼吸速率降低。

这表明植物的光合作用和呼吸作用相互关联,光照条件下光合作用增强,呼吸作用减弱;黑暗条件下光合作用减弱,呼吸作用增强。

4. 植物水分运输实验(1)实验材料:向日葵幼苗、水势计、染料等。

(2)实验步骤:①将向日葵幼苗的根部用染料染色。

实验针灸学实验报告分析(3篇)

实验针灸学实验报告分析(3篇)

第1篇一、引言针灸学作为我国传统医学的重要组成部分,具有悠久的历史和丰富的实践经验。

随着现代科技的发展,实验针灸学应运而生,它是在中医理论指导下,运用现代科学技术和方法,对针灸作用原理、腧穴定位、针灸疗效等方面进行系统研究的学科。

本报告针对实验针灸学实验报告进行详细分析,旨在了解实验针灸学的研究方法、实验过程和实验结果,为后续研究提供参考。

二、实验内容与方法1. 实验内容实验针灸学实验报告主要涉及以下几个方面:(1)腧穴定位:通过实验验证腧穴的准确性,为临床针灸治疗提供依据。

(2)针灸作用原理:探讨针灸对机体生理、生化等方面的影响,揭示针灸作用机理。

(3)针灸疗效:通过实验评估针灸对疾病的治疗效果,为临床治疗提供参考。

(4)针灸不良反应:观察针灸治疗过程中可能出现的副作用,为临床安全用药提供参考。

2. 实验方法(1)动物实验:采用健康动物作为实验对象,通过观察动物生理、生化等方面的变化,评估针灸治疗效果。

(2)人体实验:在人体上进行针灸治疗,观察治疗效果及不良反应。

(3)实验室检测:利用现代科学技术手段,对针灸作用机理、腧穴定位等进行深入研究。

三、实验结果与分析1. 腧穴定位实验实验结果表明,通过实验验证,腧穴定位具有较高的准确性,为临床针灸治疗提供了可靠的依据。

2. 针灸作用原理实验实验结果显示,针灸对机体生理、生化等方面具有显著影响,如调节神经递质、改善血液循环、提高免疫力等。

3. 针灸疗效实验实验结果显示,针灸对多种疾病具有显著的治疗效果,如疼痛、消化系统疾病、神经系统疾病等。

4. 针灸不良反应实验实验结果表明,针灸治疗过程中可能出现的副作用较少,安全性较高。

四、实验结论1. 实验针灸学实验报告为针灸治疗提供了科学依据,有助于提高针灸治疗效果。

2. 实验针灸学实验方法具有科学性、严谨性,为针灸研究提供了有力支持。

3. 实验结果表明,针灸具有多方面的生理、生化作用,为揭示针灸作用机理提供了重要线索。

显微镜观察细胞实训报告

显微镜观察细胞实训报告

一、实验目的1. 熟悉显微镜的基本构造和使用方法。

2. 学会制作和观察临时装片。

3. 了解不同类型细胞的结构和特点。

4. 培养严谨的实验操作习惯和观察能力。

二、实验原理显微镜是一种利用光学原理放大微小物体的仪器。

通过显微镜观察细胞,可以直观地了解细胞的结构和功能。

本实验主要采用光学显微镜进行观察,通过调节物镜和目镜的倍数,可以观察到不同倍数的细胞图像。

三、实验材料与仪器1. 实验材料:洋葱鳞片叶、口腔上皮细胞、根尖细胞、酵母菌细胞等。

2. 实验仪器:光学显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、染色液、吸水纸等。

四、实验步骤1. 制作临时装片(1)取一片干净的载玻片,用镊子夹起一小块洋葱鳞片叶或口腔上皮细胞,放入载玻片中央。

(2)用滴管滴一滴蒸馏水在载玻片上,使细胞平铺在载玻片上。

(3)用镊子夹起盖玻片,轻轻放置在载玻片上,避免产生气泡。

(4)用吸水纸在盖玻片一侧吸走多余的水分。

2. 染色(1)将染色液滴在盖玻片的一侧。

(2)用吸水纸在盖玻片的另一侧吸走多余的染色液。

(3)等待染色液渗透到细胞内。

3. 观察(1)将载玻片放在显微镜的载物台上。

(2)调节物镜和目镜的倍数,观察不同倍数的细胞图像。

(3)记录观察到的细胞结构、形态和特点。

五、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶细胞观察到洋葱鳞片叶细胞呈长方形,细胞壁较厚,细胞质呈绿色,细胞核较大,呈圆形。

