实验三、孕马血清促性腺激素效价的生物学测定
促性腺激素测定实验报告
促性腺激素测定实验报告
实验目的：通过测定促性腺激素的水平，探究其在生理和疾病状态中的作用和变化规律。
实验材料和方法：将实验样本与检测试剂按照说明书要求配制，通过酶联免疫吸附分析法（ELISA）测定促性腺激素的浓度，并根据相关标准曲线计算各样本中促性腺激素的含量。
实验结果：测定结果显示，在正常生理状态下，促性腺激素的水平处于正常范围；而在某些疾病状态下，促性腺激素的水平可能升高或降低，提示相应的生理或病理变化。
实验结论：促性腺激素测定可以作为评估性腺功能和男女生殖健康状况的重要指标，对于临床诊断和治疗具有一定的指导意义。
实验总结：本实验通过促性腺激素测定，深入探究了其在生理和病理状态下的变化规律，为进一步研究性腺功能和生殖健康提供了重要参考。
实验意义：促性腺激素测定实验有助于加深对性激素调节机制的理解，为临床诊断和治疗提供了重要的实验数据支持。
实验二PMSG生物效价测定
药品与试剂
PMSG（孕马血清促性腺激素）
01
购自某生物科技公司，规格为1000IU/支，用生理盐水稀释至所
需浓度。
生理盐水
02
用于稀释PMSG和注射使用。
乙醇
03
用于消毒实验器具和动物皮肤。
实验方法与步骤
动物处理
药品注射
观察记录
数据处理
实验前对小鼠进行适应性饲 养，保持环境安静、温度适 宜、自由摄食和饮水。实验
深入了解PMSG
通过生物效价的测定，可以进一步了 解PMSG的生理作用、药代动力学特 性以及与其他生物活性物质的相互作 用。
实验原理
生物效价定义
生物效价是指某一生物活性物质与标准品或参照物质相比 较，在特定生物系统中引起相同生物效应的相对能力。
PMSG生物效价测定方法
本实验采用小鼠超排卵实验方法，通过给小鼠注射不同剂 量的PMSG，观察并记录小鼠的排卵数和黄体数，进而计 算PMSG的生物效价。
生物效价。
03 实验结果与分析
CHAPTER
数据处理与统计方法
数据清洗
统计分析
去除异常值、重复数据等，保证数据 质量。
采用t检验、方差分析等统计方法，比 较不同处理组间的差异显著性。
数据转换
对数据进行标准化或归一化处理，消 除量纲影响。
结果展示与解读
01
02
03
表格展示
将实验数据整理成表格， 包括处理组、对照组、平 均值、标准差等关键信息。
实验二pmsg生物效价测定
目录
CONTENTS
• 引言 • 实验材料与方法 • 实验结果与分析 • 实验结论与意义 • 实验注意事项与改进建议
01 引言
不同激素药物促进后备猪同期发情试验报告
99PIGS TODAYJanuary 2021文 ⊙ 赵 越 镇江句容后白畜牧兽医站 施增斌 新疆泰昆农牧科技有限公司本研究综合应用烯丙孕素、孕马血清促性腺激素等对某商品猪场8～9月龄的400头长大二元杂后备母猪进行同期发情试验，以进一步研究外源激素产品对后备母猪同期发情和繁殖性能等方面的影响。
结果表明烯丙孕素+低剂量的孕马血清促性腺激素组合配种利用率最佳。
不同激素药物促进后备猪同期发情试验报告同期发情主要是指利用外源激素诱导母猪群体在同一时期内集中发情和排卵的技术。
其主要目的是便于组织集约化生产和管理，实现母猪集中配种、分娩及断奶等。
在一个大的猪群中，每头母猪所处的发情周期阶段是随机的。
由于黄体期的时间占了整个发情周期的大部分时间（70%左右），即一群母猪中处于黄体期的个体占了大多数。
因此，控制个体猪只黄体的消长是控制母猪群同期发情的关键。
同期发情就是利用外源激素人为地控制并调整一群母猪发情周期的进程，使之在预定的时间内集中发情和排卵。
实践中常用前列腺素PGF2α来提前消除黄体，或用孕激素类药物来延长黄体期以实现群体母猪发情的同期化。
下文对促进同步发情的相关药物进行了介绍。
烯丙孕素，也叫四烯雌酮，是一种人工合成的口服型活性孕激素，以类似于天然孕酮的作用模式来抑制促性腺激素的释放，主要用于控制母猪的发情周期，可以延长母猪的黄体期。
一般以烯丙孕素直接口腔饲喂或者饲料给药，每日20mg，每日定时给药1次，连续14～18d。
孕马血清促性腺激素（PMSG）,是一种糖蛋白，来源于马属动物胎盘的杯状结构，可在妊娠30d以后的母马血液中检测到，妊娠70d左右含量最高，以后逐渐减少，至180d在母马血液中消失。
PMSG生理功能主要是促进卵泡发育，此外还具有一定促排卵和黄体形成的功能。
喜得孕GES ®，每头份含400IU孕马血清促性腺激素（PMSG）和200IU绒毛膜促性腺激素（HCG），前者能促进卵泡成熟，后者促进排卵。
马垂体促性腺激素的提取及其生物活性测定
马 的垂体 位 于脑 的基 底 部 ， 骨 体 的 脑 垂 体 窝 蝶 内［ 。脑垂 体分 为腺 垂 体 （ 叶） １ ］ 前 和神 经 垂体 （ 叶 ） 后 两 部分 ， 腺垂 体 分泌 ７种 激素 ， 中维 持 性腺 机 能 的 其 两 种 激 素 是 促 卵 泡 素 （ ｏｌ ｌ ｓｉ ｌｔ ｎ ｏ— ｆｌｃｅ ｔ ｉ — ｍｕａｉ ｇ ｈ ｒ ｏ
（． 疆 农 业 大学 动物 医 学 学 院 ， 疆 乌 鲁 木 齐 ８ ０ ５ ；． 疆 畜 牧科 学 院 畜 牧 科 学 研 究 所 ， 疆 乌 鲁 木 齐 ８ ０ ０ ） １新 新 ３０２２新 新 ３ ０ ０
摘 要 ： 家畜胚 胎移 植技 术在 畜牧 业 生产 中应用 日益广 泛 ， 由于马促 性 腺 激 素在 国 内外 无 商品 出售 ， 使
是 Ｆ Ｈ 和 Ｌ 协 同作 用 的结 果 。Ｆ Ｈ 促 进 颗 粒 细 Ｓ Ｈ Ｓ
