实验十一 人类X染色质的观察
人类X-染色质的观察
实验材料与药品
材料：女性口腔颊部粘膜细胞（ 材料：女性口腔颊部粘膜细胞（用牙 签刮取） 签刮取） 试剂：,1NHcl,2％硫堇 试剂： ％
实验步骤
取材
牙签刮取口腔粘膜 细胞， 细胞，涂于洁净 的载玻片， 的载玻片，凉干 或烘干（ ℃ 或烘干（40℃）
解离
加入1NHCl水解 加入 水解 10min(37-40℃) ℃
漂洗
流水淋洗、 流水淋洗、凉干
漂洗
染色
2％硫堇染色 ％ 15min（室温） （室温）
观察
流水淋洗、 流水淋洗、烘干 或自然干燥
作业
• 绘制粘膜细胞、指出X-小体 绘制粘膜细胞、指出 小体
人类X-染色质的观察 人类 染色质的观察
•
实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验步骤 作业
•
•
•
•
实验目的
初步掌握观察和鉴别X-染色质的简 初步掌握观察和鉴别 染色质的简 易方法，识别其形态特征和所在部位。 易方法，识别其形态特征和所在部位。
•
实验原理
• 人类正常染色体组成： 人类正常染色体组成：男性为 22AA+XY;女性为 女性为22AA+XX性染色体。女 性染色体。 女性为 性染色体 性的两条X染色体，在间期有一条呈异固缩 性的两条 染色体， 染色体 形式，保持高度浓缩状态， 形式，保持高度浓缩状态，因此易于用适 当的染料加以显示， 当的染料加以显示，成为便于观察的性染 色质（ 小体 小体， 氏小体）。 色质（X-小体，Barr氏小体）。 氏小体
人类性染色质标本的制备和观察
实验一
X染色质
实验一
Lyon假说:
（1）正常女性体细胞内仅有1条X染色体有活性，另 一条X染色体在遗传上是失活的，在间期细胞 核中高度螺旋化而呈异固缩的X染色质。
（2）X染色体失活发生在胚胎早期。 （3）X染色体失活的随机性和恒定性。
实质：失活的X染色体 意义：X染色体的剂量补偿 X染色质的数目=X染色体数-1
1、几对基本概念 染色质——染色体 常染色质——异染色质 常染色体——性染色体
实验一
内容步骤
实验一
（一）性染色质的定义及形成机制
1、几对基本概念
性染色质（sex chromatin）：
在间期细胞核中性染色体的异染色质部分显示出 来的一种特殊结构，包括X染色质和Y染色质 。
内容步骤
（一）性染色质的定义及形成机制
隐性
紧貼脸颊 不能
无 拇指第一节向指背弯曲
较无名指短 无(单眼皮)
无 左手拇指在上
实验一
课后作业
1、绘制人类口腔黏膜上皮细胞（示X染色质） 2、自学理论书P114-115遗传平衡定律及遗传
平衡群体的判断，判定是否为平衡群体。
实验一
预习
实验二：人类染色体核型分析 （实验指导：P59；P62） 准备：非显带核型的照片染色体剪下
实验一
基因
tt Tt TT
实验一
（三）PTC尝味实验：
1、原理 人类味觉对苯硫脲（又称苯基硫代碳酰二胺，
PTC）的敏感性由一对等位基因（T、t）控制，属不 完全显性遗传。基因型不同的个体尝出含PTC溶液的 浓度有明显的差异。
6 7 10 11
①②③ ④
tt
人体X—染色质的观察
★ X-染色质的形态：
1.结构致密的浓染小体，轮廓清楚； 2.大小约1u左右，常附着于核膜边缘或靠 近内侧； 3.其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒 形及双球形；
FEMALE
MALE
三.实验材料
1.女性口腔颊部黏膜细胞
2.毛发根部细胞
四.实验仪器及试剂
仪器:
显微镜
试剂: 1M盐酸、蒸馏水、改良苯酚品红
1932年美国遗传学家H.J.Muller首先在 果蝇中发现了剂量补偿效应，并把它看作 是维持雌雄两性生物基因表达的一致所特 有的一种遗传效应。 剂量补偿效应：在XY型性别决定机制 的生物中，使性连锁基因在两种性别中有 相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。
进一步研究发现，所有哺乳类雌体细胞中都 有一条这种表现的X染色体； Lyon假说： 1961年由Lyon提出，又称单个活性X染色体假说。 1．正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条X染色体中 只有一条有活性(activation X, Xa)，另一条失活 (inactivation X, Xi)； 2．失活是随机的； 3．失活发生在胚胎发育的早期； 4．杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体。
2．毛发根部细胞的观察：
拔取一根带有毛根的头发，自基部截取 2cm左右置载片上，再加一滴1M盐酸解离5-7 分钟，待毛根后鞘软化后拔去毛干，蒸馏水 清洗3-5次，滴加一滴染液染10-15分钟，吸取 多余的染料，再覆以盖片，隔一片吸水纸用 手指轻度加压后镜检。
六.实验结果
1.观察50个女性可数细胞，同时观察50个男 性者为对照，分别计算显示X-染色质细胞 所占的百分比。 2.观察中选绘4-5个典型细胞，示明X-染色质 的形态部位。
Barr小体
