戊二醛固定液的配制
多聚甲醛-戊二醛固定液说明书 - Coolaber
多聚甲醛-戊二醛固定液说明书产品编号：SL1580X保存条件：-20℃保存，一年有效。
4℃保存，一个月有效。
产品内容：产品组成SL177XX%戊二醛固定液10mL/100mL/500mL说明书1份产品简介：1.对于较大的动物要做电镜，灌注固定，选择4%多聚甲醛+（0.5-2%）戊二醛的混合固定液，这两种固定剂优缺点可以互相补充。
2.多聚甲醛与戊二醛相比，其渗透力强、固定迅速、价格低廉，它对细胞基质保存不如戊二醛，但对酶的活性保存好。
如果做免疫电镜或者电镜的细胞化学，则戊二醛浓度要低一些为好。
3.而且取材后固定的时间，方法也有讲究。
如果是个体较大的动物，也需要在具体试验中做一些处理，比如兔子，就可以只灌注头颈部。
小白鼠，数量也不多，做常规透射电镜，也可以用4%戊二醛灌注。
固定液成分选择：1、多聚甲醛+5%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。
冷却后加10ml25%戊二醛，再加15ml0.2PB,调pH备用。
此固定液中含多聚甲醛4%，戊二醛5%，属高渗液，但固定效果不错，尤其对细胞内的微管保存较好。
2、2%多聚甲醛+2%戊二醛：溶解1g多聚甲醛于25ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。
冷却后加4ml25%戊二醛，再加21ml0.2PB,调pH备用。
常规固定选用这种配方。
3、4%多聚甲醛+0.5%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。
冷却后加1ml25%戊二醛，再加24ml0.2PB,调pH备用。
推荐用作免疫电镜标本固定剂，对于抗原较强的标本，可将浓度降低到2%多聚甲醛+0.25%戊二醛。
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TEM电镜样品制作程序(新)
TEM电镜样品制作程序一、试剂1．磷酸缓冲液（Milloning p buffer）A液：2.53％NaH2PO4.2H2O水溶液41.5mlB液：2.52％NaOH水溶液8.5ml （0.3M, 50ml, pH7.3）2. 固定液1). 戊二醛（4％）：25％戊二醛原液16ml＋DDW 50ml，摇匀后加p buffer 50ml，终pH7.0~7.42).锇酸（四氧化锇）：配原液：1g＋50ml DDW 2％配固定液：2％原液/p buffer＝1/13.4. 染色液1).醋酸铀饱和乙醇溶液：醋酸铀5g,乙醇50ml2).柠檬酸铅染液：硝酸铅1.33g，柠檬酸钠1.76g，DDW 30ml二、常规操作步骤【第一天】取材取各组小白鼠♀♂各一只，处死后立即取小肠（消化管取材不应斜切，剪开管腔使之成片状，平铺，黏膜面朝上，最好将其四边固定，用生理盐水漂洗黏膜表面『注意：快，准，轻，小，冷』固定（前固定）戊二醛固定3～4h(可在戊二醛中长期保存--几周甚至1~2个月)『注意：固定液的酸碱度必须与被固定的组织的酸碱度基本保持一致，大多数动物组织酸碱度的平均值是7.4』用p buffer洗一次，共3次，后过夜【第二天】固定（后固定）向样品中加入0.2ml p buffer和0.2ml锇酸(共0.4ml,可事先在通风厨内配好)，2h后用p buffer清洗样品(在通风厨内操作)『样品可在p buffer中保存』配包埋剂(大约需1h，每加入一种试剂需搅拌15min)脱水（丙酮系列）30％，50％，70％，80％，90％（各一次，15min/次），无水丙酮（2次，10min/次）『注意：脱水要彻底；若当天不能完成浸透、包埋操作，应将样品停留在4℃，70％乙醇或丙酮中过夜；脱水动作尽量要快，特别是100％脱水剂，更要注意样品块不要在空气中停留时间过长，否则会造成样品干燥』配下一步浸透用的丙酮/树脂(1/1,1/2)浸透（丙酮－树脂）丙酮/树脂＝1/1，浸透1h（0.2ml,0.2ml）丙酮/树脂＝1/2，浸透1h（0.2ml,0.2ml+0.2ml）纯树脂，浸透（2h后即可包埋，也可隔夜再包埋）包埋树脂加满样品槽，呈凸面，标签纸放中间，样品放两边『注意：包埋剂用前不能搅拌，以免产生气泡。