１ １ ３ 试 剂 与 仪 器设 备 １ ０ｇ Ｌ 乙酸 铵 、 酸 、 ． ． ０ ／ 乙 ９ ０ｍＬ Ｌ乙醇 、 ５ ／ 乙醚 和丙 酮 ， 为 国产 分 析纯试 剂 ； 均
人 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 ， 波 激 素 厂 生 产 。Ｊ２ 宁 一５
１ １ ２ 实验 动 物 １ 日龄 同批 、 ． ＿ ８ 同源 雌 性 （ 明 昆 系） 鼠， 重９ｇ １ ， 自新 疆 医科 大 学 实验 动 小 体 ～ ３ｇ 购
物 中心 。
ＬＨ） 两 者 合 称 为 垂 体 促 性 腺 激 素 （ ｏ ａ ｏｒ ｐ ｉ ， ｇ ｎ ｄ ｔｏ ｈｃ ｈｒ ｎ， ｏｍｏ ｅＧＴＨ） 。它 们 可促 进 睾 丸 的 精 子 形 成 、 卵 泡 成熟 及参 与 黄 体 的形 成 ， 是垂 体 前 叶产 生 的 糖 蛋 白激 素 ［ 。Ｆ Ｈ 能 促进 卵 泡 的早 期 发 育 ， 泡 成 熟 ２ ］ Ｓ 卵
孕马血清标准
孕马血清标准
孕马血清（PMSG）是一种常用的动物用促性腺激素，用于促进动物排卵和改善繁殖性能。
孕马血清的标准因生产厂家和用途而异，但通常会根据其促性腺激素的含量、纯度、生物活性、安全性等方面进行规定。
一般来说，孕马血清中促性腺激素的含量越高，其促排卵效果越好。
同时，孕马血清的纯度也很重要，高纯度的产品可以减少杂质和其他激素的干扰，提高使用效果。
此外，孕马血清的生物活性也是评价其质量的重要指标，活性越高，促排卵效果越好。
在安全性方面，孕马血清应符合相关法规和标准，如无菌、无热原、无有害微生物等。
此外，孕马血清的使用剂量和注射时间应根据具体情况而定，一般建议在兽医指导下使用。
总之，孕马血清的标准是多方面的，包括促性腺激素含量、纯度、生物活性、安全性等。
选择符合标准的孕马血清产品可以提高动物的繁殖性能和生产效益。
马垂体促性腺激素的提取及其生物活性测定
万方数据
动物医学进展．２０１０，３１（８）：２０－２３ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
微载体培养ＰＫ一１５细胞试验条件的优化
何锡忠１，李春华１，倪建平２，蒋风英１，邹 勇¨
（１．上海市农业 品有限公司，上海２０１１０６）
～８０ ｍＬ／Ｌ；放入４℃冰箱，２４ ｈ后取出，收集白色
马垂体促性腺激素提取物生物活性测定
①试验分组。取同一来源的１８日龄的雌性昆明小 鼠，体重９ ｇ～１３ ｇ，随机分成４组，每组６只。第１ 组为ｈＣＧ组，取ｈＣＧ
１ ２５
Ｕ加１ ｍＬ生理盐水溶解；
第２组为垂体提取物组，取１ ｍｇ垂体提取物溶于 ｍＬ生理盐水中（１ ｍｇ／ｍＬ）；第３组为提取物和
系）小鼠，体重９ ｇ～１３ ｇ，购自新疆医科大学实验动 物中心。 １．１．３试荆与仪器设备
９５０ １００
ｇ／Ｌ乙酸铵、乙酸、
ｍＬ／Ｌ乙醇、乙醚和丙酮，均为国产分析纯试剂；
人绒毛膜促性腺激素，宁波激素厂生产。Ｊ一２５ ＡＶＡＮＰＩ低温离心机（ＢＥＣＫＭＡＮ
ＣＯＵＬＴＥＢ），
ＰＬ２０３电子分析天平（梅特勒一托利多仪器公司）， ＤＳ－１组织捣碎机（上海标本模型厂），ＦＥ２０ ｐＨ计 （梅特勒一托利多仪器公司），ＳＷ－ＣＪ－２ＦＤ超净工作台 （苏州安泰空气技术有限公司），ＬＤＺＸ一５０ＫＢ立式压 力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）。
用７６０ ｍＬ／Ｌ～８００ ｍＬ／Ｌ乙醇作为沉淀剂使糖蛋白
３．４马垂体提取物生物活性测定效果判断 本试验用小鼠测定马脑垂体提取物的生物活 性，结果表明从马脑垂体中提取出的提取物含有促 性腺激素，能对小鼠卵巢和子宫产生作用，使小鼠的 卵巢颜色出现红色的变化（有卵泡发育），卵巢表面 有红色排卵点，与对照组有明显区别，可以确定马脑 垂体提取激素具有生物活性。随后在母马使用的结 果也证明了本试验提取物具有较高的生物活性，本 试验的垂体提取方法可行。 综上所述，本试验用马脑垂体提取获得的促性 腺激素提取物，用小鼠做生物活性测定，结果表明本 试验提取的马垂体促性腺激素提取物具有生物活 性。 参考文献：
孕马血清促性腺激素定量检测试剂盒的建立与应用
孕马血清促性腺激素定量检测试剂盒的建立与应用章金刚军事医学科学院输血医学研究所血清或血浆成分的检测多采用免疫学方法。
根据检测的目的不同，检测方法很多，其中酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种最为常用也比较成熟的试验技术，既可用于定性，也可用于定量。
在医学和兽医学实践中，大多数的检测试剂盒都是基于ELISA方法。
目前，用于检测抗原（包括孕马血清促性腺激素（PMSG）），多采用双抗体夹心ELISA。
理论上讲，对于孕马血清促性腺激素（PMSG）的定量检测，应该采用双抗体夹心ELISA方法。
要建立PMSG的双抗体夹心ELISA，必须首先获得特异性好、敏感性高、亲和力强的抗体。
所用抗体可以是纯化的多克隆抗体（抗血清），也可以是单克隆抗体（单特异性）。
上述两类抗体各有优缺点，关键是标准化、特异性、敏感性、重复性的问题。
以下从主要研究内容、试验技术方案、基本经费预算、可能存在问题（风险因素）等几个方面简要叙述，供参考。
一、主要研究内容1、抗原制备与鉴定无论是制备多克隆抗体，还是单克隆抗体，抗原即PMSG的纯度都至关重要。
基本要求是PMSG的纯度应为电泳纯级，毫克量以上。
否则，可能影响整个工作的开展。
