79例自然流产绒毛的染色体分析
自然流产者66例绒毛染色体及内分泌因素分析
３３ Ｐ Ｏ患者 血 Ｉｌ的平 均 值 较 正 常妇 女 的 平 均值 高 ， ＦＨ ｌ 而 Ｓ
染 色体正 常者 ３ 例（ ８例 ４ ， ；３例 ４ ，ｖ ， １ １ ６Ｈ １ ６ ｘ ） 其 中， 月经 失 调 者 ｌ ６例 （ １６ ） Ｐ Ｏ ３例 （ １９ ５ ％ ，Ｃ Ｓ １ ４ ．％） 两组 患者 Ｉｌ Ｆ Ｈ．Ｒ Ｐ Ｏ ｌ ，Ｓ Ｐ Ｌ，Ｃ Ｓ及月经 史见表 １ 。 由表 １ 结果 可 以看 出 ， 毛染 色体 正 常 者 的月 经 绒 不 规 律 发生 率 较 高 ， 血 基 础 Ｌ 较 高 ， Ｐ Ｏ 的 其 Ｈ值 且 ｃｓ
作用于卵 泡细 胞 ， 之更 多地 合 成 黄体 酮 ， 持 妊 娠。 使 维 显然 ， 卵泡 的 发 育 和 卵 子 的 成熟 及 排 卵 过 程 中 Ｉｌ 在 ｌ 起着非 常重要 的作用 Ｊ ２。卵 泡期 低水 平 的 Ｌ 值对 卵 Ｈ 泡发育 和孕 卵着床 是 必 须 的 。 已有 研 究 证实 ， 泡 期 卵
人均除外 生殖 器官 的病 变及 内科 合并 症 ， 吸烟酗 酒 无 史及毒 物接触 史 。 ｌ２ 方法 不 完 全 流产 者 刮 宫取 绒 毛 ， 压 榨方 法 ， 用 以秋水 仙素 和 固定 技术制备标 本 。标本 培养后行 染色 体核型 分析 ， 出染色 体 正常 组 和 异常 组 。全 部病 例 分 于流产 之后 的两次 正常 月 经后 的 卵泡 早 期 （ 期 的第 周 ３ ５天 ） 血 ， 放 免 法 测 血 基 础 Ｌ 促 卵 泡 激 素 取 用 Ｈ、 （Ｓ 和催乳 素 （Ｒ ） 平 ； ＦＨ） ＰＬ 水 同时 ， 全部 病 例 行 阴道 超 声检 查 卵巢 形 态， 以确 定 是 否 为 多 囊 卵 巢 综 合 征 （Ｃ Ｓ ＰＯ ） １ ３ 统计 学 处 理 所 得结 果 计 数 资料 用 ２ ． 检验 ， 计 量资 料用组 间 ｔ 验进行统计 学处 理 检
染色体畸变检测在自然流产绒毛组织染色体核型分析中的应用价值
染色体畸变检测在自然流产绒毛组织染色体核型分析中的应用价值【摘要】目的：探讨染色体畸变检测在自然流产绒毛组织染色体核型分析中的应用价值。
方法：选取2019年3月至2020年11月对80例自然流产患者作为研究对象，用随机数字表法将其分对照组和观察组，各40例，对照组接受细胞培养染色体核型检测，观察组接受染色体畸变检测，比较两组患者检测阳性率和检测成功率。
结果：观察组检测阳性率90%、检测成功率92.50%高于对照组70%、65%（X2=5.0000、9.0383，P<0.05）。
结论：临床在分析自然流产绒毛组织染色体核型时可采用染色体畸变检测技术，相比于细胞培养染色体核型检测，可提升检测阳性率和成功率，为研究自然流产原因提供一定参考依据。
【关键字】自然流产；绒毛㢟；染色体核型；染色体畸变；细胞培养女性妊娠后，多种因素均会造成其出现自然流产症状。
大部分学者认为，产妇出现自然流产，其主要因胚胎染色体异常而造成[1]。
但临床用于检测染色体核型的常规方式-细胞培养方式，其检出率非常低，无法为临床研讨产妇自然流产原因提供更有效、直接的研讨依据。
因此，继续探寻检出染色体核型阳性率更高的方式。
有学者提出[2]，染色体畸变检测的阳性率高于细胞培养检测，但目前医学界有干此方面的报告非常少。
现本文共纳入80例自然流产患者分组重点论述此点。
具体报告如下：1.资料及方法1.1一般资料选取2019年3月至2020年11月对80例自然流产患者作为研究对象，用随机数字表法将其分对照组和观察组，各40例。
各患者均接受B超检查显示胚胎发育停止，并排除孕期感染者。
对照组：孕周时间9-13周，平均（11.15±0.65）周，产次1-4次，平均（2.02±0.21）次；孕次1-5次，平均（2.65±0.24）次，年龄20-38岁，平均（26.35±1.25）岁；观察组：孕周时间9-14周，平均（11.25±0.58）周，产次1-5次，平均（2.98±0.25）次；孕次1-5次，平均（2.69±0.22）次，年龄20-39岁，平均（26.30±1.36）岁。
染色体拷贝数变异测序联合STR 分型在
[收稿日期]2021-07-26 [修回日期]2022-07-20[基金项目]安徽省重点研究与开发计划项目(202004j07020004)[作者单位]1.安徽医科大学附属合肥医院(合肥市第二人民医院)检验科,安徽合肥230011;2.安徽医科大学附属妇幼保健院医学遗传中心,安徽合肥230001[作者简介]庞 宇(1996-),男,硕士,检验师.[通信作者]朱健生,硕士研究生导师,主任技师,教授.E⁃mail:593130772@[文章编号]1000⁃2200(2022)12⁃1719⁃04㊃检验医学㊃染色体拷贝数变异测序联合STR 分型在流产物遗传学分析中的应用庞 宇1,2,王朝红2,唐俊湘2,王森林2,朱健生2[摘要]目的:对150例流产物进行遗传学检测,并对结果进行分析,为探究自然流产的遗传学病因积累临床资料㊂方法:选择2020年2-7月在安徽省妇幼保健院妇产科就诊的150例自然流产病人,运用拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV⁃Seq)联合短串联重复序列(Short tandem repeats,STR)分型对流产物进行遗传学检测㊂结果:150例流产物均成功检测,染色体正常71例(47.33%),染色体异常79例(52.67%),其中染色体数目异常56例,占染色体异常总数的70.89%,染色体微重复/微缺失4例(2.67%),嵌合体14例(9.33%),染色体数目合并结构异常3例(2.00%),单亲二倍体2例(1.33%)㊂导致自然流产最主要的染色体异常为染色体数目异常(37.33%),包括染色体非整倍体(32.67%)㊁三倍体(4.67%);其次为嵌合体(9.33%)㊂与自然流产密切相关的染色体异常依次为:45,X㊁16⁃三体;69,XNN㊁21⁃三体;18⁃三体;16⁃三体嵌合体㊂结论:CNV⁃Seq 联合STR 技术适用于流产物染色体异常的检测,可覆盖更多范围的染色体异常,能实现更加准确㊁全面的诊断,对明确自然流产的遗传因素,指导孕妇再次备孕,实现优生优育具有重要的意义㊂[关键词]自然流产;拷贝数变异测序;短串联重复序列;染色体数目异常;染色体结构异常[中图法分类号]R 714.55 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2022.12.023Application of chromosome copy number variation sequencing combinedwith STR typing technique in the genetic analysis of abortionPANG Yu 1,2,WANG Chao⁃hong 2,TANG Jun⁃xiang 2,WANG Sen⁃lin 2,ZHU Jian⁃sheng 2(1.Clinical Laboratory ,Hefei Hospital ,Anhui Medical University ,Hefei Second People′s Hospital ,Hefei Anhui 230011;2.MedicalHeredity Research Center ,Affiliated Maternal and Child Health Hospital of Anhui Medical University ,Hefei Anhui 230001,China )[Abstract ]Objective :To explore the genetic causes of spontaneous abortion and accumulate clinical data by genetic detection and analysis of the 150cases of abortion.Methods :A total of 150patients