Barr小体
Detection of sex chromatin by Thionin stain ×400
人X染色质的观察
实验原理 实验目的 主要仪器、材料及试剂 实验方法及实验步骤
思考题
实验原理
• 1949年，Barr和Bertram在雌猫神经细胞核 内发现了一种浓染小体，直径约1.5um，雄 猫神经细胞核中则没有这种结构。进一步 研究发现，除猫以外，其他雌性哺乳动物 及正常女性间期细胞核中均存在这种结构， 当时称之为Bar小体，又叫X染色质(X chromati)或X小体(X body)。
Lyon剂量补偿学说认为:女性有两条X染色 体，但所表达的绝大部分遗传物质与只有 一条X染色体的男性是一样多的。这是因为 女性的X染色体中只有一条保持活性，而另 一条以巴氏小体的形式存在，遗传上无活 性，结果X连锁基因得到剂量补偿。
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实验目的
第一,初步掌握观察和鉴别染色质的方法,识 别Barr小体的形态特征及所在部位． 第二， 了解Ｘ染色体失活的有关理论假说以及失 活染色体上的基因所控制的遗传性状的特 点。
（1） 清水漱口三次以上，用灭菌牙签的钝 头刮取口腔颊部细胞(将第一次刮取物弃 去），涂于干净的载波片上使成一薄层，空 气中干燥。
（2）固定：60%冰醋酸中固定20min. （3）染色：加几滴改良苯酚品红染液染色
10-15min.清水冲去浮色。
（4）镜检： 在低倍镜下，可见口腔粘膜上皮细胞核为圆形或 卵圆形．细胞质不着色；换油镜，选择典型的可 计数细胞进一步观察，可计数细胞的判断标准是： 核较大、染色清晰、轮廓清楚、无皱褶及缺损， 染色质为细丝状或均匀的细粒，核膜周围无细菌 污染：在可计数细胞内，仔细寻找X染色质：X染 色质的特征是：染色深，轮廓消晰，平凸形、半 圆形、扁平形或三角形，大小为1—1.5um．多位 于核膜内侧缘：统计X染色质的阳性率(至少应观 察100个细胞)。
人X染色质的观察
染色质是细胞间期核周期不同阶段的存在形式。染色质主 要有两种类型：在细胞分裂期凝缩而在间 期松散(成为弥散状)的称为常染色质；在所 有时期一直凝缩着的称为异染色质。
• 实际上异染色质又可分为两类：一类是在 各种细胞中都处于凝缩状态，最晚进行复 制的异染色质，这类异染色质不含有结构 基因，没有什么“功能”，称之结构异染 色质；另一类则是在有些细胞或在一定的 发育时期和生理条件下才表现为凝缩状态 的异染色质，这类异染色质虽含有结构基 因，但从生理上讲，绝大多数基因是失活 的，称为兼性异染色质。如X染色质就是一 种兼性异染色质
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主要仪器、材料及试剂
（１）材料 口腔上皮细胞
（２）主要仪器 显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸、 吸管。
（３）主要试剂 ①固定液 ②染色液
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主要仪器、材料及试剂
（１）材料 口腔上皮细胞
（２）主要仪器 显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸、 吸管。
（３）主要试剂 ①固定液 ②染色液
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实验方法及实验步骤
（1） 清水漱口三次以上，用灭菌牙签的钝 头刮取口腔颊部细胞(将第一次刮取物弃 去），涂于干净的载波片上使成一薄层，空 气中干燥。
（2）固定：60%冰醋酸中固定20min. （3）染色：加几滴改良苯酚品红染液染色
10-15min.清水冲去浮色。
（4）镜检： 在低倍镜下，可见口腔粘膜上皮细胞核为圆形或 卵圆形．细胞质不着色；换油镜，选择典型的可 计数细胞进一步观察，可计数细胞的判断标准是： 核较大、染色清晰、轮廓清楚、无皱褶及缺损， 染色质为细丝状或均匀的细粒，核膜周围无细菌 污染：在可计数细胞内，仔细寻找X染色质：X染 色质的特征是：染色深，轮廓消晰，平凸形、半 圆形、扁平形或三角形，大小为1—1.5um．多位 于核膜内侧缘：统计X染色质的阳性率(至少应观 察100个细胞)。
人类X染色质的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要：人类X染色质（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。
根据X染色体失活与Lyon假说，雌性哺乳动物的两条X染色体中，只有一条X染色体有转录活性，另一条X染色体无转录活性，呈固缩状，形成X染色质。
失活发生在胚胎发育早期，且失活是随机的。
本实验以人口腔颊部粘膜细胞、发根毛囊细胞为材料制备X染色质标本，通过硫瑾染色、压片等方法观察巴氏小体。
