呼吸道标本的处理分解

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呼吸道标本细菌学检验

呼吸道标本细菌学检验标准操作程序1.检验目的规范呼吸道标本细菌学检验操作规程，确保检验结果准确可靠。

2.适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。

3.标本采集与运送3.1 采集时间以晨痰为好。

3.2 采集方法3.2.1 自然咳痰法用清水反复漱口后从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内。

3.2.2 气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。

3.2.3 气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。

3.2.4 呼吸机采集法使用呼吸机的病人，可利用呼吸机吸取深部痰入专用采集器内送检。

3.2.5 为了明确扁桃体炎、会厌炎、鼻咽部化脓性感染的病原体，可以采集拭子送检。

首先拭子用无菌生理盐水沾湿，然后用力在感染部位擦拭，采集标本与无菌管送检。

3.3 标本运送3.3.1 采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2h。

3.3.2 延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保存（疑为肺炎双球菌、流感嗜血杆菌等苛氧菌感染除外），以免杂菌生长，但必须在24h内处理。

3.3.3 对可疑烈性呼吸道传染病的患者检验标本，在采集、运送及保存过程中必须注意生物安全防护。

4.检验步骤4.1接种：用无菌拭子蘸取脓性部分，接种于血平板和巧克力平板第一区，再用一次性接种环分区划线接种。

4.2 涂片在接种的同时进行涂片。

用铅笔在磨砂部位编号，每片只涂一份标本。

4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。

4.4 涂片染色镜检：涂片革兰染色，自然干燥后镜检。

先用低倍镜浏览整片，计数平均每个低倍视野WBC、上皮细胞的数量。

标本合格与否参考表1，合格标本再用油镜观察，主要观察片中主要细菌类型、WBC内吞噬什么细菌等，以作为看板时决定什么细菌要做的依据。

表1 痰液标本分级4.5 培养结果观察4.5.1 口咽部正常寄生的需氧菌主要是腐生的奈瑟菌、草绿色链球菌，4.5.2 有明确意义的病原菌： A群溶血性链球菌(咽炎)、流感嗜血杆菌（b型5y以下儿童急性会厌炎、急性支气管炎）、肺炎链球菌（急性支气管炎常继发于病毒感染、大叶性肺炎）、百日咳鲍特菌（咳嗽、支气管扩张）、金黄色葡萄球菌（肺炎）、军团菌（肺炎）、白喉棒状杆菌。

呼吸道标本的培养与鉴定

呼吸道标本的培养与鉴定人体的上呼吸道有常居的细菌群，下呼吸道是无菌的。

上呼吸道常居菌主要有：草绿色链球菌、α、β链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、拟杆菌、梭杆菌、口腔厌氧球菌、奈瑟菌（致病菌除外）等。

1. 下呼吸道感染的病原菌种类因感染部位而有所差异。

（1）.咽炎最常见的病原菌是A群链球菌；（2）.喉炎的病原菌以流感嗜血杆菌为主；（3）.中耳炎常见病原菌为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌及口腔厌氧菌；（4）.社区获得性下呼吸道感染的常见病原菌包括肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎衣原体、肺炎支原体、卡他莫拉菌、化脓性链球菌、结核分枝杆菌、嗜肺军团菌、诺卡菌等，金黄色葡萄球菌可引起社区获得性、进行性、坏死性肺部病变;(5)长期使用广谱抗菌药物及激素、粒细胞减少的患者容易受到侵袭性真菌的感染。

2.检验方法与程序通常用鼻咽拭子采集标本。

痰和支气管灌洗液用无菌痰杯留取。

应由临床医生指导留取。

痰标本及上呼吸道拭子标本应在2小时内送到实验室。

3.涂片检查直接涂片、革兰染色、镜检。

痰液标本每低倍视野上皮细胞应小于10个，白细胞应大于25个。

还可以初步判定是否有病原菌存在及病原菌的种类。

比如，念珠菌可直接在高倍镜下检查孢子及菌丝。

4.细菌培养通常采用分区划线接种的方法进行标本的初次接种。

①血平板适用于分离各类细菌，特别是β溶血性链球菌②巧克力平板于5%co2环境下分离嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌或淋病奈瑟菌③中国蓝/麦康凯平板用于分离革兰氏阴性杆菌④沙氏平板用于分离念珠菌及其他酵母菌或真菌⑤厌氧血平板放厌氧环境，分离厌氧菌⑥罗-琴培养基或米氏7H10培养基，用于结核分枝杆菌的培养。

35℃培养18-24小时，观察细菌菌落形态及特点，呼吸道标本中的常居菌群不用鉴定，培养后生长于平板第二区或第三区的中等或大量细菌，或仅在第一区生长的纯种细菌，都是需要鉴定的细菌。