2、单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备包括小鼠免疫与检测、杂交瘤细胞的融合与筛选、阳性克隆的筛选与扩增、杂交瘤细胞株的建立与鉴定（含染色体鉴定）、抗体的亚类与效价鉴定、抗体的亲和力与特异性鉴定、单抗的制备与纯化、单抗的标记与测定等。
要建立检测试剂盒，必须选出3～5株针对不同抗原决定簇的单克隆抗体，继续有关特异性、敏感性、稳定性等一系列试验。
3、多克隆抗体的制备一般选用家兔。
主要内容包括免疫与检测、血清的采集与鉴定、抗体的纯化与鉴定、抗体的标记与测定等。
多克隆抗体存在的最大缺陷是难于标准化，检测结果不稳定，这也是目前检测试剂盒多采用单克隆抗体的主要原因。
4、检测方法的建立和优化检测方法的建立和优化包括抗体和抗原最适工作浓度的优化、抗体包被浓度的优化、抗原标准含量曲线的建立、样品检测等。
孕马血清促性腺激素
北京华越洋生物提供 QQ:1733351176孕马血清促性腺激素（PMSG ）PMSG 也是一种糖蛋白激素，其特点是含糖量高，约占41～45%，而且唾液酸含量多，因而形成了PMSG 的酸性特点，故在血液中的半衰期可长达40—120小时。
PMSG 分子与垂体促性腺激素一样，也是由α和β亚单位组成，而β亚单位是表现其活性的主要部分。
其分子量为53000。
由于分子不够稳定，高温、酸、碱条件都易引起失效，同时对它的分离提纯工作也较其他糖蛋白激素困难，但是目前通过研究其肽链的编码DNA ，已经推出其α、β两亚基的氨基酸顺序。
1.PMSG 具有类似FSH 和LH 的双重活性，但以FSH 的作用为主，因此有着明显的促卵泡发育的作用，同时有一定的促排卵和黄体形成的功能。
2.对雄性动物具有促使精细管发育和性细胞分化的功能。
关于PMSG 对妊娠母马本身的确切功能和生物学特性．至今还了解不够，尚待深入研究论证。
(四)孕马血清促性腺激素的应用PMSG 是一种经济实用的促性腺激素。
在生产上常用以代替较昂贵的FSH 而广泛应用于动物的诱发发情、超数排卵或增加排卵率(如提高双羔率)；对卵巢发育不全或雄性生精能力衰退等也都可收到一定疗效。
其应用方法和常用剂量列于表2—4。
应该提出的是，在实践中进行诱发发情或超数排卵处理时，发现动物个体对PMSG 的反应性差异很大，有的个体甚至没有反应。
其原因比较复杂，是否与个体生理状态不同，或者不同个体产生不同程度的免疫性反应所致，尚有待进一步探讨。
关于PMSG 与PG 或hCG 等其他激素合用，在胚胎移植中作超排处理的方法、剂量详见有关章节。
(五)孕马全血、孕马血清制备或提取孕马血清促性腺激素的方法编码 品名 规格 单位 北京华越洋生物WX01-1000 孕马血清促性腺激素（PMSG ）1000IU 瓶 北京华越洋生物WX01-5000孕马血清促性腺激素（PMSG ） 5000IU 瓶北京华越洋生物提供QQ:17333511761.孕马全血的制备取500ml玻璃瓶，加入硼砂10g、硫代硫酸钠5g及蒸馏水30ml，在蒸锅中灭菌。
反向间接血凝法检测孕马血清中ECG PMSG活性的探讨
２．２直肠探测妊娠日期定为４０—１２０ ｄ，不同天数的大 鼠效价见表２。
表２妊娠１３期与ＥＣＧ／ＰＭＳＧ大鼠效价关系（ＩＵ，ｍＬ）
收稿日期：２００５—０９—２０ 作者简介：陈萸芳（１９２７一），女，研究员。从事各种马血 清生物制品提取及孕１血清促性腺激素的 纯化及质量检测．
万方数据
黑龙江动物繁殖第１４卷第１期２００６年 ＲＩＨＡ法判定标准及结果：以红血球凝集强弱分 级，用“一”、“＋”符号代表。 阴性：一：血球沉于孔底呈点状，周围光滑。＋一：血 球沉于孔底．或中心有白色小点，或周闱不光滑。＋：ＪｆＩＬ 球在孔底沉积面积较大，周围有散在少量凝集。 阳性：２＋：红血球呈薄层凝集，面积较小，边缘 较松散，一般以２＋开始为阳性反应．但本试验中 以２＋ｙ－０为＜２０ ＩＵ／ｍ１．，故以３＋为阳性起点。３＋：红血 球呈薄层凝集．面积比２＋大。４＋：红ＩｌＩＬ球平铺布满整个 孔底，全凝集。５＋及６＋：红血球呈强凝集或皱缩成团， 或随样ｌ铺逐孔稀释度增高仍布满整个孔底。
２
将ＲＩＨＡ判断强弱分级以一至６＋表示，３＋以下是 低效价绀，未达４０ ＩＵ／ｍＬ采血指标。 由表３可见，强凝集５２个样（阳性组），平均６４－４ ＩＵ／ｍＬ，其中８个样与大鼠测定的结果不符合；一至２＋ 者（阴性组）共２２匹马，平均１３．９ ＩＵ／ｍＬ，仅１个样品２ 种方法结果不符合。
３分析与讨论
３．１
注：符号ａ为二种测定万法结果不符合。
本次实验结果说明．ＥＣＧ／ＰＭＳＧ抗体致敏的羊醛 化红血球特异性较强，“｛血样中抗原效价不足时，红血 球凝集为２＋以下的弱反应，反之则增加至６＋。从３＋以 上界定为阳性，以此判断采血界限，得到效价较高的孕 马血清原料。 ３．３可以认为反向问接血凝测ＥＣＧ／ＰＭＳＧ效价的优 点是：（１）敏感性高，只需微量抗体和抗原；（２）迅速，１～
家畜繁殖学实验中马绒毛膜促性腺激素效价测定方法的改进
2.1原理 双抗体夹心法的原理是将特异性抗体结合到固
相载体上形成固相抗体,然后使待测抗原与过量的固 相抗体结合形成免疫复合物，在特定温度下孵育一定 时间后洗涤拍干再加入过量的酶标记抗体，与免疫复 合物中的抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复 合物，加入反应底物显色，根据显色程度计算样品中 抗原的含量。 2.2步骤
间接竞争法的原理是将一定量的抗原包被于聚 苯乙烯微孔板中,加入无关蛋白载体封闭未结合位点, 加入标准品或样品，然后加入酶标二抗（如羊抗鼠免 疫球蛋白）,检测与包被在固相载体上的抗原发生免疫 反应的受检抗体，经孵育和洗涤后,加底物显色。优点 是只变换包被的抗原，便可用同一种酶标抗体建立检