最新复方戊二醛溶液
复方戊二醛溶液------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxx复方戊二醛溶液本品含戊二醛(C5H802)应为14.0％-16.0％(g/ml)，含烃铵盐以C22H40ClN计应为9.0％～10.0％(g／m1)。
[处方][制法][性状] 本品为琥珀色的澄清液体，有特臭。
[鉴别][检查] 相对密度本品的相对密度(附录33页)为1.030～1.040。
酸度取本品20.0ml，加水10ml与溴麝香草酚蓝指示液8滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液由橙黄色变为黄色，消耗氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)不得过3.0ml。
[含量测定] 戊二醛取本品适量(约相当于戊二醛0.2g)，。
精密称定，精密加6.5％三乙醇胺溶液20ml与盐酸羟胺的中性溶液(取盐酸羟胺17.5g加水75ml 溶解，加异丙醇稀释至500ml，摇匀，加0.04％溴酚蓝乙醇溶液15ml，用6.5％三乙醇胺溶液滴定至溶液显蓝绿色)25ml，摇匀，放置l小时，用硫酸滴定液(o.25mol／L)滴定至溶液显蓝绿色。
并将滴定的结果用空白试验校正。
另取本品，同时测其相对密度，将供试品量换算ml数。
每1ml硫酸滴定液(0.25mol/L)相当于25.03mgC5H802。
苯扎氯铵取本品适量(约相当于苯扎氯铵0.5g)，精密称定，置含有35ml水的250m1分液漏斗中，加0.1mol／L氢氧化钠溶液10ml与氯仿25ml，精密加入新制的5％碘化钾溶液10ml，振摇，静置使分层，水层用氯仿提取3次，每次10m1，弃去氯仿层，用水约15ml淋洗分液漏斗上部，加盐酸40ml，放冷，用碘酸钾滴定液(0.05mol／L)滴定至淡棕棕，加氯仿5ml，继续滴定并剧烈振摇至氯仿层无色，并将滴定的结果用空白试验校正。
戊二醛-银染法
戊二醛-银染法
（基于Heukeshoven和Dernick的方法，根据以下方案，用戊二醛作为敏化剂进行硝酸银染色）
1.固定
凝胶电泳后，将凝胶在125mL 固定液中固定30分钟（固定液配方：40％EtOH / 10％HAc）
2.敏化
使凝胶在125mL敏化液中反应30分钟（敏化液配方：0.125％戊二醛/0.2％硫代硫酸钠/6.8％乙酸钠溶）
3.洗涤
用125mL去离子水洗涤三次，每次5分钟
4.银染
将凝胶用125mL银染液浸渍20分钟（0.015％甲醛和0.25％硝酸银溶液）
5.洗涤
随后用125mL去离子水洗涤两次，每次1分钟
6.显色
加入125ml显色液还原银离子（显示液配方：0.008％甲醛/3％碳酸钠溶）
7.终止
完成银离子还原后，将凝胶浸入125mL 1.5％EDTA中以停止显影
8.洗涤
用去离子水洗涤。
9.保藏
将染色的凝胶储存在去离子水中或在滤纸上在真空下在65℃下干燥40分钟。
电镜材料固定方法
1、固定液固定（固定液体积是固定材料的十倍以上）
3%戊二醛in 0.1M PBS ,ph7.2，室温5-6h，后4°C保存