若无致病菌或呼吸道正常菌群生长，可能提示正常菌受抗菌药物的抑制。

呼吸道标本的采集与送检要求

2. 延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保存（疑为肺链和流感嗜血杆菌等苛养菌不在此列），以免杂菌生长，但保存的标本应在24h 内处理。
3. 对可疑烈性呼吸道传染病（SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者标本，在采集、运送或保存过程中必须注意生物安全保护。
二、临床微生物标本转运要求 1. 密闭运送原则。 2. 及时运送原则。 3. 生物安全原则，运送箱三层包装。
键（更加重要）。 4. 改善患者全身情况。
标本采集送检频次
一、怀疑普通细菌性肺炎： 1. 每天一次，连续2-3天。如果每天均报告同一种菌，
且++或+++，则有临床意义，但实际情况每天大多报告不同菌。
2. 不建议24h内多次采集。
3. 关于是否一定要采集晨起第一口痰的质疑？——因第一口痰会受胃肠道和口咽部细菌的影响，并存在过早采集无法保证及时送检等问题。所以实际临床操作中只要方便采集，正规口腔处理，及时送检，并非必须晨起第一口痰。
一份培养结果与多个环节相关，最关键的因素就是标本的正确采集与运送!!!
感染的病原体是什么？
是不是很难确诊哪个是真正的致
病菌？ Why？
微生物检测背景及流程
一、常规项目检验时间：标本接收（1-2min）——标本接种、涂片（5min）——细菌培养（18-48h）——细菌鉴定、药敏试验（18-24h或48小时）——结果报告（5min）
2. 经人工气道吸引分泌物：是目前临床较为常用的微生物标本。但由于这些宿主的气管纤毛黏液防御机制受到损害，有学者提出此法的标本应该先做细胞学筛选。
五、培养阳性细菌都需要抗菌药物治疗吗？ 1. 不是，培养阳性≠感染，可能为污染（血培养），可

呼吸道标本的细菌培养

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国内概况：
• 国内最早儿童肺炎链球菌脑膜炎个案报告
在1942年。60年代中期以前研究资料显示 SP肺炎、脑膜炎在冬春季发病较多，是儿科住院病人中常见病例多发生在婴幼儿。 SP性脑膜炎占化脑的11.1-22.1％，仅次于流脑。SP也是小儿肺炎的重要病原菌之一， SP所致大叶性肺炎，5岁以下儿童中可占70 ％。
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（三）痰标本细菌培养存在的问题。
• 痰标本的培养时间：
呼吸道(痰)标本培养应该为24~72小时。24小时培养后细菌生长稀少或未生长的平板应继续培养到72小时后再作报告，防止一些生长缓慢的细菌会遗漏，如卡他莫拉菌、奴卡菌、嗜血杆菌等。
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（四）呼吸道（痰）标本的接种处理
儿童呼吸道常见细菌培养鉴定技术
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病原菌确定原则
• 自从发现细菌以来，已经确定上百种疾病的病原菌，对这
些常见的传染病，通常只要检出已经确定的病原菌，就可以认定这种疾病的原因。
• 新出现的传染病，需要用确定病原菌的古老标准来确定。
• 对病人组织、器官中分离到的一种微生物，不足以说明就
是疾病的原因。对于细菌性疾病，需要满足郭霍原则（Koch）。
齐。
• 不典型的SP菌落有水滴样，菌落较大，边缘不整
齐；还有细小、似草绿色链球菌但较湿润的菌落也需注意。
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细菌染色形态
• 革兰氏染色阳性，呈矛头状，成双或链状排列，
有荚膜；在痰标本中大多数成双排列。
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鉴定要点：
• Optochin敏感，胆汁溶菌和荚膜肿
胀试验阳性，菊糖分解试验阳性，小鼠毒力试验阳性。

呼吸道标本采集

试剂要求：应使用无菌、无热原、无杂质、无刺激性的试剂，确保采集到的呼吸道标本质量可靠。
采集容器：应选择密封性好、防漏、不易变形、易于灭菌的采集容器，以便于保存和运输呼吸道标本。
采集工具：应使用一次性或经过严格消毒的采集工具，避免交叉感染和污染。
采集环境及安全要求
采集环境：选择清洁、安静、通风良好的环境，避免交叉
相关法律法规及规定
涉及的法律法规：涉及《医疗废物管理条例》、《传染病防治法》等相关法律法规
采集人员的资质要求：必须具备相应的医学知识和技能，并经过相关培训和考核
采集过程中的伦理要求：尊重患者的知情权和自主权，保护患者隐私，确保患者安全
涉及的法律责任：违反相关法律法规及规定可能面临行政处罚或刑事责任
咽拭子标本采集
采集方法：使用医用棉签擦
拭咽部
采集部位：咽后壁、扁桃体
隐窝等处
采集目的：检测呼吸道病毒、细菌等病原体
注意事项：采集前应告知患者注意事项，采集时应避免损伤咽部粘膜
支气管肺泡灌洗液标本采集
采集方法：通过纤维支气管镜，将灌洗液注入肺泡内，然后回收采集目的：用于诊断肺部感染、肺泡蛋白沉积症等疾病优点：可以直接观察到肺泡内的病变情况，提高诊断的准确性注意事项：采集前需要评估患者的病情和肺功能状态，避免出现不良反应
呼吸道标本采集
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目录
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呼吸道标本采集的种类呼吸道标本采集的质量控制
呼吸道标本采集的步骤
呼吸道标本采集的临床意义
呼吸道标本采集的伦理和法律问题
01
添加章节标题
02
呼吸道标本采集的步骤

