戊二醛固定液的配制

戊二醛固定液的配制 The final edition was revised on December 14th, 2020.

Step 1:

0.2M磷酸缓冲液的配制：

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磷酸二氢钠（） 2.6克

磷酸氢二钠29克

双蒸馏水加至500毫升pH调至

Step 2:

戊二醛固定液的配制：

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25% 戊二醛1ml

双蒸馏水4ml

L磷酸缓冲液5ml

戊二醛最终浓度%

pH值

戊二醛固定剂的配方：

（a）磷酸缓冲液的配方：

A液：磷酸氢二钠贮备液：

Na2HPO4·9H2O 克

或：Na2HPO4·7H2O 克

或：Na2HPO4·7H2O 克

加双蒸水至 500毫升

B 液：磷酸二氢钠贮备液

NaH2PO4·H2O 克

或：NaH2PO4·2H2O 克

加双蒸水至 600毫升

使用时将A液毫升和B液毫升混合成磷酸缓冲液。（）（b）﹪戊二醛固定液的配方：

磷酸缓冲液 50毫升

25﹪戊二醛溶液 10毫升

加双蒸水至 100毫升

具体步骤如下：

离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2％多聚甲醛＋％戊二醛。双醛固定对免疫电镜更加适合。）30min，PBS漂洗两遍，1％锇酸固定1h，PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。

把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加%戊二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察