牡丹中丹皮酚含量及其提取检测方法研究

作者：龚明贵，张巧明，秦翠丽，原小秋

【关键词】牡丹；,,丹皮酚；,,含量；,,分离提取

摘要：对牡丹中丹皮酚含量的差异性、提取和检测方法的最新研究进展进行了综述。牡丹的根皮是一种传统中药材, 其中含有丹皮酚等多种有效成分。丹皮酚是起镇痛、消炎、抗菌等作用的主要活性成分, 随着中药现代化的进展，对中药有效成分的分离提取、含量测定已成为新的热点课题。

关键词：牡丹；丹皮酚；含量；分离提取

a study on the extraction, isolation and the analysis of content of paenol in root bark of penoy

1 牡丹中丹皮酚含量

丹皮酚为毛茛科植物牡丹（paeonia suffruticosa andr）的主要活性成分，牡丹叶、茎、茎皮、根、根皮中均含有。牡丹中丹皮酚含量差异受产地、采收季节、采后加工方法、生长条件等因素影响很大，因此我们有必要对牡丹中丹皮酚含量作一研究。

“土地所出, 真伪陈新, 并各有法。”

1.1 产地对丹皮酚含量的影响《神农本草经》载曰：

说明了产地的重要性。我国牡丹分布广，资源丰富，其活性成分丹皮酚的含量差异很大。为了探讨和建立不同产地丹皮药材的质量控制方法和指标，范明等［3］18个省区不同产地的丹皮中丹皮酚含量测定结果显示，其中以云南产（5.94%）牡丹皮含量为最高, 宁夏产（3.83%）次之，而河南、福建产（1.58%）最低，可见产地对药材质量影响较大。胡世林等［4］对7个产地的丹皮酚含量进行研究，发现安徽铜陵的“凤丹皮”含量最高，各产地平均含量为1.08%～2.51%。杨洁［5］测定的丹皮酚平均含量在上述范围内，含量最高的为四川产丹皮，其次为安徽产丹皮，福建产丹皮含量最低。通过研究认为，丹皮质量好坏不应该忽略产地对其有效成分的影响。

1.2 采收期对丹皮酚含量的影响中草药采收期直接影响药材品质、产量及资源的合理保护与开发利用。白志川等［6］研究发现，丹皮酚的含量随生长年份增加而增加，5年生丹皮中丹皮酚的含量明显高于3年生与4年生；牡丹根皮在年生长期中，丹皮酚的含量符合季节性代谢规律，10月份含量基本达到最高点，这与李海燕等［7］的研究结果相符，丹皮酚含量的高峰期与2005版《中国药典》中记载的丹皮的采收期一致［8］。

1.3 种植海拔丹皮酚含量的影响中药材中有效成分含量总受到生长条件的影响和制约，这些生长条件包括海拔、光照、温度等。范俊安等［9］研究发现同一品种的牡丹随着海拔高度的变化，丹皮酚含量呈现明显的抛物线型规律性变化，以海拔600 m为最高（含量3%），高于或低于600 m ，含量均下降；但各海拔样品丹皮酚含量均在2%以上，说明海拔400 ～800 m均适宜种植，海拔为600 m的地区在我国分布较为广泛，牡丹在我国适生区也较广。

1.4 不同部位中丹皮酚含量李海燕等［10］采用反相高效液相法测定牡丹各部位中丹皮酚的含量，结果发现同一采收期不同部位中丹皮酚的含量以根皮的含量较高，根皮（

2.868%）&根（1.402%）&茎皮（1.026%）＞叶（0.837%）&茎（0.556%），这与2005年版《中国药典》规定药用部位基本一致；同时还发现丹皮酚含量：细根皮（

3.118%）＞细根（2.873%）&根皮《中国药典》规定牡丹皮采收时除去细根，从主要成分的相对含量来看是否合理，（2.868％），

值得研究。

1.5 产地加工方法对丹皮酚含量的影响牡丹皮产地加工方法有3种：熏丹皮、刮丹皮、原丹皮，吕文海等［11］通过实验结果表明，不同产地加工方法对丹皮酚含量影响不同，原丹皮＞刮丹皮＞熏丹皮。通过分析认为外表皮是丹皮酚含量最高的部位，木质部含量低于皮部；刮丹皮前后经两次硫磺熏制，仅仅改善了商品外观，既人为的增加了药材中硫化物的残留量，又降低了丹皮酚的含量。原丹皮中丹皮酚含量比刮丹皮高，表明国外客商使用原丹皮有一定科学依据，建议国内也改变传统用法，使用原丹皮，不仅有效成分含量更高，且