2. 口腔上皮细胞观察到口腔上皮细胞呈扁平状,细胞质较薄,细胞核较小,呈圆形。

3. 根尖细胞观察到根尖细胞呈长柱状,细胞壁较厚,细胞质呈绿色,细胞核较大,呈椭圆形。

4. 酵母菌细胞观察到酵母菌细胞呈圆形或椭圆形,细胞壁较薄,细胞质呈透明,细胞核较小,呈圆形。

通过观察不同类型的细胞,我们可以了解到细胞的结构和特点。

例如,洋葱鳞片叶细胞具有细胞壁,而口腔上皮细胞则没有细胞壁。

此外,不同类型的细胞在细胞核的大小、形状等方面也存在差异。

六、实验总结1. 本实验成功完成了显微镜观察细胞的目标,学会了制作和观察临时装片。

细胞实验资料

细胞实验资料

细胞实验在科学研究中,细胞实验是一种常见的实验方法,用于研究细胞的结构、功能和相互作用。

通过细胞实验,研究人员可以深入了解细胞内部的生物学过程,从而推动生命科学领域的发展。

细胞实验的意义细胞实验在生命科学研究中具有重要的意义。

通过细胞实验,科学家可以观察和探索细胞内部的各种生物学过程,如DNA复制、蛋白质合成、信号转导等。

细胞实验还可以用于研究细胞的遗传变异、生长特性以及对环境的适应能力。

这些研究成果对于理解生命的基本规律、疾病的发生机制以及药物的研发具有重要意义。

细胞实验的常用方法细胞实验的常用方法包括细胞培养、细胞染色、细胞计数、细胞分离和细胞转染等。

其中,细胞培养是最基本的实验方法之一,通过将细胞放置在适当的培养基中,可以使细胞在体外继续生长和繁殖。

细胞染色可以用来观察细胞内部的结构和功能,如核酸、蛋白质、细胞器等。

细胞计数可以用于确定细胞培养的浓度和数量。

细胞分离和细胞转染则可以用于研究细胞的特定功能和相互作用。

细胞实验的应用细胞实验在生命科学领域有着广泛的应用。

在癌症研究中,科学家可以利用细胞实验研究癌细胞的生长特性、信号通路以及对化疗药物的敏感性。

在药物研发中,细胞实验可以用来筛选药物的有效性和毒副作用。

在疾病治疗中,细胞实验可以帮助医生设计个性化的治疗方案。

总结细胞实验是生命科学研究中不可或缺的重要方法,通过细胞实验可以深入了解细胞的结构、功能和相互作用。

细胞实验在疾病治疗、药物研发以及生物学研究中有着广泛的应用前景。

随着科学技术的不断进步,相信细胞实验将发挥越来越重要的作用,推动生命科学领域的发展。

高中生物21个实验总结表(3篇)

高中生物21个实验总结表(3篇)

第1篇一、实验一:观察植物细胞和动物细胞的结构1. 实验目的:了解植物细胞和动物细胞的形态结构,掌握显微镜的使用方法。

2. 实验原理:通过显微镜观察植物细胞和动物细胞的切片,了解其形态结构。

3. 实验步骤:(1)制片:将洋葱鳞片叶或口腔黏膜细胞制成切片。

(2)染色:用碘液染色,使细胞核和细胞质着色。

(3)观察:使用显微镜观察切片,观察植物细胞和动物细胞的形态结构。

4. 实验结果:植物细胞具有细胞壁、液泡和叶绿体,动物细胞无细胞壁、液泡和叶绿体。

二、实验二:观察植物细胞的有丝分裂1. 实验目的:了解植物细胞有丝分裂的过程,掌握有丝分裂各阶段的特点。

2. 实验原理:通过观察洋葱根尖细胞的有丝分裂,了解有丝分裂各阶段的特点。

3. 实验步骤:(1)制片:将洋葱根尖制成切片。

(2)染色:用醋酸洋红或碱性品红染色。

(3)观察:使用显微镜观察切片,观察有丝分裂各阶段的特点。

4. 实验结果:有丝分裂分为间期、前期、中期、后期和末期。

三、实验三:观察减数分裂1. 实验目的:了解减数分裂的过程,掌握减数分裂的特点。

2. 实验原理:通过观察洋葱根尖细胞或果蝇细胞的减数分裂,了解减数分裂的特点。

3. 实验步骤:(1)制片:将洋葱根尖或果蝇细胞制成切片。

(2)染色:用醋酸洋红或碱性品红染色。

(3)观察:使用显微镜观察切片,观察减数分裂各阶段的特点。

4. 实验结果:减数分裂分为减数第一次分裂和减数第二次分裂。

四、实验四:观察线粒体和叶绿体1. 实验目的:了解线粒体和叶绿体的形态结构,掌握观察方法。

2. 实验原理:通过观察洋葱细胞或叶绿体,了解线粒体和叶绿体的形态结构。

3. 实验步骤:(1)制片:将洋葱细胞或叶绿体制成切片。

(2)染色:用健那绿或亚甲基蓝染色。

(3)观察:使用显微镜观察切片,观察线粒体和叶绿体的形态结构。

4. 实验结果:线粒体呈线状或粒状,叶绿体呈扁平囊状。

五、实验五:观察DNA和RNA在细胞中的分布1. 实验目的:了解DNA和RNA在细胞中的分布,掌握观察方法。

实验总结-细胞培养方法

实验总结-细胞培养方法

一、培养细胞常用配置培养基的配置:基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml冻存液的配置:10 % DMSO + 90%胎牛血清依次比例酌量配置。

超净工作台常规配置移液器1套(2.5μl、20μl、200μl、1ml),酒精灯1盏,液器1台,斜架1台,酒精喷壶1个,酒精棉球缸1个,污缸1个,常规耗材:培养瓶(50㎝2),定量移液管(5ml、10ml),枪头(1ml、200μl、10μl),培养皿,6/24/48/96孔板,医用脱脂棉球,冻存管所需试剂:培养基,胎牛血清,双抗,DMSO,胰酶,75%酒精……实验前准备:所需的各项高压后的耗材及污物缸放于超净工作台,用酒精喷壶喷洒实验台面,并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。

培养基及胰酶恢复常温后使用,可37℃水浴5-10min二、细胞复步骤:1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯,开启超净台正常工作状态,用酒精消毒操作者的双手。

2. 培养液(DMEM),恒温水浴箱37℃预热20min,备用。

超净台准备一支15ml 离心管备用。

3.将所需的培养基确保瓶身干净后酒精消毒放于工作台面,点燃酒精灯,再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次,旋开瓶盖后需再次分别消毒瓶口和瓶盖。

4. 从液氮保存罐中取出冻存管,立即放入37℃水浴中,快速摇晃,直至冻存液融化至黄豆粒大小后迅速取出。

5. 将细胞悬液移入15ml离心管,缓慢加入4ml培养液,离心(1000r/min,5min)。

6. 取出2个培养皿并做好标记(复日期等),提前加入5-10ml培养液;离心结束后用1ml培养液悬液混悬沉淀细胞后分别加入培养皿。

7. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧,熄灭酒精灯,整理实验台面,取出实验试剂及污缸等,关闭超净工作台。