本次试验的目的是掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位，了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1.引言1.1巴氏小体人类有23对染色体，其中22对为常染色体，另一对为性染色体。
女性为XX，男性为XY。
X与Y染色体有一部分是同源的，在减数分裂时可以相互配对，其余部分则不同源。
Y 染色体含有很少的基因，而X染色体则含有大量的基因。
男性与女性的常染色体数目是一样的，所含有的基因数目也相等；但是女性含有两条X染色体，而男性一条X一条Y，因此女性性染色体所携带的基因剂量远高于男性，然而研究发现女性伴性遗传基因的表达剂量与男性是大体相同的，其原因可以用剂量补偿效应解释。
剂量补偿效应(dosage compensation effect)的定义: 在XY性别决定机制的生物中，使性连锁基因在雌、雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。
也就是说，在雌性和雄性细胞里，由X染色体基因编码产生的酶或其它蛋白质产物在数量上相等或近乎相等。
剂量补偿存在两种情况，雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活)，只有一条X 染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的；另一种是X染色质的转录速率不同，如果蝇雌性细胞中两条X染色体都有活性，但它们的转录速率低于雄性细胞X染色体的转录速率。
性染色质：人体X-染色质观察
四、实验用具药品
1.仪器用具：显微镜、载玱片、盖玱片、剪刀、镊子、 酒精灯、牙签 2.药品试剂：改良品红、醋酸洋红、50%醋酸、蒸
馏水
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性染色质：人体X-染色质观察
五、实验步骤：
1.口腔颊部粘膜细胞的观察 用牙签从女性口腔两侧颊部刮取上皮粘膜细胞，在 原位刮取2-3次，分别涂抹在干净载片上，待稍干后， 滴加1-2滴1%醋酸洋红染液，常温下染色2-5分钟，勿 使干燥，压片后镜检。 要点：先漱口
五、实验步骤：X－染色质的辨认
低倍镜下检出典型的可数细胞： 标准：A、核质呈网状或细颗粒状分布；B、核膜清晰， 核无缺损；C、染色适度；D、周围无杂菌； 高倍镜下观察：1、核膜内侧边缘；2、核仁附近；3、 染色质中间游离部位。（正常女性口腔粘膜细胞中约 30-50%有一个Barr小体。在丌同实验室中计数的差 别较大，而在男性中则仅只偶尔可见丌典型者——这 是环境引起代谢的暂时现象，约2%以下）
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性染色质：人体X-染色质观察
二、实验原理：
Ｘ染色体失活假说：在正常的雌性哺乳动物的体细胞 中，一条Ｘ染色体在遗传上有活性，而另一条处于失 活状态。这种失活发生在胚胎发育的早期，失活是随 机的。
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性染色质：人体X-染色质观察
三、实验材料 ：
上皮粘膜细胞、带有毛根的头发
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人类性染色质体观察
姓名班级同组人科目遗传实验题目人类性染色质体观察组别第五组一、研究背景1949年，美国人Barr发现，雌猫神经元细胞核中在间期有一个深染的小体，而雄猫没有。
以后在其他哺乳动物中发现同样现象。
称为Barr’s body，巴氏小体。
研究发现巴氏小体的数目＝x染色体数-11961年Mary Lyon提出巴氏小体是通过异固缩形成异染色体而失活的X染色体，是达到雌雄两性X染色体上活性基因剂量平衡的一种补偿方式。
巴氏小体也被称为性染色质体或 X染色质体。
Lyon假说的要点：1. X染色体失活发生在胚胎发育的早期（受精后的16天左右，胚胎的细胞数达到5000～6000左右，植入子宫壁时），一旦失活，其上的大部分基因也失去表达活性；2. 每一体细胞中哪一条x染色体失活是随机的；3. X染色体的失活状态可以通过有丝分裂传递，即一旦某条X染色体失活，在其所有子细胞中都是同样一条X染色体失活。
修正：失活的X染色体上并非全部基因都呈莱昂化（失活）：①呈莱昂化（失活）的基因如G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶血Ⅷ因子）；这些基因表现了完全的失活，即XGXG≈XGY②非莱昂化基因：如Xg血型基因、MIC2抗原基因等，这些基因无论在有活性还是在无活性的X染色体上都能够表达。
即 XGXG≈XGY的2倍③不完全的剂量补偿效应：如 XSXS 的产物是 XSY 产物的1.3倍，而没有达到2倍。
二、研究目的1、确定巴氏小体的位置，观察巴氏小体的形态；2、尝试通过观察巴氏小体的有无进一步验证性别三、实验原理巴氏小体形态：在间期也表现为浓缩致密的、深染的结构，在DNA复制期表现为晚复制。
大小约1～1.5微米。
女性细胞中观察到的频率为13～39％，正常男性0～2％。