（取材：先整个材料放入固定液中，之后用锋利的双面刀片分割，不能撕扯材料，分割成小块后1*1mm，置于固定液中，抽气~20min，让材料沉入固定液中）
2、0.1M PBS Ph7.2 充分漂洗3-4次，20-30Min/次
3、1%锇酸固定in 0.1M PBS，4°C overnight
4、0.1M PBS Ph7.2 充分漂洗3-4次，20-30Min/次
5、乙醇系列脱水：30%-50%-70%（4°C, overnight,可以停下）
-80%-90%-95%-100%-100%（每级20-30分钟，不同材料时间不同）
注意：100%乙醇时不要吸干，防止材料干了。
用丙酮置换乙醇：
乙醇：丙酮=1：1，纯丙酮2次，每级20-30分钟
6、丙酮：树脂=2：1，1：1（可以停下了，overnight），1：2 2-3h/级
纯树脂12h，
换纯树脂12h （从进入树脂开始就要防潮！）
7、包埋
8、聚合60°C 24hr
注意：免疫电镜时不用锇酸固定，树脂换成LRWhite等水溶性树脂，固定液可以是25%戊二醛+1.25%多聚甲醛in 0.1M PBS Ph 7.2。
扫描电镜细菌制样方法
细菌样品前处理取液体或固体培养基中培养20h左右、旺盛生长的菌体。
(1)收集菌体:①液体培养基中的菌体,可取培养液8000rpm离心3~5min,弃上清,倒入2.5%戊二醛固定液;②固体培养基上的菌体,可在菌落表面滴几滴戊二醛固定液,轻刮菌落(注意不要刮下培养基)。
将菌液吸入小离心管,离心后换入新鲜戊二醛固定。
(2)固定,脱水按常规方法。
2.5%戊二醛,2~4h→磷酸缓冲液清洗3次→1%锇酸4~6h→缓冲液清洗3次→乙醇梯度脱水,30%,50%,70%,85%,95%各一次,100%乙醇2次,15~20min/次→乙酸异戊酯置换2次,20min/次(注意:每步均需离心,8000rpm,3~5min,弃上清,倒入下一种试剂,滴管来回吸几下,打散菌块)。
(3)临界点干燥: 普通定性滤纸裁成35mm×18mm的纸条,将长边35mm平均分成3份,对折成小纸包,用订书钉将一端订牢,成小口袋状。
将离心浓缩后的菌液滴入小纸包,立即用钉书器将另一端钉牢。
放入临界点干燥器样品室,进行CO2临界点干燥。
一般每次可同时处理10~20种不同菌样(注意,需用液态CO2置换2~3次)。
(4)离子溅射金:沿两端书钉剪开滤纸包,将干燥后粉末状纯菌体倒入平皿,轻摇尽量分散菌体。
碳导电胶带一面粘在1/4盖玻片上,另一面倒扣轻压在菌体粉末上,翻正后用镊子或牙签将菌体轻轻刮薄铺平。
离子溅射金后,即可进行扫描电镜观察。
细菌样品特殊制备方法；1，固体培养基中的菌体用镊子夹一小块盖玻片，轻轻放在旺盛生长的菌体上，粘附一定的细菌。
然后用双面胶将此盖玻片贴在棕色瓶瓶盖内壁，在棕色瓶内加入适量1%锇酸，盖上含有样品的瓶盖，熏蒸固定2h以上。
然后用双面胶将盖玻片粘在样品台上，喷金，进行扫描电镜观察。
2，液体培养基中的菌体取一定的培养液，8000rpm离心3~5min，弃上清液，加入2.5%戊二醛固定2h，pH 7.2磷酸盐缓冲液清洗，然后加入蒸馏水稀释，充分混合后用滴管取混合液一滴于小块盖玻片上，吸附2min，用滤纸吸去多余溶液。
电镜缓冲液、固定液、染液配方
固定液配方一、戊二醛固定液:市售戊二醛为25%or50%水溶液，一般用磷酸缓冲液或二甲砷酸盐溶液配制成所需浓度的固定液0.1mol/L 二甲砷酸钠缓冲液 A 液：二甲砷酸钠•3H 2O 4.28g加双蒸水至100ml B 液：HCL(36-38%) 1.66ml 加双蒸水至100ml按下表比例混合A 、B 液以配制0.2M 二甲砷酸钠母液（在通风橱配制），加1倍双蒸水即得0.1M 二甲砷酸钠缓冲液0.1mol/L 磷酸缓冲液 A 液：Na 2HPO 4溶液 2.84g Na 2HPO 