甲醛滴定法测定氨基酸含量教学提纲
氨基酸总量(氨态氮)的测定
氨基酸总量(氨态氮)的测定一、目的与原理：1、了解掌握单指示剂与双指示剂甲醛滴定法测氨基酸总量的方法与原理：二、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。
由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。
（二）试剂(1)40％中性甲醛溶液，以麝香草酚酞为指示剂，用1N NaOH溶液中和。
(2)0.1％麝香草酚酞乙醇溶液。
(3)0.100N氢氧化钠标准溶液。
(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。
加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.1OON NaOH 溶液滴定至淡蓝色。
记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。
V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。
0.014：氮的毫克当量。
三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。
从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。
PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH 值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。
(二)试剂：(1)三种试剂同单指示剂法(2)0.1％中性红(50％乙醇溶液)(三)操作步骤：取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100NNaOH 准溶液滴定至淡蓝色。
甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量.docx
甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。
甲醛可与氨基酸上的一N%3结合，形成一NH —CH Q OH、一N （CH2—0H）2等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+,测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。
若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具（一）试剂1、1%酚酞酒精溶液称Ig酚酞溶于IOOmI 95%酒精中。
2、0.5%溴麝香草酚蓝溶液取0.5溴麝香草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、氨基酸溶液4、标准0.100mol∕L氢氧化钠溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml ,加1%酚酞指示剂2滴，滴加0.1mol∕L NaoH 溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和 （二）实验器具 1、锥形瓶 3、移液管洗耳球 5、容量瓶 7、量筒 四、操作步骤1、取3只50ml 锥形瓶，按下表加入试剂(pH8.7~9.0)2、碱式滴定管 4、天平 6、试剂瓶 8玻棒与烧杯3、结果计算氨基酸溶液中含氨基酸的百分比浓度为式中：C=（V1-V2）× C0×氨基酸分子量/（10× V样）C:总酸含量（g∕100ml）V i为滴定样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）; V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；C o :标准氢氧化钠准确浓度（mol∕L）V样：样品体积（ml）4、氢氧化钠标准溶液的标定4 1 κm标准is定落液4.1.1配制⅛⅛ no g⅛S'⅛钠需于IOQmL无二敦化晞⅛水中滞匀琏人聚乙烯容界中•密闭放置至溶液清氐按表1倾定佣酬管量取上翩孰用无二輸斛水解至IQ伽L,齣.表1标定按表2的规定称取于105Γ-110t电烘箱中十煥至国重的工作基准试剂命苯二屮酸爼銅厠无二水溶絹加2⅛≡ao示椒10 XLh用吃制⅛τ⅛s¾⅛⅛溶發滴定至酒液呈粉虹色供保痔30S4同时做零白试蜃。
甲醛滴定法测定氨基氮
甲醛滴定法测定氨基氮
一、实验目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
二、实验原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。
甲醛可与氨基酸上的NHN(CH2蒸馏水（ml）5、05、07、0中性甲醛溶液（ml）5、05、05、00、05%溴麝香草酚蓝溶液（滴）22
20、5%酚酞乙醇溶液（滴）44
42、混匀后用标准0、100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色（pH8、7~9、0）
3、结果计算每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为式中：V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml）； V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；1、4008 为1ml 0、1mol/L氢氧化溶液相当的氮量（mg）
五、注意事项利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。
随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。
六、实验报告根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的优缺点。
，七、思考题
1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么/
2、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—N+H3基上的H+，不能用一般的酸碱指示剂？。
氨基酸总量的测定
氨基酸总量(氨态氮)的测定一、目的与原理：1、了解掌握单指示剂与双指示剂甲醛滴定法测氨基酸总量的方法与原理：二、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。
由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当参加甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反响式可能以下面三种形式存在。
〔二〕试剂(1)40％中性甲醛溶液，以麝香草酚酞为指示剂，用1N NaOH溶液中和。
(2)0.1％麝香草酚酞乙醇溶液。
(3)0.100N氢氧化钠标准溶液。
(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。