但是：1.生殖细胞中不发生X染色体失活。
2.失活的X染色体上有活性基因似乎是与失活基因相嵌存在。
因此，哺乳动物的雌性就X染色体上基因的作用来说是嵌合体。
四、实验器材1、女生的口腔上皮细胞2、载玻片姓名班级同组人科目遗传实验题目人类性染色质体观察组别第五组五、实验试剂95%乙醇水溶液、1 mol/L 的HCl、改良酚红液六、实验步骤1. 涂片(1) 清洁口腔:细胞提供者需重复两三次用水漱口,以便去掉松动的上皮细胞和细菌.(2) 然后用清洁灭菌的牙签或适当的刮片,从女性口腔两颊刮取上皮黏膜细胞, 涂抹在干净载玻片上,每次可涂1～3 片,涂抹范围大约1～2 张盖玻片大小.2. 滴加1 mol/L 的HCl水解10 min。
人类X染色质观察
陈宗礼 齐向英
一、实验目的
初步掌握X-染色质标本的制作方法； 识 别人类细胞X-染色质的形态特征及所在位 置，为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提 供参考条件。
二、实验原理
1949年Barr等发现，在雌猫的神经细胞核内 有一个浓缩的深染小体，在雌性的细胞中没 有。后来了解，在雌体细胞中的两条X-染色 体在间期是有一条，（或这条的大部分）处 于凝集而不活动状态，从而形成了这种X-染 色质（或称性染色质，Barr’s body）后来进 一步发现。在所有哺乳动物的细胞中广泛从 在。
五、实验内容和步骤
3. 水洗：用蒸馏水冲洗两次，用吸水纸吸 去剩余水分。 4. 染色压片：稍干后滴加1-2滴2%乳酸醋酸 地衣红，室温下染色20-30分钟，勿使干 燥，然后加盖片复以吸水纸，用手指轻度加 压后待检。
五、实验内容和步骤
（二）毛发根部细胞涂片的制备： 1. 取材：拔取一根带有毛根的头发，自基 部截取2cm左右置载片上。 2. 预染：在毛根部加一滴地衣红染液预染 片刻。
二、实验原理
X-染色质是异染色质化的失活的X-染色体， 普遍存在于哺乳类雌体细胞中。人类在女性 两个X染色体中，有一个是失活的呈异固缩 状态（不包括胚胎发育早期及配子形成的时 期）。在间期核表现为深染的X-染色质。正 常情况大小约为1-1.5mm，频率在13-39%左 右，而在正常男性个体中缺乏这种现象（02%）。因而通过X-染色质的检查可鉴别胎儿 性别，并为判断性染色体异常引起的遗传病 提供参考资料。
三、实验材料
口腔黏膜细胞或发根细胞。
四、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验器具和药品试剂
1. 器具：显微镜，洁净的载片和盖片，压 舌板，刮片或牙签，吸水纸。 2. 试剂：95%乙醇，5%醋酸，2%乳酸醋酸地 衣红。
人类X染色质(巴氏小体)制备与观察
人类X染色质（巴氏小体）的制备与观察摘要巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染色小体，在遗传学、细胞观察方面有重要意义。
实验中作者取人口腔颊部上皮细胞与发根毛囊细胞进行硫瑾染色操作，通过显微观察对巴氏小体进行识别与计数，描述巴氏小体的形态，并统计其在不同性别人体细胞中的出现率。
引言在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体失活并呈异固缩状态，此即为巴氏小体。
又称X小体、性染色质，直径约1μm，通常位于间期核膜边缘。
1949年，加拿大学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现[1]。
通常人类男性细胞核中很少或没有巴氏小体，而女性有1个，性染色体异常的患者如XXY、 XXYY、XXX、XXXY等，巴氏小体的数量＝X染色体数量－1。
综合巴氏小体与哺乳动物性染色体的剂量补偿效应，Lyon M．F 于1961年提出Lyon 假说，主要内容有：(1)正常的雌性哺乳动物两条X染色体只有一条在遗传上有活性，另外一条失活；(2)X染色体失活是随机的。
因此表达是随机的，结果在杂合子中会出现嵌合现象（mosaic）。
例外：有袋类失活的X染色体全部是父方的。
(3)失活发生在胚胎发育的早期，如人在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。
一个细胞的一条染色体一旦失活，这个细胞的后代细胞中该染色体均失活。
Lyon假说虽然可以解释一些问题但不是全部，如人类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。
随着生物学和医学的发展人们已经认识到单条X染色体失活现象是普遍存在的，但失活的染色体上存在失活区和非失活的。
如人类中位于X染色体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶血第Ⅷ因子）等是非失活的，而Xg血型基因是失活的。
巴氏小体的生物学观察，对于优生学中鉴别性别和预防性连锁疾病的发生，以及作为癌细胞核异常主要形态学特征之一鉴定癌细胞，有重要价值[1]。
实验十一 人类X染色质的观察
五、作业 作业