with spontaneous abortion who underwent in the Obstetrics and Gynecology Department of Anhui Province Maternity and Child Health Hospital from February 2020to July 2020were selected.Copy number variation sequencing(CNV⁃Seq)combined with short tandem repeats(STR)typing technique were used to detect the genetic characteristics of abortion.Results :All 150cases of abortion were detected successfully,71cases were normal(47.33%),79cases were chromosomal abnormalities (52.67%).Among them,56cases (70.89%)had chromosome number abnormality,4cases had chromosome microduplication /microdeletion(2.67%),14cases had mosaicisms (9.33%),3cases had chromosome number and structure abnormality(2.00%),and 2cases had uniparental diploid(1.33%).The main chromosomal abnormality which leading to spontaneous abortion was chromosomal number abnormality (37.33%),including chromosome aneuploidy (32.67%)and triploid(4.67%),followed by mosaicisms(9.33%).The chromosomal abnormalities which closely related to spontaneous abortion were (45,X),trisomy 16,(69,XNN),trisomy 21,trisomy18andmosaic trisomy16.Conclusions :CNV⁃Seq combined with STRtyping technique is suitable for the detection of chromosomal abnormalities in abortion.It can cover more chromosomal abnormalities and also can realize more accurate and comprehensive diagnosis in abortion.It has great significance to diagnose the genetic factors for spontaneous abortion,guide pregnant women to prepare for pregnancy againand realize the[14] LU J,SHEN G,LI Q,et al .Genotype distribution characteristicsof multiple human papillomavirus in women from the Taihu River Basin,on the coast of eastern China[J].BMC Infect Dis,2017,17(1):226.[15] YOU W,LI S,DU R,et al .Epidemiological study of high⁃riskhuman papillomavirus infection in subjects with abnormal cytological findings in cervical cancer screening [J].Exp TherMed,2018,15(5):412.(本文编辑 卢玉清)eugenics.[Key words]spontaneous abortion;copy number variation sequencing;short tandem repeats;chromosome number abnormality; chromosome structure abnormality 胚胎染色体异常是导致自然流产的重要原因之一,占自然流产因素的50%~70%[1],主要为染色体数目异常如染色体三体㊁多倍体㊁X染色体单体等,其次为染色体结构异常如染色体微重复/微缺失㊁染色体嵌合体㊁染色体易位等[2]㊂自然流产不仅对女性的健康造成一定的伤害,而且给社会和家庭增加了负担㊂对流产物的染色体检测,为探究流产的病因,指导孕妇下一次备孕,实现优生优育,具有重要的意义,本研究采用拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV⁃Seq)联合短串联重复序列(short tandem repeats,STR)分型的方法,对150例流产物进行遗传学检测,并对结果进行分析,为探究自然流产的遗传学病因积累临床资料㊂1 资料与方法1.1 一般资料 选择2020年2-7月在安徽省妇幼保健院妇产科就诊的150例流产病人㊂其中初发流产63例,复发流产87例,年龄21~44岁;孕6~ 36+6周,超声诊断为胚胎停育,其中流产组织46份,绒毛104份;经遗传咨询,自愿接受流产的病因学检查,留取流产物(流产组织或绒毛)经处理并保存备用,所有病人均签署知情通知书㊂1.2 方法 1.2.1 流产物的CNV⁃Seq测序 送检的流产组织或绒毛,用0.9%氯化钠溶液反复冲洗,尽量去除母体细胞的污染,放置专用试管内,-20℃冰箱保存㊂选取10mg的流产组织或绒毛,应用Qiaqen QIAamp DNA Blood Mini Kit试验盒,提取基因组DNA,利用Covaris S220超声波破碎仪将DNA打断,文库构建㊁纯化㊁定量㊁DNA混合文库在illumina Nocaseq6000测序仪上进行双端测序,利用Nx Clinical生信分析软件对染色体非整倍体及100kb以上的拷贝数变异(CNV)进行分析,对比至人类基因库[hg19]或[GRCh37],并通过OMIM㊁DGV㊁GLINGEN㊁ClinVar㊁PubMed㊁DECIPHER㊁ISCA㊁NCBI㊁UESC等数据库比对,对检测结果进行判读㊂1.2.2 流产物STR分型检测 把DNA样本进行多重荧光PCR扩增,将其产物在ABI3500Dx遗传分析仪上进行毛细管电泳,检测出不同分型的相对定位,应用Genc Mapper软件对结果进行计算分析㊂2 结果2.1 流产物染色体检测结果 本研究检测流产物150例,均成功检测,检测成功率100%,染色体正常71例(47.33%),染色体异常79例(52.67%)(见表1)㊂2.2 染色体非整倍体㊁多倍体㊁嵌合体检测结果 本研究共检出染色体非整倍体49例(染色体三体38例,X染色体单体11例);多倍体7例(69,XXY, 4例;69,XXX,3例),染色体数目异常在X㊁16㊁21号染色体发生率较高;嵌合体14例,其中16㊁X号染色体嵌合体发生率较高(见表2)㊂表1 不同类型染色体异常的检测结果染色体异常类型具体异常情况n占总数比例/%染色体数目异常染色体非整倍体4932.67多倍体7 4.67染色体结构异常染色体微重复/微缺失4 2.67染色体嵌合体嵌合三体10 6.67嵌合单体2 1.33多条染色体嵌合2 1.33纯合区域单亲二倍体2 1.33两种类型及以上异常染色体数目+结构异常3 2.00合计7952.67表2 150例流产物染色体非整倍体㊁多倍体㊁嵌合体检测结果检测结果n占总数比例/% 