214
现代农业科技2021年第12期
包被:用包被液0.05 mol/L碳酸盐缓冲液（pH值 9.6）稀释抗原至工作液浓度为1~10 滋g/mL，每孔加 100 滋L，4益过夜;次日弃去孔内溶液,用洗涤液洗涤 3次，每次3min，于干净吸水纸上拍干。加样:加一定 浓度稀释的待检样品（同时做空白对照、阴性对照孔 及阳性对照）100 滋L于上述已包被反应孔中,37益温 育1 h,用洗涤液洗涤3次，每次3 min，于干净吸水纸 上拍干。加酶标抗体:于各反应涤3次, 每次3min，于干净吸水纸上拍干。加底物液显色:于 各反应孔中加入现配的3,3,,5,5,-四甲基联苯胺底 物溶液100 滋L,37益温育30 min0终止显色反应:于各 反应孔加入终止液（2 mol/L硫酸溶液）50 滋Lo测定吸 光度渊OD）值:加完终止液之后5 min内将酶标板放在 酶标仪上，测定波长450 nm时的OD值,输出到Excel 中。以标准品浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，生成 标准曲线和直线回归方程,根据公式计算未知样品的 eCG浓度。 3间接竞争法 3.1 原理
【doc】孕马血清促性腺激素（PMSG）生物测定方法—小鼠卵巢增重法...
孕马血清促性腺激素（PMSG）生物测定方法—小鼠卵巢增重法...孕马血清促性腺激素(PMSG)生物测定方法～小鼠卵巢增重法和子宫增重法的探讨李湛君柯若伦(中国药品生物制品捡定所100050)l95表文探讨了用小鼠卵鞋增重法和.,显子言增重洼测定孕马血清促性隙激素(PYlSG)生物效价的可厅洼影响田袁及最洼窑验条件.实验墙果证明小鼠卵巢和子宫增重法在一定剂量范围内,剂量的对数弓反应存在直线关系,涮主P~ISG嫂升与太鼠印巢增重甚结接近,小鼠珀幕增重击与1j,鼠子宫增重法比转,前者优于者.孕马血清促性腺激素(PMSG)是FSH和LH的混合物.但以FSH为主,其生物测定方法主要依据FSH和LH的活性.PMSG第二次国际标准品效价协作标定中共采用十二种生物测定方法"I}日本药局方(翦十一改正),英国药典(1988)以大鼠卵巢增重法作为法定方法.我所于1980年首次建立PMSG国家标准品时,也采用此法.由于太鼠来源困难价格高,因此考虑用小鼠.小鼠卵巢增重法或子宫增重浩国内外均曾有报导".我们就效价测定中最佳实验条件,如给药次数,摘取小鼠卵巢或子宫时间等进行了探讨,对比陌种方法优劣,井与大鼠卵巢增重法的生物效价测定结果进行比较.一,材料与方法动物:小自鼠:昆明种,雌性,体重10～12g,本所繁殖场.大白鼠:雌性,体重d0～60g,北医实验动物中心.标准品PMSG第二次国家参考标准品(s2),效价llOOlU/amp.样品:PMSG冻千样品,本所制备(T);PMSG冻干制剂,日本商品(r),PMSG冻干原料,外购(T).方法小鼠卵巢增重法:雌幼小白鼠,体重10～12g,均匀分组,每组10～15只,剂量范围选择在最小剂量能产生卵巢增重,最大剂量增重不达极限溶液以生理盐水或05%CMC配制, 剂距l:0.5.每只小鼠颈部皮下一次注射0.2 ml,给药后一定时间用乙醚麻醉处死,摘取卵巢,剥离干净,吸干组织液,用精密天秤(精确至05rag)称重.小鼠子宫增重法:方法同上,但剂距用l:0.6(或l:0.7),最后摘取子宫称重.大鼠卵奠增重法:按文献,实验设计为(2?2)法或(3?3)法.效价测定结果均按中国药典(1985)量反应平行线测定法(2.2或3.3)进行可靠性测验;可靠性测验通过者计算效价和平均可信限率.=,结果与讨论1.剂量与反应关系,直线性测验小鼠卵巢增重法和小鼠子宫增重法,每次实验设4～6个剂量组,以对数剂量与反应关系作图,进行直线性翅!I验并计算精密度指数值(^=S/b)及回归直线的斜率b值.表1及图1,图2为小鼠卵巢法和小鼠子宫法多次实验结果:经直线性测验,PMSG在一定剂量范围内,对数剂量与反应的直线回归项有非常显着意义(P<0.01),二次曲线回归项及偏离回归项均无显着意义(P>D一05),即直线关系成立.比较二种方法的^值,比较,●;:fI■●ll●,..●196巷壁堑盘查表1小鼠卵簟法和小鼠子宫法PMSG对散剂量～反应直线性涓验避过的涓定结果实验方浩小鼠卵巢珐小鼠子宫法.剂量图l小鼠卵巢法对数瓤量～反应曲线纵坐标:器官重(rag)/小鼠重(g)横坐标IU/只接近,说明二种方法有相近的精密度.小鼠子宫法虽其b值大,反应对剂量的灵敏度高,但反应对其它各种影响因子的敏感性亦高,标准差亦大,故值亦不小.小鼠子宫法直线关系成立的剂量范I目较窄,并受季节等客观条件影响,剂量范围变化比小鼠卵巢法大(图2),因此用小鼠子宫增重法时,最好先作预实验,并且剂距不宜太大.2.相同实验条件下,一次路药与多次给药的比较文献"'测定PMSG效价均用大鼠卵巢增重法,但给药方法不同,前者为一次给药,而后者为连续三天三次给药.我们在相同实验条件下,比较了一次给药与三次给药(每天一次连续三天)方法的优劣,并作它们两个回归系巨2小鼠于宫甚对数剂量～反应曲线[实验1(4月份),x实验2(5月份)▲实验8(6月份)纵坐标:器官重(rag)/小鼠重(g)横坐标tv/只数间的显着性铡验.三次给药时,将PMSG溶于0,5CMC溶液中,一次配成,4℃保存.表2结果表明:小鼠卵巢增重法三次给药比一次给药的精密度指数小,b大,并且b～b间差异有显着性意义,即三次给药的方法不仅回归直线的斜率较大,反应对剂量的灵敏度较高,而且精密度也较好,标准差较小,故小鼠卵巢增重法三次给药优于一次给药.