微生物的分离和纯培养课件
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中图版选修一 1.1 微生物的分离和纯培养课件(42张)
[思维激活1] 提示
用酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌？70% 酒精擦拭属化学消毒。酒精消毒时，70%的酒精杀
与95%的酒精，哪一种效果更好？为什么？ 菌效果最好。原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固 成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌 力减弱。
1．微生物 (1)定义
形体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜
细菌 酵母菌 微生物主要包括_____ 、放线菌、 _______ 、霉菌以及立克次氏体、支原
体、_____等。
病毒
2．培养基
生长繁殖 代谢 (1)培养基的概念：根据微生物__________ 和_____的需要，将各种 营养物质 _________混合在一起，配制成适合微生物生存的营养基质 ——培养基。
仅杀死物体表面或内 较为温和的 消 部一部分对人体有害 物理或化学 的微生物(不包括芽孢 毒 方法 和孢子) 杀死物体内外所有的 灭 强烈的理化 微生物，包括芽孢和 菌 因素 孢子
特别提醒 实验后所有用过的培养基、培养液都要统一进 行高压蒸汽灭菌后再丢弃，否则会造成环境污染。实验过 程中一定不可吃东西、喝水；离开实验室时一定要洗手， 以防止被微生物感染。
种类 特点 用途 工业生产 分类、鉴定
天然培养基 含化学成分不明确的天然物质 培养基成分明确(用化学成分 合成培养基 已知的化学物质配成)
特别提醒 天然培养基成分不明确，造价低；合成培养基
成分明确，价格高。
4．消毒和灭菌的区别 条件 结果 常用的方法 煮沸消毒法、 巴氏消毒法、 紫外线或化学 药物消毒法 灼烧灭菌、干 热灭菌、高压 蒸汽灭菌
第一节
微生物的分离和纯培养
1．进行微生物的分离和培养。
2．用大肠杆菌为材料进行平板培养，分离菌落。
《微生物纯培养技术》课件
纯培养技术可用于病原微生物的分离、鉴 定和药物敏感性试验，为临床诊断和治疗 提供依据。
微生物纯培养技术
02
的基本原理
微生物的分离与纯化
微生物的分离
通过选择合适的培养基和培养条件， 将混合的微生物群体分离成单一的微 生物个体。
微生物的纯化
通过反复划线、稀释接种等方法，获 得纯培养的微生物，即同一菌种或纯 种微生物的培养。
微生物的培养基
培养基的组成
培养基是由水、碳源、氮源、无机盐 等组成，根据不同微生物的需求，培 养基的成分和比例会有所不同。
培养基的制备
根据配方和操作步骤，将各种成分混 合在一起，经过灭菌处理后，制成适 合微生物生长的培养基。
微生物的培养条件
温度
不同微生物对温度的需求不同，适宜的 温度可以促进微生物的生长和代谢。
生理生化特性分析
测定微生物的生理生化特性，如氧化酶试验 、糖发酵试验等。
应用前景探讨
探讨微生物纯培养技术在生产、科研等领域 的应用前景和潜在价值。
微生物纯培养技术04Fra bibliotek的应用实例
在医学领域的应用
抗生素生产
01
微生物纯培养技术用于分离和培养具有抗生素产生能力的菌株
，为医学领域提供大量抗生素。
疾病诊断
《微生物纯培养技术》 ppt课件
目 录
• 微生物纯培养技术概述 • 微生物纯培养技术的基本原理 • 微生物纯培养技术的实验操作 • 微生物纯培养技术的应用实例 • 微生物纯培养技术的挑战与展望
微生物纯培养技术
01
概述
微生物纯培养技术的定义
01
微生物纯培养技术是指通过一定 的物理、化学手段，将自然界中 混杂的微生物群体分离出来，获 得纯种微生物的技术。
微生物的分离和纯培养 PPT课件(共4个) 中图版
微生物的分离和纯培养
（实验11）
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。
2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。
3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
实验原理
• 自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起， 要研究某种微生物的特性，必须从混杂的微生 物类群中分离它，使该微生物处于纯培养状态 这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化。
•
27、我们无法选择自己的出身，可是我们的未来是自己去改变的。励志名言：比别人多一点执着，你就会创造奇迹
•
28、伟人之所以伟大，是因为他与别人共处逆境时，别人失去了信心，他却下决心实现自己的目标。
•
29、人生就像一道漫长的阶梯，任何人也无法逆向而行，只能在急促而繁忙的进程中，偶尔转过头来，回望自己留下的蹒跚脚印。
•