参加中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.1OON NaOH 溶液滴定至淡蓝色。
记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。
V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。
0.014：氮的毫克当量。
三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法一样，只是在此法中使用了两种指示剂。
从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。
PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH 值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。
(二)试剂：(1)三种试剂同单指示剂法(2)0.1％中性红(50％乙醇溶液)(三)操作步骤：取一样的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份参加中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOHOH准溶液滴定至淡蓝色。
实验四甲醛滴定法测定氨基氮含量
实验八 甲醛滴定法测定氨基氮含量
一、目的
掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和方法
二、原理
水溶液中的氨基酸为两性离子，因而不能直 接用碱滴定氨基酸的羧基。用甲醛处理氨基酸, 甲醛与氨基结合,可形成羟甲基衍生物，使 NH3+上的H+游离出来，这样就可用碱滴定 NH3+放出的H+，从而计算出氨基氮含量。
试剂和器材
1．试剂： （1）0.1mol/L 标准甘氨酸溶液 准确称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL。 （2）0.1mol/L 标准氢氧化钠溶液 （3）0.5%酚酞指示剂 称0.5g酚酞溶于100mL50%乙醇。 （4）中性甲醛溶液 甲醛溶液（36～37％，分析纯） 50mL，加入0.5％ 酚酞指示剂1 mL ，用0.1 mol/L的氢氧化钠溶液滴定至 微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。
四、结果计算
1、回收率计算：
实际测得量 甘氨酸氨基氮回收率 % 100 理论加入量
公式中: 实际测得量(mg)为滴定1和2号瓶耗用的标准氢氧化 钠溶液毫升数的平均值与3号瓶耗用的标准氢氧化 钠溶液毫升数之差乘以1.4008。 理论加入量(mg)等于2 乘以1.4008。
※1.4008
为1mL 0.1mol/L标准氢氧化钠溶液相当于氮的毫克数。
试剂和器材 1．试剂：
（5）待测样品 未知浓度的甘氨酸溶液。
甲醛滴定法测定食品中的氨基酸酸含量
食品中氨基酸含量的测定————甲醛滴定法一、原理氨基酸是具有氨基和羧基的氨基酸，在溶液中以两性离子形态存在，当向溶液中加入碱时，氨基上的氢离子解离出来与羟基结合生成水。
使溶液ph不会急剧上升，但当氨基上的氢离子全部解离时则溶液的pH急剧上升，氨基上氢离子的解离常数值通常在9以上，滴定终点pH在12以上，没有适当的指示剂，为此，可用甲醛与氨基酸作用，氨基上的两个氢原子被甲醛取代生成氨基酸的二羟甲基衍生物。
由于氨基上的氢被取代，氨基上氢离子的解离常数降至7左右，滴定终点pH在9左右，这样就可以用酚酞做指示剂，用氢氧化钠标准溶液滴定氨基上的氢离子。
此法滴定的是α-氨基的含量，准确度仅达氨基酸理论含量的90%。
二、材料仪器与试剂1、材料：白豆油或浅色饮料，色深样品需进行脱色处理2、仪器：锥形瓶、滴定管、10ml量筒和移液管，20ml量筒或移液管，100ml 容量瓶。
3、试剂：中性甲醛，酚酞指示剂（0.5%）（0.5克酚酞定容100毫升），0.01N 氢氧化钠溶液。
三、操作步骤1、制样：根据样品颜色及氨基酸含量将样品进行适当稀释，一般吸取20ml样品，稀释定容到100m l。
色泽深的样品先加入50ml水和活性炭5g，加热煮沸，过滤，用30ml水洗涤活性炭，洗涤水与滤液合并，然后转移至100ml容量瓶中定容至刻度。
固体样品需粉碎后称取5~10g，加50ml水和活性炭5g，加热煮沸，过滤，用30ml水洗涤活性炭，洗涤水与滤液合并，然后转移至100ml容量瓶中定容至刻度。
2、测定：准确吸取已稀释的样品溶液10ml于三角瓶中，加入10ml中性甲醛，滴加2~3滴酚酞指示剂，用0.01mol/L氢氧化钠溶液滴定至溶液呈微红，30秒不褪色（8.2～10.0）即为终点。
3、空白滴定：用去除二氧化碳的蒸馏水替代样品进行滴定。
四、计算氨基氮（mg/ml或g样品）=[（V-V O）×C×0.14008]/10×100M或VC----氢氧化钠的当量浓度V-----滴定样品时消耗的氢氧化钠溶液的体积（ml）V O------滴定空白时消耗的氢氧化钠溶液的体积（ml）0.14008----氮的毫克当量。
氨基酸总量(氨态氮)的测定(甲醛滴定法)
氨基酸总量(氨态氮)的测定（甲醛滴定法）一、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH 基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。
由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。
（二）试剂(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。
(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。
(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。
加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。
记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。
V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。
0.014：氮的毫克当量。
三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。
从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。
PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。
(二)试剂：(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。
(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。
(4) 0.1%中性红(50%乙醇溶液)(三)操作步骤：取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100N NaOH准溶液滴定至淡蓝色。
甲醛滴定法测定氨基酸含量