小鼠子宫增重法一次给药与三次给药比较,虽b—b间差异无显着性意义,但值小,即精密度较好,故一次给药的小鼠子宫增重法可能较好.表2PMSG--攻耸药与三次给药结果比较～～∞'帅一一乳只一Ⅲ∞∞围如范量.剂数n一实一.■lI^.●●●3.最佳子宫或卵巢摘取时间的选择小鼠卵巢和小鼠子宫增重法分别给3～4组剂量,在给药后不同时间摘取卵巢或子宫称重,比较给药后第二天(24小时),三,四,五,六天的组织增重情况精密度,回归直线的斜率等.表3说明:小鼠卵巢增重法,给药后第四,五天回归直线的斜率b值较大,精密度指数较小.并且多数情况下第四天b值最大,^ 值最小,第五天次之}而第二,三,六天的回-197?归直线常不成立,个别成立者也是b值最小, 值最大,井与第四天b值问差异常有显着性意义.故认为小鼠卵巢增重法反应高峰在第四天,其反应对齐量的灵敏度最高,标准差最小,精密度最好,摘取卵巢的最佳时同为给药后第四天(72小时).小鼠子宫增重法给药后第四,五天回归直线的斜率b值最大,精密度指数^值最小,而第三,六天b值小,值大,因此选择给药后第四天(72小时)摘取子宫为佳表5耋旨pMSG后不商时间摘取卵巢或子宫的比较宴峻方法编号小鼠卵巢法小鼠子宫浩!摘取组织天数第二天l第三天l簿四天I第五天li,0?230.98P<0.0,5O?44lO?62P~0*050,580.530.6;O.P>0.05第三天0.320.52P>O.02第四天J0.3.1:0.27第五天lo.弛.o.50}P<O.05第二天OoO0ld8?33P<O?Oi;第三天0.072.i9P<o.053第四天Io.45o.37j第五天o.31Io.3gP>O.05第六天0.18l0.78P<0.06第三天J0.51.1.36P>O.05第四天I3.O010.184第五天1.210.d2P>o.o.第六天l0.i;1i.2,5P>O.05第三天J1.3010.d6P>O.05【第四暑I2.30【0.29{5第五天2.i;1J0.23P>O.05第六天l1.15l0.25P>O.054小鼠法与大鼠卵巢法效价锢!I定结果比较.以小鼠9口巢法和小鼠子宫法分别溯定三个PMSG样品的生物效价,并与大鼠卵巢增重法的测定结果进行比较.表4说明小鼠卵巢和小鼠子宫增重怯与大鼠卵巢增重法测定的效价一般比较接近,个别实验有相差较多的,与大鼠法的效价比值, 小鼠卵巢法是0.84—1.05,小鼠子宫法是1.18 ^一1.26,虽与大鼠法间的差异均无显着性意l98如义,但结果偏高:从平均可信限率及精密度指数上都可看出.小鼠法的辐密度均不如大鼠卵趟晶买殓方浩TT￡药物{}析杂志巢法,但我们考虑可通过严格控制动物质量,增加物数等措施加以改进.表4PMsG样品生物效价测定结果'～…一'1_●___..__________-__..●___-_____',.'-__,__-q-一敬数摇.鼠242.{J凳蔷'(213.4—292.J,臣202.7卵巢甚(136.4—298.4)一鼠285.5F宦法9(I95.2～425.3)x鼠642.5}巢一(624.6～1373.3)一677.9卵矍法.(639.～8I7.3)小鼠774.8予喜法4(611.5～885.2)走鼠858?4._翼法'(770.0～580.9)出鼠1084.8F富珐i<925.2—1216.0注;可靠恤f黔均通过【;j犬鼠卵巢法比值'23.9～5I.2:0.14～0.18i2.6～30.810.I2～0.23小鼠卵巢增重法直线关系成立的剂量范围较宽,并比较稳定.易选择剂量进行教价测定;而小鼠子宫增重法呈直线关系的剂量范围较窄,受客观条件影响变化较大,进行效价测定时剂量不易掌握,影响成功率,并且测定结果波动较大.敦价比值偏高,故认为小鼠卵巢法优于小鼠子宫涪虽然我们所测的样品较少,积累的数据有限,但实验结果初步证明小鼠卵巢法有一定的可行性,在特定条件下,可代替大鼠进行效价测定,但尚需进一步完善并积累数据进行考核.关■词:孕马血清促性腺激素;生物测定}小鼠卵巢增重珐:鼠子宫增重弦1.00I参考文献'[1]DRBangham&PatriclaAIWoodward.●Bu]lW1dH|thOrg,85:76I,1956[2]日年菇局方(第十一改正)[8]TheBritishPharmaeopeIa.1988[4]V0nHTrolldenlet:ZbJPharm,120(10):100S.1981[5]吕垒根等l上海畜牧兽医通讯,3(3)l127,I983(本文于l989年6月11日修改回,●●1O(4).1990?199? PreliminaryStudiesintotheBioassayMethodofSerumGonadotrophin(PMSG)MouseOvarianWeightMethod andMouseUterineWeightMethodLiZhan-junKeRuo—lun(Ⅳnti.M』Institute/.rtheControlo/PharmaceuticalottdBiologicalProductsBei]in9)Thispaperi'tlqul'resintothebioassaymethodsofmollseovarianweightMOWanduterine mou5eweightMUWforestimationofpMSG.Thefeasibility,accuracyofthemethodsand theexperimentalconditionsaFeinvestigated.ResultsofthetestsbythewayofMOW artdMUWdemonstratedthatinacertaindoserangethereislinearrelationshipexisting