8. 将培养瓶放入培养箱培养注意事项:1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套。

此项尤为重要,细胞冻存管可能漏入液氮,解冻时冻存管中的气温急剧上升,可导致爆炸。

科学观察细胞的实验报告

科学观察细胞的实验报告

一、实验目的1. 熟悉光学显微镜的使用方法。

2. 了解细胞的基本结构及其功能。

3. 通过观察细胞,提高对生物学知识的理解和应用能力。

二、实验原理细胞是生命的基本单位,是构成生物体的基本结构。

光学显微镜是一种常用的观察细胞结构的工具。

通过观察细胞的结构,可以了解细胞的组成、功能以及生命活动的基本规律。

三、实验材料1. 实验仪器:光学显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、吸管、生理盐水、稀碘液等。

2. 实验试剂:0.9%生理盐水、稀碘液、考马斯亮蓝R250染色液等。

3. 实验材料:洋葱鳞片叶、口腔上皮细胞、黑藻叶片等。

四、实验步骤1. 制作临时装片(1)在洁净的载玻片中央滴一滴生理盐水。

(2)用消毒牙签的一端,在漱净的口腔侧壁上轻轻地刮几下,将牙签上附有碎屑的一端放在载玻片上的生理盐水滴中涂抹几下。

(3)用镊子夹起洁净的盖玻片,将它的一边先接触载玻片上的生理盐水滴,然后,轻轻地盖在水滴上。

(4)在盖玻片的一侧加稀碘液;用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引,使用染液浸润到标本的全部。

2. 使用显微镜观察(1)开启显微镜,调整光源和放大倍数。

(2)将临时装片放在显微镜下,进行观察。

(3)观察洋葱鳞片叶细胞、口腔上皮细胞、黑藻叶片细胞等,重点观察细胞膜、细胞质、细胞核、叶绿体、线粒体等细胞结构。

3. 绘图(1)依照所观察到的细胞,画一个细胞图,并注出各部分的名称。

(2)分析所观察到的细胞结构,总结其功能。

五、实验结果1. 观察洋葱鳞片叶细胞(1)细胞壁:呈明显的界限,为纤维素和果胶组成。

(2)细胞膜:位于细胞壁内,为磷脂双分子层,蛋白质和糖蛋白。

(3)细胞质:细胞质基质中分布有细胞器,如线粒体、叶绿体、内质网、高尔基体、液泡、核糖体等。

(4)细胞核:位于细胞中央,有核膜、核孔、核仁、核质等结构。

2. 观察口腔上皮细胞(1)细胞膜:位于细胞壁内,为磷脂双分子层,蛋白质和糖蛋白。

(2)细胞质:细胞质基质中分布有细胞器,如线粒体、核糖体等。

高中生物实验总结

高中生物实验总结

高中生物实验总结高中生物实验总结大全(附word下载)实验一:使用高倍显微镜观察几种细胞一、实验目的:1、学会如何使用显微镜观察细胞;2、了解细胞的构造;3、学会制作临时装片。

二、实验材料:(实验材料可换)松针、动物血液、动物神经细胞永久装片三、实验用具:载玻片、盖玻片、蒸馏水、滴管、镊子、土豆、刀片、显微镜(物镜5X、10X、40X)四、方法步骤:1、制作松针的临时切片:(1)取干净的载玻片一个平置于试验台上,用滴管在载玻片中央滴一滴蒸馏水。

(2)将土豆切成条状(截面约:0.5X0.5cm)取两条,将一根松针夹在两个土豆条之间,用刀片削成尽量薄的薄片,削时,手腕不动,靠大臂带动小臂移动刀片。

切片数次。

从中选取较薄的切片,置于载玻片的水滴上。

(3)从一侧轻轻盖上盖玻片,不要产生气泡。

用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴,即完成临时切片的制作。

2、观察切片:(1)取出显微镜,置于试验台上靠左的位置,翻开光源。

(2) 将上步制作好的切片置于显微镜的载物台上,调整载物台位置,使盖玻片对准光源。

(3)使用5X物镜观察切片,使松针切片在视野中心,换成10X物镜,观察松针叶面横切构造。

(4)换成40X物镜观察,注意细胞及细胞内物质构造,画图。

3、动物血液临时装片的制作及观察(除了不用切片,其他类似)4、动物神经细胞永久装片的观察。

五、考点提示:1、松针的叶面构造是什么样的?2、动物细胞的构造是什么样的?与植物细胞又什么不同?3、显微镜的物镜倍数愈大,视野的亮度如何?物体的大小如何?4、如何调节焦距?5、如何才能使切片尽量的薄?切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。

实验二:检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质一、实验目的:尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,说明实验原理—颜色反响,识记和区分用于可溶性复原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色,初步掌握鉴定上述化合物的根本方法,学会描述实验现象,掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。

动物实验细胞实验报告

动物实验细胞实验报告

一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本操作技术。

2. 了解细胞培养过程中可能出现的常见问题及其解决方法。

3. 观察细胞在不同培养条件下的生长状态,了解细胞生长规律。

二、实验原理动物细胞培养是指将动物体内的细胞取出,在体外条件下进行培养、繁殖的过程。

细胞培养技术是生物学研究的重要手段,广泛应用于细胞生物学、分子生物学、遗传学等领域。

本实验采用动物细胞培养技术,通过观察细胞在不同培养条件下的生长状态,了解细胞生长规律。

三、实验材料与仪器1. 实验材料:小鼠胚胎成纤维细胞、胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、无菌培养皿、无菌移液器、细胞计数板等。

