猪瘟简要疫苗介绍
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猪瘟疫苗简要介绍
目录
1 2 猪瘟概述 猪瘟疫苗概述
3 猪场猪瘟疫苗与疫病发生情况调查
1 猪瘟概述
猪瘟
• 猪瘟（Hog Cholera，HC或Classical Swine Fever，CSF）是由猪瘟病毒（HCV或CSFV）引 起的一种高度接触性热性传染病。
以出血和发热为主要特征，并引起妊娠母猪流 产、胎儿畸变、慢性营养性消耗、淋巴细胞和血 小板减少等免疫系统受损、继发或并发细菌或其 他病毒感染等临床表现，呈急性或慢性经过，是 一种对猪危害性极大的传染病，被国际兽疫局 (OIE)列为必须上报的疾病。
是对猪瘟兔化弱毒进行改造,使其缺失或替换某一段基因,而其免疫 原性不改变,缺失或替换的基因所表达的蛋白则可作为诊断抗原,从而 达到疫苗接种猪和自然感染猪相区别目前所研究的猪瘟C 株突变株标 记疫苗多是对猪瘟兔化弱毒进行E2 或E0 基因的部分缺失、全缺失或 替换。
• 猪瘟C株突变株标记疫苗 •
口服疫苗
• 病原和抗体诊断
•
防制措施
• 1、被宣布为疫区的，严禁输出和调入猪只，严格 执行自繁自养原则。 • 2、立即淘汰和处理病猪和可疑病猪， 深埋或无 害处理。 • 3、应加强猪场的兽医监督， 舍内定期大消毒。 • 4、做好预防接种工作。
病猪大部分背部毛根渗血、病猪聚 堆、精神沉郁、不食。
精神沉郁，眼脸微肿发青
病毒活载体疫苗
• 原理： • 将外源目的基因用重组DNA 技术克隆到活的载体病毒中制备的一种疫 苗, 可直接用这种疫苗经多种途径免疫动物。目前研究最多的是痘病毒。 其他作为候选病毒载体还有腺病毒、 乳多空病毒、 口疮病毒、 禽痘病 毒、 伪狂犬病毒等。 痘苗病毒拥有广泛的宿主范围, 毒性低, 是较早作 为生产基因重组疫苗的载体之一。 研究进展： 伪狂犬病毒是另一个重要的活病毒载体, 外源基因可稳定地插入其DNA。 已证实将CSFV 的E2 基因插入伪狂犬的gX 基因位点, 既不会改变伪狂犬 病毒的细胞或宿主嗜性, 也不会使伪狂犬病毒的毒力发生变化。
• •
•
腺病毒是另一个用得较多活病毒载体。Hammond等 2000 年构建了CSFV W eyb r idge 株 gp 55 (E2)基因重组腺病毒( rPAV ) , 免疫猪能抵抗 强毒攻击, 且攻毒后无任何临床症状, 剖检无任何病理变化[18 ]。
亚单位疫苗
• 原理： • 将编码某种特定蛋白质的基因组与适当质粒或病毒载 体重组后导入受体(细菌、酵母或动物细胞) , 使其在受体 中高效表达, 提取所表达的特定多肽, 加佐剂即制成亚单位 苗。 • E2 蛋白是猪瘟病毒主要保护性抗原能诱导机体产生中 和抗体, 保护机体免受强毒攻击。 • 特点： • E2亚单位疫苗具有良好的应用价值，应用E2,E0亚单位 疫苗免疫猪,可区别疫苗接种猪与强毒感染猪所诱导的抗 体,这对于检测免疫猪群中是否有感染CSFV强毒,以及早期 诊断CSFV野毒感染具有十分重要的意义.