betWeenthelogarithmofdoseaⅡdthereaction.SomesamplesofPMSGaTeestimated hYthemethodsme12tiOI1edahoveandals0byratovarianweightmethod.TheresultB sho,nosigⅡillcant0lifferencesamoⅡgthemHoweve~,MOWseemstobethemethod. Keywords:PMSG.Bioassay;Mouseovarianweightmethod;MouseuterineweightI【l】1Lld荧光法测定聚肌胞含量的研究张培培(中国药品生物河品检定所l000503本文建立了测定聚肌Jj白含量的新方法～荧光洼.用正交实验选择出缓冲蔽的盐(Nac】)浓度为0.5r,反应温度为室温(20℃),反应时INlO分钟为最佳测定条件,含量在2～l2g/ml范围内呈良好的线性关系.变异系数(n=5)小于 5.本文提供的方法简便,快速和实用,比现有的剥定方法专一性更强,有一定的应坍价值.聚肌胞是由单链聚肌苷酸和聚胞苷酸聚合而成的双链多聚核昔酸.是一种免疫增强荆,具有抗病毒的功能"-.』临床用于单纯性疱疹性角膜炎,痘疹性i21腔炎,带状痘疹等I.聚肌胞含量测定目前国内多采用地依酚法….该法是根据样品中核糖含量来确定聚肌胞含量, 其专属性较差,不能区分样品中单链和双链聚核苷酸,并受蛋白质,杂糖干扰..本文试用荧光法测定聚肌胞含量,该法能专一地与双链聚肌胞结合,为聚肌胞含量的测定建立了快。
绒山羊母羊使用同期发情药物时应注意事项
行治疗很快康复。
对全场未发病猪饲料拌入“双冠王”（石家庄征宇动物药业有限公司生产），按０．０５ ｍｌ／ｋｇ体重使用，连用５ ｄ进行预防。
中草药处方：（１）活蟾蜍５～７只（约５００ ｇ），洗净置容器内，加水约５００ ｍＬ，加热至沸，再以文火煎煮２０ ｍｉｎ，取煎液（煎液过多可浓缩）候温，加大黄苏打片０．３ ｇ×１５０片（研末），用胃管１次投服。
每日１次，病轻者１剂，病重者连投２～３剂。
病程长、体质弱者可同时用１０％葡萄糖液５００ ｍＬ、地塞米松磷酸钠注射液５ ｍＬ、２０％安钠咖５ ｍＬ，混合静注（５０ ｋｇ剂量。
蟾蜍有毒，用量不宜过大，药液不宜过多，否则易引起呕吐）。
（２）黄花蒿６０～１２０ ｇ，柴胡１５～２５ ｇ，水煎１次灌服，每日１剂，５ ｄ为一个疗程。
（３）枫杨叶５０ ｇ，煎汤内服，每日１剂，连服３～５ ｄ。
经以上措施处理，除重症死亡外，其余猪均康复。
５ 预防措施 除做好常规环境消毒外，应特别注意手术器械及注射针头的消毒。
病死猪一律焚烧无害化处理，病猪舍地面用２％火碱喷洒，并用“洁王”（主要成分是复合碘、增效剂、表面活性剂、络和剂、渗透剂等）喷雾消毒。
扑杀场内所有的猫狗，并且严禁外来人员进入。
６ 小结 猪弓形虫病易与猪瘟、猪丹毒、猪肺疫、副伤寒混淆。
鉴别诊断除注意各自的特征性病理变化外，要靠细菌和虫体检查以及血清学方法确诊。
鉴于猫是弓形虫的终宿主，在猫体内能完成全部生活史，卵囊随猫粪便排至外界，在适宜的温度和湿度条件下形成孢子体即成熟的感染性卵囊，所以猪场应禁止养猫。
因啮齿动物也是弓形虫的中间宿主，为控制弓形虫病的发生，猪场应注意灭鼠。
磺胺类药物对本病有较好的疗效，一旦确诊，及时用药会使症状很快控制，磺胺类药物和抗菌增效剂联合应用效果会更好。
绒山羊母羊使用同期发情药物时应注意事项张文军 １ ，刘兴伟２ ，杨洺扬３（1.辽宁省畜牧业经济管理站，辽宁 沈阳 110032；2．辽宁省畜牧科 学研究院，辽宁 辽阳 1110003； 3.辽宁省动物疫病预防控制中心） 对绒山羊母羊进行药物处理，实现同期发情，进而实现同期配种、集中产羔、同期断奶，不仅方便绒山羊繁殖方面的饲养管理，还能提高母羊的繁殖效率。
孕马血清促性腺激素的生物学测定
实验五孕马血清促性腺激素的生物学测定一.实验特点实验类型：设计型实验实验类别：专业基础课计划学时：4学时每组人数： 4～5人二．实验目的要求生物学测定法是根据一些动物的靶器官和靶组织对激素反应程度来测定激素含量的方法，是最早应用于激素测定的经典方法，能够直接反应激素的生物活性，也称作激素的生物学效价，其它的测定方法往往以此种方法加以验证。
要求学生通过孕马血清促性腺激素的活性测定，掌握激素的生物学测定方法。
三．实验原理PMSG的生物学测定法是以即将达到性成熟或摘除垂体的小鼠或大鼠，注射含有待测激素样品后，观察其子宫或卵巢增重及卵泡发育等变化。
凡是引起确定的生理变化的最低有效剂量，即相当于一个效价单位（如小鼠单位或大鼠单位）。
母马在妊娠的40天，PMSG开始出现，增长至70天达到顶峰，持续到120天，每升血液中可达7万国际单位以上，然后开始下降，大约在170天时降到几乎测不出的程度。
PMSG 能促进动物卵巢机能，进而引起子宫增生和生长的变化。
以性未成熟的小白鼠子宫增大程度为测定活性的根据，来测定该激素引起小白鼠子宫阳性反应的最低浓度，来进行计算预测定的PMSG样品的活性。
即为能引起未成熟的小白鼠子宫增大一倍PMSG的量称之一个小白鼠单位。
四．实验动物和器材1.同品系20～21日龄，体重10～12g性未成熟的雌性健康小白鼠25只（每一实验教学组）。
2.含PMSG血清样品或稀释的PMSG和灭菌生理盐水。
3.5ml注射器5只，5号小针头5只，试管架1个，1ml、2ml、5ml、10ml吸量管各一支，吸耳球一个，10 ml试管5支，20ml试管二支，剪子，镊子。