2. 实验仪器:细胞培养箱、倒置显微镜、超净工作台、离心机、电子天平等。

四、实验步骤1. 准备工作(1)将小鼠胚胎成纤维细胞接种于无菌培养皿中,放入细胞培养箱中培养。

(2)配制DMEM培养基,加入青霉素、链霉素,混匀后过滤除菌。

2. 细胞传代(1)将培养好的细胞取出,用无菌移液器吸取适量的细胞悬液,加入无菌离心管中。

(2)以1500r/min的速度离心5分钟,弃去上清液。

(3)加入适量的DMEM培养基,混匀后用无菌移液器吸取适量的细胞悬液,接种于新的无菌培养皿中。

(4)将培养皿放入细胞培养箱中培养。

3. 细胞计数(1)用细胞计数板对细胞进行计数,计算细胞密度。

(2)根据细胞密度调整细胞传代比例。

4. 观察细胞生长状态(1)用倒置显微镜观察细胞在不同培养条件下的生长状态。

(2)记录细胞形态、细胞密度、细胞周期等指标。

五、实验结果与分析1. 细胞生长状态在适宜的培养条件下,细胞呈长梭形,排列整齐。

随着培养时间的延长,细胞密度逐渐增加,细胞体积逐渐增大。

2. 细胞计数结果经过多次传代,细胞密度逐渐增加,细胞计数结果如下:第1代:1.5×10^6个/mL第2代:2.0×10^6个/mL第3代:2.5×10^6个/mL第4代:3.0×10^6个/mL3. 细胞周期分析通过观察细胞形态,发现细胞处于不同的生长阶段,包括G1期、S期、G2期和M 期。

番茄细胞实验报告

番茄细胞实验报告

番茄细胞实验报告在番茄细胞实验报告中,我将详细介绍实验的目的、材料和方法、结果和讨论,以及对实验的总结和展望。

1. 实验目的:本实验旨在研究番茄细胞的各种性状,如细胞形态、大小、有丝分裂和有丝分裂指数等,并通过实验结果探讨番茄细胞的特点和生长规律。

2. 材料和方法:(1)实验所用材料包括:番茄果实、显微镜、玻璃片、苏木精、盐酸、甲醇、无水乙醇、石蜡、甲苯、试管、移液管等。

(2)实验操作步骤:(a)将番茄果实切割成小块,用盐酸和甲醇进行消毒;(b)取一部分番茄细胞悬液,滴于玻璃片上;(c)将玻璃片放置于显微镜下,观察番茄细胞的形态、大小等特征,并记录观察结果;(d)将其余的番茄细胞悬液注入试管中,配制成一定浓度的细胞悬液;(e)在显微镜下观察有丝分裂和无丝分裂的细胞,并记录观察结果;(f)计算有丝分裂指数。

3. 结果和讨论:(1)通过显微镜观察,我们发现番茄细胞呈圆形或类似长方形的形态,大小相对较小。

细胞内含有着色质和细胞质等成分。

(2)在有丝分裂观察中,能够清晰地观察到染色体变化和细胞核分裂的过程。

通过计算有丝分裂指数,我们可以推断番茄细胞的生长速度和增殖活力。

(3)实验结果表明,番茄细胞具有较高的有丝分裂指数,说明其细胞增殖能力较强,这与番茄果实的生长速度和果实数量有关。

4. 总结和展望:通过本实验,我们了解到番茄细胞的形态、大小、有丝分裂和有丝分裂指数等特征。

实验结果表明番茄细胞具有较高的细胞增殖能力,这对于进一步研究番茄栽培和果实的生长规律具有重要意义。

未来可以通过引入外源基因或利用生物技术手段,进一步提高番茄细胞的增殖速度和果实产量,并对其进行进一步的研究和应用。

总之,通过此次番茄细胞实验,我们对番茄细胞的各种性状和特征有了更深入的了解,并为今后研究和应用提供了一定的参考和借鉴。

细胞培养小实验实验报告(3篇)

细胞培养小实验实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本操作流程,包括原代培养和传代培养。

2. 了解细胞培养过程中的无菌操作规范。

3. 观察细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。

二、实验原理细胞培养是从生物体中取出某种组织或细胞,模拟体内生理条件,在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代的过程。

细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞,并在有控制的环境条件下进行实验,避免了体内实验时的许多复杂因素,还可以与体内实验互为补充。

三、实验用品1. 仪器及器材:显微镜、载玻片、盖玻片、移液枪、培养皿、无菌操作台、无菌操作箱、细胞培养箱、CO2培养箱、细胞计数器等。

2. 试剂:细胞培养液、胰蛋白酶、胎牛血清、抗生素、无菌水等。

四、实验步骤1. 原代细胞培养(1)取动物组织,剪碎后用胰蛋白酶消化,制成细胞悬液。

(2)将细胞悬液加入培养皿,置于CO2培养箱中培养。

(3)观察细胞生长情况,每隔24小时更换一次培养液。

2. 传代培养(1)当细胞达到一定密度时,用胰蛋白酶消化细胞,制成细胞悬液。

(2)将细胞悬液按1:2的比例传代到新的培养皿中。

(3)观察细胞生长情况,每隔24小时更换一次培养液。

3. 细胞计数(1)取适量细胞悬液,加入细胞计数器。

(2)计数细胞数量,计算细胞密度。

4. 细胞形态观察(1)取细胞培养皿,用盖玻片覆盖。

(2)置于显微镜下观察细胞形态、生长情况。

五、实验结果1. 细胞生长情况:原代细胞在培养皿中生长良好,细胞密度逐渐增加。

传代培养后,细胞生长速度略有下降,但总体状况良好。

2. 细胞形态:细胞呈多边形,细胞核清晰可见,细胞间连接紧密。

3. 细胞计数:细胞密度为1×10^6个/mL。

六、实验结论1. 成功进行了原代细胞培养和传代培养。

2. 细胞在体外培养过程中生长良好,细胞形态正常。

3. 细胞培养技术为生物学研究提供了有力工具。

七、实验总结本次实验成功掌握了细胞培养的基本操作流程,了解了无菌操作规范,并观察了细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。