45,X117.33 69,XXY4 2.67 69,XXX3 2.00 47,XN,+310.67 47,XN,+43 2.00 47,XN,+52 1.33 47,XN,+1310.67 47,XN,+142 1.33 47,XN,+153 2.00 47,XN,+1610 6.67 47,XN,+185 3.33 47,XN,+2010.67 47,XN,+216 4.00 47,XN,+2210.67 49,XN,+3,+14,+510.67 48,XN,+7,+202 1.33 46,XN/45,X2 1.33续表2检测结果n 占总数比例/%46,XN /47,XN,+32 1.3346,XN /47,XN,+510.6746,XN /47,XN,+610.6746,XN /47,XN,+710.6746,XN /47,XN,+164 2.6746,XN /47,XN,+2110.67多条染色体嵌合体21.332.3 染色体CNV 的检测结果 本研究共检出染色体微重复/微缺失4例(2.67%),同时存在染色体数目㊁结构异常3例(2.00%)㊂涉及1㊁13㊁14㊁17㊁18号染色体,经数据库查询,均存在不同类型的致病性表型(见表3)㊂3 讨论 基于高通量测序的CNV⁃Seq 对流产物染色体的测序,是通过将目标染色体的DNA 剪切成小片段,构建文库,PCR 扩增,以及遗传学信息检测,克服了传统细胞核型技术的染色体制备不良㊁培养失败㊁分辨率低等缺点,对染色体非整倍体和染色体CNV 可以提供更加准确的遗传学信息,但对染色体多倍体㊁单亲二倍体㊁母源性细胞污染的鉴别仍显不足[3]㊂而STR 分型方法是设计荧光引物扩增特定的序列,再进行毛细管电泳,由荧光峰值面积来表达产物扩增的数量,通过等倍基因的剂量变化,来诊断染色体数目异常,对排除母源性细胞污染,以及染色体多倍体㊁单亲二倍体㊁性染色体数目异常的诊断具有快速㊁准确的特点,可弥补CNV⁃Seq 的不足[4]㊂CNV⁃Seq 联合STR 分型方法应用于流产物染色体异常的检测,可覆盖更大范围的染色体异常,能实现对流产物的遗传信息更加准确㊁全面的诊断,为合理备孕提供科学的依据㊂表3 流产物染色体CNV 的检测结果序号年龄/岁孕周/周孕产史就诊原因检测结果致病性分析1298+3G1P0胚胎停育Seq[GRCh37]1q21.1q21.2(145866610⁃147915109)X1发育迟缓,先天性心脏病,面部畸形,成人期精神分裂症23911+5G4P1胚胎停育Seq[GRCh37]18p11.32(1⁃1553527)X1发育迟缓,心脏畸形,前脑无裂畸形3266+6G1P0稽留流产1:Seq [GRCH37]13q31.2q34(87778439⁃15169878)X12:3q25.32(158047415⁃158583714)X3小头畸形,心脏畸形4289+4G1P0稽留流产1:Seq[GRCh37]14q11.1q33.33(18944037-107349540)X32:45,X智力低下,发育迟缓,肌张力低下,特纳综合征5319+5G1P0胚胎停育1:Seq [GRCh37]17P12(14076298-15490260)X12:47,XN,+22发育迟缓,肾脏畸形,智力低下,22⁃三体综合征6408+5G5P2胚胎停育1:Seq [GRCh37]17p12(14080405⁃15473084)X32:46,XN /47,XN,+22Chareot⁃Marie Tooth 病7349+6G5P2胚胎停育Seq [GRCh37]22q11.21(1888423⁃21524732)X1DiGeorge 综合征 本研究共检出染色体异常79例(52.67%),其中染色体数目异常56例,包括染色体非整倍体49例;三倍体7例;嵌合体14例;染色体微重复/微缺失4例;同时存在染色体数目㊁结构异常3例;单亲二倍体2例㊂本研究的结果提示:导致自然流产最主要的染色体异常为染色体数目异常(37.33%),其中主要是染色体非整倍体(32.67%);其次为嵌合体(9.33%)和三倍体(4.67%)㊂与自然流产密切相关的染色体异常依次为:45,X㊁16⁃三体;69,XNN㊁21⁃三体;18⁃三体;16⁃三体嵌合体㊂在染色体异常中的占比依次为13.92%㊁12.66%㊁8.86%㊁7.59%㊁6.33%㊁5.06%㊂相关的临床表现为:69,XNN,常于孕早期出现流产,胎儿可表现为先天性心脏病,肾脏畸形㊁脑积水㊁脑部畸形和脊髓脊膜膨出等;45,X,表现为特纳综合征,胎儿发育迟缓,身体矮小,先天性性腺发育不良等,部分胎儿发生孕早期流产;16染色体三体,表现为早孕期胚胎停育㊂其他染色体三体也有表现为不同程度的,多样性的胎儿畸形,胚胎停育㊁胎儿宫内生长发育迟缓等临床表现,但检出率较低㊂NIKITINA 等[5]分析了563例自然流产物染色体,染色体正常为296(52.6%),染色体异常为267(47.4%);导致自然流产最主要的染色体异常依次为非整倍体㊁三倍体等,且先前胚胎具有异常核型的孕妇再次受孕后,发生复发流产的频率仍很高㊂因此,自然流产物的遗传学检查,对指导再次妊娠具有积极意义㊂本研究中染色体嵌合体检出14例(9.33%),分布于3㊁5㊁6㊁7㊁16㊁21㊁X号染色体,其中16号染色体三体嵌合体检出率率最高(2.67%)㊂16号染色体三体嵌合主要是胚胎早期 三体自救”形成单亲二倍体,或为16⁃三体/16⁃二体的复合体,临床表现为:胎儿宫内生长受限㊁胚胎停育㊁先天性心脏病㊁多脏器畸形等[6]㊂嵌合体的形成可能会增加自然流产的发生率,且嵌合体中异常核型比例越高,临床症状就越明显[7]㊂单亲二倍体可能因涉及遗传印迹基因㊁隐性基因纯合突变等,使胎儿出现各种临床综合征,表现为胎儿宫内生长受限㊁器官畸形㊁胚胎停育等临床症状㊂本研究中染色体微重复/微缺失以及同时合并染色体数目异常的共7例(4.67%),均存在不同类型的致病性表型㊂其中22q11.2微缺失可能导致DiGeorge综合症㊁腭心面综合症㊁TaKao综合症等,临床表现包括多种先天畸形:先天性心脏㊁胸腺发育不全㊁甲状旁腺功能减退和/或面部畸形㊂随着时间的推移可能出现的其他临床问题是自身免疫㊁肾功能不全㊁发育迟缓㊁胚胎流产㊁恶性肿瘤和神经系统表现,如精神分裂症等[8]㊂17q12微重复涉及Chareot⁃Marie Tooth病1A型的发生以及压迫麻痹性神经病变,表现为一种慢性进行性肌萎缩症[9]㊂1q21.1微缺失综合症表现为小头畸形㊁癫痫发作㊁发育迟缓和各种先天性异常,如心脏异常和泌尿生殖系统异常等,以及成人期精神分裂症的发生相关[10]㊂18p11.32微缺失最常见的特征包括严重程度不一的智力低下㊁身材矮小㊁流产㊁前脑无裂畸形㊁颅面畸形以及言语和认知发育迟缓㊂其他较少见的临床症状包括行为障碍㊁心脏畸形㊁肌张力障碍㊁生长激素缺乏和自身免疫性疾病[11]㊂染色体CNV也是导致自然流产的重要因素[12-13],但其检出率较染色体数目异常低㊂如检查结果为致病性CNV,还需进一步明确其为新发突变,还是来源于父母㊂对于检查结果为非致病性的CNV,可能应寻找CNV遗传因素之外的自然流产病因如精子畸形㊁妇科疾病㊁内分泌疾病㊁感染㊁药物㊁化学毒物㊁自身免疫疾病等,可为再次备孕的产前诊断㊁遗传咨询提供有价值的临床资料㊂综上所述,染色体非整倍体是自然流产的主要遗传学原因㊂流产物的遗传学的检测,仍需更多的样本量的临床研究㊂对流产物染色体易位㊁倒位㊁单基因病等检测仍面临着一定的困难,仍需选择更多精准的检测方法,避免漏检㊂对流产物染色体异常的病人,还应结合夫妻双方染色体的检测,从而明确染色体异常的来源,指导再次妊娠㊂总之,对流产物的遗传学检测可以从基因层面揭示自然流产的病因,对提高生育质量,减少出生缺陷,实现优生优育具有重要的意义㊂[参考文献][1] YANG L,TAO T,ZHAO X,et al.Association between fetalchromosomal abnormalities and the frequency of spontaneousabortions[J].Exp Ther Med,2020,19(4):2505.[2] RAJCAN⁃SEPAROVIC E.Next generation sequencing in recurrentpregnancy loss⁃approaches and outcomes[J].Eur J Med Genet,2020,63(2):103644.[3] ZHANG J,TANG X,HU J,et al.Investigation on combined copynumber variation sequencing and 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79例绒毛细胞培养染色体核型结果分析