(1)观察50个女性可数细胞，同时观察50个男 性可数细胞为对照，分别计算显示X-染色质 细胞所占的百分比。 (2)观察中选绘4～5个典型细胞，示明X-染色基部截取 2 cm左右置载玻片上， （2）在毛根部加1滴2％乳酸醋酸地衣红染液， 片刻后再加1滴50％醋酸(或只加50％醋酸)， 低倍镜下观察。
（3）待毛根鞘软化后拨去毛干，重新加1滴 染液，覆以盖玻片， （4）在酒精灯上轻微加热后静置5 min，隔 一片吸水纸用手指轻度加压后镜检。
一、实验目的 初步掌握观察与鉴别X染色质的简易方法 识别其形态特征及所在部位。
二、实验原理
剂量补偿效应
人类正常男性体细胞中只有1条X染色体，不失活， 故见不到X染色质； 女性的2条X染色体中，在间期时有一条不表现活 性而保持浓缩状态，因此易于用适当的染料加以 显示，成为便于观察的性染色质体(或称X-小体、 Barr小体)。
1材料正常女性口腔颊部黏膜毛发根部细胞2实验器具显微镜洁净的载玻片和盖玻片刮片吸水纸3实验药品和试剂95酒精50醋酸2乳酸醋酸地衣红1口腔颊部黏膜细胞的观察1用清洁灭菌的刮片从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜细胞在原位刮取23次2分别涂抹在干净载玻片上每次可涂13片涂抹范围为12张盖玻片大小
人类X染色质的观察 实验十一 人类 染色质的观察
三、实验材料
1、材料
正常女性口腔颊部黏膜、毛发根部细胞
2、实验器具 实验器具
显微镜、洁净的载玻片和盖玻片、刮片、吸水纸
3、实验药品和试剂 实验药品和试剂
95％酒精、50％醋酸、2％乳酸醋酸地衣红
四、实验步骤
1、口腔颊部黏膜细胞的观察
（1）用清洁灭菌的刮片，从女性口腔两侧颊部 刮取上皮黏膜细胞，在原位刮取2～3次 （2）分别涂抹在干净载玻片上，每次可涂1～3 片，涂抹范围为1～2张盖玻片大小。
人类X染色质小体的制备和观察
人类X染色质小体的制备和观察实验时间2016.12.06晚摘要：本实验利用传统的细胞生物学方法，通过选取女性和男性口腔上皮细胞，制备人类X 染色质小体装片，并进行观察，对X染色质小体的形态特征进行辨别。
最后对奥运利用巴氏小体进行性别检测存在的问题进行分析。
1引言1948年Barr发现雌性动物大多数组织中都存在着被碱性染料深染的小体，并称之为性染色质(sex chromatin)。
在之后的几年，Barr及其学生又相继研发了用皮肤活组织切片及口腔上皮细胞涂片检测性染色质的技术。
国际奥委会曾用使用检测性染色质的方法防止“伪娘”参加女子项目。
从大量的观察、统计的数据中，Harnden归纳出一个细胞中性染色质数与一个个体中所含的X染色体数、倍性的关系：一个细胞中性染色质数(最大值)=X染色体数-倍性/2。
本实验利用传统的细胞生物学方法，通过选取女性和男性口腔上皮细胞，制备人类X染色质小体装片，并进行观察，对X染色质小体的形态特征进行辨别。
最后对奥运利用巴氏小体进行性别检测存在的问题进行分析。
2实验材料2.1实验材料每一个学生：显微镜，载玻片，盖玻片，牙签，一次性水杯，镊子，解剖针。
每一组学生：引用矿泉水，固定液(95%乙醇：冰乙酸=3:1，装在染色缸中)，蒸馏水；70%、95%乙醇，无水乙醇，45%乙醇，5mol/LHCl，记号笔；二甲苯，香柏油，镜头纸；石炭酸品红染液。
2.2实验步骤2.2.1获取实验材料取一干净载玻片，用记号笔在即将涂细胞的一面作个标记。
用水将口漱净，尽可能除去口中杂物。
然后用牙签钝头在口腔(颊内侧)用力刮取，弃去第一次得到的刮取物，在同一部位继续刮取以取得深层的表皮细胞，将刮得的细胞涂抹在干净的载玻片上，反复几次，使玻片上的材料尽量抹厚些。
实验材料选自同学口腔上皮细胞。
2.2.1染色及制片在晾干的玻片上直接滴上石炭酸品红染料,染色10分钟，盖上盖玻片，吸去多余的染料，放在显微镜下观察[1]。
人类X染色体的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要：本实验旨在掌握鉴定人类X染色质的方法，通过将人体口腔颊部粘膜细胞和毛囊细胞解离、染色等步骤制片，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位。
同时了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1引言：1949年加拿大学者Barr和Bertram在一些雌猫神经原细胞核中, 发现在核膜内缘有一个染色较深的近似三角形的小体, 在雄猫中没有发现。
根据后来的深入研究发现，这个染色较深的小体和性别有关。
直到1971年巴黎会议上正式被命名为X 染色质。
以后的研究表明巴氏小体是一个异染色质化的失活的x 染色体。
在正常的男性细胞中只有一个X 染色体,是正常有活性的, 因此男性细胞中没有巴氏小体。
而在正常女性细胞中有二个X 染色体, 其中一个正常, 另一个异染色质化因此在女性细胞中可见到一个巴氏小体。
巴氏小体的个数= X 染色体个数一1 ，大都出现在核膜边缘。
性染色质在人类中，正常男性个体出现的比例约为1%，正常女性约为17-39%，在由性染色体数目异常而引起的性别畸型( X O 除外) 患者的细胞中, 可见到一个或一个以上巴氏小体。