细胞培养_实验报告

细胞培养_实验报告

一、实验目的1. 熟悉细胞培养的基本操作流程。

2. 掌握原代细胞培养和传代细胞培养的方法。

3. 了解细胞培养在生物学研究中的应用。

二、实验原理细胞培养是指将生物体中的组织或细胞取出,在人工条件下模拟其生理环境,使其生存、生长、繁殖或传代的技术。

细胞培养技术具有操作简便、可控性强、成本低等优点,在生物学、医学、药物研发等领域具有广泛的应用。

三、实验材料1. 仪器:显微镜、培养皿、移液枪、离心机、超净工作台等。

2. 试剂:DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、青霉素、链霉素、抗生素等。

3. 组织:动物组织(如小白鼠胚胎组织)。

四、实验方法1. 原代细胞培养(1)取动物组织,用无菌手术刀切成小块。

(2)将组织块放入含有胰蛋白酶的离心管中,37℃水浴消化30分钟。

(3)消化结束后,用移液枪吹打组织块,使细胞分散。

(4)加入适量胎牛血清终止消化,用离心机离心去上清液。

(5)加入DMEM培养基重悬细胞,接种于培养皿中。

(6)将培养皿放入细胞培养箱中培养,观察细胞生长情况。

2. 传代细胞培养(1)待原代细胞生长到一定密度后,用胰蛋白酶消化细胞。

(2)加入胎牛血清终止消化,用离心机离心去上清液。

(3)加入DMEM培养基重悬细胞,按1:2的比例接种于新的培养皿中。

(4)将培养皿放入细胞培养箱中培养,观察细胞生长情况。

五、实验结果1. 原代细胞培养:细胞呈圆形,排列紧密,生长较快。

2. 传代细胞培养:细胞形态与原代细胞相似,生长速度略慢。

六、实验讨论1. 细胞培养过程中,无菌操作至关重要,避免细菌、真菌等污染。

2. 培养基的成分和pH值对细胞生长有重要影响,需严格控制。

3. 细胞培养技术广泛应用于生物学、医学、药物研发等领域,具有广阔的应用前景。

七、实验总结通过本次实验,我们掌握了细胞培养的基本操作流程,了解了细胞培养在生物学研究中的应用。

在实验过程中,我们体会到无菌操作的重要性,以及培养基成分和pH值对细胞生长的影响。

实验室培育细胞实验报告(3篇)

实验室培育细胞实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本原理和方法;2. 了解细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术;3. 观察细胞在体外培养过程中的生长和变化。

二、实验原理细胞培养是将细胞从生物体中取出,在体外模拟生物体内环境,使其在适宜的条件下生长、繁殖和传代。

细胞培养技术是生物学研究的重要手段,广泛应用于医学、生物工程等领域。

三、实验材料与仪器1. 实验材料:小鼠脾脏细胞、胰蛋白酶、细胞培养液、DMSO(二甲基亚砜)、培养瓶、移液器、细胞计数板、显微镜等。

2. 仪器:超净工作台、细胞培养箱、离心机、冰箱等。

四、实验步骤1. 细胞复苏:将冷冻保存的细胞复苏,解冻后用移液器吹打均匀,加入适量培养液,调整细胞浓度;2. 细胞接种:将复苏后的细胞接种于培养瓶中,放入细胞培养箱培养;3. 细胞传代:待细胞长满培养瓶后,用胰蛋白酶消化细胞,调整细胞浓度后,重新接种于新的培养瓶中;4. 细胞观察:定期观察细胞生长情况,记录细胞形态、数量和生长速度;5. 细胞冻存:将细胞传代后,取适量细胞加入DMSO,冷冻保存。

五、实验结果与分析1. 细胞复苏:复苏后的细胞呈圆形,细胞膜完整,无碎片;2. 细胞接种:接种后的细胞在培养箱中生长良好,细胞形态规则,细胞间连接紧密;3. 细胞传代:传代后的细胞生长迅速,细胞数量逐渐增加;4. 细胞观察:细胞在体外培养过程中,形态、数量和生长速度逐渐稳定。

六、实验结论1. 成功掌握了细胞培养的基本原理和方法;2. 掌握了细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术;3. 观察到细胞在体外培养过程中的生长和变化。

七、实验讨论1. 细胞培养过程中,无菌操作至关重要,应严格遵循无菌操作规程;2. 细胞传代时,应选择合适的胰蛋白酶浓度和消化时间,以减少对细胞的损伤;3. 细胞培养过程中,应定期观察细胞生长情况,及时调整培养条件,以保证细胞生长良好。