实验4甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的竣基。
甲醛可与氨基酸上的TOL结合，形成一NH-CHQH、一N(CH L OH)：等疑甲基衍生物，使2乩上的H•游离出来，这样就可以用碱滴定冋3放出测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。
若样品中含有多种氨基酸(如蛋白质水解液)，测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具(―*)试剂1、％酚酿酒精溶液称酚瞅溶于100ml60%酒精中。
2、％溟麝香草酚蓝溶液取澳麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、1%甘氨酸溶液取lg甘氨酸溶于100ml蒸饰水。
4、标准L氢氧化钠溶液5、中性甲本醛溶液取甲醛溶液50ml,力嗎酚酿指示剂约3ml,滴加LnaOH溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。
（二）实验器具1、锥形瓶2、碱式滴定管1、移液管洗耳球4、天平5、容量瓶6、试剂瓶7、量筒8、玻棒与烧杯四、操作步骤1、取3只100ml锥形瓶，按下表加入试剂。
2、混匀后用标准L氢氧化钠溶液滴定至紫色（〜）3、结果计算每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为(V-K)x 1.4008吨= --- ---- "3 -----式中：百为滴定样品消耗氢氧化钠的体积(ml)；也为滴空白消耗氢氧化钠的体积(ml)；为lml L氢氧化溶液相当的氮量(mg)五、注意事项利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。
随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。
六、实验报告根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的优缺点。
，七、思考题1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么/2、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的一2乩基上的H',不能用一般的酸碱指示剂。
氨基酸总量(氨态氮)的测定(甲醛滴定法)
氨基酸总量(氨态氮)的测定（甲醛滴定法）一、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH 基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。
由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。
（二）试剂(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。
(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。
(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。
加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。
记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。
V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。
0.014：氮的毫克当量。
三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。
从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。
PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。
(二)试剂：(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。
(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。
(4) 0.1%中性红(50%乙醇溶液)(三)操作步骤：取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100N NaOH准溶液滴定至淡蓝色。
实验九甲醛滴定法测定氨基酸
实验九甲醛滴定法测定氨基酸一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。
二、原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：H3N+—R—COO—H2N —R—COO —+H+-NH 3是弱酸，，完全解离时 pH 为 11～12 或更高，若用碱滴定 -NH 3所释放的 H+来测量氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示终点。
常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使 -NH 3释放 H+，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内 (pH9.0 左右 )。
因此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。
—R-CH(COO )-NH— )-NH 2+H + R-CH(COO — )-NH 2 3NaOHHCHOR-CH(COO中和R-CH(COO——)-NHCH 2OH HCHO R-CH(COO)-N(CH 2OH) 2 如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量（脯氨酸与甲醛作用生成不稳定的化合物，使滴定 mL 数偏低。
酪氨酸的滴定 mL 数偏高）。
如样品是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。
但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。
随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。
三、器材药25 mL 锥形瓶；3 mL 微量滴定管；吸管；0.1 mol ／ L 标准甘氨酸溶液 300 mL 准确称取 750 mg 甘氨酸，溶解后定容至 100 mL ；0.1 m01／L 标准氢氧化钠溶液500 mL ；（标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密闭瓶中保存。
不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩余氢氧化钠。
）酚酞指示剂 20 mL 0.5％酚酞的 50％乙醇溶液中性甲醛溶液400mL在50 mL 36～37％分析纯甲醛溶液中加入 1 mL 0.1 ％酚酞乙醇水溶液，用 0.1 mol／ L 的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。