临床微生物标本的送检与采样指南

临床微生物标本的送检与采样指南呼吸道标本采集及运输一、上呼吸道标本1、送检指征上呼吸道感染包括咽炎、喉炎、会厌炎等，凡具有以下情况任何一项者疑似患者。

1.1 病毒性普通感冒伴有明显咽痛时，怀疑为咽部链球菌感染，应做细菌培养。

1.2 细菌性咽-扁桃体炎：明显咽痛、咽部发红、畏寒、发热，体温可达39°C以上。

1.3 喉咙痛、咳嗽、喉部有脓样分泌物等临床症状。

1.4 上呼吸道感染易并发鼻窦炎、中耳炎、气管-支气管炎，需送相应部位分泌物或痰液进行细菌培养。

2、标本采集上呼吸道标本包括鼻、鼻咽、咽拭子标本。

应根据临床表现和感染部位的不同有选择性的采集标本，以便更好地分离出病原菌。

采集时应选择无菌、不含抑制剂的棉拭子，预先用无菌生理盐水或营养肉汤蘸湿拭子，并直取感染部位，减少污染。

2.1 鼻拭子的采集：最好使用扩鼻器，先用拭子拭去鼻黏膜表面的分泌物并丢弃，用第2个试子蘸取无菌生理盐水或营养肉汤，插入鼻孔采集病灶标本。

2.2 咽拭子的采集：采集标本时患者先用清水漱口，由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，用无菌的鼻咽拭子（一端弯曲的金属棉拭）由口腔进入，越过舌根到咽后壁或腭垂后侧，采集鼻咽红肿处标本，取材后小心将试子退出，立即放人无菌试管内。

若咽部明显发红或有假膜存在时，应在局部擦拭取标本（最好拭子从膜底下擦拭）。

采集标本可在咽部多点采集标本，以提高检出率。

若无局部病变或做带菌者测试应于咽部或扁桃体上擦拭。

3、采集时间及频率3.1 检查时间：应于抗菌药物应用之前。

时间上无严格限制，但咽部是呼吸和食物的通路，也应晨起后采集为佳。

3.2 采集频率：重复采集标本的频率一般每日最多1次。

4、标本的运输标本采集后应立即送检，室温运送时间小于2小时，如果不能立即接种，必须装在无菌运送培养基中，避免由于干燥而使某些细菌死亡。

检测淋病奈瑟菌或脑膜炎奈瑟菌的拭子应放人含碳的转运培养基，采集后2小时内接种平板，以防细菌死亡。

呼吸道标本的处理分解

培养结果结合涂片判断定置菌或致病菌
3、前列腺液标本别离出凝固酶阴性葡萄球菌或革兰阳性小杆菌，涂片未见到，可能是污染细菌，应建议重送标本。
4、当涂片中见到的细菌，并由细菌吞嗜现象存在，在培养时别离出该细菌可推测为致病菌。〔涂片应注明细菌是细胞内或细胞外〕
第二十七页，共九十一页。
培养结果结合涂片判断定置菌或致病菌
5、涂片报告的日期和培养报告日期要对应便于医生判别结果的参考价值。
6、并每一视野可见到>20个/油镜或该菌占所见到细菌的50%，可推测是标本中的优势菌。
第二十八页，共九十一页。
第三局部别离培养标准草案有了合格的标本是保证培养成功的重要条件，但如果没有适宜的别离培养基和培养环境同样不能获得好的结果，为此制定如下根本条例以保证致病菌别离成功。
〔5〕小儿采集痰标本：用压舌板刺激咳嗽使肺部和器官的分泌物喷出，用拭子采取标本送检，如不能立即送检应种入输送培养基。
第二十页，共九十一页。
厌氧培养标本采集标准条例
1. 痰标本的厌氧培养标本采集：必须用气管穿刺法获得痰液，从口腔吐出的痰标本不能用于厌氧培养。
2. 尿标本的厌氧培养标本采集：耻骨上膀胱穿刺获得尿标本可用于厌氧菌培养
内容简介
上呼吸道标本标准操作程序〔SOP〕下呼吸道标本标准操作程序〔SOP〕痰标本的标准化操作〔草案〕
第二页，共九十一页。
上呼吸道标本处理程序
大局部步骤需要在生物平安柜内接种
细菌性咽炎的实验室诊断
原理
大多数上呼吸道感染是由病毒引起的。细菌性咽炎经常是由化脓性链球菌引起。但重度的会厌炎和喉气管炎那么是例外，其一般是由于b型流感嗜血杆菌引起。
1、尿培养别离出3种以上的细菌，或别离出凝固酶阴性葡萄球菌、革兰阳性棒状杆菌等非定义为致病菌的细菌，涂片未见到，应在报告中提示可能是污染细菌建议结合临床表现考虑结果的参考价值。

五呼吸系统标本微生物检验

支气管肺泡灌洗液
应尽快送检，室温下不超过2小时；如不能及时送检，应4℃保存，不超过24小时。
呼吸系统感染常见微生物
01
02
03
细菌
肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、卡他莫拉菌
等。
病毒
呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒等。
真菌
白色念珠菌、曲霉菌等。
04
其他微生物
支原体、衣原体等。
定期演练和培训
定期组织实验人员进行应急演练和培训，提高应对生物安全事件的能力和水平。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
肺炎链球菌检验
通过血平板培养、Optochin敏感试验和胆汁溶菌试验等方法进行鉴定。
流感嗜血杆菌检验
采用巧克力平板进行分离培养，并通过卫星现象、X因子和V因子依赖试验等方法进行鉴定。
05 微生物检验结果解读与临床意义
检验结果解读原则及注意事项
遵循微生物学原则
在解读检验结果时，需遵循微生物学的基本原则，包括微生物的种类、数量、生长特性等。
高度的敏感性和特异性。
真菌学检验
1 2 3
直接镜检
采集患者的呼吸道分泌物或组织样本，在显微镜下直接观察真菌的形态和结构特征，以初步判断真菌的种类。
培养法
将样本接种于适当的培养基上，进行真菌培养，观察真菌的生长情况和菌落特征，以鉴定真菌种类。
血清学检测
利用特异性抗体与真菌抗原的结合反应，进行血清学检测，如凝集试验、沉淀试验等，以辅助诊断真菌感染。
病毒
如流感病毒、呼吸道合胞病毒等，病毒感染一般采取对症治疗和支持治疗。
真菌
如白色念珠菌、曲霉菌等，真菌感染多见于免疫力低下患者，治疗需考虑抗真菌药物。