79例绒毛细胞培养染色体核型结果分析发表时间：2014-05-12T09:35:21.390Z 来源：《医药前沿》2014年第3期供稿作者：韦德宁覃柳群[导读] 侵入性产前诊断有可能对母体或胎儿造成不同程度的损害，但是由于其直接分析胎儿的材料，故绒毛、羊水和脐带血穿刺依然是目前产前诊断的金标准。
韦德宁覃柳群（广西柳州市妇幼保健院检验科广西柳州 545001）【摘要】目的探讨绒毛染色体培养分析方法用于产前诊断的临床意义，以期对产前诊断咨询有所支持。
方法取2011年11月至2013年12月在我院产检门诊共79例孕早期具有相应产前诊断适应征孕妇，于孕10-14周B超引导经腹抽取绒毛，用培养法进行染色体核型分析。
结果 79例绒毛样本，培养成功76例（3例培养失败，无贴壁细胞生长），培养成功率为96.20%（76/79），检出染色体异常核型11例，其中5例45,XO，2例21三体，2例嵌合体，1例69，XXY，1例47，XN,+9。
结论绒毛染色体培养法制备方法简单、技术稳定、结果可靠，可用于胎儿染色体疾病的产前诊断，是孕早期产前诊断的有效方法，绒毛活检术在产前诊断领域应用前景广泛，与羊膜腔、脐带血穿刺术相比较有一定优势，在条件许可的实验室应尽可能开展。
【关键词】产前诊断绒毛染色体异常产前咨询【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）03-0140-02侵入性产前诊断的方法应根据孕妇的孕周来决定，孕早期（11-14周）一般采取绒毛，而孕中期、晚期则多采用羊膜腔穿刺或脐带血穿刺来采集羊水、脐血标本。
人的绒毛细胞由受精卵发育分化的滋养层细胞及绒毛间质的胚外中胚细胞组成，绒毛细胞与胎儿组织同源，通过绒毛检测，可客观反映胎儿情况，绒毛既可以直接制片进行染色体的观察，也可以经培养制备染色体，进行产前诊断。
绒毛活检由于诊断时机更早，临床应用的意义更大。
本院2011年11月开展绒毛染色体培养，对符合产前诊断指征的孕妇，于早孕期11-14周行B超引导下经腹取绒毛组织进行培养，取得良好效果，现将本院开展情况报道如下：1 一般资料与方法1.1 一般资料2011年11月至2013年12月到我院产检门诊就诊共79例孕早期具有相应产前诊断适应征孕妇，孕妇年龄21-44岁，孕周10-14周，B超引导经腹抽取绒毛，用培养法进行染色体培养分析。
流产绒毛细胞染色体分析规范流程
1 检验目的和方法1.1 检验项目：流产绒毛细胞染色体制备及分析。
1.2 检验方法:培养瓶法，G显带2 检验原理和检验目的2.l 检验原理绒毛细胞由受精卵发育分化的滋养层细胞及绒毛间质中的胚外中胚层细胞组成,绒毛细胞和胎儿组织同源,通过绒毛检测，可客观反映胎儿情况。
绒毛既可以直接制片进行染色体观察,也可以经培养制备染色体，进行产前诊断。
2.2 检验目的用于胚胎停止发育的染色体诊断，规范流产绒毛细胞染色体制备程序，获得足够的染色体核型进行分析，保证及时准确的发出报告。
3检验前程序3.1 绒毛采集要求3.1.1无菌条件子啊吸取流产绒毛组织少量放入无菌离心管内，加入适量无菌生理盐水保存样本。
3.1.2采集前核对患者姓名、性别、年龄以及离心管上的标签。
3.1.3严格执行各种操作技术常规及无菌技术，染色体标本采集、交接过程应防止污染。
3.2 拒收样本的规定3.2.1接收标本时应注意核对装有绒毛无菌管上的患者是否一致，发现错误应及时拒收标本并与采集者取得联系。
3.2.2检查绒毛标本是否符合实验要求，所取组织是否为蜕膜等。
不符合要求将标本退回，通知临床医生，并登记在《不合格标本登记本》。
3.2.3检查合格后，在产前诊断系统上记录。
3.3 让步标本的规定3.3.1培养过程中发现的轻度污染；3.3.2绒毛量少于5mg或未见典型绒毛组织等。
上述几种情况均视为让步条件，应先接收样本并接种，待标本处理完毕，确定是否能制备出足够多的能满足分析要求的核型再作进一步处理。
若核型数量不足或质量不理想，应及时联系手术医师择期重新抽取样本并培养。
3.4 样本储存规定3.4.1采集的样本应常温下及时运送至实验室进行接种。
3.4.2标本采集后应尽快接种培养。
3.4.3未能当天进行接种的样本应放于4℃冰箱中，保存时间不超过3天。
4 实验用品酒精灯，烧杯，天平，离心机，CO2培养箱，载玻片，玻片盒，光学显微镜，灭菌注射器，离心管，吸管，量简，培养瓶，试剂瓶，染色缸，剪刀，镊子，手术刀，培养皿等5 实验试剂5.1 培养基：GBICO AmnioMAX-II COMPLETE 羊水培养基,BIO-AMF-2 羊水培养基。
自然流产患者绒毛EVTs的基因芯片初步分析
胚胎滋养细胞在妊娠早期向绒毛和绒毛外两个方向分 化，其中只有绒毛外滋养层细胞（Extravillous trophoblast cells， EVTs）具有侵袭能力。EVTs 与子宫内膜细胞接触粘附，降解 细胞外基质，迁移和侵入子宫蜕膜，使胎盘锚着在子宫上； EVTs 还侵入母体子宫螺旋动脉，替代和重塑螺旋动脉的内 皮细胞层，使螺旋动脉管腔扩大，为胎盘和新生血管提供充 足的血液[1，2]。EVTs 的侵袭能力决定了胚泡的侵袭性和胎盘 的形成，其“有控性侵袭”行为的改变直接影响胎盘的形成和 胚胎的发育。因此，研究自然流产患者 EVTs 与正常 EVTs 之 间基因表达谱的变化有利于寻找 EVTs 异常侵袭和自然流产 的发生机制。本文中我们利用人类全基因组芯片 U133 plus2.0， 以正常 EVTs 为对照，检测自然流产绒毛 EVTs 的基因表达 谱变化，并对差异基因进行功能分析，以期找出 EVTs 异常侵 袭和自然流产发生的新机制。 作者介绍：余秋波（1976- ），男，博士，
流产有关。
【关键词】自然流产；EVTs；侵袭；基因表达谱
【中国图书分类法分类号】R714.21
【文献标识码】A
【收稿日期】2009- 04- 28
Expression profile analysis of human spontaneous abortion extravillous trophoblast cells
重庆医科大学学报 2010 年第 35 卷第 1 期 （Journal of Chongqing Medical University 2010. Vol.35 No.1）
— 19 —
制备及芯片（Affymetrix）杂交扫描。 1.2.3 数据提取和差异表达基因筛选芯片 信号经 GCOS1.2 软件处理，得到 Signal Log Ratio，即实验组（自然流产绒毛）与 对照组（正常绒毛）比值取“Log2”后的值；差异基因筛选标准 为 Log- Ratio≥2（上调）或 Log- Ratio≤- 2（下调）。 1.3 基因芯片结果验证
自然流产遗传病因的高通量测序检测-医学遗传学论文-基础医学论文-医学论文
自然流产遗传病因的高通量测序检测-医学遗传学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——遗传病论文（行业热点范文8篇）之第八篇摘要：应用高通量测序技术(HT-NGS,High throughput-next generation sequencing technologies)研究自然流产发生的遗传学病因分布情况。
方法提取孕早期流产绒毛组织或孕中期流产胎盘组织,裂解细胞后提取DNA。
采用高通量测序技术检测染色体异常图谱。
结果共检测174例流产组织,诊断成功率100%。