12甲醛滴定
0.1 mol／L标准甘氨酸溶液
准确称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL 0.1 mol／L标准氢氧化钠溶液 0.5%酚酞乙醇溶液 称0.5g酚酞溶于100ml50%乙醇中
中性甲醛溶液 在50mL 36～37％分析纯甲醛溶液中加入1 mL 0.1％酚酞乙醇水溶液，用0．1 mol／L 的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的 玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。如已放
置一段时间，则使用前需重新中和。
2.实验仪器：
恒温水浴锅、分光光度计、吸管、试管及试管架
【操作步骤】
1、取2只.1 mol／L甘氨酸溶液 蒸馏水 中性甲醛溶液 酚酞指示剂（滴）
样品 2.0 5.0 2.0 5
空白 — 7.0 2.0 5
混匀后分别用0.1mol/L标准氢氧化钠溶液滴定
氨基酸的甲醛滴定（解离）曲线
如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛 滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品 是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液， 则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。 但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水 解程度。随水解程度的增加滴定值也增加， 滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。
【实验主要仪器、试剂】
甲醛滴定法测定氨基酸
【实验目的】
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和 操作要点
【实验原理】
氨基酸是两极电解质，在水溶液中有如
下平衡： R-CH –COON+ H3 R-CH –COONH2
+
H+
-N + H3是弱酸，完全解离时pH为11-12或更 高，若用碱滴定-N+H3释放的H+来测量氨基 酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确 指示终点。 常温下，甲醛可与氨基酸上的-NH2结合， 形成—NHCH2OH、—N(CH2OH)2 等羟甲 基衍生物，使上述平衡右移，使
实验二氨基酸的甲醛滴定
H
R
C
NH2 + H+
COO-
H
R
C
NHCH2OHO、O
COO-
+HCHO
H
RC
N（CH2OH）
2
COO-
01
试剂
02
一． 中性甲醛 二． 0.5%酚酞乙醇
溶液 三． 标准的氢氧化
钠液 四． 0.01N Gly液 五． 未知浓度的Gly
液
四、主要的器材
如何正确使用滴定管？
五、操作方法
甘氨酸氨基氮回收率 1. 取锥形瓶3个，编号，向第1、2号两瓶内各加入2毫升0.01N标准甘氨酸溶液及 1-2滴酚酞指示剂。向第3号瓶内加入2毫升蒸馏水及1-2滴指示剂作为对照混匀 后，用0.01N标准氢氧化钠溶液滴定第1号瓶内的溶液至微红色，并保留作为掌 握滴定终点的颜色标准。向第2、3号瓶内加入4毫升中性甲醛溶液混匀，分别用 0.01N标准氢氧化钠溶液将它们滴定至第1号瓶颜色，将每个编号都重复操作2次 ，并求出甘氨酸氨基氮的平均回收率。
02
该滴定法能否定量测定蛋白质的水解溶
03
液？
是否所有的AA均能用该方法测定？为什
么
04
为什么计算氨基酸含量可只计算氨基氮
05
？
值日
06
实验报告
原理
用甲醛与氨基相互作用， 使氨基上的二个氢原子被 甲醛所取代生成氨基酸的 二羟基衍生物。由于氨基 上的氢被取代，则氨基上 的H+离子解离的PK值降 低到7左右，滴定终点在 PH9左右，这样就可以用 酚酞指示剂，用氢氢化钠 来滴定-NH3+上的H+。 从而计算出氨基酸的量。
H
R
C
甲醛滴定法测定氨基酸含量
实验4 甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。
甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。
若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具（一）试剂1、0.5%酚酞酒精溶液称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。
2、0.05%溴麝香草酚蓝溶液取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、1%甘氨酸溶液取1g甘氨酸溶于100ml蒸馏水。
4、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液5、中性甲本醛溶液取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示剂约3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。
（二）实验器具1、锥形瓶2、碱式滴定管1、移液管洗耳球4、天平5、容量瓶6、试剂瓶7、量筒8、玻棒与烧杯四、操作步骤3、结果计算每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为12() 1.40082V V mg -⨯= 式中：V 1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml ）；V 2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml ）；1.4008 为1ml 0.1mol/L 氢氧化溶液相当的氮量（mg ）五、注意事项利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。
随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。
六、实验报告根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的优缺点。
，七、思考题1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么/2、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—N +H 3基上的H +，不能用一般的酸碱指示剂？教你如何用WORD文档(2012-06-27 192246)转载▼标签：杂谈1. 问：WORD 里边怎样设置每页不同的页眉？如何使不同的章节显示的页眉不同？答：分节，每节可以设置不同的页眉。
甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量演示教学
甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。