因而通过巴氏小体检查可鉴别胎儿的性别和诊断性染色体异常引起的遗传疾病。
1961 年, 英国遗传学家Lyon 根据前人和自己的研究发表了莱昂假说, 明确提出了单个X染色体随机失活从而在两性间保证X 连锁基因转录水平一致的论点, 并为现在的科学家所普遍接受。
普遍认为, 巴氏小体的形成是与一个非编码RNA XIST 的大量且特异表达有关, 大量的XIST 顺式作用在其中一条X染色体上, 引发了该条染色质的广泛甲基化从而导致异染色质的形成, 使其上的基因出现表达沉默现象。
2 实验材料和方法：2.1实验材料和仪器：1）显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、牙签；2）硫瑾染液；3）1mol/L的HCl、蒸馏水；4）口腔颊部粘膜细胞和毛囊细胞。
人类性染色质检查与观察
仪器、材料
显微镜、染色缸、载玻片 试剂
实验步骤
X染色质制片与观察 1女性口腔粘膜细胞制片：清水漱口，用牙签的 钝头刮口腔颊部黏膜，将刮起的细胞均匀涂布在 干净的载玻片中间，不等晾干，立即将涂片放入 甲醇：冰醋酸=3：1的固定液中固定15分钟，晾 干，染色。 2染色：在涂片处加上数滴硫堇染液，染色5-10 分钟，用水冲洗，晾干，镜检。 3观察：用低倍镜观察紫蓝色的细胞核，看清楚 间期核的形态特征，找到X染色质。X染色质一般 紧贴在细胞核核膜内缘，大约1-1.5µm，染色深， 常呈三角形、馒头形、梭形或其他形态。
试验报告 性染色质标本 预习试验报告 实验考试
实验考试题
染色体标本制备时，低渗与固定有何意义？ 试述核型分析时应注意哪些问题？ 某男性口腔粘膜细胞检查X染色质和Y染色 质均为阳性，试分析其核型。
人类性染色质检查与观察实验目的了解人类间期细胞核中x染色质和y染色质的检查方法及意义实验原理人类女性口腔粘膜细胞的核膜内缘常可发现一个浓染小体而正常男性则无
人类性染色质检查与观察
实验目的
了解人类间期细胞核中X染色质和Y染色质 的检查方法及意义
实验原理
人类女性口腔粘膜细胞的核膜内缘常可发 现一个浓染小体，而正常男性则无。这一 浓染小体是一条X染色体失活异固缩形成 的，现在通称为X染色质或X小体。男性间 期细胞核中经特殊染色方法染色后在荧光 显微镜下可见一个0.3µm的强荧光小体， 为Y染色体长臂末端被荧光染料着色而成， 称为Y染色质。X染色质和Y染色质的检查 可作为性别测定的依据和性染色体数目异 常的一种辅助诊断方法。
注意事项
中山大学人类X染色质标本的制备与观察报告
人类X染色质标本的制备与观察张皓予15335203一、实验目的1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。
2.正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。
3.说明人体细胞中核内X染色体的数目和性染色体数目之间存在的关系。
二、实验原理X染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。
在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。
用苯酚品红改良染液染色后，便可观察到染色较浓，多位于核膜内侧缘，呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形，直径约1μm大小的小体。
女性细胞核中出现率为40%~60%。
Barr和Bertram首先（1949）在雌性猫的神经细胞核中发现，在多数核中部有一个小的深染的小体，而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体，此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类和灵长类等动物的多数组织细胞中存在，而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex chromatin)，或称为“巴氏小体”(Barr body)。
这种小体常位于核膜的内表面，呈Feulgen阳性反应，表明是DNA的成分，有证据表明，性染色质的存在是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体，其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质。
但如果一个男人有XXY染色体，那就会有一个性染色质，虽然表现为男性。
同样，XXX的三体应当有两个巴氏小体。
因此，性染色质实质上是一个失活的X 染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来?目前，已有许多证据证明，在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化，成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明，失活的X染色体的固缩周期与其它染色体是不同步的，它在S期是晚复制的。
