灭菌锅验证

某厂高压灭菌锅验证SOP

Ⅰ.目的：

在现有设备和消毒工艺条件下，利用生物指示剂Sterikon plus Bioindicator (货号：1.10274，Merck)对培养基灭菌有效性进行验证。

Ⅱ.范围：

适用于ETC高压蒸汽灭菌锅和立式圆形LS-B5OL高压蒸汽灭菌锅的验证。

Ⅲ.职责：

微生物分析师应按照此SOP执行。

Ⅳ.程序：

原理：生物指示剂是BacilusStearothermophilus与培养基组成的菌悬液，在121℃消毒15分钟的情况下，此菌会被杀死。

A.安全措施

1.生物指示剂仅供实验室使用。

2.小心轻放以防破裂。

3.贮存于2-8℃冰箱中，不能与食物同放。

4.每支安瓿只能使用一次，用过后进行消毒处理。

B.安瓿内容物的数量与活性验证。

1.戴上一次性手套，在层流台上小心打开ampoule。

2.用一支5ml无菌移液管把安瓿中菌悬液全部吸出。

3.记录菌悬液的体积（每支安瓿的体积）。

4.用无菌生理盐水把悬菌液稀释成三个梯度，分别为1:1000，1:10000,1:100000。

5.吸取1ml稀释液加入无菌培养皿，加入15-20ml营养琼脂（包括一个阴性对照）混匀，每个稀释度做双样。

6.58-62℃培养48-72小时。

7.48-72小时后，在菌落计数器上计数。

8.同一稀释度的两个数值进行平均，然后乘上稀释度，得出每毫升菌悬液中所含活菌数。

9.后二个稀释度所得出的活菌数/ml进行平均，算出平均值。

10.结果记录于高压灭菌锅有效性验证记录中，见附录B-1.

C.消毒锅验证

1. 对于ETC验证把五支ampoules分别放入五只标有A1，A2，A3，A4，CO的小烧杯中,然后把五只小烧杯放置在附录A1所示的位置上，其余平面位置基本放满待灭菌物料。对于LS-B5OL验证6支ampoules分别放入6只标有1.

2.

3.

4.

5.6的小烧杯中,然后把6只小烧杯放置在附录A2所示的位置上，其余位置基本放满待灭菌物料。

2. 对于ETC验证培养基121度，15分钟的灭菌有效性，须将ampoules分别放入五只标有A1，A2，A3，A4，CO的特定体积.特定容器配制好的培养基溶液中，然后放置在附录A1所示的位置上，其余平面位置基本放满待灭菌相同体积，相同容器的溶液。对于LS-B5OL 也是如此。

2.121℃消毒15分钟，充分冷却后，放入58-62℃恒温箱中培养24-48小时。

3.用一支未消毒的安瓿作阳性对照。

4.在培养24小时和48小时后观测结果。

结果判断：

a.阳性对照管应由紫色变为黄色判为该指示剂有效。

b.如安瓿内容物发生浑浊且颜色由紫变黄（产酸），说明灭菌无效果。

c.在72小时内，紫色未变，则继续培养至七天，每天观测结果。阳性对照安瓿经培养后呈阳性反应，而其余安瓿仍为紫色，说明消毒锅灭菌效果良好。

5.结果记录于高压灭菌有效性验证报告中，见附录B-2。如果结果说明消毒锅灭菌效果良好，则灭菌负载可以按照验证通过的方式进行分布操作；若结果不好，则重新确定负载分布.装载和容器类型，只有当生物指示剂验证通过，才能将负载分布和容器类型确定。

6.验证频率：

a.每年一次，每次循环和负载连续进行三次。

b.灭菌锅每次发生故障，维修后要验证一次。

V.附录

A.附录一：ETC生物指示剂分布图

B.附录二：LS-B5OL生物指示剂分布图

C.附录三：ETC高压灭菌锅验证

D.附录四：58-62℃72小时培养结果