传统疫苗
• • • • • • • • • • • 优点： 1、免疫原性优良。 2、免疫谱广。 3、安全高效。 4、遗传稳定性良好。 缺点： 1、弱毒疫苗干扰猪瘟血清学诊断,使人们难以区别猪瘟感染猪和免疫猪。 2、弱毒活苗还有可能与野毒重组或进行自然突变而造成毒力返强。 3、弱毒活苗可通过母猪胎盘感染造成胎猪死亡、弱仔、先天性感染仔猪,导致 出现免疫耐受现象。 使用现状及展望： 欧盟己禁止使用猪瘟弱毒疫苗,而采用扑杀感染猪来控制和消灭猪瘟,采用扑杀 政策需要大量的人力、物力和巨额资金投入,但发展中国家是难以承受的,因此开 发猪瘟的新型疫苗显得尤为迫切。近年来随着基因工程技术的迅速发展为猪瘟 新型疫苗的研究和开发提供了新的工具"
四肢无力，走路摇晃
体表出血、淤血呈紫红色,体温40.5—41.8度
好喝脏水。食欲费绝
肾脏颜色变淡，表面有大量点状出血
皮下出血点
精神沉郁、消瘦、贫血
肾脏桑葚状，有出血点
猪瘟诊断口诀
• • • • • • • • • • • • • 猪瘟得病发高烧 粪便好象算盘子 体温最高四十二 结膜发炎颜色红 初期便秘呈球状 后期腹泻有恶臭 四肢内侧和腹部 指压斑点不褪色 急性两天就死亡 青链霉素都无效 必须注射猪瘟苗 买头仔猪不容易 家家户户都要防 站立不稳拱着腰 爱喝污水钻褥草 抽搐痉挛地上倒 流出脓液上下粘 黑红粘液和血便 公猪尿液排不完 大小不一红色点 爱喝脏水不饮食 慢性两月也是完 磺胺类药也白板 防疫才能得安全 不搞防疫不划算 错过良机后悔晚
2 猪瘟疫苗概述
猪瘟疫苗
• 传统疫苗 灭活疫苗、弱毒疫苗 • 新型疫苗
病毒活载体疫苗、亚单位疫苗、标记疫苗、口 服疫苗、基因疫苗、猪瘟合成肽苗
传统疫苗
• 传统的猪瘟疫苗包括：猪瘟灭活疫苗和猪瘟弱毒疫苗 • 猪瘟灭活疫苗： • 猪瘟灭活疫苗是二十世纪四五十年代曾经使用过的 传统疫苗，当时对控制猪瘟的流行曾起到一定的积极 作用，但其免疫效力低，保护期短，激发机体产生免 疫力慢。 • 猪瘟弱毒疫苗： • 我国猪瘟兔化弱毒疫苗的生产由兔脾淋巴疫苗、全乳 兔疫苗逐步过渡到用组织培养生产的细胞疫苗，为避 免猪体自身对疫苗质量产生影响，生产上一般使用异 源细胞，如牛睾丸、羊睾丸等原代细胞增殖猪瘟 C 株 疫苗。
• 欧洲国家为消除野猪传播CSFV的危险,提出用口服疫苗 对野猪进行免疫,Chenut G等研究了用C株疫苗毒经口免疫的 效果及可行性,结果表明,C株疫苗毒安全性高,对野兔、绵羊 等多种动物是安全的,用于野猪免疫是可行的。 • Koenig等利用BVDV CP7基因与猪瘟弱毒株E2基因联合制 备口服疫苗,结果表明,所有试验猪在免疫21天后,均可获得保 护.Kaden等人利用C株制备猪瘟口服疫苗,经本动物试验,结果 表明,所有试验猪在免疫后10d,均可获得保护,免疫保护期长 达6~10个月之久. • Soos报道以C株在分娩前167~217d口服免疫母猪,结果所 有3周龄及80% 6周龄仔猪中和抗体滴度为1:40,25% 10周龄仔 猪中和抗体滴度达到1:20,所有仔猪ELISA抗体检测均为阳性 。
基因疫苗
•
• •
• • • • •