五．实验内容步骤1.将25只小白鼠随机分为5组，每组5只，其中4组为实验组，另一组做为对照组。
2.取灭菌后的试管4支，分别加人生理盐水11、2、4、6ml，吸取1ml样品血清或PMSG稀释液加人到第一支试管中，充分混匀。
再取此试管的稀释血清在其他三支试管中各加入2ml，混匀后其血清浓度分别为1/12，1/24，1/36 和1/48。
实验二-PMSG生物效价测定
(二)剖检
1.剖检时间 测试小鼠应在注射药物后的72-78h内 进行。
2.剖检步骤
(1)处死小鼠 采用颈椎脱臼法处死小鼠。将小鼠 头部固定，用力牵拉鼠尾，可感到颈椎部位脱 臼的振动。也可采用将小鼠头部经撞击致死。 然后用图钉将小鼠呈仰卧姿势固定于小木板上 或鼠解剖台上。
(2)剖腹 将处死并固定好的小鼠，沿腹中线剪开 腹腔，向前方揭去肠胃内脏，即可在肾脏后方 看到两侧呈乳白色的卵巢及与输尿管相平行的 两子官角。
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0.2
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对照组
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六、实验报告 计算出被测样品中含有的PMSG小鼠单位数。
感谢您的阅读收藏，谢谢！
对照组亦为3只雌幼小鼠，在每次给各测试组小 鼠注射的同时，注射同样剂量的生理盐水。
2．注射部位 按照各组要求的药物剂量,准确地注 射于小鼠的皮下,注意不得将药液注射于胸腔或 腹腔内，亦不可溢漏于体表。
3．剂量 每只小鼠注射剂量为0.2ml。
4．注射方法 用手指捏住小鼠的头及尾部 固定之，以酒精棉球消毒其背部,提起皮 肤，将注射针头平插刺入皮下，将针头 微向上挑起不露出针尖时，再注入药物。 随着药物的推入，在皮下可看到鼓起一 个小泡，即证实药物确已注入皮下部位。 注射针头宜选用小号细针头,以防止注射 后的药液从针孔处逸出。
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3
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185
动物科学1001班
组
每0.1ml血清中加
稀释后血
母猪早期妊娠诊断
母猪早期妊娠诊断作者：张凤仁来源：《兽医导刊》 2017年第8期妊娠诊断是母猪繁殖管理上的一项重要内容。
配种后，越早确定妊娠对生产越有利，可以及时补配，防止空怀。
这对于保胎，缩短胎次间隔，提高繁殖力和经济效益具有重要意义。
一般情况下，母猪妊娠后性情温驯，喜安静、贪睡、食量增加、容易上膘，皮毛光亮和阴户收缩。
一般来说母猪配种后，过一个发情周期没有发情表现说明已妊娠，到第二个发情期仍不发情就能确定是妊娠了。
近年来较成熟、简便，并具有实际应用价值的早期妊娠诊断技术主要有以下几个：（一）母猪早期妊娠诊断方法1. 超声诊断法超声诊断法是利用超声波的物理特性，将其和动物组织结构的声学特点密切结合的一种物理学诊断法。
其原理是利用孕体对超声波的反射来探知胚胎的存在、胎动、胎儿心音和胎儿脉搏等情况来进行妊娠诊断。
目前用于妊娠诊断的超声诊断仪主要有A 型、B 型和D 型。
（1）B 型超声诊断仪。
B 型超声诊断仪可通过探查胎体、胎水、胎心搏动及胎盘等来判断妊娠阶段、胎儿数、胎儿性别及胎儿状态等。
具有时间早、速度快、准确率高等优点，但价格昂贵、体积大，只适用于大型猪场定期检查。
（2）多普勒超声诊断仪（D 型）。
该仪器可通过测定胎儿和母体血流量、胎动等做较早期诊断。
有实验证明，利用北京产SCD- Ⅱ型兽用超声多普勒仪对配种后15 ～ 60 d 母猪检测，认为51 ～ 60 d 准确率可达100%。
（3）A 型超声诊断仪。
这种仪器体积较小，如手电筒大，操作简便，几秒钟便可得出结果，适合基层猪场使用。
据报道，这种仪器准确率在75% ～ 80%。
试验表明，用美国产PREG －TONE Ⅱ PLUS 仪对177 头次母猪进行检测，结果表明，母猪配种后，随着妊娠时间增长，诊断准确率逐渐提高，18 ～ 20 d时，总准确率和阳性准确率分别为61.54% 和62.50%，而在30 d 时分别提高到82.5% 和80.00%，75 d 时都达到95.65%。
血清效价测定实验报告
一、实验目的本实验旨在学习血清效价测定的原理和方法，掌握间接ELISA技术的操作步骤，并了解微柱凝胶法检测孕妇血清中IgG抗A（B）抗体效价的室内参考值。
二、实验原理1. 间接ELISA原理：利用间接ELISA技术测定血清效价。
将与抗体相应的抗原固定在载体上，制备固相抗原。
然后加入含有目标抗体的样本，抗体与抗原发生特异性结合。
接着加入酶标二抗，结合到抗原抗体复合物上。
最后加入底物，底物在酶催化下显色。
显色深浅与样本中抗体的含量呈正相关。
2. 微柱凝胶法：通过微柱凝胶法检测孕妇血清中IgG抗A（B）抗体效价。
将样本加入微柱凝胶中，若抗体与抗原结合，则在凝胶中形成可见的凝集现象。
通过观察凝集现象，判断抗体效价。
三、实验材料1. 间接ELISA实验材料：（1）抗原：牛血清白蛋白（BSA）浓度为5mg/ml。
（2）动物：经三次免疫后的BALB/c小鼠。
（3）其他试剂及器材：辣根过氧化物酶标记羊抗鼠lgG抗体、包被液、脱脂奶粉、洗涤液、底物显色液、终止液；手术剪、酒精棉、可拆卸酶标板、聚苯乙烯酶标板条、1.5ml离心管等。
（4）主要设备：离心机、冰箱、酶标仪、微量移液器、恒温箱。