17、一个人只要强烈地坚持不懈地追求，他就能达到目的。你在希望中享受到的乐趣，比将来实际享受的乐趣要大得多。
•
18、无论是对事还是对人，我们只需要做好自己的本分，不与过多人建立亲密的关系，也不要因为关系亲密便掏心掏肺，切莫交浅言深，应适可而止。
•
19、大家常说一句话，认真你就输了，可是不认真的话，这辈子你就废了，自己的人生都不认真面对的话，那谁要认真对待你。
•
15、所有的辉煌和伟大，一定伴随着挫折和跌倒；所有的风光背后，一定都是一串串揉和着泪水和汗水的脚印。
• 1 土壤样品 • 2 培养基 （1）牛肉膏蛋白胨培养基 （2）高氏1号培养基 （பைடு நூலகம்）马铃薯培养基（PDA培养基）
实验方法与步骤
• 1.平板的制作： 将已灭菌的培养基融化，冷却到40-50℃， 倒平板。
（实验11）
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。
2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。
3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
实验原理
• 自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起， 要研究某种微生物的特性，必须从混杂的微生 物类群中分离它，使该微生物处于纯培养状态 这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化。
•
27、我们无法选择自己的出身，可是我们的未来是自己去改变的。励志名言：比别人多一点执着，你就会创造奇迹
•
28、伟人之所以伟大，是因为他与别人共处逆境时，别人失去了信心，他却下决心实现自己的目标。
•
29、人生就像一道漫长的阶梯，任何人也无法逆向而行，只能在急促而繁忙的进程中，偶尔转过头来，回望自己留下的蹒跚脚印。
•
17、一个人只要强烈地坚持不懈地追求，他就能达到目的。你在希望中享受到的乐趣，比将来实际享受的乐趣要大得多。
•
18、无论是对事还是对人，我们只需要做好自己的本分，不与过多人建立亲密的关系，也不要因为关系亲密便掏心掏肺，切莫交浅言深，应适可而止。
•
19、大家常说一句话，认真你就输了，可是不认真的话，这辈子你就废了，自己的人生都不认真面对的话，那谁要认真对待你。
•
15、所有的辉煌和伟大，一定伴随着挫折和跌倒；所有的风光背后，一定都是一串串揉和着泪水和汗水的脚印。
• 1 土壤样品 • 2 培养基 （1）牛肉膏蛋白胨培养基 （2）高氏1号培养基 （பைடு நூலகம்）马铃薯培养基（PDA培养基）
实验方法与步骤
• 1.平板的制作： 将已灭菌的培养基融化，冷却到40-50℃， 倒平板。
高二生物课件 微生物的分离和纯培养(1)
仅杀死物体表面或内
部一部分对人体有害 的微生物(不包括芽孢 和孢子)
煮沸消毒法、 巴氏消毒法、 紫外线或化学 药物消毒法
灭 菌
强烈的理化 因素
杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和 孢子
灼烧灭菌、干 热灭菌、高压 蒸汽灭菌
特别提醒 实验后所有用过的培养基、培养液都要统一进 行高压蒸汽灭菌后再丢弃，否则会造成环境污染。实验过 程中一定不可吃东西、喝水；离开实验室时一定要洗手， 以防止被微生物感染。
病的原_微__生__物_____有_和害_微__生__物__的__营__养__细__胞______ ，常用的是 射线_____消毒法化和学_药__剂______消毒法。
[思维激活1] 用酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌？70% 与95%的酒精，哪一种效果更好？为什么？ 提示 酒精擦拭属化学消毒。酒精消毒时，70%的酒精杀 菌效果最好。原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固 成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌 力减弱。
异养型 微生物
CO2、 NH3、铵盐、
NaHCO3 硝酸盐等
糖类、脂 肪酸等
铵盐、 硝酸盐、 蛋白质等
生长因子
一般不 需要
有些种 类需要
举例
硝化 细菌
乳酸菌
2.培养基的成分 (1)培养基的成分 培养基中一般含有水、无机盐、碳源、氮源、生长因子五 大类营养物质。 (2)碳源、氮源及生长因子的来源与功能比较
方法
灭菌操作
适用对象
灼烧 灭菌
在酒精灯火焰的充分 燃烧层灼烧
对接种环、接种针或其他 金属工具灭菌，也可以对 试管口、瓶口灭菌
干热 灭菌
在干热灭菌箱内， 耐高温且需保持干燥的物
160～170 ℃条件下， 品，如玻璃器皿和金属用
微生物的分离和纯培养ppt(共4个)精品课件
平均菌落数×稀释倍数 微生物的细胞个数（个/g）＝ 土壤克数
微生物分离基本方法及原则
分离微生物时一般是根据该微生物对营养， pH，氧气，温度等要求的不同，供给它们合 适的条件或加入某种抑制剂，形成只利于该菌 种生长，不利于其他菌种生长的环境，从而淘 汰不需要的菌种。