诊断正常核型110例,占63.2%,女男比例1:1.39。
诊断染色体数目异常例,占总病例的36.8%。
其中45,X 14例,占数目异常的21.9%;21-三体10例,占数目异常的15.6%;16-三体、14-三体和22-三体各5例,分别占数目异常的7.8%;18-三体和13-三体各4例,分别占数目异常的6.3%;69,XXX、69,XXY及3-三体各2例,分别占数目异常的3.1%。
诊断CNV81例,占46.6%。
其中有临床意义的28例,占16.1%,无意义及意义不明的占30.5%;正常核型合并CNV58例,占CNV总数的71.6%,染色体数目异常合并CNV23例,占CNV总数的28.4%。
其中1例患者检测到13号染色体大段缺失。
174例组织中,早期妊娠135例,其中染色体数目异常61例,占早期妊娠病例的45.2%;检测46,XN 74例,占早期妊娠病例的54.8%。
结论高通量测序技术为发展的新技术,可用于任何孕期诊断。
其取材量少,检测成功率高,快速、覆盖面广,但缺点是价格贵,对于平衡易位无法诊断。
关键词：自然流产,高通量测序,拷贝数变异自然流产与遗传病因密切相关,应用遗传学方法检测流产组织的遗传学异常对于研究流产原因的具有重要意义。
继G显带核型分析、荧光原位杂交技术应用于临床后,高通量基因测序技术研究和应用也日益受到重视,成为更有效的自然流产遗传病因检测方法。
71例自然流产胚胎组织染色体微阵列检测结果分析
71例自然流产胚胎组织染色体微阵列检测结果分析周方元;李艳【摘要】目的:评估染色体微阵列分析技术(CMA)对自然流产病因分析的临床价值.方法:选取2017-10-2018-03武汉大学人民医院就诊的自然流产患者71例,收集流产的绒毛或胎儿组织.根据流产时孕龄,将受检者分为早期流产组(n=49)和晚期流产组(n=22);根据受检者此次流产之前是否具有流产史,将受检者分为有流产史组(n=49)和无流产史组(n=22);根据受检者是否为辅助生殖技术(ART)受孕,将受检者分为ART组(n=14)和非ART组(n=57).采用CMA对流产绒毛或胎儿组织进行染色体组拷贝数变异检测,分析其结果并比较各组的异常率差异.结果:CAM技术成功获得结果71例,检测成功率为100.00％,染色体异常31例,异常率43.66％;早期流产组中染色体异常率显著高于晚期流产组(57.14％ vs 13.64％,P=0.001);有流产史组异常率显著高于无流产史组(55.10％ vs 27.27％,P=0.03);ART组染色体异常率与非ART组的异常率无明显差异(42.86％vs45.45％,P=0.946).结论:染色体异常是自然流产的主要原因,应用CMA检测技术,可以为自然流产原因的分析提供重要遗传学信息.【期刊名称】《微循环学杂志》【年(卷),期】2018(028)004【总页数】4页(P57-60)【关键词】染色体微阵列;自然流产;染色体异常;辅助生殖技术【作者】周方元;李艳【作者单位】武汉大学人民医院检验科,武汉430060;武汉大学人民医院检验科,武汉430060【正文语种】中文【中图分类】R714.21;R446.11+3自然状态(非人为目的造成)发生的流产称为自然流产。
在所有临床确认的妊娠中，自然流产的发生率约为15%[1]。
发生在12周以前的流产定义为早期流产，妊娠12周至不足28周的流产定义为晚期流产。
其中连续自然流产2次以上称为复发性流产[2]，在育龄期妇女中发生率为4.1%[3]。
自然流产与绒毛染色体的关系
２ ｍ Ｌ ３ ： １ （ 甲醇 ： 冰 乙酸 ） 固定 液 预 固定 、 固定 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ； 离
２ 结 果
２ ０ １ ２ 年 ９月孕妇 ２ ７ ３ 例。以 自然流产 ， 因胚 胎停 止发育 予手术清官 的孕妇 １ ２ ３例为 观察组 ， 孕妇年 龄 ２ ２～３ ９
岁， 平均（ ２ ９ ． ４± ０ ． １ ７ ） 岁； 孕 周 为 ６～ １ ４周 ， 平 均（ １ ０ ． ３±
．
３ １ ４ ８ ．
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竺
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自然 流产 与绒 毛 染 色体 的关 系
潘倩 莹 ， 孙筱 放 ， 孔舒 ，王 鼎 ， 赖 炜 强
广州 医科大学 附属第三 医院妇产科研究所实验部 、 广东省产科 重大疾病重 点实验 室（ 广州 ５ １ ０ １ ５ ０ ）
助诊 断， 并对培养成功的绒 毛细胞制备 染 色体及核 型分析。结果 观 察组 １ ２ ３例 患者绒毛培 养成功 １ ２ ０例 ， 其中 染色体异 常共 ６ ５例 ， 异常检 出率 ５ ４ ． １ ５ ％， 检 出的染色体异常类型有 ： 常染色体 三体 ３ ６例 （ ３ ０ ． ０ ０ ％） 、 性 染 色体异
【 关键词 】 自然流产 ； 绒毛染 色体 ； 临床研 究
自然 流产是妇产 科常见病 与疑难 病 ， 因其病 因 尚 未明确 ， 而且涉及方 面广泛 ， 是 困扰妊娠妇女 与临床医 生的难题 。近年 为 了开展计划 生育优 生优 育 ， 临床开 始从 基 因学人 手 ， 探讨 自然流 产与绒毛染 色体异 常的 关系， 使得绒 毛染色体在 自然流产 中越来越受关 注 ， 而
早期自然流产胎儿绒毛细胞培养及染色体核型分析
早期自然流产胎儿绒毛细胞培养及染色体核型分析梁彩红禤洁甜汤丽霞杨光（广东省佛山市第一人民医院临床医学研究所，佛山市528000）【摘要】目的探讨早期自然流的原因及流产胎儿绒毛染色体核型检查的意义。
方法应用长期培养法对60例早期自然流产的胎儿绒毛组织进行绒毛细胞培养，并对培养成功的绒毛细胞制备染色体及核型分析。
结果60例自然流产的绒毛组织中绒毛细胞培养成功56例（93．3%），56例中检出异常核型32例（57．1%），其中常染色体三体16例、多倍体6例、嵌合体6例、性染色体单体2例、结构异常2例；正常核型24例（42．9%），其中男性核型5例、女性核型19例。
结论胚胎染色体异常是早期自然流产的主要原因，早期流产胎儿绒毛染色体检查有利于查明流产的原因，合理指导下次妊娠。
【关键词】流产；绒毛细胞；染色体；核型分析【中图分类号】R714．21【文献标识码】A【文章编号】0253-4304（2011）06-0691-03Chorionic Villus Cell Culture and Analysis on Chromosomal Karyotype in Early Spontaneous AbortionLIANG Cai-hong，XUAN Jie-tian，TANG Li-xia，YANG Guang（Institute of Clinical Medicine，the First People＇s Hospital of Foshan City，Guang dong，Foshan528000，China）【Abstract】Objective To study the cause of early spontaneous abortion and the value of chromosomal karyotype analysis of the chorionic villus samples．Methods The chorionic villus specimens that were obtained through60cases of early spontaneous abortion were cultured for karyotype analysis．Results Of the60cases，chorionic villus was successfully cultured in56cases（93．3%），and abnormal embryo karyotypes were identified in32cases（57．1%）．