八、实验总结本次实验成功进行了细胞培养,掌握了细胞培养的基本原理和方法,为后续的细胞学研究奠定了基础。

胞间连丝实验报告总结

胞间连丝实验报告总结

一、实验背景与目的胞间连丝是植物细胞间的一种特殊结构,贯穿两个相邻的植物细胞的细胞壁,连接两个原生质体的胞质丝。

这种结构对于植物的物质运输、信息传导以及细胞间的相互作用具有重要意义。

本实验旨在通过观察胞间连丝,深入了解其形态、分布及其在植物生理活动中的作用。

二、实验材料与方法1. 实验材料:洋葱根尖、显微镜、载玻片、盖玻片、染色剂(如伊红或醋酸洋红)、盐酸酒精溶液等。

2. 实验方法:- 取洋葱根尖,经盐酸酒精溶液处理,使细胞分离。

- 将处理后的洋葱根尖制片,滴加染色剂。

- 在显微镜下观察洋葱根尖细胞,寻找胞间连丝。

- 记录胞间连丝的形态、分布及其与细胞器的关系。

三、实验结果与分析1. 胞间连丝的形态:胞间连丝呈细丝状,直径约为0.5-1.0微米。

其结构主要由纤维素、半纤维素和果胶等组成。

2. 胞间连丝的分布:胞间连丝广泛分布于植物细胞间,尤其在叶片、茎、花等部位较为明显。

在细胞板、细胞壁的纹孔处,胞间连丝的密度较高。

3. 胞间连丝与细胞器的关系:胞间连丝与液泡、线粒体、内质网等细胞器密切相关。

液泡内的物质可通过胞间连丝运输到相邻细胞;线粒体产生的能量也可通过胞间连丝传递给其他细胞。

4. 胞间连丝的功能:- 物质运输:胞间连丝是植物细胞间物质运输的重要通道,如水分、营养物质、激素等可通过胞间连丝在细胞间传递。

- 信息传导:胞间连丝在植物细胞间传递信息,如生长素、细胞分裂素等激素可通过胞间连丝在细胞间传递,调节植物的生长发育。

- 细胞间的相互作用:胞间连丝使相邻细胞在生理上保持有机联系,有利于细胞间的协作和分化。

四、实验结论通过本实验,我们成功观察到了植物细胞间的胞间连丝,并对其形态、分布及其在植物生理活动中的作用有了更深入的了解。

胞间连丝是植物细胞间的重要结构,在物质运输、信息传导和细胞间的相互作用等方面发挥着重要作用。

五、实验讨论1. 胞间连丝的观察难度较大,需要一定的显微镜操作技巧和经验。

在实验过程中,应仔细操作,避免损坏细胞结构。

细胞观察实训报告

细胞观察实训报告

一、实验目的1. 了解细胞的基本结构,包括细胞膜、细胞质、细胞核等;2. 掌握显微镜的使用方法,学会观察细胞的结构和功能;3. 培养实验操作技能,提高实验观察和分析能力。

二、实验原理细胞是生物体的基本结构和功能单位,由细胞膜、细胞质、细胞核等部分组成。

细胞膜是细胞的外层结构,具有保护细胞和调控物质进出的作用;细胞质是细胞内的液体,含有各种细胞器,参与细胞的代谢活动;细胞核是细胞的控制中心,负责遗传信息的传递。

三、实验材料与仪器1. 实验材料:洋葱鳞片叶、人体口腔上皮细胞、细胞培养液;2. 实验仪器:显微镜、载玻片、盖玻片、吸管、滴管、酒精灯、酒精棉球、生理盐水等。

四、实验步骤1. 制作洋葱鳞片叶细胞玻片(1)取洋葱鳞片叶,用刀片将其切成薄片;(2)将切片放在载玻片上,用吸管滴加少量生理盐水;(3)用盖玻片覆盖切片,轻轻压紧,使其与载玻片紧密贴合;(4)用酒精灯在盖玻片边缘加热,使水分蒸发,形成均匀的细胞玻片。

2. 制作人体口腔上皮细胞玻片(1)用棉签轻轻刮取口腔上皮细胞;(2)将细胞涂抹在载玻片上,用盖玻片覆盖;(3)用酒精灯在盖玻片边缘加热,使水分蒸发,形成均匀的细胞玻片。

3. 观察细胞(1)将制作好的细胞玻片放置在显微镜载物台上;(2)调整物镜和目镜,使视野清晰;(3)观察洋葱鳞片叶细胞的结构,包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等;(4)观察人体口腔上皮细胞的结构,包括细胞膜、细胞质、细胞核等。

五、实验结果与分析1. 观察洋葱鳞片叶细胞,可见细胞呈长方形,细胞壁明显,细胞膜较薄,细胞质中含有很多细胞器,如液泡、线粒体等。

细胞核位于细胞中央,呈圆形,核膜、核仁清晰可见。

2. 观察人体口腔上皮细胞,可见细胞呈不规则形状,细胞膜较薄,细胞质中含有很多细胞器,如线粒体、内质网等。

细胞核位于细胞中央,呈圆形,核膜、核仁清晰可见。

通过本次实验,我们掌握了显微镜的使用方法,学会了观察细胞的结构和功能。

同时,了解了细胞膜、细胞质、细胞核等细胞基本结构的特点和作用,为今后学习细胞生物学奠定了基础。

原代细胞培养实验报告总结归纳

原代细胞培养实验报告总结归纳
5.实验报告
(1).原代细胞和传代细胞培养有哪些区别?
(2).总结一下你自己的经验,怎样才能既迅速,又保证无菌操作。
|?评论
?|??采纳率28%
擅长领域:?暂未定制
提问者对回答的评价:
谢谢
相关内容
2008-12-11?
2010-03-12?13
2009-10-07?5
2008-10-19?16
2010-04-28?18
细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响,消毒、配液等均有严格的规范和要求,特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
③.将细胞悬液吸出2ml左右,加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml左右培养液,盖好瓶塞,送回二氧化碳培养箱中,继续进行培养。
4.2.3结果
一般情况,传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上,2~4天就可在瓶内形成单层,需要再次进行传代。
4.3器材及液体的准备和无菌操作的注意事项
4.3.1器材和液体的准备
4.1.3结果
细胞接种后一般几小时内就能贴壁,并开始生长,如接种的细胞密度适宜,5天到一周即可形成单层。
4.2传代细胞培养
4.2.1原理
体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭,将培养的细胞分散,从容器中取出,以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为传代培养。