呼吸道标本采集和结果解读

测结果。
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检测方法的局限性：不同检测方法可能存在不同的敏感性和特异性，影响结果的准确性。
添加项标题
标本采集的局限性：呼吸道标本采集过程中可能存在污染、取样不足等问题，影响结果的可靠性。
添加项标题
检测试剂的局限性：不同品牌、不同批次的检测试剂可能存在差异，导致结果不一致。
添加项标题
呼吸道标本采集和检测的时间较长，需要等待实验室结果才能做出诊断，可能会延误患者的治疗
时间。
汇报人：XX
解读人员的局限性：不同专业背景和经验水平的解读人员可能对结果有不同的理解和判断，影响结果的解读和解释。
呼吸道标本采集和检测不适用于所有情况，如病情较轻、无呼吸道症状的患者可能无法采集到有
意义的标本。
呼吸道标本采集和检测的准确性受到多种因素的影响，如采集方法、标本保存和
运输等。
呼吸道标本采集和检测的敏感性较低，可能会漏检某些病原体，导致误诊或漏诊。
呼吸道标本采集难度大，易受污染
采集过程中易发生交叉感染
呼吸道标本采集对患者的创伤较大
呼吸道标本检测的准确性受多种因素影响，如病毒变异、检测试剂的灵敏度等。
呼吸道标本采集的难度较大，容易受到污染或交叉感染。
呼吸道标本检测的特异性有时不够理想，容易出现假阳性或
假阴性的结果。
呼吸道标本检测的时间较长，需要等待较长时间才能获得检
检测原理：利用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增呼吸道标本中的病毒核酸片段，从而检测病毒的存在。
采样方法：通常采用鼻咽拭子或痰液作为呼吸道标本，通过专用的采样拭子采集后送检。
检测步骤：包括样本采集、保存、运输、核酸提取和扩增等步骤，通过荧光定量PCR仪进行检测。

呼吸道标本采集

（4）标本运送：
咽拭子标本的运送宜采用带保湿功能的运送培养基，避免由于送检时间过长而干燥。如未采用运送培养基，应于 0.5h 内送检。即使采用运送培养基，室温保存也不应超过24h。
02 痰液标本
痰培养仅用于下呼吸道感染，主要是肺部感染的诊断。
（1）临床采样指征：
咳嗽、脓性痰，伴有发热，影像学检查出现新的或扩大的浸润影；气道开放患者，出现脓痰或血性痰；考虑下呼吸道感染患者采集痰液标本，同时送血培养标本。
（3）标签及申请单：
申请单除应包括患者基本信息外，患者的临床诊断、症状、是否使用了抗菌药物、检测目的，标识是普通培养、抗酸杆菌还是真菌培养。一定要注明标本种类为肺泡灌洗液，以及采集时间。无菌管上的标签要求有唯一标识号或条码，注明标本采集时间、检测目的。
（4）标本运输：
标本采集后需尽快送到实验室，不要冷藏标本。
质量不合格标本：显微镜下细胞学检查发现标本受口咽部菌群污染。合格痰标本鳞状上皮细胞＜10个/低倍视野，白细胞＞25个/低倍视野，或白细胞与鳞状上皮细胞的数量比值＞2.5。
无标签或标签贴错。
标识信息不明，未提供采集时间及送检目的等。
超过2h送达实验室，且未正确保存的标本。
运送容器有渗漏。
同一天同一项目重复送检的痰标本。
（2）采集要求：
痰标本的采集时机十分关键，应严格遵循以下原则采集标本：
争取首剂抗菌药物治疗使用前及更换抗菌药物前采集。标本采集后保证2h内送达实验室并得到接种。只要有可能得到合格的痰标本，应马上采集、送检。宜在医护人员直视下留取合格痰标本。送检痰标本后三天内不主张再次送检。
（3）标本采集：

呼吸道标本采集流程

自行咳痰采集法取患者晨痰
留置于无菌容器
用冷开水漱口
深呼吸后用力咳出
呼吸道深部痰液
立即送检立即送检吸取痰液采集法气管镜采集法咽拭子采集法 24h 痰标本采集法标本量不少于1ml
清水漱口取出无菌拭子用压舌板轻压舌部蘸取少量生理盐水迅速擦拭患者口腔两侧腭弓及咽、扁桃体分泌物迅速把咽拭子插入无菌试管内塞紧立即送检叩击患者背部患者取适当卧位将集痰器与吸引器连接抽吸痰液2～5ml 于集痰器内记录痰标本总
量外观和性状广口集痰瓶内加少量清水患者晨起进食前漱口后第一口痰开始留取，至次日晨起进食漱口后最后一口痰结束全部痰液留入集痰瓶内立即送检采集标本气管镜引导下置于无菌容器。