(1)分离细菌：取10-7、10-8两个稀释度各0.2ml加入 培养皿中，涂布牛肉膏蛋白胨平板，37℃倒置培 养，24小时。 (2) (2) 分离霉菌：取10-5、10-6两个稀释度各0.2ml，涂 布土豆平板（倒平板前在土豆培养基中加入80% 的乳酸5滴），28℃倒置培养，3～4天。 (3) 分离放线菌：取10-5、10-6两个稀释度各0.2ml， （制备菌悬液时，应先加入10%酚10滴）涂布淀 粉平板，28℃倒置培养，7～10天。
大肠杆菌菌落
伊红美蓝培养基
曲霉
酵母菌落
霉菌菌落 青霉
放线菌菌落
A：诺尔斯氏链霉菌 B：皮疽诺卡氏菌 C：酒红指孢囊菌 D：游动放线菌 E：小单胞菌 F：马杜拉放线菌
产抗菌素的放线菌
A：卡特利链霉菌 B：弗氏链霉菌 C：吸水链霉菌金泪亚种 D：卡那霉素链霉菌 E：除虫链霉菌 F：生磺酸链霉菌
实验材料
微生物的分离和纯培养
（实验11）
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。 2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。 3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
实验原理
• 自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起， 要研究某种微生物的特性，必须从混杂的微生 物类群中分离它，使该微生物处于纯培养状态 这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化。
关于微生物纯培养的分离方法课件
一、划线法
分区划线法（蛇形线法）操作图
第一区划线 第二区划线 第三区划线
分区划线法适用范围： 适用于浓度较大的样品
连续划线法操作图
连续划线法适用范围： 适用于浓度较小的样品
二、稀释平板法
104/ml
103/ml
102/ml
101/ml
从土壤中分离纯微生物
1、稀释倾注分离法
2、稀释涂布分离法
四、选择培养基分离法
原理
❖ 创造适于目的微生物生长条件 ❖ 促使目的微生物快速生长呈优势菌 ❖ 抑制非目的微生物生长 ❖ 从混杂微生物中分离目的微生物
1、利用选择培养基进行直接分离
选择培养基
只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
1、利用选择培养基进行直接分离
土壤 选择培养基 单细胞 直接分离
例二：分离筛选产高温淀粉酶（65℃）细菌
单细胞
65℃培养
淀粉水解透明圈 目的菌菌落
选择培养基平板 （淀粉为唯一C源）
选择因子：营养选择因子淀粉 环境选择因子65℃高温
2、富集培养法
人为创造一些条件只让所需的微生物生长， 在这些条件下，所需要的微生物能有效地与 其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远 超过其他微生物。
富集培养是分离微生物菌种最强有力的技术之一
营养选择因子和生理条件选择因子可无穷尽组 合，可从自然界选择分离各类特异微生物
例：从土壤中分离能产生ß－半乳糖苷酶的微生物
富集培养
选择培养基分离
目的菌验证
涂布棒
弹簧接种枪
1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.接种锄 5.接种铲 6. 接种匙 7.接种刀 8.接种刀 9.剪刀 10.钢钩 11. 镊子 12.弹簧接种枪 13.接种、枪（日本式）
微生物的分离纯化和培养技术124页PPT
查氏培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋 白胨培养基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。
2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中， 在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水 的试管中，以此类推，制成不同稀释度。
3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然 后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的 试管中吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。
微生物的分离、纯化及培养技术
分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得 只含某一种或某一株微生物的过程。
为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落 并不一定保证是一种菌。
常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法、稀释涂布平板法 稀释混合平板法、平板划线法