此外，人们也已发现，晚复制的这根X染色体常位于核的边缘，这个位置也正好是巴氏小体出现的位置。
三、实验仪器与试剂1.仪器与用具显微镜，水浴锅，牙签，载玻片，盖玻片，镊子，吸水纸。
人类X染色质的制备与观察
姓名系年级学号日期科目遗传学实验题目人类X染色质的制备与观察人类X染色质的制备与观察摘要：巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染色小体，在遗传学、细胞观察方面有重要意义。
希望通过实验掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位；了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
本实验中通过取人口腔颊部上皮细胞与发根毛囊细胞进行硫堇染色、显微观察识别巴氏小体并进行计数，来描述巴氏小体的形态，并统计其在不同性别人体细胞中的出现率。
引言1949年，加拿大学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现。
他以更多的动物组织做了深入的研究，结果发现有袋类、偶蹄类、食肉类、灵长类（包括人类）等动物的不同组织的体细胞中，同样显示这种性别差异。
Barr称这种小体为核仁随体，现在我们通常称之为巴氏小体。
Barr推论这种小体是由性染色体的异染色质衍化来的。
20世纪60年代前后，根据对性染色体异常病人的X染色体与X染色质数目的关系的研究发现，X染色质数等于一个个体的X染色体数减1。
进一步的研究表明，一个X染色质是一条异染色质化的X染色，在间期其DNA的复制要比其他的染色体晚（Morishima，1962）。
在一个个体中，究竟是来自父本还是来自母本的X染色体失活，则是随机的，这种随机失活是生物体内的剂量补偿机制（Lyon，M.，1962）。
从上述我们可以看出X染色质是一种包含结构基因的异染色质，这种异染色质通常称为兼性异染色质（facultative chromatin）。
因为X染色体的失活是个比较复杂的生物学问题，目前对这一现象仍然存在着一些难以解释的疑点。
例如：是否所有组织的全部细胞中，在任何时间都存在这种X小体？失活的X小体是如何进行复制的?虽然对X小体存在着一些不同看法，但目前X染色质的检查，在医学遗传的研究中，临床和法医诊断上仍具有一定的意义。
人类X染色质的制备与观察
人类X染色质的制备与观察姓名摘要：X染色质（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm、贴近于核膜边缘的染色小体。
在本实验中，我们选取口腔粘膜、头发根鞘细胞制备X 染色质，通过染色、压片等方法观察巴氏小体在细胞核内的分布及形态等特征，目的是通过实验掌握观察与鉴定人类X染色质的方法、在显微镜下正确识别X染色质的形态特征及所在部位，以及了解X染色体失活的有关假说和失活X染色体上的基因所控制的遗传性状的特点，为进一步研究人类染色体畸变与疾病的关系提供基础方法、为遗传病临床诊断提供参考。
通过此次实验，我们达到了实验预期，取得了良好的实验效果。
关键词：X染色质（巴氏小体）、口腔黏膜细胞、头发根鞘细胞1.引言X染色质小体（或称巴氏小体、性染色质小体、X小体等）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm、贴近于核膜边缘的染色小体。
巴氏小体在细胞分裂间期细胞核中出现异固缩现象，表现出浓缩、染色深、无活性的特点。
巴氏小体在细胞分裂期可形成正常的染色体形态，但复制时间比有活性的X染色体稍迟一些。
巴氏小体在正常女性体内是由女性两个X 染色体中的一个失活形成，位于间期细胞核中，紧贴核膜内缘，大小约1～1.5 μm，呈现三角或椭圆形小体。
巴氏小体在女性体内数量为X染色体数减1。
”1949年，Barr在猫神经元核仁附近发现一种染色很深的小体，他仔细研究发现这种小体出现在大多出现在雌猫神经元中，雄猫的神经元中则极少出现，即这种小体与性别有关。
Barr称这种小体为“核仁随体”，并推测小体是由两条性染色体的异染色质衍化来的。
他以更多的哺乳纲的代表性动物的不同组织做了观察，结果发现有袋类、偶蹄类、翼手类、食肉类、灵掌类（包括人类）的多种组织的体细胞中，同样显示这种性别差异（即雌雄二型现象）。
观察X染色质小体数在当时成为检测X染色体数是否产生变异的快捷方法。
实验十一 人类X小体的观察
（2）6-PGD杂合体细胞电泳实验
证据3：X染色体数与Barr小体数
X染色体显示异固缩现象。在靠近核膜的地方，成为性 染色质体（sex-chromatin body），而雄性没有。细胞学 的研究发现Barr小体的数目正好是X染色体数目减1（n-1)。 总之， X染色体在哺乳动物中的失活是指在任何二倍 体的哺乳动物细胞中，无论存在几条X染色体，都只有一 条xX染色体保持活性。这个过程使X连锁基因得到剂量补 偿，保证染色体为XX的女性和XY的男性具有相同的有效基 因产物。