呼吸道标本细菌学检验标准操作规程

呼吸道标本细菌学检验标准操作规程1目的规范呼吸道标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。

2适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。

3标本3.1标本类型：痰、咽拭子、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺等。

3.2标本采集3.2.1采集时间：以晨痰为好；支气管扩张症病人，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。

3.2.2自然咳法：在留取痰之前，用清水反复漱口，应从气管深处出痰，吐入无菌容器内。

3.2.3气管镜下采集法：在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。

3.2.4气管穿刺法：在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。

3.2.5棉拭采集法：用无菌棉拭子轻轻擦拭病人鼻咽部黏膜，留取标本，置无菌试管内送检。

3.3标本拒收标准3.3.1申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。

3.3.2痰标本呈水样或唾液样。

3.3.3痰涂片白细胞<10/低倍视野，上皮细胞>25/低倍视野。

3.3.4标本容器溢漏，无瓶盖。

3.3.5痰标本留取放置时间太长，超过2小时。

3.3.6未用指定的无菌容器作细菌培养。

3.4标本保存采集标本后立即送到实验室，放置时间不超过2小时。

4试剂、仪器4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。

4.2VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡、革兰阴性菌药敏卡、革兰阳性菌鉴定卡、革兰阳性菌药敏卡、药敏纸片等，有效期及储存条件参见试剂说明书。

培养箱4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2等。

5细菌鉴定和药敏监控参见《质量管理程序》。

6检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

6.1肉眼观察：包括颜色、黏度、有无血丝或脓。

6.2涂片检查：可以确定标本是否适合做细菌培养，直接涂片镜检，依据低倍镜下观察白细胞和上皮细胞数目多少来评定。

并可初步判定是否有病原菌存在。

痰标本镜下分类分级白细胞（个）上皮细胞（个）A>25<10B>25<25C<10>25注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合格，应重新留标本。

痰及下呼吸道标本的采集指征、采集方法、注意事项、标本运送及临床情况沟通

痰及下呼吸道标本的采集指征、采集方法、注意事项、标本运送及临床情况沟通采集指征有下列体征之一，应进行痰培养：①咳嗽、咳痰，痰液可为脓性、血性、铁锈色或红棕色胶胨阳痰。

②咯血，包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等。

③呼吸困难，呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。

④发热伴白细a胞增高尤其是中性粒细胞或CRP、PCT明显增高。

⑤胸部影像学检查提示有感染可能。

肺部感染的患者有25-50%可能发生菌血症，应同时作血培养。

采集方法1、自然咳痰法以晨痰为佳，咳痰前先用冷开水、纯净水反复漱口三次，然后用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰杯中，1h 内送检。

尽可能在用抗菌药物之前采集标本。

标本量应＞1ml。

痰量少或无痰者可采用雾化吸入加温至45℃的10%Nacl水溶液，使痰液易于排出。

对难于自然咳痰患者可用无菌吸痰管）抽取气管深部分泌物。

2、对昏迷、重症、难治，或伴免疫抑制，或疑是厌氧菌引起的院内感染者，可采用纤维支气管镜采集法、防污染毛刷采集法（PSB）、支气管肺泡灌洗法（BAL）、环甲膜穿刺经气管吸引法（TTA）、经胸壁针穿刺吸引法（TNA）采集标本，均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。

3、小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将棉拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上。

幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。

注意事项痰标本不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。

室温下延搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。

标本运送标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保持＜2h,4℃冰箱保存＜12h。

一般每天只需做一次。

痰及下呼吸道标本验收与拒收见下：1、送检目的不合适者，如咽拭子、咳痰、吸出的分泌物做厌氧菌培养无意义，应拒收。

2、申请单应填写完整无误。

标本标识必须唯一，未标采集时间、部位或检验要求等拒收。

3、标本容器必须符合规定，溢漏、无盖者拒收。

呼吸道标本的采集、储存和运送规范

㊃ＣＯＶＩＤ-１９特稿标准／指南㊃ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３-５５０１．２０２０．０１．００５呼吸道标本的采集㊁储存和运送规范杨童玲１，３夏爱梅１，３胡晓静１余艮珍２史欢２顾莺１张晓波１王传清１张崇凡１黄国英１作者单位１复旦大学附属儿科医院上海，２０１１０２；２华中科技大学同济医学院附属同济医院武汉，４３００３０；３共同第一作者通讯作者张崇凡，Ｅ-ｍａｉｌ：ｘｔ２１１３１１＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ；黄国英，Ｅ-ｍａｉｌ：ｇｙｈｕａｎｇ＠ｓｈｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ流感病毒检测最常见的是采集呼吸道标本，可采用拭子㊁刷子㊁吸出物和灌洗液获取呼吸道标本，可以采集鼻咽㊁口咽㊁鼻孔等㊂曾使用培养法或直接法荧光抗体法进行检测［１，２］，现以逆转录多聚酶链反应（ＲＴ-ＰＣＲ）方法，可以通过样本中少量的病毒核酸扩增而提高检测率［３］㊂急性严重呼吸综合征冠状病毒２（ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２）感染流行期间，ＲＴ-ＰＣＲ是ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染确诊的首选方法［４，５］㊂检测准确性最高的标本是下呼吸道标本，但属于有创性操作㊂由于核酸扩增检测可以检测更低浓度的病毒，并且不需要细胞的存在，因此喉部拭子或唾液样本可能是进行分析的合适样本［６］，但其检出率低于８３％［７］㊂相对无创而准确率高的是鼻咽抽吸物标本，能提供高浓度的感染细胞㊂对于儿童，采集一个口咽拭子和一个鼻部拭子的准确性相当于鼻咽拭子的准确性［８］，是检测准确性与无创性采集的理想搭配㊂但临床上为了避免假阴性，通常会同时采集一个口咽拭子和一个鼻咽拭子㊂口咽拭子的采集相对比较简单，鼻咽拭子的采集需要经过培训，而且鼻咽拭子的采集过程可能会引发患者打喷嚏或者咳嗽而导致气溶胶的产生，存在交叉感染的风险［９］㊂本文基于新型冠状病毒肺炎（ＣＯＶＩＤ-１９）作为乙类传染病甲类管理办法，介绍呼吸道标本的采集㊁贮存和运送［１０，１１］㊂１采集对象ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染的ＣＯＶＩＤ-１９疑似病例㊁疑似聚集性病例，其他需要进行ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染诊断或鉴别诊断病例，确诊的ＣＯＶＩＤ-１９是否康复的鉴别病例，或其他需要进一步ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染筛查检测的环境或生物材料㊂２采集者从事ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２检测标本采集的技术人员应经过生物安全培训且为合格者和具备相应的实验技能㊂按照‘儿童新型冠状病毒感染／肺炎疑似和确诊病例快速筛查和临床实践指南“［１２］的要求使用三级防护，最好使用全面型电动送风呼吸器面罩进行有效防护㊂３采集标本ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２初步诊断测试，中国疾病预防控制中心（ＣＤＣ）建议收集和检测咳嗽患儿的上呼吸道（鼻咽和口咽拭子）和下呼吸道（痰，如果可能）的样本㊂按照国家卫健委ＣＯＶＩＤ-１９诊疗方案（试行第六版）的要求，尽可能留取痰液标本，气管插管患者采集下呼吸道分泌物标本㊂４采集标本时机临床怀疑ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染应立即向当地卫生部门报告，当地公共卫生工作人员将确定患者是否符合ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染调查对象的标准㊂临床标本应在临床或公共卫生实验室采集，用于常规呼吸道病原体检测㊂临床实验室不应从ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染者采集的样本中分离病毒㊂一旦确定了符合ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染对象，应尽快采集样本㊂５采样管及其保存液上㊁下呼吸道标本采集后均置于含３ｍＬ病毒保存液的采样管中，推荐以Ｅａｇｌｅ'ｓ基础培养液为基础的保存液㊂保存液中也应添加胎牛血清或牛血清白蛋白等稳定病毒的蛋白质外壳的添加液㊂除此之外，还应添加青霉素㊁链霉素㊁庆大霉素及多黏菌素Ｂ等抑制细菌生长，保存液提供的样本基本是活病毒，可以最大程度保持样本的原始性，后续不仅可以用于病毒的核酸提取检测，还可用于病毒的培养和分离㊂６采样拭子应选用合成纤维或人造纤维，不推荐海绵或棉花拭子，棉花的纤维对蛋白质吸附较强，导致病毒不易洗脱到保存液中，也不推荐尼龙类的纤维，其吸水性不佳，导致采样量不足，影响检出效率㊂７样本的储存和拒收原则上样本应立即送检㊂以下是各种储存必需的条件：①采集后，应贴上相应的标签，样本可在４ħ以下保存㊃９１㊃中国循证儿科杂志２０２０年２月第１５卷第１期７２ｈ，②如果预计提取检验会延迟，则将样本储存在－７０ħ或更低的温度，③提取的核酸应储存于－７０ħ或更低的温度㊂拒收的样本包括：①没有保存在２８ħ或－７０ħ或以下的样本；②样本标签或资料不完整；③样本类型不合适；④样本量不足㊂８样本的运送①运送人员防护要求：需对运送人员进行专业培训，做好二级防护，目前中国的标本运送由ＣＤＣ的专业人员来取，工作人员通道进入，污染通道离开㊂②样本需要双层密封袋密封，每袋装１份标本，将样本储存在４ħ，并使用密封的标本转运箱（内附有冰袋）立即运送㊂在每个样本容器上贴上患者的具体信息㊁样本的具体信息㊂为每个提交的样本填写卫生行政部门要求的表格㊂③如果样本在－７０ħ下冷冻，运输时则将其放在密封的标本转运箱（内附有干冰）连夜运送，如无－７０ħ保存条件，则于－２０ħ冰箱暂存㊂９加强沟通临床和实验室工作人员之间的及时沟通很重要，这样才能在处理可能ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染病例的标本时将感染的风险降到最低㊂１０上呼吸道标本采集１０．１口咽拭子 ①视野要求：口咽拭子取样时，应该在良好的照明条件下，使用一次性压舌板来确保咽喉部有足够的视野，压舌板将舌压到一边，避开舌头，拭子擦拭扁桃体（图１Ａ㊁Ｂ）㊂②口咽拭子材质的要求：只能使用带塑料柄的合成纤维棉签，不能使用海藻酸钙拭子或带木柄的拭子，因为它们可能含有灭活某些病毒和抑制ＰＣＲ检测的物质㊂③患儿体位和口腔防护要求：患儿取坐位或卧位，采集者坐在患儿对面，以能够看清患儿口咽部扁桃体为准，采集的时候要让患儿头部上抬３０度，采集时患儿应该用口罩罩住鼻部，减少喷嚏或咳嗽飞沫飞溅（图１Ｃ）㊂④取材要求：将口咽拭子深入口咽部，在原位最好保持１０ｓ以吸收分泌物，用拭子棉签同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，轻度用力拭抹咽后壁部位，应避免触及舌部㊂将口咽拭子棉签头浸入采样管中，尾部弃去，旋紧管盖㊂１０．