4 / 3.161g Na 2HPO 4 •H 2O / 3.56g Na 2HPO 4 •2H2O /5.363g Na 2HPO 4 •4H2O / 7.164g Na 2HPO 4 •7H2O加双蒸水至100mlB 液：NaH 2PO 4溶液 2.40g NaH 2PO 4/ 2.76g NaH 2PO 4 •H 2O/ 3.121g NaH 2PO 4 •2H 2O 加双蒸水至100ml按下表比例混合A 、B 液以配制0.2M 磷酸缓冲液，加1倍双蒸水即得0.1M 磷酸缓冲液二、四氧化饿固定液 1、2%四氧化饿水溶液将0.5 or 1.0g 装四氧化饿安踣瓶充分洗净，放入棕色试剂瓶，在排毒柜内将安瓿瓶敲破，立刻加入双蒸水，配制成2%四氧化饿水溶液，盖上盖子，溶解1d. 2、用0.1M 磷酸缓冲液配制成四氧化饿固定液 0.1M 磷酸缓冲液 5ml2%四氧化饿水溶液 5ml 三、karnovsky 2%多聚甲醛-2.5%戊二醛固定液 1、10%多聚甲醛水溶液 多聚甲醛 2g 双蒸水 20ml 2、固定液配制0.2M 磷酸缓冲液 50ml25%戊二醛 10ml 双蒸水加至100ml 10%多聚甲醛水溶液 20ml染色液配方一、 透射电镜正染色液1、柠檬酸铅（Re ynolds’）溶液 硝酸铅 1.33g 柠檬酸三钠 1.76g 切片染色时间5-10min 双蒸水 30mlNOTICE:该溶液易与空气中CO 2作用而产生沉淀，故使用与保存时，应尽量减少与空气接触，若稍有白色沉淀即舍弃 2、醋酸双氧铀-50%饱和溶液 醋酸双氧铀 2g 50%乙醇 100ml 切片染色时间15-30min （室温），延迟时间or 提高温度可加反差 NOTICE:溶液呈鲜黄色，若变淡则表示失效。
戊二醛固定液(4%)
北京雷根生物技术有限公司
戊二醛固定液(4%)
简介：
固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
戊二醛固定液会引起蛋白质α-螺旋结构变形，不利于过氧化物酶染色，速速度快，渗透力差。
Leagene 戊二醛固定液(4%)主要由戊二醛、磷酸盐等组成，pH7.2～7.4，该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，是最常用的标准戊二醛固定液，经常用于电镜标本的固定。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 取新鲜标本，立即入戊二醛固定液(2%)中，4℃固定1～4h 。
2、 稍大标本应适当延长固定时间。
3、 送检或4℃保存。
注意事项：
1、 Leagene 戊二醛固定液(4%)有一定腐蚀性，请在通风较好的环境下小心操作， 避免吸入。
2、 组织取材的厚度不同，固定时间也不同。
常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm ，一般不超过6mm 。
对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
3、 温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但本固定液最好不要提高温度。
4、 取出新鲜组织后，应及时固定。
无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。
编号 名称 DF0152 DF0152 Storage 戊二醛固定液(4%) 100ml 500ml 4℃ 避光
使用说明书 1份。
消毒液的消毒方法和配制比例
消毒液的消毒方法和配制比例
应用20%戊二醛原液,怎样配配制1000 ml 2%戊二醛对医疗器械进行消毒?
