实验三植株磷素的测定钼蓝法(精)

实验三植株磷素的测定钼蓝法

董青05级生科2班40508096

一、实验原理

在酸性条件下,无机磷可与钼酸铵作用生成磷钼酸铵,并被氯化亚锡还原成蓝色的磷钼蓝，由蓝色的深浅即可测定磷的含量。

H3PO4 +12(NH4)MoO4 + 21HCl →(NH4)3PO4·12MoO3 +21NH4Cl+ 12H2O

磷钼酸铵

(NH4)3PO4·12MoO3→(MoO2·4MoO3)2·H3PO4·4H2O

磷钼蓝

钼蓝的最大吸收波长为660nm.

二、实验仪器：

分光光度计研钵等

试剂: 50µg/ml标准磷溶液

材料:菠菜、青菜、菜花

三、实验步骤

1、绘制标准曲线

1）取标准磷溶液分别配成浓度为0、6、8、10、15、20、25、30µg/ml 磷溶液各10mL；

2）取上述不同浓度标准磷溶液1mL于试管中，加入7mL水，再加入钼酸铵硫酸试剂2mL，摇匀后加入SnCl22滴，混匀，静置10-15min；

3）选择660nm波长，用光径1cm比色杯，以浓度0为参比溶液，测得各标准溶液的吸光度值；

4）以磷浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2、植物组织中磷含量的测定

1）取材料2g于研钵中，加少许石英砂及5mL水研磨；

2）将匀浆移至25mL容量瓶中，将研钵中残渣一并洗入，定容至刻度；

3）取10mL该混合液的上清液于6000r/min条件下离心15min后，提取液1mL两份于洁净的试管中,在上述同样条件下测其吸光度值；

4）根据公式计算磷含量：

P(µg/g叶鲜重)= C×(V/W)

式中：C为提取液的磷含量（µg/ml）；

V为提取液的体积（mL）；

W为样品鲜重（g）。

四、注意事项

1、使用钼蓝测磷法时，钼蓝铵-硫酸溶液加入体积要准确，否则会因酸度

不合适而导致不显色。

2、显色时间不宜过长，蓝色易褪去。

3、实验中比色皿易着色，实验完毕，应及时用水清洗，再用70%乙醇浸

泡。

0.805µg/ml 0.598µg/ml

对照标准曲线

得出菠菜叶组织液的吸光值为：0.805和0.598。对照上面的标准曲线得出其组织液中的含磷量是13µg/ml和25µg/ml

C=(13+25)/2=19µg/ml

P= C×(V/W)=19×(25/2)=237.5µg/g

分析：磷元素在幼叶中存在较多。因此，我们主要选择菠菜幼叶。我们的数据较为偏大。这可能是我们在实验操作过程中出现的差错。我们离心之后的上清液比较浑浊。因而影响到了吸光值的大小。同时两个试管的吸光值也有所不一致。可能与上清液取的先后顺序有关。