吉林大学生物基础实验教学中心
一. 目的要求 二. 实验原理 三. 微生物培养技术 四. 结果观察
（4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。 （5）将试管口在火焰上微烧一周。 （6）参照图（7-1） （7）将接种环抽出，灼烧管口。 （8）塞上棉塞。 （9）将接种环经火焰灼烧灭菌。
吉林大学生物基础实验教学中心
将已接种的斜面、半固体和液体 培养基放置培养箱中培养将生长好的 菌种用牛皮纸包好，置4℃冰箱中保 存。
接种
吉林大学生物基础实验教学中心
培养
吉林大学生物基础实验教学中心
微生物的纯化培养
吉林大学生物基础实验教学中心
吉林大学生物基础实验教学中心
平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实 验日期。 2、划线方法
稀释混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀
吉林大学生物基础实验教学中心
2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中， 在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水 的试管中，以此类推，制成不同稀释度。
3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然 后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的 试管中吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。
微生物的分离、纯化及培养技术
分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得 只含某一种或某一株微生物的过程。
为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落 并不一定保证是一种菌。
常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法、稀释涂布平板法 稀释混合平板法、平板划线法
吉林大学生物基础实验教学中心
一. 目的要求 二. 实验原理 三. 微生物培养技术 四. 结果观察
（4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。 （5）将试管口在火焰上微烧一周。 （6）参照图（7-1） （7）将接种环抽出，灼烧管口。 （8）塞上棉塞。 （9）将接种环经火焰灼烧灭菌。
吉林大学生物基础实验教学中心
将已接种的斜面、半固体和液体 培养基放置培养箱中培养将生长好的 菌种用牛皮纸包好，置4℃冰箱中保 存。
接种
吉林大学生物基础实验教学中心
培养
吉林大学生物基础实验教学中心
微生物的纯化培养
吉林大学生物基础实验教学中心
吉林大学生物基础实验教学中心
平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实 验日期。 2、划线方法
稀释混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀
吉林大学生物基础实验教学中心
第二章微生物的纯培养和显微技术精品PPT课件
如四联微球菌 （Micrococcus tetragenus）
四联球菌
▲八叠球菌 按三个互相垂直的平
面进行分裂后，每八个 球菌在一起成立方体形.
如藤黄八叠球菌
（Sarcina ureae)
八叠球菌
▲葡萄球菌 分裂面不规则，多个球菌
聚在一起，像一串串葡萄。 如金黄色葡萄球菌
（Staphylococcus aureus)
第二节 显微镜和显微技术
显微镜自 身特点
放大倍数 分辨率 反差
显微 观察效果
操作者 技能
显微镜使用 标本制作 观察技术
一 显微镜的种类及原理 二 显微观察样品的制备
一 显微镜的种类及原理
普通光学显微镜 暗视野显微镜（视野暗，样品亮。细菌运动） 相差显微镜（不染色观察细微结构） 荧光显微镜（黑暗时荧光素吸收紫外线放出可见光） 电子显微镜
第二章 微生物的纯培养和显微技术
第一节 微生物的分离和纯培养 第二节 显微镜和显微技术 第三节 原核微生物 第四节 真核微生物
第一节 微生物的分离和纯培养
微生物的培养物（culture) 微生物的纯培养物(pure cultrue) 微生物的纯培养技术
无菌技术
防止实验操作过程中其被其他微生物污
显微镜的数值孔径与镜口角及工作距离间的关系 η.sinθ——数值孔径NA。
低倍镜 高倍镜
油镜
以空气做介质同以香柏油做介质的比较 η.sinθ——数值孔径NA。
(a)×500
(b)×175
(c)×210
(a) (b)暗视野显微镜观察 (c) (d) (e)相差显微镜观察
(d)×600
(e)×100
普通光学显微镜
机械装置——镜座、支架、载物台、调焦螺旋 光学系统——物镜、目镜、聚光器
四联球菌
▲八叠球菌 按三个互相垂直的平
面进行分裂后，每八个 球菌在一起成立方体形.