1 计算配制1000 ml 2%戊二醛,应取20%戊二醛的毫升数:
(1000ml x 2%)/20% = 100 ml
2 取100 ml20%戊二醛,倒入1000 ml量筒内,再加水至1000 ml。
3 最后将1000 ml 2%戊二醛倒入玻璃缸内,混匀,再将需消毒的医疗器械放入缸内,浸泡30分钟。
如何使用喷雾器对传染病疫点进行消毒
1 取某一种消毒剂若干,按消毒对象配制成所需的应用液,如固体消毒剂,要过滤除去不溶解的成分,混匀,装入消毒桶内;
2 装入配制好的消毒液不应超过规定的刻度线,将盖盖好,并拧紧螺丝;
3 加压打气,筒内压力达到足够时,拧开喷杆阀门,对消毒对象进行均匀喷洒消毒,如压力不足,再关闭阀门加压后再消毒;
4 消毒后,要用清水刷洗消毒筒内残余消毒剂,擦拭清洁晾干后备用。
应用20%过氧乙酸原液,如何配置成1000mg/L的过氧乙酸5000ml对餐具进行消毒?
1 计算配置1000mg/L过氧乙酸5000ml,应取20%过氧乙酸的毫升数:
(5000ml x 1000mg / L)/200000mg / L= 25 ml
2 取20%过氧乙酸原液25 ml ,倒入5000毫升的量筒内;
3 加入4975 ml (5000 ml -25 ml )水至量筒内,使液面达到5000毫升刻度线上,再将配好的5000 ml 应用液,移到大容器内,最后将餐具放入1000 mg / L 过氧乙酸内,浸泡3分钟进行消毒。
常用试剂配方
常用试剂配方常用试剂配方1. 黏片剂铬明矾—明胶1％明胶与0.1％铬明矾（硫酸铬钾）等量混合。
50～60℃中加热，用纱布过滤。
一般载玻片预处理时涂明胶三层，自然干燥。
2. 多聚甲醛—戊二醛固定液10ml 25％戊二醛20ml 10％多聚甲醛溶液（w/v）50ml 0.2M PH7.4PBS20ml 蒸馏水3. DAB 显色液配方3，3—二胺基联苯盐酸盐（DAB） 20mgPBS 50ml30％过氧化氢 50ul用PBS溶解DAB，用前加过氧化氢混匀，避光染色4. 0.2MPBS配方 PH7.3 无钙镁Nacl 8.0gKcl 0.2gNa2HPO4 1.15g （Na2HPO4·12H2O 2.9g）KH2PO4 0.2g双蒸水 1000ml5. 0.01M PH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）先配0.1M PH7.4 PBKH2PO4 2.61gNa2HPO4·12H2O 28.94g加蒸馏水至 1000ml用时，取上液100ml,加NaCl8.5g,加蒸馏水1000ml.即为 0.01M PH7.4 PBS6. 盐酸酒精配方70％乙醇100ml盐酸1ml混匀7. 清洗液配方（玻片）重铬酸钾：120g 蒸馏水：1000ml 浓硫酸：200m先将重铬酸钾与水置塑料桶中搅拌溶化，置桶于冷水中，慢慢加入浓硫酸并不断搅拌，溶液透明即可。
此液可使用多次，至颜色变暗绿时，即失去清洁能力，不能再使用。
8. 10％中性福尔马林固定液配方 PH7.0甲醛 100mlKH2PO4 4gNa2HPO4 6.5g （Na2HPO4·12H2O 16.4g）蒸馏水 900ml9. 多聚赖氨酸多聚赖氨酸 5g双蒸水 1000ml配制方法：称取多聚赖氨酸，溶于双蒸水充分溶解，此溶液为0.5%,4℃保存，也可-20℃保存备用，多聚赖氨酸可反复冻融效果无明显影响。
工作液再稀释10-50倍，即工作浓度可为0.01-0.05%。
戊二醛固定液(1%,电镜专用)
北京雷根生物技术有限公司 戊二醛固定液(1%,电镜专用)简介：固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。
固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。
固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。