心得体会实训报告观察细胞

心得体会实训报告观察细胞

一、引言细胞是生命的基本单位,是构成生物体的最小结构单元。

通过本次实训,我有幸走进了显微镜的世界,近距离观察了细胞的结构与功能。

在实训过程中,我不仅对细胞有了更深入的了解,而且对科学实验的态度和技能也得到了提升。

以下是我在实训过程中的心得体会。

二、实训过程1. 实训准备在实训开始前,我们首先学习了细胞学的基本知识,包括细胞的结构、功能以及常见的细胞类型等。

接着,我们了解了显微镜的使用方法,包括如何调节焦距、如何观察细胞等。

2. 实训操作实训过程中,我们使用了多种细胞样本进行观察,包括植物细胞、动物细胞、微生物细胞等。

在实验操作中,我们按照以下步骤进行:(1)制片:将细胞样本涂抹在载玻片上,滴加染色液,进行染色处理。

(2)封片:在载玻片上滴加封片剂,覆盖盖玻片。

(3)观察:使用显微镜观察细胞,调整焦距,观察细胞的结构和功能。

3. 实训总结通过本次实训,我们观察了多种细胞类型,了解了细胞的基本结构和功能。

以下是我对本次实训的总结:(1)细胞结构:细胞主要由细胞膜、细胞质、细胞核等组成。

细胞膜是细胞的保护层,细胞质是细胞内的液体环境,细胞核是细胞的控制中心。

(2)细胞功能:细胞具有多种功能,如物质合成、能量转换、信息传递等。

通过观察细胞,我们可以了解细胞在不同环境下的生理变化。

(3)细胞类型:根据细胞的结构和功能,我们可以将细胞分为原核细胞和真核细胞。

原核细胞结构简单,真核细胞结构复杂。

三、心得体会1. 提高实验技能通过本次实训,我掌握了显微镜的使用方法,学会了制片、封片等实验操作。

这些技能对于我今后的学习和工作具有重要意义。

2. 增强观察能力在观察细胞的过程中,我学会了如何从细节中发现问题,如何从现象中寻找规律。

这种观察能力对于我今后的学习和研究具有重要意义。

3. 深化对细胞的认识通过本次实训,我对细胞的结构和功能有了更深入的了解,认识到细胞是生命的基本单位,是构成生物体的最小结构单元。

4. 培养科学素养在实训过程中,我学会了如何进行科学实验,如何收集和分析实验数据。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

实验方法总结(2):细胞生物学部分1.原代细胞分离与培养 (2)1.1原代细胞分离 (2)1.2原代细胞培养 (2)2. 干细胞分离培养 (3)2.1胚胎干细胞诱导分化 (3)2.2肿瘤干细胞(CSC)分离鉴定 (3)3. 细胞增殖相关研究方法 (5)3.1 MTT分析法 (5)3.2 XTT (5)3.3 WST-1 (6)3.4 CCK-8(WST-8) (6)3.4 平板克隆形成 (6)3.5 软琼脂克隆形成 (7)3.6 BrdU (7)4.细胞转移相关研究方法 (8)4.1 划痕 (8)4.2 细胞粘附 (8)4.3 Transwell迁移 (9)4.4 Transwell侵袭 (9)5. 血管生成 (10)6. 细胞周期:PI染色 (10)7. 细胞凋亡检测 (10)7.1 AnnexinV/PI双染色法 (10)7.2 TUNEL法 (11)7.3 线粒体膜电位(MMP)检测 (12)8.细胞分选 (12)8.1 流式分选 (12)8.2 磁珠珠分选 (13)9.细胞转染 (13)10. 细胞慢病毒感染 (14)11. 基因稳定细胞株的筛选 (14)12. 耐药细胞株的筛选 (15)13. 细胞共培养 (15)13.1直接共培养 (15)13.2间接共培养 (15)1.原代细胞分离与培养1.1原代细胞分离人或动物体(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密,不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖,必须将现有的组织块充分散开,使细胞解离出来。

第一,悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10 min。

经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层,这样可根据需要收获目的细胞。

第二,实体组织材料的分离方法对于实体组织材料,由于细胞间结合紧密,为了使组织中的细胞充分分散,形成细胞悬液,可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

其中,机械分散法的特点是简便、快速,但对组织机械损伤大,而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。

而消化分离法是指把组织剪切成较小团块(或糊状),应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动,使团块膨松,由块状变成絮状,此时再采用机械法,用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡,使细胞团块得以较充分的分散,制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液,接种培养后,细胞容易贴壁生长。

1.2原代细胞培养原代细胞的培养也叫初代培养,是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养,是建立细胞系的第一步。

第一,组织块培养法组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。

其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中,瓶壁可预先涂以胶原薄层,以利于组织块粘着于瓶壁,使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

第二,消化培养法第三,悬浮细胞培养法。

对于悬浮生长的细胞,如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化,可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

第四,器官培养。

器官培养是指从供体取得器官或组织块后,不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养。

器官培养可保持器官组织的相对完整性,可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响,以及局部环境的生物调节作用。

2. 干细胞分离培养2.1胚胎干细胞诱导分化首先将类胚体消化成单细胞,贴壁培养,于不同的培养阶段添加不同种类和不同浓度的化学物质、条件培养基或细胞因子等诱导条件,直接促进ES细胞定向分化为某种特殊类型的细胞;或通过改变培养条件对某些类型的细胞分化起抑制作用,从而高效诱导目的细胞的分化。

改变细胞的培养条件使ES细胞进行定向分化的基本策略有三种:一是向培养基中添加生长因子和化学诱导剂等;二是将ES细胞与其它细胞一起进行培养;三是将细胞接种在适当的底物上,以促使细胞中某些特定基因的表达上调或下降,从而引发细胞沿着某一特定谱系进行分化。

体外诱导胚胎干细胞的物质有化学试剂诱导法、细胞因子诱导法和外源基因诱导法。

化学试剂诱导法:维甲酸(RA)、DMSO、β-磷酸甘油、维生素C(VC)、地塞米松、维生素K3(VK3)以及2,5-羟基维生素D3等化学试剂,都能诱导ES细胞定向分化为特定类型细胞。