如藤黄八叠球菌
（Sarcina ureae)
八叠球菌
▲葡萄球菌 分裂面不规则，多个球菌
聚在一起，像一串串葡萄。 如金黄色葡萄球菌
（Staphylococcus aureus)
第二节 显微镜和显微技术
显微镜自 身特点
放大倍数 分辨率 反差
显微 观察效果
操作者 技能
显微镜使用 标本制作 观察技术
一 显微镜的种类及原理 二 显微观察样品的制备
一 显微镜的种类及原理
普通光学显微镜 暗视野显微镜（视野暗，样品亮。细菌运动） 相差显微镜（不染色观察细微结构） 荧光显微镜（黑暗时荧光素吸收紫外线放出可见光） 电子显微镜
第二章 微生物的纯培养和显微技术
第一节 微生物的分离和纯培养 第二节 显微镜和显微技术 第三节 原核微生物 第四节 真核微生物
第一节 微生物的分离和纯培养
微生物的培养物（culture) 微生物的纯培养物(pure cultrue) 微生物的纯培养技术
无菌技术
防止实验操作过程中其被其他微生物污
显微镜的数值孔径与镜口角及工作距离间的关系 η.sinθ——数值孔径NA。
低倍镜 高倍镜
油镜
以空气做介质同以香柏油做介质的比较 η.sinθ——数值孔径NA。
(a)×500
(b)×175
(c)×210
(a) (b)暗视野显微镜观察 (c) (d) (e)相差显微镜观察
(d)×600
(e)×100
普通光学显微镜
机械装置——镜座、支架、载物台、调焦螺旋 光学系统——物镜、目镜、聚光器
微生物菌种分离(共61张PPT)
平板划线法
斜线法 曲线法 方格法 放射法 四格法
平板划线法
斜线法：
用接种环以无菌操作挑取菌悬液一环，先在平板 培养基的一边作第一次平行划线3-4条，再转动培 养皿70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却 后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用 同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线 和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。
琼脂固体 培养基
(1882年)
很多细菌不能
在土豆上生长
明胶高温易溶化
不能37°C培养
一直沿用至今
微生物纯培养分离技术
纯培养物分离方法
固体培养基分离
涂布平板法 平板划线法 平板倾注法 稀释摇管法
液体培养基分离
单细胞（孢子）分离 选择培养分离
涂布平板法
1、少量样品加到平板中央（1mL） 2、玻璃三角涂棒浸入酒精 3、沾有酒精的涂棒在火焰上灼烧后使其冷却 4、无菌涂棒将样品均匀涂布琼脂培养基表面，适当条件下培养
Technology
Erko Stackebrandt, DSMZ, Braunschweig, Germany
微生物菌种鉴定技术
1923(1)、1925(2)、1930(3)、1934(4)、1939(5)、1948(6)、1957(7)、1974(8)、 1994(9)
伯杰氏鉴定细菌学手册
Bergey's Manogy
产生新的问题：将有越来越多的分类单元不能只以表型 特征进行鉴别，必须结合基因型测定才能鉴定。
微生物菌种鉴定技术
表征（表型）特征
形态特征 生理和代谢特征 生态特征
遗传（基因型）特征
蛋白质比较 核酸碱基组成 核酸序列
分子标尺
多相鉴定技术
实验二微生物的分离纯化ppt课件
鉴别肠道细菌 鉴别水中大肠菌群 鉴别水中大肠菌群
液体培养基分离纯培养
工
稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的
业
微 生
许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表
物 与
现为不生长。
育
种 学
单细胞（孢子）分离
实
验
——
一般采用显微操作仪，在显微镜下进行；操
宜
宾 作难度与细胞或个体的大小成反比；
学
院
（3）形态观察
与 育
面划线接种
种 学
• 浅盘固体接种
实
验
——
宜 宾 学 院
无菌操作：在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行
工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验
宜 宾 学 院
——
工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验
宜 宾 学 院
——
工
业
划线分离
微
生
物
与
育
种
学
实
验
——
宜 宾 学 院
工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验
各大类
3~6月 简便
细菌、酵母菌 6~12月 简便
各大类** 1~2年 简便
产孢子微生物 1~10年 简便 有效
各大类
5~15年 简便 以上 有效
微
生
工
物
业 微
学
生 物 与
实 验
育 种
室
学
的
实 验
常
——
规
宜 宾
操
学 院
作
程
序
培养基特征性变化 蛋白水解圈 明胶液化 由淡红色变成深红色
主要用途 鉴别产蛋白酶菌株 鉴别产蛋白酶菌株 鉴别产脂肪酶菌株
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37℃ 培养
目的菌优势 非目的菌
选择培养基平板 （含牛奶或酪蛋 白唯一C、N源）
目的菌落 菌落周围有透明 蛋白水解圈
例一：分离筛选蛋白酶产生细菌
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
例一：分离 筛选蛋白酶 产生细菌
含牛奶选择培养基目的菌生长平板
营养选择因子：牛奶或酪蛋白 只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌 长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶
三、单细胞（单孢子）分离
采用显微分离法从混杂群体中直接分离单 个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养， 称为单细胞（单孢子）分离法。