固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
戊二醛固定液会引起蛋白质α-螺旋结构变形，不利于过氧化物酶染色。
戊二醛固定液固定速度快，渗透力差。
Leagene 戊二醛固定液(1%,电镜专用)由戊二醛、磷酸盐、去离子水等组成，pH7.2～7.4，该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，经常用于电镜标本固定。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 根据实验具体要求操作。
2、 取新鲜标本，立即入戊二醛固定液4℃固定1～4h ，稍大标本应适当延长固定时间。
3、 送检或4℃保存。
注意事项：1、 Leagene 戊二醛固定液有一定腐蚀性，请在通风较好的环境下小心操作， 避免吸入。
2、 组织取材的厚度不同，固定时间也不同。
常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm ，一般不超过6mm 。
对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
3、 固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。
4、 温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但本固定液最好不要提高温度。
5、 取出新鲜组织后，应及时固定。
无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。
相关： 编号 名称 DF0161 Storage 戊二醛固定液(1%,电镜专用) 100ml RT 避光 使用说明书 1份 编号名称 DC0032Masson 三色染色液 NH0043SSC 缓冲液(20×,pH7.0) NH0053变性鲑鱼精DNA(10mg/ml) NR0001 DEPC 处理水(0.1%)。
戊二醛固定液的配制
戊二醛固定液的配制Step 1:0.2M磷酸缓冲液的配制：---------------------磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O） 2.6克磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29克双蒸馏水加至500毫升pH调至7.4Step 2:戊二醛固定液的配制：---------------------25% 戊二醛1ml双蒸馏水4ml0.2mol/L磷酸缓冲液5ml戊二醛最终浓度 2.5%pH值7.3-7.4戊二醛固定剂的配方：（a）磷酸缓冲液的配方：A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液：Na2HPO4·9H2O 17.81 克或：Na2HPO4·7H2O 26.83 克或：Na2HPO4·7H2O 35.82克加双蒸水至500毫升B 液：0.2M磷酸二氢钠贮备液NaH2PO4·H2O 13.8 克或：NaH2PO4·2H2O 15.61 克加双蒸水至600毫升使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸缓冲液。
（PH7.4）（b） 2.5﹪戊二醛固定液的配方：0.2M磷酸缓冲液50毫升25﹪戊二醛溶液10毫升加双蒸水至100毫升具体步骤如下：离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2％多聚甲醛＋2.5％戊二醛。
双醛固定对免疫电镜更加适合。
）30min，PBS漂洗两遍，1％锇酸固定1h，PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。
