第三章毛细管电泳法介绍

合集下载
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
是现代微柱分离技术和经典电泳技术结合的产物,
是气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)等常用分
离技术的重要补充,在诸多研究领域得到了人们 广泛的接受和认可。
一、毛细管电泳发展历程



1808年,俄国物理学家 Pence 发现电泳现象。 1937年,瑞典Tiselius将蛋白质混合液放在两段缓冲溶 液之间,两端施以电压进行自由溶液电泳,发现样品的 迁移速度和方向由其电荷和淌度决定,第一次从人血清 提取的蛋白质混合液中分离出白蛋白和α、β、γ球蛋 白,但分离效率低; 1981年,Jorgenson在75μm毛细管内施加300 V/cm的高 强度电场,获得了理论塔板数超过400,000 plates/m的 高分离效率,轰动了整个分离界,成为CE划时代里程碑 1989年,毛细管电泳仪问世。 1989年,第一届CE国际会议的召开,标志着一门新的分 析技术的产生。
面电离成SiO-,管内壁带负电荷,形成双电层。

在高电场的作用下,带 正电荷的溶液表面及扩 散层向阴极移动,由于 这些阳离子实际上是溶 剂化的,故将引起柱中 的溶液整体向负极移动, 形成电渗流。
1. CE中电渗流的大小与方向
电渗流的大小可用电渗速度和电渗淌度表示。
(1)电渗流的大小

电渗流的大小与电场强度、Zata电势及缓冲液介电

3.CE中电渗流的作用

电渗流的速度一般约等于离子电泳速度的5~7倍; 各种电性粒子在毛细管柱中的迁移速度为:


Baidu Nhomakorabea
阳离子迁移速度 =电渗流+电泳流,阳离子运动速度快于电渗流;
阴离子迁移速度 =— 电渗流–电泳流,阴离子运动速度慢于电渗流; 中性粒子迁移速度 =电渗流,中性粒子运动速度与电渗流一致。
μ
ef

ef
E

q 6 πr
由此可知,球形带电离子的迁移率,主要取决于自身状态,即与其所带电 量成正比,与其半径及介质粘度成反比。电泳过程中正是利用带电离子电 泳迁移速度或迁移速率的差异来实现分离的。
二、电渗流

石英毛细管柱,内壁大约有8.31 mol/m2的硅醇基
(Si-OH),其等电点约为1.5,内充液pH>3时,表

(5)高度自动化:CE是目前自动化程度最高的分离分析
方法之一;

(6)洁净:通常用水溶性缓冲液,对人体和环境无害;
(7)多分离模式:可根据需要在同一仪器上选用不同的
样品分离模式;

(8)应用范围广:具有“万能”分析的功能和潜力,既 可以分析无机离子、氨基酸、药物等小分子,又可以 分析蛋白质等生物大分子,甚至整个细胞和各种微粒。
第三章 毛细管电泳法
Capillary Electrophoresis

第一节 毛细管电泳概述 第二节 毛细管电泳基础理论 第三节 毛细管电泳仪


第四节 毛细管电泳类型
第五节 毛细管电泳的应用和进展
第一节 毛细管电泳概述

毛细管电泳(CE),又称高效毛细管电泳,是近
年来发展最快的高效分离分析技术之一。该技术
F’=6πηrνef
η:缓冲液粘度;r:球形分子的半径;νef:离子在电场中的迁移速度。
当带电离子以速度ν 在电场中移动时,受到大小相等、方向相反的电场驱 动力和平动摩擦阻力的作用,此时
F=F’
故:
q· E= 6πηrνef
则离子在电场中的迁移速度:
ef
qE 6πr
即带电离子的电泳迁移速率(或称电泳淌度) :
第二节 毛细管电泳基础理论
+

一、电泳流

电泳:在电解质溶液中,位于电场中的带电离子
在电场力的作用下,以不同的速度向其所带电荷
相反的电极方向迁移的现象。


+
电泳时,不同离子在电场中具有不同的定向迁移 速度,迁移速度与哪些因素有关?
淌度(μ):单位电场下的电泳速度。 绝对淌度:在无限稀释溶液中测得的淌度。 有效电泳淌度:在实际溶液中测得的淌度。

在具体实验中,可根据需要选用不同的中性组分作为标
记物(N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、甲酰胺、苯酚、 丙酮等),测定不同缓冲条件下中性标记物的迁移时间, 按下述公式计算出电渗率:
eof
ldet ldetltot E tE t V
eof
其中,t:中性标记物的迁移时间,ldet为毛细管电泳有 效长度, ltot为毛细管电泳有效长度。
(2)CE中电渗流的方向

石英毛细管带负电荷,溶液带正电荷,电渗流 流向阴极;

改变电渗流方向的方法:
毛细管改性:表面键合阳离子基团; 加电渗流反转剂:
内充液中加入大量的阳离子表面
活性剂,将使石英毛细管壁带正电荷,溶液表面带 负电荷。电渗流流向阳极。
2.CE中电渗流的流形

液相色谱中的溶液流动为层流,抛物线流型,管壁 处流速最慢,管中心处的速度为平均速度的2倍(引 起谱带展宽较大)。 在毛细管电泳中,电荷均匀分布,整体移动,电渗 流的流动为平流,塞式流动(谱带展宽很小),故 柱效较高。

电场强度:与所施加的电压成正比,与两电极间的距离(L)成反比
E=V/L

电场力:在溶液中,电场对带电离子作用力(F)的大小等于带电离子所带
的净电荷(q)与电场强度的乘积:
F=q· E

在电泳迁移过程中,介质粘滞力(F’)必然会阻碍离子的迁移。 粘滞力的大小与离子大小、形状、缓冲液粘度、甚至电泳介质孔径均有关系, 与带电离子的移动速度更是直接相关。对于球形分子F’的大小服从Stokes 定律:
二、毛细管电泳的特点
CE是现代微柱分离和经典电泳技术有机结合的产物,具有较
HPLC和平板凝胶电泳更多的优点:

(1)高效:每米理论塔扳数低则十几万,高则几百万甚 至上千万;

(2)快速:可在十几分钟甚至几十秒内完成分离; (3)低样品消耗:只需纳升甚至皮升级样品量; (4)低成本分析:只需低廉的分离毛细管和少量的运行 缓冲液;
常数有关,某一电泳体系内电渗流的具体数值可以 用Helmholtz-Smoluchowski 公式计算:
eof
ε V ε V ( )( ) eof E ltot ltot
eof为电渗速度; eof 为电渗淌度(EOF mobility); 为双 式中, 电层的Zeta电位; 为缓冲液介电常数;η为电解液粘度;V 为所施加的电压; ltot 为毛细管总长度。
相关文档
最新文档