16cases were antosomal triploid，6case were multiplod，6cases were mosaic，2cases were sexual chromosome abnormalitie，and2 cases were structural aberrations；normal karyotypes were identified in24cases（42．9%），5cases were males and19 cases were females．Conclusion Embryo chromosomal abnormality is a major cause of early spontaneous abortion，and karyotype analysis of the villus helps identify the causes of abortion and ensure the success of the next pregnancy．【Key words】Abortion；Chorionic villus；Chromosome；Karyotype analysis自然流产是临床妊娠最常见的并发症之一，且流产绝大部分是发生在怀孕早期（孕15周以内）［1－2］。
基于高通量测序技术的稽留流产绒毛染色体研究
基于高通量测序技术的稽留流产绒毛染色体研究【摘要】现如今，我国二代测序技术获得了显著提升，高通量的基因测序技术也得到了显著的发展，它能够一次对几十万甚至是几百万个DNA分子进行有效的序列测定。
并且其相比传统测序技术更为简单、准确、全面、快速，现在已经在临床上大规模的开始应用，特别是在胚胎植入前使用这种方法进行诊断诊断。
本文将稽留流产妇女绒毛染色体检测应用高通量基因测序技术，有效为稽留流产的病因学研究积累数据，为指导稽留流产的妇女再生育提供遗传学的依据。
【关键词】高通量测序技术；稽留流产；绒毛染色体；检测；研究目前，有资料显示，自然流产出现的概率以及达到了临床妊娠的15%-20%左右，通常会出现在患者的怀孕早期[1]。
导致出现自然流产的原因有很多，比如感染、环境、遗传、免疫以及血型等等诸多的原因。
因此，就需要能够及时找到患者出现自然流产的原因，并且采取有针对性的指导措施就是直观重要的。
而且，出现早期流产的患者，有50%都是遗传缺陷造成的，主要患者的胎染色体的结构以及数目出现异常这两个原因。
这就需要可以有效的分析患者的染色体，从而找出其中的根源性问题，避免患者出现再次流产。
1 资料和方法1.1一般资料选取某院妇科在2016年5月～2017年5月收治的因稽留流产行清宫术患者81例，患者年龄在22岁-42岁之间，孕龄为8-16周。
通过彩超在患者流产前进行检查，其胚胎均显示已经停止发育，患者也没有出现感染或者是接触过有毒有害物质。
1.2检测方法首先，对患者完成清宫手术之后，取出患者100毫克的绒毛组织，将其通过生理盐水冲洗五次。
在患者术中在无菌环境之中取出患者100毫克的绒毛组织，通过无菌生理盐水多次冲洗绒毛组织，从而有效清除会对细胞贴壁造成影响的血液成分。
需要注意的是，还需要抽取患者的外周血一份，以备参考。
其次，取出患者10毫克的绒毛组织，并提取其基本组的DNA，然后对提取的DNA浓度和纯度，通过紫外可见分光光度计进行测定。
79例不明原因习惯性流产患者采用联合治疗的临床研究
的理论基础主要在于其抗凝作用 。阿司匹林 是乙酰水杨酸类药 ． 作用 于前列腺素合成过 程中的第一个 合成 酶环氧化酶 ，使血小 板中 Ｐ Ｇ合成酶 乙酰化而 失活 ， 从 而抑制 Ｔ Ｘ Ａ ２的合成 ， 预防微 血栓 形成 ， 改善局部血循环 。 促进 胎心的形成 。因为妊娠本 身就 是一种高凝状 态 ．而且越来越多的证 据也提示 习惯性流 产与胎 盘血管血栓形成和梗死有关 ，从 而导致妊娠过程 中空囊 的形成 （ 下转第 ３ ８页）
曩啊 Ｎ ０ ｒ ６ Ｅ Ｉ Ｇ Ｎ Ｍ Ｅ Ｄ Ｉ Ｃ Ａ Ｌ Ｔ Ｒ Ｅ Ａ Ｔ Ｍ Ｅ Ｎ Ｔ
临 床医 学
７ ９ 例不 明原 因 习惯性流产患者采用联合治疗 的临 床研 究
孙 鹏 达 杨 逸 尘
沈 阳市和平 区妇婴医院 ， 辽宁沈阳
１ １ ０ ０ ０ ５
１ ． ２ ． １ 主动 免疫 所有 患者均于计划妊娠前 ２月进行主动免疫治 疗（ 即淋巴细胞接种） 每２ １ ｄ 进行 １ 次连续 ２ － ３次 。治疗前夫妻
３ 讨 论
均除外传 染性疾病 ，如丈夫患有传染性疾病则采用第 方血液
进行 。具体方法 ： 用 ２支 ５ ｍＬ肝素抗凝管抽取丈夫或第ｉ方（ 需 空腹 ） 血 １ ０ ｍ Ｌ ， 另取 ２支 １ ５ ｍ Ｌ离 心管 每管加入 ５ ｍ Ｌ淋巴细
创立 了对习惯性流产的主动免疫疗法后 ，该法 己为世 界多中心 采用 ，根据周 内外文献报道采用丈夫或者第 方淋 巴细胞的 主 动免疫 治疗后 妊娠成功率可达 ７ ０ ． ０ ０ ％～ ８ ６ ． ９ ６ ％。阿司 林应用
胞层 ， 加 人清洁离心管反复用生理盐水洗涤 ３次 ， 弃除上清后取
经常的流产不 仅给患者 的精 神和 身体 带来严重 的创伤 ， 也
流产细胞染色体核型分析 项目简介
流产绒毛染色体核型检查项目简介
自然流产是妇产科的一种常见病，其发生率约占临床妊娠的15%左右，多数发生于12孕周以内。
诱发自然流产的可能原因众多，包括
1、遗传基因缺陷，染色体异常；
2、母体因素比如母体妊娠期患有严重全身性疾病、生殖器官异常、内分泌异常、
过量吸烟、饮酒、创伤休克等；
3、免疫功能异常；
4、环境因素如化学物质的过多接触等。
大量的文献及研究表明，胚胎染色体异常是自然流产的主要原因。
临床意义
正是由于胚胎染色体异常是自然流产的主要原因，而且主要表现为流产绒毛染色体的数目异常，因此对染色体异常的流产胚胎进行明确判断，将能对至少50%以上的早期自然流产夫妇进行病因确诊，并得到有针对性的明确的生育指导，所以自然流产的孕妇都应该进行流产绒毛染色体的检查。
筛查时期和适应人群
流产妇女在取出流产胚胎时送检绒毛或胎儿组织。
标本采集要求
耗材：标本杯+生理盐水标本：绒毛组织或胎儿组织
备注：12周内，送绒毛组织或整个胚胎；12周以上，取绒毛组织、皮肤组织1*1cm、内脏或心脏血（3ml以上）
临床项目收费标准。
自然流产胚胎绒毛中着丝粒蛋白-H的异常表达与染色体数目异常的相关性研究
自然流产胚胎绒毛中着丝粒蛋白-H的异常表达与染色体数目异常的相关性研究井宣;崔向荣;霍凯;义建伟;李晓芳;刘荣华【摘要】目的探讨自然流产胚胎绒毛中着丝粒蛋白-H (CENP-H)的异常表达与染色体数目异常的相关性. 方法将96例早期自然流产患者的绒毛组织进行FISH检测,将其分为染色体正常组与染色体异常组,进而对两组患者CENP-H的mRHA及蛋白表达水平进行检测分析. 结果 96例早期自然流产患者绒毛标本的FISH检测成功率为100％,其中染色体正常53例,检出染色体异常43例,异常率为44.8％;其中常染色体数目异常26例,发生率为27.1％;性染色体数目异常10例,发生率为10.4％;性染色体合并常染色体异常3例,发生率为3.1％;三倍体及四倍体各2例,其发生率均为2.1％.相比染色体正常组,染色体异常组患者绒毛CENP-H基因mRNA 及蛋白相对表达量均降低,两组差异有统计学意义. 结论染色体数目异常自然流产胚胎绒毛中CENP-H的异常表达可能是引发胚胎染色体异常分离的因素之一.【期刊名称】《中国生育健康杂志》【年(卷),期】2016(027)004【总页数】4页(P331-334)【关键词】自然流产;染色体数目异常;着丝粒蛋白-H;绒毛组织【作者】井宣;崔向荣;霍凯;义建伟;李晓芳;刘荣华【作者单位】030000太原,山西省人民医院检验科;山西省妇幼保健院生殖医学中心;山西省肿瘤医院乳腺外科;太原市中心医院辅助生殖医学中心;临汾市第四人民医院生殖医学科;临汾市第四人民医院生殖医学科【正文语种】中文自发性流产(spontaneous abortion)为妇产科领域常见疾病，发生率占全部妊娠的10%～15%[1]。
引发自然流产的因素很多，其中遗传因素，尤其染色体数目异常是导致自然流产发生的主要原因，占到所有致病因素的50%～60%[2-4]。