甲醛可与氨基酸上的一N+H3结合，形成一NH —CH2OH、一N（CH2—OH）2等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+,测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。
若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具（一）试剂1、1%酚酞酒精溶液称1g酚酞溶于100ml 95%酒精中。
2、0.5%溴麝香草酚蓝溶液取0.5溴麝香草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、氨基酸溶液4、标准0.100mol/L氢氧化钠溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml，加1%酚酞指示剂2滴，滴加0.1mol/L NaOH 溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。
（二）实验器具1、锥形瓶2、碱式滴定管3、移液管洗耳球4天平5、容量瓶6试剂瓶7、量筒8玻棒与烧杯四、操作步骤、混匀后用标准氢氧化钠溶液滴定至紫色(pH8.7~9.0)3、结果计算氨基酸溶液中含氨基酸的百分比浓度为C= （V i-V2）x C o X氨基酸分子量/ （10W样）式中：C :总酸含量（g/100ml）V i为滴定样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）;V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）;C o：标准氢氧化钠准确浓度（mol/L）V样：样品体积（ml）4、氢氧化钠标准溶液的标定4 i4.1 I IK懈取1 于io®沱i' 側的水中摆匀准人聚乙娇容器中理用敖賢竜常械清益 竝1削規魚聰料骨瞬上层静厨无二砒段射解至M 伽L.舶. +X JiOS 标框炳JE 附质国戡度肌WOH ）」」（欣I;U151 0.5 27 0.15,411.2标定2于IO5C-l ：0r 电也箱中+甥至恆重的工作塞准试期菲苯二印翳勿輒削无二氫It 碳的水常解旳2掃酎散指*釈10祸）用圧制好的氢軋化的裁陵稱定至諮液30 s*同时齢白试執站：用-紳二甲卿帥质鼬IM 数似戦为克妙v的皐飮单位为毫升（讥）：亂祉畴林定尉的 载畫肌WJH ）扒泅/打T 隣踰胖一甲魅剛好邢无二 |[|1T.5so 歆3XSao __—|0J0.7550^XIOOO E 疋)M空白试期統桶辎体积脯仏戦为JHKmLh曲数仏单也为克再庫尔【”mol}[M（KHGHQ）—2必?乩五、注意事项(1) 利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。
甲醛滴定法测定氨基酸含量
实验4 甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。
甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。
若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具（一）试剂1、0.5%酚酞酒精溶液称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。
2、0.05%溴麝香草酚蓝溶液取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、1%甘氨酸溶液取1g甘氨酸溶于100ml蒸馏水。
4、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液5、中性甲本醛溶液取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示剂约3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。
（二）实验器具1、锥形瓶2、碱式滴定管1、移液管洗耳球4、天平5、容量瓶6、试剂瓶7、量筒8、玻棒与烧杯四、操作步骤2、混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色（pH8.7~9.0）3、结果计算每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为12() 1.40082V V mg -⨯= 式中：V 1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml ）；V 2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml ）；1.4008 为1ml 0.1mol/L 氢氧化溶液相当的氮量（mg ）五、注意事项利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。
随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。
六、实验报告根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的优缺点。
12甲醛滴定
置一段时间，则使用前需重新中和。
2.实验仪器：
恒温水浴锅、分光光度计、吸管、试管及试管架
【操作步骤】
1、取2只25ml锥形瓶，按下表加入试剂。
锥形瓶编号 试剂(mL) 0.1 mol／L甘氨酸溶液 蒸馏水 中性甲醛溶液 酚酞指示剂（滴）
样品 2.0 5.0 2.0 5
空白 — 7.0 2.0 5
混匀后分别用0.1mol/L标准氢氧化钠溶液滴定
甲醛滴定法测定氨基酸
【实验目的】
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和 操作要点
【实验原理】
氨基酸是两极电解质，在水溶液中有如
下平衡： R-CH –COON+ H3 R-CH –COONH2
+
H+
-N + H3是弱酸，完全解离时pH为11-12或更 高，若用碱滴定-N+H3释放的H+来测量氨基 酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确 指示终点。 常温下，甲醛可与氨基酸上的-NH2结合， 形成—NHCH2OH、—N(CH2OH)2 等羟甲 基衍生物，使上述平衡右移，使
氨基酸的甲醛滴定（解离）曲线
如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛 滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品 是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液， 则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。 但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水 解程度。随水解程度的增加滴定值也增加， 滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。
【实验主要仪器、试剂】
0.1mol/LNaOH溶液相当的氮量（mg）
【思考题】
1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么?