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❖ 营养琼脂平板上不能形成菌落 ❖ 分离难度与细胞或个体的大小成反比 个体较小的微生物需采用显微操作仪 较大的微生物可使用毛细管提取
1、利用选择培养基进行直接分离 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
选择培养基
只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
1、利用选择培养基进行直接分离 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
土壤 选择培养基 单细胞 直接分离
❖ 用固体培养基分离、培养
微
❖ 用液体培养基分离、培养
生 物
❖ 单孢子分离
分
❖ 选择培养分离
离 方
❖ 二元培养物分离、培养
法
❖ 无菌技术
微生物的保藏技术
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微生物纯种分离
❖ 将多种混杂微生物，经某种技术或方法 分离成纯种的过程
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上节课知识回顾
❖ 微生物分离纯化方法 ❖ 用固体培养基分离、纯培养
❖ 稀释倒平板法 ❖ 涂布平板法 ❖ 平板划线法 ❖ 稀释摇管法
❖ 用液体培养基分离、纯培养
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
微生物的分离和纯培养 显微镜和显微技术
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分区划线法（蛇形线法）操作图
第一区划线
灭菌接种环
第二区划线
灭菌接种环
第三区划线
灭菌接种环
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分区划线法适用范围： 适用于浓度较大的样品
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连续划线法操作图
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一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养； 单个微生物只在固体培养基上形成菌落； 在液体培养基中不会形成菌落
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同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
个别细胞较大的细菌 原生动物、藻类
营养琼脂平板不能长菌落
如何分离纯培养？ 接种物液体培养基顺序稀释法分离
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培养物在液体培养基中进行高度顺序稀释， 如果经稀释后的同一稀释度的大多数 （95%以上）试管中没有微生物生长，有 微生物生长的试管得到的培养物可能就是 纯培养物。
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一、用固体培养基（营养琼脂平板） 分离纯种
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（一）、微生物纯种分离的原理和方法
微生物样品
分散成单个微生物
某种方法
培养
单菌落
多种混杂
平板
每个菌落为纯种（纯培养）
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Each colony was examined microscopically
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四、选择培养分离
原理
❖ 创造适于目的微生物生长条件 ❖ 促使目的微生物快速生长呈优势菌 ❖ 抑制非目的微生物生长 ❖ 从混杂微生物中分离目的微生物
连续划线法适用范围： 适用于浓度较小的样品
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4、稀释摇管法（dilution shake culture method)
培养严格厌氧微生物
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二、用液体培养基分离纯化培养
单菌落转接培养
纯种（纯培养）
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（二）、纯种平板分离的不同方法
104/ml
103/ml
102/ml
101/ml
从土壤中分离纯微生物
1、涂布平板文档法仅供参（考，s不p能r作e为a科学d依据p，la请勿te模仿m；如e有t不h当o之处d，)请联系网站或本人删除。
纯培养（pure culture）
❖ 在适宜条件下培养纯种获得的培养物 （群体）
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菌落
单个微生物在适宜的固体培养基表面或内 部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可 见的、有一定形态结构的子细胞群体，称 为菌落(colony)。
涂布平板法 稀释倒平板法
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2、稀释倒平板法（倾注平板法）（pour plate method)
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3、平板划线法（streak plate method）
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