染色体数目异常与着丝粒结构和功能异常、纺锤体检查点缺陷、端粒异常等因素有关。
自然流产绒毛染色体核型分析的研究现状
文章编号：1003－6946（2012）06－431－04自然流产绒毛染色体核型分析的研究现状李阳洋1综述，章勤2审校（1．浙江中医药大学第一临床医学院，浙江杭州310053；2．浙江省杭州市中医院，浙江杭州310007）【摘要】自然流产的发病率日趋升高，其主要原因为染色体异常，分析胚胎染色体的核型对寻找自然流产的原因具有重要意义。
绒毛细胞染色体制片的培养法成功率高于直接法，但培养法的操作难度及成本亦高于直接法；自然流产的绒毛染色体异常核型中以非整倍体的发生最多见，其中16三体约占三体的1/3；自然流产、辅助妊娠后流产的绒毛染色体异常率分别都高于人工流产的绒毛染色体异常率；对于自然流产绒毛染色体异常与支原体、衣原体感染相关性及自然流产次数、年龄、孕周及胚胎性别与绒毛染色体核型的关系均尚无明确结论。
目前类似以上通过绒毛染色体分析寻找自然流产原因的研究很多，但可以治疗的原因并不多见，故还需结合临床的实验指标，寻找与绒毛染色体的相关性，进一步提高染色体分析的意义。
【关键词】自然流产；绒毛；染色体异常中图分类号：R715.5文献标识码：B自然流产是妇产科的一种常见病，近年来的调查估计其发生率约占临床妊娠的15% 20%，其中多数为早期流产（妊娠在12周前终止者）。
诱发自然流产的原因很多，涉及遗传、解剖、免疫、内分泌、感染甚至环境及其他未知因素等，其中遗传因素在自然流产的发生中起了相当大的作用。
本文综述分析了近几年关于自然流产绒毛染色体核型分析的研究现状。
1绒毛细胞培养及染色体分析技术在流产中的应用自然流产其病因可能有以下几种：遗传因素（染色体异常、遗传印记异常、单亲二倍体、偏斜X-染色体失活、单基因突变等）、子宫解剖异常（双角子宫或中隔子宫等）、免疫因素（如封闭抗体缺乏）、内分泌因素（孕激素分泌不足、前列腺素增多、甲状腺功能低下等）、感染因素（如TORCH感染）、血栓形成倾向、环境因素（情绪受强烈刺激）等，在这些因素当中，染色体异常占50% 60%［1］，为主要因素。
运用mlpa对自然流产绒毛组织的遗传学分析
运用MLPA对自然流产绒毛组织的遗传学分析邓桂林 马庆庆 乔印玲 卢 韦 苏远华【中图分类号】 R714.21 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 1671-8054（2020）01-0116-02【摘 要】 目的：运用MLPA对自然流产绒毛组织的遗传学进行分析，研究绒毛组织的染色体异常与自然流产的关系。
方法：选取医院收治的66例自然流产患者为研究对象，流产绒毛组织为观察组，同时选择66例正常绒毛组织为对照组，分别采用染色体核型分析以及MLPA技术进行染色体非倍体的诊断，分析各例患者流产的原因与染色体异常的相关性。
结果：66患者通过MLPA技术检测成功率为100%，通过染色体核型分析检测成功率为74.24%；自然流产患者的染色体异常率为9.09%，正常柔毛组织染色体变异率为0%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。
结论：染色体异常是导致胚胎自然流产的重要因素，针对此类患者，建议夫妻双方行染色体检查，从而为指导下次妊娠提供重要的科学依据。
【关键词】 MLPA 自然流产 绒毛组织 染色体异常 嵌合率随着我国二胎政策的全面开放，妊娠妇女大幅度增加，高龄孕妇增多，流产患者也在不断增加。
研究显示，我国流产患者中50%以上的流产原因为染色体异常，在染色体异常流产患者中染色体非整倍数异常又占绝大多数[1~2]，因此研究绒毛组织的染色体异常与自然流产的关系具有重要的作用。
本医院为了探究MLPA技术在查明流产原因方面的临床价值，运用MLPA对自然流产绒毛组织进行染色体非倍体的诊断，以便指导下次妊娠，减轻患者心理负担。
现报道如下：1 资料与方法1.1 一般资料 选取本医院于2017年6月-2019年2月收治的66例自然流产患者作为研究对象，将其流产绒毛组织作为观察组，同时选择66例来我院体检为正常生育的健康孕妇的绒毛组织作为对照组，且经过染色体检测为正常核型，所有患者年龄20~45岁，平均年龄（32.47±2.14）岁，孕龄7~13周，平均孕龄（8.37±1.51）周。
染色形态学分析多部位异常数79
染色形态学分析多部位异常数79一种典型的隐性遗传病，它在新生儿中的发生率约占1/600。
这些疾病对于健康家庭而言可能无关紧要，然而对于患者而言却是痛苦不堪。
那么有没有办法把患者身上的异常染色体区别开来呢?答案当然是肯定的。
只需进行特殊处理就可以了!科学家们已经找到了一个很好的途径——染色形态学分析。
近年来，随着医疗水平的提高，各种先天畸形的诊断也越来越准确，其中最重要的检查手段之一便是染色体核型分析。
通过观察染色体的数目及结构，我们可以判断出该细胞所属的物种，从而推测出该物种的起源与演化历史;同时还可以根据某些细微差别，如缺失、易位等，判断出细胞内部的异常情况，并且预知未来的表现。
例如，人类的21号染色体长臂上存在一条称作“三臂染色体”的片段，它包括两条姐妹染色单体(X)和一条非姊妹染色单体(Y)，因此被认为具有独立的功能。
但是，即使是拥有了精密的仪器设备，染色体核型分析仍旧是一项费力又耗时的工程。
大量实验证明：在动植物细胞中，染色质呈丝状，每条染色质都带有许多小的圆形颗粒，叫做染色体。
染色体主要成分是蛋白质，外面包裹着一层由 DNA 组成的双螺旋结构的核心，核心周围绕着一圈由 RNA 组成的环状结构，叫做核糖体。
这样，染色体就像一张网络图，连接着众多的遗传信息。
人类胚胎细胞培养是以细胞为基础的分离、纯化和鉴定染色体的技术。
但是，受限于技术原因，利用胚胎干细胞研究染色体异常尚难取得令人满意的效果。
因此，人们希望借助于显微镜下的染色体核型分析，直接观察活细胞中染色体的形态结构，从而获得更加清晰的图像资料。
采用人工方法将早期正常生殖细胞中含有的非整倍体细胞或由突变产生的多倍体细胞除去，再移入培养液中继续培养，待其恢复至二倍体后，再挑选出其中的单倍体细胞进行培养，最终筛选出正常的配子细胞。
这样，就可以避免自然界中雌雄配子相遇的偶然性，保障人类生育的稳定性。
染色体微阵列技术在85例自然流产胚胎组织染色体检测中的应用及致病基因分析
染色体微阵列技术在85例自然流产胚胎组织染色体检测中的应用及致病基因分析陈雨露;白云;高玉青【期刊名称】《中国医学工程》【年(卷),期】2024(32)4【摘要】目的探讨染色体微阵列技术在85例自然流产胚胎组织染色体检测中的应用及致病基因。
方法选择2021年10月至2023年1月于周口市中心医院生殖医学中心收治的自然流产并行清宫术的流产样本85例,对流产的绒毛或胎儿组织予以采集,并采用染色体微阵列分析技术检测。
分析40例染色体数目异常的染色体微阵列检测结果,早期流产组和晚期流产组流产组织的染色体异常率,流产史组和无流产史组流产组织的染色体异常率,辅助组和未辅助组流产组织的染色体异常率,7例染色体结构异常的染色体微阵列检测结果。
结果85例研究对象均检测成功,染色体异常占比55.29%(47/85),染色体数目异常占比47.06%(40/85),染色体结构异常8.24%(7/85);其中染色体数目异常中三倍体例数为28例,占比70.00%(28/40)最高,染色单体为5例,占比12.50%(5/40),多倍体3例,占比7.50%(3/40),嵌合体2例,占比5.00%(2/40),常染色体缺失2例,占比5.00%(2/40);早起流产组流产组织的染色体异常率比晚期流产组高(χ^(2)=7.720,P=0.005);流产史组流产组织的染色体异常率比无流产史组高(χ^(2)=4.942,P=0.026);辅助组与未辅助组流产组织染色体异常率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.223,P=0.636);7例染色体结构异常中,拷贝数变异的样本有4例,杂合性缺失的样本有1例,同时存在上述情况的样本有2例;共发现流产相关基因6个,分别为NFATC1、ERCC6L、RPS4X、KANK1、SMARCA2、PMP22。