生产和加工成本也会降低［12］。

2 丹皮酚提取分离方法

2.1 醇提法以无水乙醇为溶剂，40℃温度下回流提取，即可将丹皮酚提取出来。醇提法提取工艺简单，有效成分提取多，似应为牡丹皮提取的最佳方法，但问题在于醇提液的后处理困难，因丹皮酚熔点低、挥发性强，实际生产中难于仅除去乙醇而不损失较多的丹皮酚，且提取过程中受热温度越高、时间越长,丹皮酚的含量和收率就越低［13］。

2.2 蒸馏－煎煮法蒸馏-煎煮法是指先蒸馏提取挥发性成分，药渣再加水提取的方法，适用于含挥发性成分药材的提取。丹皮酚随蒸气馏出后，在冷藏状态下大量析出，滤过干燥即可用于成型，保存方便且转移率较高［14］，但其提取率远低于醇提法［3］；提取过程中选择适宜的ph范围使丹皮酚溶解，并确保溶液贮存过程中的稳定已成为丹皮酚提取液体制备过程中的关键，在蒸馏过程中可以加盐、先加碱后加酸等提高提取率，研究认为加盐蒸馏法是丹皮酚提取的最优方法；为了提高其在水中溶解度，通常采用有机溶剂、助溶剂、表面活性剂等途径来解决问题，有文献报道将其制成β-环糊精包合物来提高其稳定性和生物利用度，能降低其挥发性，增加其溶解度［15］。

2.3 co2 超临界流体萃取法应用超临界萃取法是当前中草药有效成分提取的一个发展方向，具有提取温度低、时间短等优点。在15 mpa ，52 ℃的提取条件下，2.5 h后其丹皮酚提取液为淡红棕色液体，冷藏后自动分层，上层为淡黄色液体，下层为淡红棕色固体［16］。co2 超临界流体萃取法提取的丹皮酚量少，远低于文献报道值，该方法能萃取出大量脂溶性成分。因co2 是非极性物质而酚苷类成分极性较大，故未能将该类萃取出来，这也是导致总提取物收率较低的一个原因［17］。为提高丹皮酚及酚苷类成分的收率，并保持本方法的提取特点，可考虑进一步优化提取条件并加入夹带剂，这方面的工作还有待深入研究。

3 丹皮酚含量测定方法

目前对丹皮酚的检测方法有高效液相色谱法、气相色谱法、分光光度法、薄层扫描法和溴量法、库仑滴定法等。

3.1 高效液相色谱法杨洁等［5］采用hplc法，结果显示丹皮酚在0.01～0.55 μg/ml 范围内线性关系良好(r = 0.999 6) ，平均回收率99.87% ，rsd 为1.46%。该法简便、快速，重现性好，精度高，适用于牡丹皮中丹皮酚的定量分析。实验中试用不同体系和比例的流动相，如甲醇－磷酸，甲醇醋酸水，结果以甲醇醋酸水溶液为流动相时丹皮酚的分离效果最好。李海燕等［7］以甲醇0. 5%磷酸(60∶40)为流动相，检测波长274 nm下应用反相高效液相色谱法对丹皮酚含量进行测定，其检测效果也较为理想。

3.2 薄层扫描法白少岩等［18］应用反射法锯齿扫描法测定牡丹皮中丹皮酚含量，以环己烷:氯仿:无水乙醇(7∶3∶1)为展开溶剂，将待测液在0.13 mm硅胶g板展开，波长：λs = 274 nm，λr：365 nm；下进行扫描。各项实验结果均较为理想，证明薄层扫描法操作简便、省样、省时，不失为测定丹皮酚含量的较理想方法，尤其是在中药复方制剂中，此方法对丹皮酚的测定可较好地排除其他成分的干扰［5］。