酿酒酵母表面展示表达系统及应用

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二、两种系统Байду номын сангаас
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酿酒酵母细胞壁主要由外层的甘露糖蛋白和内层的葡
聚糖骨架组成，两者通过共价健相连。外层甘露糖蛋白有
两种类型：
• 一种是通过非共价健与酵母细胞壁松散相连并能被ＳＤＳ 提取出来的低分子量蛋白；
• 一种是必须被葡聚糖酶酶解细胞壁的β-１，3-和β-１，６葡聚糖层后才能被ＳＤＳ抽提的高分子量蛋白，包括凝集 素、絮凝素、Sed1p、Cwp1p、 Cwp 2p和Tip1p、Tir1p 、Srp1p等。后者的结构中大多都含有GPI锚定区域
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凝集素展示表达系统
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凝集素展示表达系统
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凝集素展示表达系统
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絮凝素展示表达系统
絮凝素Flo1p 是一种新兴的展示系统,它是酿酒酵母细 胞表面类似凝集素的细胞壁蛋白。 • 目前，已经形成了两种类型的絮凝素展示系统 ： • 一是GPI 系统 ；根据目的蛋白的特性和实验目的确定截去 Flo1p 肽段的长度,然后,目的蛋白的C 端融合到锚定序列 上。 • 二是利用Flo1p 的絮凝结构域的黏附能力创建一个表面展 示系统。
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问题和展望
优点 1、可克隆较大外源蛋白 2、对表达的外源蛋白质进行有效的折叠、糖基化和形成二硫键,并与葡
聚糖共价结合，耐SDS 抽提 3、酵母生产快,容易培养，展示蛋白能稳定地在子代细胞中表达 4、表达的蛋白可用荧光激活细胞分选仪(FACS) 进行灵敏而方便地检测
和筛选 缺点： 1、天然活性不够，表达的蛋白可能不完整 2、表达量也不够,而且酒精往往会抑制生长 3、多拷贝载体不稳定，整合载体则拷贝数低，表达的蛋白量少
• 其中分别由AGα1、AGa1／AGa2和Flo1表达异源蛋白的 凝集素和絮凝素酵母细胞展示表达系统应用较多。
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凝集素展示表达系统
α凝集素和ａ凝集素是酵母细胞壁上的两种甘露糖 蛋白，它们在酿酒酵母的交配型α（ＭＡＴα ）和 交配型ａ（ＭＡＴａ）单倍体细胞之间介导细胞 与细胞的性粘附，使细胞融合形成双倍体 。
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GPI 系统
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絮凝结构域系统
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应用
近几年来，酿酒酵母细胞表面展示表达系统迅速发 展并在多个领域获得应用，展现出广阔的发展前景。 1、作为生物催化剂展示表达各种酶蛋白：
淀粉分解酶、纤维素分解酶、脂酶 2、环境治理中展示表达金属蛋白 3、蛋白质分子的相互作用及组合蛋白库的构建 4、可作为生物传感器的荧光蛋白的展示表达 5、免疫学中的应用
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酿酒酵母表面展示表达系统及应 用
报告人：刘顺
2010.11.10
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主要内容 1 概念
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两种系统
3 应用
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优缺点
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一、概念
酿酒酵母表面展示表达系统： 一种固定化表达异源蛋白质的真核展示系统，
即把异源靶蛋白基因序列与特定的载体基因序列融 合后导入酵母细胞，利用酿酒酵母细胞内蛋白转运 到膜表面的机制（糖基磷脂酰肌醇，GPI锚定）， 使靶蛋白表达并定位于酵母细胞表面，之后用葡聚 糖酶抽提细胞壁目的蛋白。