细胞因子诱导法:ES细胞在培养过程中对许多细胞因子具有很强的依赖性。

增加或减少一种或几种细胞因子可影响ES细胞的增殖或分化。

目前研究最深入的细胞因子主要有骨形成蛋白(BMPs)和成纤维细胞生长因子(FGF)等。

外源基因诱导法:转基因法可以弥补细胞因子法的不足。

其原理是使某个促分化基因在ES细胞中过度表达,从而调控ES细胞的分化。

应用此方法之前,首先要确定决定该细胞向不同方向分化的关键基因,其次还要确保在适宜的时间将此基因正确插入到ES细胞基因组序列上。

2.2肿瘤干细胞(CSC)分离鉴定对于CSC的分离纯化主要有根据细胞表型特征和生物学特性而建立的两大类方法:第一类:依赖于细胞表面标志的分离方法造血系统肿瘤干细胞:正常造血干细胞的表型为CD34+CD38+Thy-1-实体瘤肿瘤干细胞:A.乳腺癌:ESA+CD44+CD24-/LowLineage-的细胞是乳腺癌CSC。

B.脑肿瘤:将CD133+的肿瘤细胞命名为脑肿瘤干细胞(BTSC), 还表达Sox2、Musashi-1、bmi-1、磷酸丝氨酸磷酸化酶等神经干细胞和其它干细胞的基因特征C.结直肠癌:CD133+细胞是结直肠癌细胞的起始细胞。

上皮细胞黏附分子、CD44、CD166可以作为鉴定结直肠癌干细胞的细胞表面标志。

以乳腺癌为例,介绍实验方法(其他肿瘤针对下面蓝色的关键词更改):人乳腺肿瘤细胞分离培养:选择XXX医院肿瘤外科接受治疗的乳腺癌患者,经过患者及其家属知情同意,在手术室无菌条件下获取肿瘤组织样本约10g,置无菌组织转移液中,迅速转入无菌实验室,PBS漂洗数遍,去除脂肪及坏死部分,将乳腺组织充分剪碎;将上述乳腺肿瘤组织移入离心管,加入8mL组织消化液(含2700U/mLⅣ型胶原酶1mL、0.02mg/mL透明质酸酶100μL、DNase50μL的DMEM 培养液),轻轻混匀,37℃水浴消化1~2小时,期间每20~30min振摇离心管1次,以便充分消化;消化结束后,加入10mL PBS,摇匀后以1000r/min离心4min,弃上清,加入1mL乳腺肿瘤干细胞培养液(含10mL/L FBS,100U/mL青霉素,100mg/mL链霉素,10ng/mL bFGF,20ng/mL EGF,20ng/mL ITS的DMEM-F12培养液),混匀,1000r/min离心4min,弃上清;以1×106/mL细胞密度接种于细胞培养箱中培养。

3d后换液,约7~10d开始出培养瓶中,置入37℃、50mL/L CO2现悬浮生长的细胞克隆球。

流式细胞术检测获得乳腺肿瘤细胞:收集培养的乳腺肿瘤细胞克隆球,离心并弃去培养基;PBS漂洗1遍,Accutase消化2min后加等体积培养基终止消化;将细胞悬液移入15mL离心管1000r/min离心4min,弃上清,用PBS溶液混悬后无菌滤膜过滤,取4支试管,按如下组合顺序分别加入荧光标记抗体各10μL:IgG1-PE/IgG2-FITC,CD44-FITC/IgG1-PE,CD24-PE/IgG2-FITC,CD44-FITC/CD24-PE,再加入500μL细胞悬液入试管中,混匀,室温避光静置15min,流式细胞仪检测。

第二类根据干细胞外排DNA结合荧光染料Hoechst33342而建立的SP细胞分离法在Hoechst33342染色的骨髓细胞中存在着一群染色很浅的细胞群,通过紫外激发后用双波长分别为450nm的蓝色荧光~675nm的红色荧光分析,其中有不到0.1%的细胞发出微弱的蓝光和红光,在流式二维分析点阵图上,呈彗星状分布在造血干/祖细胞主群的一侧,因此被称为侧群(SP)细胞。

SP细胞广泛存在于人和动物的多种成体组织、实体瘤及肿瘤细胞系中,并具有干细胞样特征。

实验方法:①细胞染色:细胞消化计数,用37℃预热的DF12培养基重悬,调整到1×106/mL 浓度,制备成单细胞悬液;加入荧光染料Hoechst33342,使终浓度为6 μg/mL,37℃避光水浴90 min;冰上10 min终止染色,计数细胞;离心细胞后,用冰预冷DF12洗涤细胞并重悬浮,将分选组调整浓度到1×107/mL以上,必要时加入1倍的DNase I;上机前再加入PI使终浓度为2 μg/mL以区分死细胞,并且400滤网过滤细胞。

②流式细胞仪检测:355 nm UV激发光源,610 nm双色短通反射滤镜,450 nm和675 nm边缘长通滤片分别检测散射光蓝光及红光部分,线性模式采集信号. 测量前向散射和侧向散射二维参数图,检测细胞均一性,以Hoechst Red为X轴,Hoechst Blue为Y轴作二维散点图,将低Hoechst Red 及低Hoechst Blue且维拉帕米组缺失的区域设定为SP细胞的“门”(gate),计算百分比,分选出SP细胞及Non SP细胞。

3. 细胞增殖相关研究方法3.1 MTT分析法MTT为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂,生成蓝色的formazan结晶,formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原)。

实验方法:接种XXX细胞用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔体积200 μL。

培养细胞同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。

呈色培养3-5天后,每孔加MTT溶液(5 mg/mL用PBS配)20 μL。

继续孵育4小时,终止培养,小心吸弃孔培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔培养上清液。

每孔加150 μL DMSO,振荡10 min,使结晶物充分融解。

比色选择490nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

3.2 XTTXTT是一种与MTT类似的四唑氮衍生物,可被活细胞线粒体脱氢酶还原成水溶性的棕色甲肷产物,当XTT与电子偶合剂共同使用时,甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。

实验方法:首先配置6.6 mmol/L XTT溶液和220 mmol/L吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)溶液。

临用时将XTT与PMS按1:1混合,形成XTT/PMS。

接种XXX细胞:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔体积200 μL。

相关文档
最新文档