DNA疫苗技术是近年来发展起来的一种新型疫苗研制技 术. 原理： 将编码某种目的抗原蛋白的基因置于真核表达元件的控 制之下,并将其直接导入动物机体内,通过宿主细胞的转录 系统合成抗原蛋白,从而诱导宿主产生对该抗原蛋白的免 疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的.这种能刺激动物机 体产生免疫应答的构建物,称为基因疫苗(核酸疫苗,裸DNA 疫苗) 基因疫苗在安全性上存在的问题 1、DNA抗体形成 2、外来抗原持续表达带来的副作用 3、导致宿主细胞恶性转化的可能性 4、源自文库疫耐受
•
流行病学
• 1、传染源 • 病猪和带毒猪。 • 2、传播途径 • 常随病猪粪尿和口、鼻、眼分泌物将病毒排出体外, 污染 栏圈、饲料、饮水和用具。主要经消化道, 其次是呼吸道, 也可以经眼结膜和受伤皮肤而感染。 • 3、易感动物 • 猪是唯一的自然宿主, 任何年龄、品种、性别的猪和野猪 均可发病。 • 4、流行特点 • 本病初次感染易感猪群时, 往往成急性爆发。以后逐渐出 现亚急性及少数慢性病例, 病的后期常继发感染猪霍乱沙门 氏杆菌和猪巴氏杆菌而并发副伤寒和猪肺疫。
标记疫苗
• 主要有：猪瘟亚单位标记疫苗和猪瘟C株突变株标记疫苗 • 猪瘟亚单位标记疫苗
•
实际上是猪瘟病毒E2、E2 B/C区或E2 A区亚单位疫苗,与亚单位疫 苗不同之处在于同时建立了相应的区别疫苗接种猪和自然感染猪的诊 断方法,目前所建立的诊断方法多是以猪瘟病毒E0基因表达蛋白为抗 原,结果疫苗接种猪不会产生针对E0的抗体,而自然感染猪则产生针对 E0的抗体,从而达到区别诊断的目的.
猪瘟合成肽苗
• 原理： • 利用重组DNA技术根据病毒基因组的核苷 酸序列,可推导出病毒蛋白质的氨基酸序列, 从而可用人工合成方法制备病毒主要抗原 相应的寡肽,制备合成肽苗。
• 主要症状：
•
病原
• 猪瘟病毒 (Hogcholera virus, HCV) 属于黄病 毒科 ( Flavividae) 瘟病毒属 ( Pestivirus) , 是RNA 病毒。病毒粒子呈圆形球状, 直径35~ 50nm, 二十 面体对称衣壳, 有囊膜。 目前认为猪瘟病毒只有一个血清型, 但病毒的 毒力差异很大。HCV 不同毒株间存在显著抗原差 异, 根据对单抗的反应可将HCV分几个抗原群, 未 发现抗原群和毒力之间的关系。HCV与牛腹泻黏 膜病病毒 (BVDV) 有共同抗原, 在中和实验和免疫 扩散中出现交叉效应。
诊断方法
• 临床诊断 • 根据临床症状、特征性病理变化,可以建立猪瘟的初步诊断, 但应与猪丹毒、猪副伤寒、猪肺疫、猪弓形体和链球菌病等 进行鉴别。
• 实验室诊断
•
猪瘟常规试验室诊断方法有兔体交互免疫试验，间接血凝 试验，荧光抗体试验，酶联免疫吸附试验和反转录聚合酶链 式反应等。
病原分离和回归试验，石蜡切片、冰冻切片和直接组织触 片，兔体交叉免疫试验，新城疫病毒强化试验，SPA协同凝 集及凝集抑制试验，免疫琼扩试验，微量炭凝结试验，酶联 吸附免疫试验，RT-PCR法，微量蚀斑减数试验等。
猪瘟脾淋疫苗
–抗原性好——为普通细胞苗的5倍 –抗原含量高——与国际标准接轨 –低过敏（组织成份单纯）——过敏源含量极低 –非特异性免疫增强——数十种淋巴细胞免疫因子协同作用 –无牛病毒性腹泻病毒污染风险，接种猪群安全 –免疫猪群抗体水平高，抗体滴度均匀