2. 微柱凝胶法实验材料：（1）孕妇血清样本（2）微柱凝胶试剂（3）其他试剂及器材：加样器、离心机、显微镜等。
四、实验步骤1. 间接ELISA实验步骤：（1）包被抗原：将BSA（5mg/ml）稀释到终浓度为1ug/ml，100ul/孔，4℃孵育过夜，洗板3次，拍干。
（2）加入样本：加入含有目标抗体的样本，100ul/孔，37℃孵育1小时。
（3）洗涤：洗板3次，拍干。
（4）加入酶标二抗：加入辣根过氧化物酶标记羊抗鼠lgG抗体，100ul/孔，37℃孵育1小时。
（5）洗涤：洗板3次，拍干。
（6）加入底物：加入底物显色液，37℃孵育30分钟。
（7）终止反应：加入终止液，终止反应。
（8）酶标仪检测：在酶标仪上检测吸光度（OD）值。
2. 微柱凝胶法实验步骤：（1）加样：将孕妇血清样本加入微柱凝胶中。
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PMSG 或实验三、孕马血清促性腺激素效价的生物学测定（
FSH的生物测定法）
一、实验目的
测定PMS（或FSH的活性，掌握该激素的简易效价测定方法。
二、实验原理
FSH为垂体促性腺激素，作用于即将达到性成熟年龄的雌性小白鼠，可促进卵巢上的卵
泡发育，分泌雌激素。
在雌激素的作用下，又可促进子宫、卵巢及整个生殖器官的发育、增大。
PMSC 因为也含有FSH,因此具有与FSH相同的生物学作用，也能促进性成熟前的小白鼠子宫发育增大。
PMSC在机体内的作用期比FSH长，因此在测试效价过程中，PMS刮作一次注射，而FSH 需经多次注射。
三、实验材料
1实验动物健康无伤残的18-23日龄（即将达到性成熟日龄）、体重9-13g的同
源雌性小白鼠。
各测试组实验鼠出生日龄相差不得越过三天，体重相差不得超过2g。
2、测定样品PMSG（或FSH、生理盐水。
3、测定器具1ml注射器、4号针头、0.1ml微量注射器、1ml和2ml吸管、吸耳球、酒精棉球、剪刀、镊子、搪瓷盘、解剖板、鼠罐和青霉素瓶（稀释瓶）。
四、测试方法
1、测试组的确定
为了测得精确效价，应先将各测试样品浓度组距加大进行粗测，从而确定样品的大致效价范围，再将测试样品浓度组距减少，以测得样品较为精确的效价，可按下表选择确定测
试组。
①PMSG测试组的确定
每0.1mlPMSG按下表加入不同量的生理盐水，稀释成不同浓度作为各测试组。
PMSGe释浓度换算小白鼠单位
每mIPMSG中加入生理盐水量稀释液中PMSG^度PMSGJ、白鼠单位（Mu/ml）111/1260
151/1680
191/20100
231/24120
271/28140
311/32160
351/36180
391/40200
47 1/48 240
1 / 3
43 1/44 220
2 / 3
②FSH 测试组的确定
FSH 是瓶装粉剂，故在配制不同浓度的测试组之前，需用一定量的生理盐水稀释成溶液， 测出每ml 溶液中的效价值后，即可换算出该瓶装内
FSH 的效价值。
每只鼠注入总剂量需分 作五次注射，每天注射两次。
在常温条件下，稀释后的
FSH 容易失活，效价降低。
因此在注
射期间的FSH 溶液应在低温下保存。
在测试中，每瓶FSH 准确取5ml 生理盐水稀释作为母液， 于0-5
C 下存放。
用FSH 母液为小白鼠作五次注射，
故每次注射剂量应是总剂量的五分之一。
因此取配制好的母液 0.2ml 加生理盐水0.8ml ，经一次稀释成工作液，再取 0.1ml 工作液,
按下表所示加入不同量的生理盐水，即可配制成不同浓度的测试组。
加生理盐水（ml ）
溶液量（ml ）
溶液浓度 注射鼠数（只）
母液/只鼠（ml ）
Mu/ml 1.1 1.2 1/12 5 1/60 60 1.5 1.6 1/16 5 1/80 80 1.9 2.0 1/20 5 1/100 100 2.3 2.4 1/24 5 1/120 120 2.7 2.8 1/28 5 1/140 140 3.1 3.2 1/36 5 1/160 160 3.5 3.6 1/36 5 1/180 180 3.9 3.6 1/40 5 1/200 200 4.3 4.4 1/44 5 1/220 200 4.7
4.8
1/48
5
1/240
240
瓶装的FSH 经1ml 生理盐水稀释成母液，可配制成 10个测试组，为50只小白鼠注
射。
2、 小白鼠称重分组
各测试组小白鼠组内体重的差异不得超过
2g ,将小白鼠分为5组，每组5只，分别编
号，其中一组为对照组，注射同样剂量的生理盐水。
其余四组为测试不同浓度样品的测试组。
3、 注射
将稀释好的药剂分别给各组的小白鼠腹部皮下注射 0.2ml ,对照组注射生理盐水， 注意
注射量力求准确，不得使药液注射胸腔或腹腔或逸出体外。
4、 剖检
于注射药液后72〜76小时，先用颈椎脱臼法或撞击头部法处死小白鼠，用图钉将小白 鼠固定于解剖板上，用剪刀剪开腹腔，将子宫卵巢剥离取出，观察子宫增大情况。
5、 效价确定
将各组子宫与对照组比较，每组
5只小白鼠中有3只或3只以上子宫增大一倍以上，
则定为阳性反应。
根据各测试组中呈阳性反应的最低浓度组效价值， 换算出被测样品中 PMSG
（或FSH 的小白鼠单位。
假设稀释液中PMSG浓度为1/x，若稀释后浓度在1/x以上各组均呈阳性反应，则1/x 浓度的测试组为呈阳性反应的最低浓度。
实际注入鼠体内的供试品药液量为1/x • 1/5ml=1/5x ml ，贝U 1ml供试品药液中含有的生物效价为5x小白鼠单位（Mu）。
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