２鼻咽拭子采集（图１Ｄ㊁Ｅ） ①鼻咽拭子材质要求同口咽拭子㊂②准备含３ｍＬ病毒保存液的采样管备用㊂③患儿体位和口腔防护要求：患儿头部后仰７０度，采集时患儿应该用口罩罩住下颌，减少咳嗽飞沫飞溅，取材人站在患儿侧方，防止飞沫飞溅㊂④鼻咽拭子棒长度要求：可以用鼻咽拭子棒测量一下，量出耳根到鼻孔的距离，并用手指做标记㊂⑤体验要求：将采样拭子以垂直鼻子（面部）方向插入鼻腔，与上颚平行，拭子伸入距离最少应达耳垂部位到鼻尖长度的一半，如果能够达到先前估计的深度最好，可有阻挡感㊂⑥取材要求：深入鼻咽部，使拭子在鼻内停留１５３０ｓ，轻轻旋转３５次，以吸收分泌物，然后抽出拭子㊂⑦取材后要求：将鼻咽拭子棉签头浸入采样管中，尾部弃去，旋紧管盖㊂图１上呼吸道标本采集注Ａ：扁桃体；Ｂ：鼻咽１１下呼吸道标本１１．１支气管灌洗液将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管，见患儿有咳嗽反射后再稍微深入１ｃｍ后，注入５ｍＬ温生理盐水，开放负压，旋转收集器头部并缓慢退出，收集抽取的黏液于病毒采样管中㊂１１．２肺泡灌洗该方法适合危重患儿，患儿往往因为呼吸衰竭或肺不张需要行气管插管或纤维支气管镜灌洗，便于获取肺泡灌洗液标本，需要在支气管镜室局麻下行电子支气管镜术㊂支气管镜由左鼻孔进入气管㊁支气管后，镜端固定于右／左肺中叶开口，经气管活检孔缓缓加入灭菌温生理盐水，每次８ｍＬ灌洗２３次，灌洗后吸出［１３］，收集至采样管中㊂１１．３鼻咽和气管抽吸婴幼儿多需要采用该途径采集标本，使用痰液收集器连接负压吸引器，痰液收集器前端的吸痰管深入到患儿气道内，见患儿有咳嗽反射后再稍微深入１ｃｍ后开放负压，吸出２３ｍＬ呼吸道分泌物至采样管中㊂参考文献[１]ＬｏｅｎｓＫ,ＶａｎＨｅｉｒｓｔｒａｅｔｅｎＬ,Ｍａｌｈｏｔｒａ-ＫｕｍａｒＳ,ｅｔａｌ．Ｏｐｔｉｍａｌｓａｍｐｌｉｎｇｓｉｔｅｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｓｐｏｓｓｉｂｌｙｃａｕｓｉｎｇｃｏｍｍｕｎｉｔｙ-ａｃｑｕｉｒｅｄｌｏｗｅｒｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｔｒａｃｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ,４７(１):２１-３１[２]ＲｏｂｉｎｓｏｎＪＬ,ＬｅｅＢＥ,ＫｏｔｈａｐａｌｌｉＳ,ｅｔａｌ．Ｕｓｅｏｆｔｈｒｏａｔｓｗａｂ㊃０２㊃ＣｈｉｎＪＥｖｉｄＢａｓｅｄＰｅｄｉａｔｒＦｅｂｕｒａｒｙ２０２０，Ｖｏｌ１５，Ｎｏ１ｏｒｓａｌｉｖａｓｐｅｃｉｍｅｎｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｖｉｒｕｓｅｓｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎ．ＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,４６(７):ｅ６１-６４[３]ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ(ＣＤＣ)．ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｒａｐｉｄｉｎｆｌｕｅｎｚａｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｔｅｓｔｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｏｖｅｌｉｎｆｌｕｅｎｚａＡ(Ｈ１Ｎ１)Ｖｉｒｕｓ-ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓ,２００９．ＭＭＷＲＭｏｒｂＭｏｒｔａｌＷｋｌｙＲｅｐ,５８(３０):８２６-８２９[４]国家卫生健康委．关于印发新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)的通知(２０２０-０２-１８)．ｈｔｔｐ:／／ｗｗｗ．ｎｈｃ．ｇｏｖ．ｃｎ／,２０２０．０２．１８[５]ＣｏｒｍａｎＶＭ,ＬａｎｄｔＯ,ＫａｉｓｅｒＭ,ｅｔａｌ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ２０１９ｎｏｖｅｌｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ(２０１９-ｎＣｏＶ)ｂｙｒｅａｌ-ｔｉｍｅＲＴ-ＰＣＲ．ＥｕｒｏＳｕｒｖｅｉｌｌ,２０２０,２５(３)．ｄｏｉ:１０．２８０７／１５６０－７９１７[６]ＷａｎｇＷＫ,ＣｈｅｎＳＹ,ＬｉｕＩＪ,ｅｔａｌ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳＡＲＳ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｉｎｔｈｒｏａｔｗａｓｈａｎｄｓａｌｉｖａｉｎｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓ．ＥｍｅｒｇＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,２００４,１０(７):１２１３-１２１９[７]ＲｏｂｉｎｓｏｎＪＬ,ＬｅｅＢＥ,ＫｏｔｈａｐａｌｌｉＳ,ｅｔａｌ．Ｕｓｅｏｆｔｈｒｏａｔｓｗａｂｏｒｓａｌｉｖａｓｐｅｃｉｍｅｎｓｆｏｒ１８１ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｖｉｒｕｓｅｓｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎ．ＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,４６(７):ｅ６１-６４[８]ＳｐｅｎｃｅｒＳ,ＴｈｏｍｐｓｏｎＭＧ,ＦｌａｎｎｅｒｙＢ,ｅｔａｌ．ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＳｐｅｃｉｍｅｎＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＩｎｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓＩｎｆｅｃｔｉｏｎｂｙＲＴ-ＰＣＲ:ＡＬｉｔｅｒａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗ．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ,５７(９),ｐｉｉ:ｅ０００２７－１９[９]ＴｅｌｌｉｅｒＲ．ＲｅｖｉｅｗｏｆａｅｒｏｓｏｌｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｏｆｉｎｆｌｕｅｎｚａＡｖｉｒｕｓ．ＥｍｅｒｇＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,２００６,１２(１１):１６５７-１６６２[１０]国家卫生健康委．新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南(第三版)．２０２０．０１．２８[１１]ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｆｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＣＯＶＩＤ-１９ＲｅｑｕｅｓｔｓｆｏｒＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＰａｎｅｌｓａｎｄＶｉｒｕｓ．ｈｔｔｐｓ:／／ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ／２０１９-ｎｃｏｖ／ｌａｂ／ｔｏｏｌ-ｖｉｒｕｓ-ｒｅｑｕｅｓｔｓ．ｈｔｍｌ[１２]复旦大学附属儿科医院．儿童新型冠状病毒感染／肺炎疑似和确诊病例快速筛查和临床实践指南．中国循证儿科杂志,１５(１):１-４[１３]黄宝兴,邓继岿,王红梅．１６９３例难治性肺炎患儿支气管肺泡灌洗液病原体培养分析．中国感染控制杂志,１４(６):３７９-３８２．（收稿日期：２０２０-０１-３１修回日期：２０２０-０２-１１）（本文编辑：张萍）㊃１２㊃中国循证儿科杂志２０２０年２月第１５卷第１期。