• 缺点：生产成本高 • 使用：
–猪瘟的加强免疫、猪瘟的紧急免疫接种 –控制慢性猪瘟、非典型猪瘟、温和型猪瘟有特效
目录
1 2 猪瘟概述 猪瘟疫苗概述
3 猪场猪瘟疫苗与疫病发生情况调查
1 猪瘟概述
猪瘟
• 猪瘟（Hog Cholera，HC或Classical Swine Fever，CSF）是由猪瘟病毒（HCV或CSFV）引 起的一种高度接触性热性传染病。
以出血和发热为主要特征，并引起妊娠母猪流 产、胎儿畸变、慢性营养性消耗、淋巴细胞和血 小板减少等免疫系统受损、继发或并发细菌或其 他病毒感染等临床表现，呈急性或慢性经过，是 一种对猪危害性极大的传染病，被国际兽疫局 (OIE)列为必须上报的疾病。
是对猪瘟兔化弱毒进行改造,使其缺失或替换某一段基因,而其免疫 原性不改变,缺失或替换的基因所表达的蛋白则可作为诊断抗原,从而 达到疫苗接种猪和自然感染猪相区别目前所研究的猪瘟C 株突变株标 记疫苗多是对猪瘟兔化弱毒进行E2 或E0 基因的部分缺失、全缺失或 替换。
• 猪瘟C株突变株标记疫苗 •
口服疫苗
• 病原和抗体诊断
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防制措施
• 1、被宣布为疫区的，严禁输出和调入猪只，严格 执行自繁自养原则。 • 2、立即淘汰和处理病猪和可疑病猪， 深埋或无 害处理。 • 3、应加强猪场的兽医监督， 舍内定期大消毒。 • 4、做好预防接种工作。
病猪大部分背部毛根渗血、病猪聚 堆、精神沉郁、不食。
精神沉郁，眼脸微肿发青
病毒活载体疫苗
• 原理： • 将外源目的基因用重组DNA 技术克隆到活的载体病毒中制备的一种疫 苗, 可直接用这种疫苗经多种途径免疫动物。目前研究最多的是痘病毒。 其他作为候选病毒载体还有腺病毒、 乳多空病毒、 口疮病毒、 禽痘病 毒、 伪狂犬病毒等。 痘苗病毒拥有广泛的宿主范围, 毒性低, 是较早作 为生产基因重组疫苗的载体之一。 研究进展： 伪狂犬病毒是另一个重要的活病毒载体, 外源基因可稳定地插入其DNA。 已证实将CSFV 的E2 基因插入伪狂犬的gX 基因位点, 既不会改变伪狂犬 病毒的细胞或宿主嗜性, 也不会使伪狂犬病毒的毒力发生变化。
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腺病毒是另一个用得较多活病毒载体。Hammond等 2000 年构建了CSFV W eyb r idge 株 gp 55 (E2)基因重组腺病毒( rPAV ) , 免疫猪能抵抗 强毒攻击, 且攻毒后无任何临床症状, 剖检无任何病理变化[18 ]。
亚单位疫苗
• 原理： • 将编码某种特定蛋白质的基因组与适当质粒或病毒载 体重组后导入受体(细菌、酵母或动物细胞) , 使其在受体 中高效表达, 提取所表达的特定多肽, 加佐剂即制成亚单位 苗。 • E2 蛋白是猪瘟病毒主要保护性抗原能诱导机体产生中 和抗体, 保护机体免受强毒攻击。 • 特点： • E2亚单位疫苗具有良好的应用价值，应用E2,E0亚单位 疫苗免疫猪,可区别疫苗接种猪与强毒感染猪所诱导的抗 体,这对于检测免疫猪群中是否有感染CSFV强毒,以及早期 诊断CSFV野毒感染具有十分重要的意义.