结论自然流产的主要原因在于染色体异常,染色体异常主要与孕周、既往是否存在流产史相关,而与是否采用辅助生殖技术无关,采用染色体微阵列技术检测可明确自然流产的原因,其中NFATC1、ERCC6L、RPS4X、KANK1、SMARCA2、PMP22等的基因变异可能是自然流产的致病基因。
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79例自然流产绒毛的染色体分析
李 凡,温庆荣,郑胤强,马 莉,郭 芸
(赣州巿妇女儿童医院,江西 赣州 341000)
摘 要:目的:探讨自然流产与染色体异常的关系,为临床提供科学依据。
方法:对79例自然流产绒毛采用直接
法或培养法制备染色体,常规制片,G 显带,染色体核型分析。
结果:检出染色体异常42例;异常率为53.16%。
结论:染色体异常是导致自然流产的重要因素之一。
进行染色体检查,对自然流产的病因、诊断及再次妊娠具有重要的指导意义。
关键词:自然流产;染色体异常中图分类号:R 715.5 文献标识码:A 文章编号:1001-5779(2009)03-0376-02
自然流产是妇科的常见病之一。
合子内在的缺陷是引起胚胎早死及自发流产的重要原因。
我室对79例自然流产绒毛进行染色体分析,现报告如下。
1 对象与方法
1.1 对象 79例绒毛来自因有自然流产先兆,前来我院妇科门诊、遗传门诊就诊以及在妇科病房住院的患者,均B 超检查提示:/胚胎停育0或难免流产,而行清宫术(流产胚胎为孕37~84天,孕妇年龄20~36岁)1.2 方法 在无菌负压吸宫术中获得绒毛组织,置无菌生理盐水中进行挑选,选出优质绒毛组织5~7m g 剪碎置10mL 的离心管,加入1%枸橼酸钠3~4mL 及秋水仙素(最终浓度为0.5~0.6L g /mL)混匀,置37e 水浴箱中15m in ,取出加固定剂(甲醇B 冰醋酸=3B 1)0.5mL 混匀,以1500r /m i n 离心
3m i n ,弃上清液。
加固定液3mL 混匀,置室温固定
15m i n ,离心弃上清液。
再重复固定一次。
加60%冰醋酸数滴后再加固定剂数滴,离心弃上清液。
加新配固定剂数滴混匀,滴于预热玻片上,56e 烤箱烤片14h 。
G 显带,核型分析3个,计数20个以上。
结构异常或嵌合体增加计数及分析。
同时,对79例夫妇进行外周血染色体分析。
按照I SC N (1995)描述核型。
2 结 果
在对79例绒毛染色体进行核型分析中,正常核型37例,异常核型42例,异常率为53.16%。
常染色体数目异常32例、结构异常3例;性染色体数目异常4例、结构异常1例;三倍体2例。
绒毛染色体异常核型见表1。
表1 绒毛染色体异常核型
序号染色体异常核型
例数(%)1
45,X
49.5247,XX (XY ),+237.1347,XX (XY ),+337.1447,XY,+712.4546,XX /47,XX ,+8
12.4647,XX,+14
24.8747,XX (XY ),+16(46,XY /47,XY,+16)1330.9847,XY,+1712.4947,XX,+21(47,XY,i nv(9),+21)24.81047,XX (XY ),+22(46,XY /47,XY,+22)614.21169,XXY
24.81246,XY,i nv(9)/46,XY,inv(9),-7,+der(7)t(7;13)(q35;q13)12.41346,XX,-13,+t(13;13)12.41446,XY,-13,+der(13)t(5;13)(q22;p13)12.41546,XY,Y \18
12.4合计
42
100.0
第29卷第3期 赣 南 医 学 院 学 报 Vo l .29NO .32009年6月 J OURNAL OF GANNAN M EDI CAL UN I V ERSI TY JUN .2009
在对79例夫妇进行外周血染色体分析中,检出平衡易位携带者1例,9号臂间倒位2例,大Y1例。
3讨论
孕早期胚胎染色体异常是自然流产最重要的原因之一。
1977年徐道觉报道,自然流产胚胎染色体畸变者约占流产胚胎的42%[1],国内外文献均有报道,自然流产中胚胎染色体异常占50%左右。
本文结果显示胚胎染色体异常率53.16%,与报道相近。
大约70%的人类胚胎都在着床前后死亡,染色体的非整倍体被认为是造成人类胚胎这种低着床率和早期丢失的一个重要原因[2]。
这种染色体数目畸变的主要发生源自双亲之一方的配子形成时或妊娠初期受精卵卵裂时出现了某号染色体不分离,则导致该染色体增多或减少一条,亦即导致三体性或单体性。
21-三体在活产儿中最常见,13-三体、18-三体也偶尔可见,而其它常染色体的三体性大多导致流产。
性染色体的三体性在活产女婴中有见,性染色体的单体性不仅见于流产儿,也见于儿童或成人。
在本文流产绒毛染色体分析中,常染色体三体是最多见的数目畸变,检出32例,占异常核型的76%,它涉及2、3、7、8、13、14、16、21和22号染色体,以16-三体最多13例,随体性三体共10例,占所有三体的81.25%。
有资料显示,在有丝分裂中期的分裂相中,经常可以看到带随体染色体的随体联合。
随体联合常常干扰染色体的正常分离[3]。
有认为次缢痕和随体的变异可能影响纺锤体不能与染色体相接,干扰染色体的正常运动和分离[4]。
16号染色体、带随体染色体的变异频率较高,因此它们可能发生三体性的频率较高。
性染色体单体数目畸变,本文4例,占异常核型的9.5%,45,X,这种畸变,除减数分裂时性染色体不分离,导致减少一条性染色体外,其中大约3/4是父系性染色体丢失[1]。
三倍体在流产儿中也十分常见。
本文2例,占4.8%,这种染色体的数目异常可源自新的突变,或源自双亲之一方配子形成中的异常有丝分裂或源自精母细胞或卵母细胞减数分裂中的异常,也可源自双受精等。
这类染色体异常一般在孕8周以前流产,曾有极少数纯三倍体的活婴报告[5]。
在流产绒毛染色体分析中,染色体结构异常本文检出4例(常染色体结构异常3例;性染色体结构异常1例)。
例1;染色体核型:46,XY,-13,+t (13;13),双亲外周血染色体检查均正常,异常染色体来自新的突变。
例2;染色体核型:46,XY,-13,
+der(13)t(5;13)(5q22;13p13)m a,t双亲外周血染色体检查,父亲核型正常,母亲核型为46,XX,t (5;13)(q22;p13)。
异常染色体来自母亲相互易位的染色体配子,在减速分裂中,通过同源染色体间的配对、交换和分离,形成18种类型的配子,其中一种异常配子与正常配子结合,即形成为5号染色体长臂部分三体,13号染色体短臂部分单体的衍生染色体胚胎导致流产。
例3;46,XY,i n v(9)/46,inv(9), -7,+der(7)t(7;13)(7q35;13q13),双亲外周血染色体检查,父亲核型正常,母亲核型为46,XX,inv (9)。
9号染色体臂间倒位,属于多态变异,它在人群中的发生率为1%[1]。
多态现象通常没有不良的临床后果。
但目前许多资料都倾向于多态现象与异常妊娠有关。
9号染色体臂间倒位的遗传主要决定于重复的或缺失片断的长短及其所含基因的致死效应[6]。
本文出现的嵌合型染色体异常,是否与之相关,尚待进一步研究。
本文另一例9号染色体臂间倒位者,其绒毛染色体核型为:47,XY,inv(9),+ 21。
例4;46,XY(Y\18),父亲核型为46,XY(Y\ 18),母有二次自然流产史,之后,随访生育一正常女孩。
Y染色体大小差异亦属于多态变异,大Y异染色质中DNA过多重复在某些方面可能造成有丝分裂发生错误或影响基因调节及细胞分化紊乱[7]。
从而导致不良妊娠结局。
染色体异常是导致自然流产的重要因素之一。
进行染色体检查,对自然流产的病因、诊断及再次妊娠具有重要的指导意义。
参考文献:
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(收稿日期:2009-03-15)
3期李凡,等79例自然流产绒毛的染色体分析。