怎样的呼吸道标本才会给临床提供可靠的指标？

怎样的呼吸道标本才会给临床提供可靠的指标？呼吸道标本是临床细菌培养的重要组成部分，在临床中，呼吸道感染可分为上呼吸道及下呼吸道感染。

不同部位的感染病原菌差异较大，规范呼吸道标本细菌学检验标准操作规程，对其操作流程的充分了解有助于临床工作的开展，进而确保检验准确可靠。

因标本容易受到口咽部菌群的污染，致使送检标本不合格，而不合格的标本可导致错误的临床诊断与治疗。

因此，本文就怎样的呼吸道标本才会给临床提供可靠的指标做如下报道。

1.规范、正确采集呼吸道标本的原因感染性疾病诊断的金标准是病原学诊断，只有详细了解了病原学和药敏结果，才能真正做到选择正确的抗菌药物及合理用药，同时避免细菌耐药的发生。

最终可节省医疗费用，减少住院时间，降低病死率。

而病原学诊断结果的正确与否，关键在于标本质量。

标本质量直接决定检验结果的可靠性，只有前期进行及时规范的标本采集，后期患者的诊断及治疗才能得到较好的结果。

只有规范呼吸道标本细菌学检验标准操作规程，才能为临床提供可靠的指标，确保检验结果准确可靠。

1.呼吸道标本有哪些上呼吸道标本有口咽拭子、鼻咽拭子以及鼻咽吸取物等；下呼吸道标本有气管吸取液、支气管肺泡灌洗液以及痰液等。

3.呼吸道样本的正确采集方法3.1口咽拭子先用生理盐水漱口，将试子放入无菌生理盐水中湿润，瞩患者放松，采集时嘱患者头部后仰30°，发“啊”声，以暴露咽喉部，将压舌板插入口咽部压住病人舌前2/3，涤纶或藻酸钙拭子适度用力，来回擦拭双侧扁桃体，然后再擦拭咽后壁3-4次，并保留10-15秒，拭子进出口腔时需避免触及舌部、悬垂体、口腔粘膜和唾液；采样完毕后取出后置采样管，将拭子头沿标记折断，使拭子浸入至采样液中，旋紧管盖。

一般情况下，不单独选用咽拭子标本诊断上呼吸道感染，鼻咽拭子或鼻咽吸取物联合检验以提高呼吸道感染的病原检出率。

3.2鼻咽拭子嘱患者尽量保持头部后仰70°，将试子缓慢转动并插入病人鼻孔至颚部，切记不可太用力，沿鼻腔壁伸入鼻咽部直至感到一定阻力时，转动数次，停留数秒吸取分泌物，轻轻旋转取出拭子，将采样管标记部位塑料棍折断，试子浸泡至采样液中，旋紧管盖，并及时送达实验室。