传统疫苗
• • • • • • • • • • • 优点： 1、免疫原性优良。 2、免疫谱广。 3、安全高效。 4、遗传稳定性良好。 缺点： 1、弱毒疫苗干扰猪瘟血清学诊断,使人们难以区别猪瘟感染猪和免疫猪。 2、弱毒活苗还有可能与野毒重组或进行自然突变而造成毒力返强。 3、弱毒活苗可通过母猪胎盘感染造成胎猪死亡、弱仔、先天性感染仔猪,导致 出现免疫耐受现象。 使用现状及展望： 欧盟己禁止使用猪瘟弱毒疫苗,而采用扑杀感染猪来控制和消灭猪瘟,采用扑杀 政策需要大量的人力、物力和巨额资金投入,但发展中国家是难以承受的,因此开 发猪瘟的新型疫苗显得尤为迫切。近年来随着基因工程技术的迅速发展为猪瘟 新型疫苗的研究和开发提供了新的工具"
四肢无力，走路摇晃
体表出血、淤血呈紫红色,体温40.5—41.8度
好喝脏水。食欲费绝
肾脏颜色变淡，表面有大量点状出血
皮下出血点
精神沉郁、消瘦、贫血
肾脏桑葚状，有出血点
猪瘟诊断口诀
• • • • • • • • • • • • • 猪瘟得病发高烧 粪便好象算盘子 体温最高四十二 结膜发炎颜色红 初期便秘呈球状 后期腹泻有恶臭 四肢内侧和腹部 指压斑点不褪色 急性两天就死亡 青链霉素都无效 必须注射猪瘟苗 买头仔猪不容易 家家户户都要防 站立不稳拱着腰 爱喝污水钻褥草 抽搐痉挛地上倒 流出脓液上下粘 黑红粘液和血便 公猪尿液排不完 大小不一红色点 爱喝脏水不饮食 慢性两月也是完 磺胺类药也白板 防疫才能得安全 不搞防疫不划算 错过良机后悔晚
2 猪瘟疫苗概述
猪瘟疫苗
• 传统疫苗 灭活疫苗、弱毒疫苗 • 新型疫苗
病毒活载体疫苗、亚单位疫苗、标记疫苗、口 服疫苗、基因疫苗、猪瘟合成肽苗
传统疫苗
• 传统的猪瘟疫苗包括：猪瘟灭活疫苗和猪瘟弱毒疫苗 • 猪瘟灭活疫苗： • 猪瘟灭活疫苗是二十世纪四五十年代曾经使用过的 传统疫苗，当时对控制猪瘟的流行曾起到一定的积极 作用，但其免疫效力低，保护期短，激发机体产生免 疫力慢。 • 猪瘟弱毒疫苗： • 我国猪瘟兔化弱毒疫苗的生产由兔脾淋巴疫苗、全乳 兔疫苗逐步过渡到用组织培养生产的细胞疫苗，为避 免猪体自身对疫苗质量产生影响，生产上一般使用异 源细胞，如牛睾丸、羊睾丸等原代细胞增殖猪瘟 C 株 疫苗。
• 欧洲国家为消除野猪传播CSFV的危险,提出用口服疫苗 对野猪进行免疫,Chenut G等研究了用C株疫苗毒经口免疫的 效果及可行性,结果表明,C株疫苗毒安全性高,对野兔、绵羊 等多种动物是安全的,用于野猪免疫是可行的。 • Koenig等利用BVDV CP7基因与猪瘟弱毒株E2基因联合制 备口服疫苗,结果表明,所有试验猪在免疫21天后,均可获得保 护.Kaden等人利用C株制备猪瘟口服疫苗,经本动物试验,结果 表明,所有试验猪在免疫后10d,均可获得保护,免疫保护期长 达6~10个月之久. • Soos报道以C株在分娩前167~217d口服免疫母猪,结果所 有3周龄及80% 6周龄仔猪中和抗体滴度为1:40,25% 10周龄仔 猪中和抗体滴度达到1:20,所有仔猪ELISA抗体检测均为阳性 。
基因疫苗
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DNA疫苗技术是近年来发展起来的一种新型疫苗研制技 术. 原理： 将编码某种目的抗原蛋白的基因置于真核表达元件的控 制之下,并将其直接导入动物机体内,通过宿主细胞的转录 系统合成抗原蛋白,从而诱导宿主产生对该抗原蛋白的免 疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的.这种能刺激动物机 体产生免疫应答的构建物,称为基因疫苗(核酸疫苗,裸DNA 疫苗) 基因疫苗在安全性上存在的问题 1、DNA抗体形成 2、外来抗原持续表达带来的副作用 3、导致宿主细胞恶性转化的可能性 4、源自文库疫耐受