2、为什么NaOH溶液滴定氨基酸的—N+H3基
上的H+，不能用一般的酸碱指示剂？
氨基酸总量(氨态氮)的测定【范本模板】
氨基酸总量（氨态氮)的测定一、目的与原理：1、了解掌握单指示剂与双指示剂甲醛滴定法测氨基酸总量的方法与原理：二、单指示剂甲醛滴定法：（一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质,因为氨基酸含有-COOH基显示酸性,又含有—NH2基显示碱性。
由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐.当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合,其碱性消失,破坏内盐的存在，就可用碱来滴定—COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在.（二）试剂(1）40％中性甲醛溶液,以麝香草酚酞为指示剂，用1N NaOH溶液中和。
（2）0。
1％麝香草酚酞乙醇溶液.(3)0。
100N氢氧化钠标准溶液。
(三）操作步骤：称取一定量样品（约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中（如为固体加水50毫升）,加2—3滴指示剂，用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色.加入中性甲醛20毫升,摇匀，静置1分钟,此时蓝色应消失。
再用0。
1OON NaOH 溶液滴定至淡蓝色。
记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算:氨基酸态氮（％)=（ N V×0。
014×100）/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。
V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1）W：样品溶液相当样品重量（克）.0.014:氮的毫克当量。
三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同,只是在此法中使用了两种指示剂。
从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法（此法操作复杂,不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。
PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH 值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。
（二)试剂:（1）三种试剂同单指示剂法(2)0.1％中性红(50％乙醇溶液）(三)操作步骤:取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色），记录用量,另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100NNaOH准溶液滴定至淡蓝色。
氨基酸总量(氨态氮)的测定
氨基酸总量(氨态氮)的测定一、目的与原理：1、了解掌握单指示剂与双指示剂甲醛滴定法测氨基酸总量的方法与原理：二、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。
由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。
（二）试剂(1)40％中性甲醛溶液，以麝香草酚酞为指示剂，用1N NaOH溶液中和。
(2)0.1％麝香草酚酞乙醇溶液。
(3)0.100N氢氧化钠标准溶液。
(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。
加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.1OON NaOH 溶液滴定至淡蓝色。
记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。
V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。
0.014：氮的毫克当量。
三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。
从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。
PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH 值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。
(二)试剂：(1)三种试剂同单指示剂法(2)0.1％中性红(50％乙醇溶液)(三)操作步骤：取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100NNaOH 准溶液滴定至淡蓝色。
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甲醛滴定法测定氨基
酸含量
实验4甲醛滴定法测定氨基酸含量
一、目的
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
二、原理
水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。
甲
醛可与氨基酸上的一N+H3结合，形成一NH —CH20H、一N（CH2—0H）2等羟甲基衍生物，使N + H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的
含量。
若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具
（一）试剂
1、0.5%酚酞酒精溶液
称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。
2、0.05%溴麝香草酚蓝溶液
取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、1%甘氨酸溶液
取1g甘氨酸溶于100ml蒸馏水。
4、标准0.100mol/L氢氧化钠溶液
5、中性甲本醛溶液
取甲醛溶液50ml,加0.5%酚酞指示剂约3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液,使溶液呈微粉红色，临用前中和。
（二）实验器具
1、锥形瓶
2、碱式滴定管
1、移液管洗耳球4、天平
5、容量瓶6试剂瓶
7、量筒8玻棒与烧杯
四、操作步骤
2、混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色（pH8.7~9.0）
3、结果计算
每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为
V V2） 1.4008 m g —〒
式中：V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml）;
V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；
1.4008为1ml 0.1mol/L氢氧化溶液相当的氮量（mg）
五、注意事项
利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。
随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。
六、实验报告
根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的优缺点。
，
七、思考题
1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么/
2、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的一N+H3基上的H +，不能用一般的酸碱指示剂？。