2、画2～3个典型细胞，示X小体的形态和所处部位。
3. Barr小体分析技术在人类遗传学工作中有什 么用途？
5.10 A calio cat (a), where the random distribution of orange and black patches demonstrates the Lyon hypothesis.
证据2：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 葡萄糖-6磷酸脱氢酶（G-6PD）的活性在男女间没 有区别。根据淀粉凝胶电脉的差异，可分为A型和B型。 由X上一对等位基因GdA和GdB控制。只有一个氨基酸 的差异。杂合体AB显示两条带。但从皮肤上取很小一 片，用胰蛋白酶处理，使细胞分散，单独培养，发现， 有的细胞群显示A型，有的显示B型女性带毛根毛发一根,放在一干净的载玻片上。
②软化:滴加软化液（50%醋酸或盐酸）软化5min。 ③ 加一滴染液后室温下放10min （勿使干燥），加上盖玻片， 垫上滤纸用手指轻轻加压即可。
人口腔X小体
X小体的形状
六、实验结果
1.X小体： 油镜下可见X小体为 一致密的浓染小体。 轮廓清晰，约1um，常 附着于核膜边缘或靠 边内侧，其形态有三 角形、卵形、扁平形 等。 正常女性间期细胞 核中X小体比例约 30%～50%。
人体X-性染色质的观察一
6、Barr小体大小、形态、位置：
X-染色质的形态表现为一结构致 密的浓染小体，轮廓清楚。
大小约1μ m左右。 常附着于核膜边缘或靠近内侧。
形状有微凸形（馒头形）、 三角形、卵形、短棒形（长方形）、 圆球形等。
7、鼓槌状突出物
在血液的多形核白细胞分裂形成过 程中，裂出形成有一细缝连结的鼓槌 状突出物（ Barr小体）。
8、性别异常
正常女性口腔粘膜细胞中约有3050%的Barr小体。
男性中偶尔可见不典型者。大于3% 即性别异常。
Y小体：
用 荧 光 染 料 如 盐 酸 阿 的 平 、 QH 染色后，可在间期核中看到一个直 径约0.3微米的强荧光小体，即 Y小 体
或在中期核中看到Y染色体的长 臂发出强荧光。
三、实验步骤
一实验目的1通过实验初步掌握观察与鉴别x染色质的简易方法识别其形态特征及所在部位
实验四、人体X-性染色质的观察
一、实验目的 1、通过实验初步掌握观察与鉴别X-染
色质的简易方法，识别其形态特征及所在 部位。
2、为进一步研究人的染色体畸变与疾 病（性别异常）、鉴别胎儿性别（羊水细 胞涂片）提供参考条件。
1、核质呈网状细颗粒状分布； 2、核膜清晰，核膜无破损； 3、染色适度； 4、周围无杂菌。
四、作业
绘制口腔粘膜细胞图，示X-染色 质的形状和部位。
Hale Waihona Puke 二、实验原理1、性染色体：和性别决定有明显的
直接关系的染色体。
2、性染色质发现： 1949年Barr等发现，在雌猫的神经 细胞核内有一个凝缩的深染小体， 在雄性的细胞中没有。
3、X-性染色质形成：
进一步了解到，雌体细胞中的两 条X-染色体在间期时有一条处于凝集 而不活跃的状态（异固缩状态），形 成明显的染色中心，染色中心这就叫 X-性染色质、 又叫Barr小体。
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பைடு நூலகம்、实验材料
1、材料
正常女性口腔颊部黏膜、毛发根部细胞
2、实验器具 实验器具
显微镜、洁净的载玻片和盖玻片、刮片、吸水纸
3、实验药品和试剂 实验药品和试剂
95％酒精、50％醋酸、2％乳酸醋酸地衣红
四、实验步骤
1、口腔颊部黏膜细胞的观察
（1）用清洁灭菌的刮片，从女性口腔两侧颊部 刮取上皮黏膜细胞，在原位刮取2～3次 （2）分别涂抹在干净载玻片上，每次可涂1～3 片，涂抹范围为1～2张盖玻片大小。
3、X-染色质的辨认
（1）低倍镜下： 检出典型的可数细胞，其标准为：
①核质呈网状或细颗状分布； ②核膜清晰，核无缺损； ③染色适度； ④周围无杂质。
（2）高倍镜或油镜下观察
选定细胞后， 在高倍镜或油镜进一步观察。
X-染色质的形态表现为一结构致密的浓染小体， 轮廓清楚，大小约1µm，常附着于核膜缘或靠近 内侧，其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形 及双球形等。 正常女性口腔黏膜细中30％～50％有1个Barr小 体，在不同实验室中计数的差别较大，在男性中 偶尔可见不典型者。
（3）待稍干后，滴加1～2滴2％乳酸醋酸地衣红， 在室温下染色20～30 min，勿使干燥， （4）加盖玻片，并覆以吸水纸，用手指轻度加 压后进行镜检。
涂片后如不即检查，应在稍干时立即放入95％酒精中固定30 min以上(也可 固定l～2 d)，取出，晾干后号，放置冰箱内保存。
2、毛发根部细胞的观察
（1）拔取一根带有毛根的头发，自基部截取 2 cm左右置载玻片上， （2）在毛根部加1滴2％乳酸醋酸地衣红染液， 片刻后再加1滴50％醋酸(或只加50％醋酸)， 低倍镜下观察。
（3）待毛根鞘软化后拨去毛干，重新加1滴 染液，覆以盖玻片， （4）在酒精灯上轻微加热后静置5 min，隔 一片吸水纸用手指轻度加压后镜检。
五、作业 作业
(1)观察50个女性可数细胞，同时观察50个男 性可数细胞为对照，分别计算显示X-染色质 细胞所占的百分比。 (2)观察中选绘4～5个典型细胞，示明X-染色 质的形态部位。
人类X染色质的观察 实验十一 人类 染色质的观察
一、实验目的 初步掌握观察与鉴别X染色质的简易方法 识别其形态特征及所在部位。
二、实验原理
剂量补偿效应
人类正常男性体细胞中只有1条X染色体，不失活， 故见不到X染色质； 女性的2条X染色体中，在间期时有一条不表现活 性而保持浓缩状态，因此易于用适当的染料加以 显示，成为便于观察的性染色质体(或称X-小体、 Barr小体)。