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流行病学
• 1、传染源 • 病猪和带毒猪。 • 2、传播途径 • 常随病猪粪尿和口、鼻、眼分泌物将病毒排出体外, 污染 栏圈、饲料、饮水和用具。主要经消化道, 其次是呼吸道, 也可以经眼结膜和受伤皮肤而感染。 • 3、易感动物 • 猪是唯一的自然宿主, 任何年龄、品种、性别的猪和野猪 均可发病。 • 4、流行特点 • 本病初次感染易感猪群时, 往往成急性爆发。以后逐渐出 现亚急性及少数慢性病例, 病的后期常继发感染猪霍乱沙门 氏杆菌和猪巴氏杆菌而并发副伤寒和猪肺疫。
标记疫苗
• 主要有：猪瘟亚单位标记疫苗和猪瘟C株突变株标记疫苗 • 猪瘟亚单位标记疫苗
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实际上是猪瘟病毒E2、E2 B/C区或E2 A区亚单位疫苗,与亚单位疫 苗不同之处在于同时建立了相应的区别疫苗接种猪和自然感染猪的诊 断方法,目前所建立的诊断方法多是以猪瘟病毒E0基因表达蛋白为抗 原,结果疫苗接种猪不会产生针对E0的抗体,而自然感染猪则产生针对 E0的抗体,从而达到区别诊断的目的.
猪瘟合成肽苗
• 原理： • 利用重组DNA技术根据病毒基因组的核苷 酸序列,可推导出病毒蛋白质的氨基酸序列, 从而可用人工合成方法制备病毒主要抗原 相应的寡肽,制备合成肽苗。
• 主要症状：
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病原
• 猪瘟病毒 (Hogcholera virus, HCV) 属于黄病 毒科 ( Flavividae) 瘟病毒属 ( Pestivirus) , 是RNA 病毒。病毒粒子呈圆形球状, 直径35~ 50nm, 二十 面体对称衣壳, 有囊膜。 目前认为猪瘟病毒只有一个血清型, 但病毒的 毒力差异很大。HCV 不同毒株间存在显著抗原差 异, 根据对单抗的反应可将HCV分几个抗原群, 未 发现抗原群和毒力之间的关系。HCV与牛腹泻黏 膜病病毒 (BVDV) 有共同抗原, 在中和实验和免疫 扩散中出现交叉效应。
诊断方法
• 临床诊断 • 根据临床症状、特征性病理变化,可以建立猪瘟的初步诊断, 但应与猪丹毒、猪副伤寒、猪肺疫、猪弓形体和链球菌病等 进行鉴别。
• 实验室诊断
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猪瘟常规试验室诊断方法有兔体交互免疫试验，间接血凝 试验，荧光抗体试验，酶联免疫吸附试验和反转录聚合酶链 式反应等。
病原分离和回归试验，石蜡切片、冰冻切片和直接组织触 片，兔体交叉免疫试验，新城疫病毒强化试验，SPA协同凝 集及凝集抑制试验，免疫琼扩试验，微量炭凝结试验，酶联 吸附免疫试验，RT-PCR法，微量蚀斑减数试验等。
猪瘟脾淋疫苗
–抗原性好——为普通细胞苗的5倍 –抗原含量高——与国际标准接轨 –低过敏（组织成份单纯）——过敏源含量极低 –非特异性免疫增强——数十种淋巴细胞免疫因子协同作用 –无牛病毒性腹泻病毒污染风险，接种猪群安全 –免疫猪群抗体水平高，抗体滴度均匀
• 缺点：生产成本高 • 使用：
–猪瘟的加强免疫、猪瘟的紧急免疫接种 –控制慢性猪瘟、非典型猪瘟、温和型猪瘟有特效