把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加2.5%戊二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察。
电镜生物样品前处理固定液配方
固定液配方一、戊二醛固定液:市售戊二醛为25%or50%水溶液，一般用磷酸缓冲液或二甲砷酸盐溶液配制成所需浓度的固定液0.1mol/L 二甲砷酸钠缓冲液A液：二甲砷酸钠•3H2O 4.28g加双蒸水至100mlB液：HCL(36-38%) 1.66ml 加双蒸水至100ml按下表比例混合A、B液以配制0.2M二甲砷酸钠母液（在通风橱配制），加1倍双蒸水即得0.1M二甲砷酸钠缓冲液Na2HPO4•2H2O 35.6gNa2HPO4•4H2O 53.63gNa2HPO4•7H2O 71.64g100mlB液：NaH2PO4溶液NaH2PO4 24.0g/ NaH2PO4 •H2O 27.6g/ NaH2PO4 •2H2O 31.21g 加双蒸水至100ml二、四氧化饿固定液1、2%四氧化饿水溶液将0.5 or 1.0g装四氧化饿安踣瓶充分洗净，放入棕色试剂瓶，在排毒柜5内将安踣瓶敲破，立刻加入双蒸水，配制成2%四氧化饿水溶液，盖上盖子，溶解1d.2、用0.1M磷酸缓冲液配制成四氧化饿固定液0.1M磷酸缓冲液5ml2%四氧化饿水溶液5ml三、karnovsky 2%多聚甲醛-2.5%戊二醛固定液1、10%多聚甲醛水溶液多聚甲醛2g双蒸水20ml2、固定液配制0.2M磷酸缓冲液50ml25%戊二醛10ml 双蒸水加至100ml10%多聚甲醛水溶液20ml染色液配方一、超薄切片染色液1、柠檬酸铅（Re ynolds’）溶液硝酸铅 1.33g柠檬酸三钠 1.76g切片染色时间5-10min 双蒸水30mlNOTICE:该溶液易与空气中CO2作用而产生沉淀，故使用与保存时，应尽量减少与空气接触，若稍有白色沉淀即舍弃2、醋酸双氧铀-50%饱和溶液醋酸双氧铀2g50%乙醇100ml切片染色时间15-30min（室温），延迟时间or提高温度可加反差NOTICE:溶液呈鲜黄色，若变淡则表示失效。
二、负染色液1、磷钨酸负染色液（PTA）磷钨酸1-2g双蒸水100ml2、醋酸双氧铀负染色醋酸双氧铀双蒸水3、钼酸铵负染色（AM）钼酸铵2g双蒸水。
扫描电镜细菌制样方法
细菌样品前处理取液体或固体培养基中培养20h左右、旺盛生长的菌体。
(1)收集菌体:①液体培养基中的菌体,可取培养液8000rpm离心3~5min,弃上清,倒入2.5%戊二醛固定液;②固体培养基上的菌体,可在菌落外表滴几滴戊二醛固定液,轻刮菌落(注意不要刮下培养基)。
将菌液吸入小离心管,离心后换入新鲜戊二醛固定。
(2)固定,脱水按常规方法。
2.5%戊二醛,2~4h→磷酸缓冲液清洗3次→1%锇酸4~6h→缓冲液清洗3次→乙醇梯度脱水,30%,50%,70%,85%,95%各一次,100%乙醇2次,15~20min/次→乙酸异戊酯置换2次,20min/次(注意:每步均需离心,8000rpm,3~5min,弃上清,倒入下一种试剂,滴管来回吸几下,打散菌块)。
(3)临界点枯燥: 普通定性滤纸裁成35mm×18mm的纸条,将长边35mm平均分成3份,对折成小纸包,用订书钉将一端订牢,成小口袋状。
将离心浓缩后的菌液滴入小纸包,立即用钉书器将另一端钉牢。
放入临界点枯燥器样品室,进展CO2临界点枯燥。
一般每次可同时处理10~20种不同菌样(注意,需用液态CO2置换2~3次)。
(4)离子溅射金:沿两端书钉剪开滤纸包,将枯燥后粉末状纯菌体倒入平皿,轻摇尽量分散菌体。
碳导电胶带一面粘在1/4盖玻片上,另一面倒扣轻压在菌体粉末上,翻正后用镊子或牙签将菌体轻轻刮薄铺平。
离子溅射金后,即可进展扫描电镜观察。
细菌样品特殊制备方法；1，固体培养基中的菌体用镊子夹一小块盖玻片，轻轻放在旺盛生长的菌体上，粘附一定的细菌。
然后用双面胶将此盖玻片贴在棕色瓶瓶盖内壁，在棕色瓶内参加适量1%锇酸，盖上含有样品的瓶盖，熏蒸固定2h以上。
然后用双面胶将盖玻片粘在样品台上，喷金，进展扫描电镜观察。
2，液体培养基中的菌体取一定的培养液，8000rpm离心3~5min，弃上清液，参加2.5%戊二醛固定2h，pH 7.2磷酸盐缓冲液清洗，然后参加蒸馏水稀释，充分混合后用滴管取混合液一滴于小块盖玻片上，吸附2min，用滤纸吸去多余溶液。
戊二醛消毒液浓度配比及使用方法
戊二醛消毒液浓度配比及使用方法Last revised by LE LE in 2021戊二醛消毒液浓度配比及使用方法有效成分及含量这里主要讲市面上用的比较广泛的环凯牌戊二醛消毒液，环凯牌戊二醛消毒液是以戊二醛为主要有效成分的消毒液，戊二醛含量为20g/L～22g/L。
性能环凯牌戊二醛消毒液戊二醛与强化剂的复配物，无色透明液体。
可杀灭细菌繁殖体、真菌、分枝杆菌和细菌芽孢，能灭活病毒。
戊二醛消毒液属高水平消毒剂，使用安全，经济实用,对物品无腐蚀、无损坏作用。
使用范围适用于各种医疗器械的消毒与灭菌。
戊二醛消毒液使用方法1、使用前加入戊二醛消毒液附带的pH调节剂(碳酸氢钠)，充分搅匀溶解;如用于金属器械，再加入附带的缓蚀剂(亚硝酸钠)溶解均匀。
2、消毒方法：用原液浸泡待消毒物品1小时。
3、灭菌方法：用原液浸泡待灭菌物品10小时。
4、消毒灭菌后的医疗器械须用无菌蒸馏水冲净残留的消毒剂后，方可使用。
戊二醛消毒液使用注意事项1、外用消毒液，不得口服。
置于儿童不易触及处。
2、戊二醛对皮肤和黏膜有刺激性，配制使用时应注意个人防护，戴口罩、防护手套和眼镜，避免接触皮肤和眼睛，如不慎接触，应立即用清水连续冲洗，必要时就医。
在通风良好处使用。
3、加入pH调节剂的消毒液可连续使用14天。
4、使用过程中如消毒液颜色变为淡黄色不影响消毒效果，但使用时应该用戊二醛浓度测试卡监测戊二醛浓度，浓度如低于20g/L则不再使用。
5、污染的器械应先用清水冲净沥干，然后再放入中浸泡，新手术器械应事先除去油污及保护膜，洗干净后再放入消毒液中浸泡，使用时容器应加盖，浸泡后须用无菌水冲洗干净再使用。
6、对醛过敏者禁用。
7、密封、避光，置于阴凉、通风处保存。
8、有效期24个月。
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戊二醛固定液的配制 The final edition was revised on December 14th, 2020.
Step 1:
0.2M磷酸缓冲液的配制：
---------------------
磷酸二氢钠（） 2.6克
磷酸氢二钠29克
双蒸馏水加至500毫升pH调至
Step 2:
戊二醛固定液的配制：
---------------------
25% 戊二醛1ml
双蒸馏水4ml
L磷酸缓冲液5ml
戊二醛最终浓度%
pH值
戊二醛固定剂的配方：
（a）磷酸缓冲液的配方：
A液：磷酸氢二钠贮备液：
Na2HPO4·9H2O 克
或：Na2HPO4·7H2O 克
或：Na2HPO4·7H2O 克
加双蒸水至 500毫升
B 液：磷酸二氢钠贮备液
NaH2PO4·H2O 克
或：NaH2PO4·2H2O 克
加双蒸水至 600毫升
使用时将A液毫升和B液毫升混合成磷酸缓冲液。
（）（b）﹪戊二醛固定液的配方：
磷酸缓冲液 50毫升
25﹪戊二醛溶液 10毫升
加双蒸水至 100毫升
具体步骤如下：
离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2％多聚甲醛＋％戊二醛。
双醛固定对免疫电镜更加适合。
）30min，PBS漂洗两遍，1％锇酸固定1h，PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。
把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加%戊二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察。