革兰阳性球菌

• 2．鉴定 • (1)涂片革兰染色镜检：标本或增菌液 直接涂片，革兰染色镜检见革兰阳性、呈葡 萄串状排列的球菌，无芽孢，无荚膜，即可 作出“查见革兰阳性球菌，葡萄串状排列， 疑为葡萄球菌”的初步报告。
• 菌落的性状： • （1）金葡：直径6~8mm，光滑、完整、稍隆起、 半透明，金黄色或者橙黄色色素，并在菌落周围 出现或不出现透明溶血环。 • （2）表葡：5~6mm，某些产黏液株能黏附在平板 表面，无色素或白色色素。 • （3）溶血：光滑奶酪状，不透明，无色素或奶油 色、黄色。 • （4）里昂：边缘整齐稍扁，奶色或黄色。 • （5）腐生：光滑、凸起、不透明、白色或柠檬色。
2.所致疾病：
感染类型
侵袭性
所致疾病
局部感染 全身感染 假膜性肠炎 食物中毒
毒素性
毒性休克综合征（TSS）
烫伤样皮肤综合征
3.凝固酶阴性的葡萄球菌 • 多为正常菌群，是医院感染的常见病 原菌 • 表皮葡萄球菌感染与临床上的人工植 入物有关 • 腐生葡萄球菌与女性尿路感染有关 • 感染与细菌的荚膜有关（生物膜）
3.生化特性和抗原结构
• 发酵葡萄糖和多种糖类，产酸不产气 • 触酶阴性A群链球菌对杆菌肽敏感，PYR试验 阳性；B群链球菌CAMP试验阳性；D群链球菌 七叶苷试验阳性；α-溶血性链球菌不分解 菊糖，对optochin耐药；肺炎链球菌分解菊 糖，对optochin敏感，胆盐溶菌试验阳性， 荚膜肿胀试验阳性。
毒性休克综合征毒素-1（TSST-1）
• 引起机体发热，增加对内毒素的敏感性 • 可引起多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综合征 （TSS）
表皮剥脱毒素（exfoliative toxin）
• 引起烫伤样皮肤综合征（staphylococcal sca
lded skin syndrome，SSSS）
SPA能与IgG1、2、4的Fc段发生非特异性结 合。IgG 的 Fab段仍可同Ag特异性结合—— 协同凝集反应。（co-agglutination）用于多 种细菌抗原的检测。
2、多糖抗原：具有群特异性。
5.分类
• 35个种，17个亚种 • 主要致病性菌种： • 金黄色葡萄球菌 • 表皮葡萄球菌 • 头状葡萄球菌 • 人葡萄球菌 • 腐生葡萄球菌 • 凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌(CNS) • 噬菌体分型、质粒分型、血清学分型等
2.培养特性： • 菌落形态： • 血琼脂平板上，经35℃培养18～24小 时 • 直径0.1~0.75mm • 灰白色或乳白色、圆形、凸起、表面 光滑、半透明或不透明的小菌落。 • 可以出现不同的溶5℃培养18～ 24小时可形成细小、中央呈脐窝状、灰色扁 平的菌落，周围形成草绿色溶血环。 • 在液体培养基中呈混浊生长，培养时 间过长，可使培养基变澄清、管底沉淀。
• 任何标本中分离出金葡菌，都应做药敏并尽快 报告 • 从输尿管、人工植入组织中分离到的“表葡”， 从尿标本中分离出的“腐生葡”应视为病原菌。 • 葡萄球菌在尿标本中﹥103~4为阳性菌尿标准。 • 凝固酶阴性者引起感染或流行时应鉴定到种。 • MRSA体外对头孢菌素“敏感”为假相。
第二节
链球菌属（Streptococcus）
毒素：
膜损伤毒素（葡萄球菌溶素） 杀白细胞素 肠毒素 表皮剥脱毒素 毒性休克综合征毒素—1
血浆凝固酶
• 概念 • 使含有抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质 • 作用机理 • 结合凝固酶（纤维蛋白原交联） • 游离凝固酶（被协同因子激活） • 致病机理： • 抵抗吞噬细胞的吞噬 • 保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏 • 是感染局限化和形成血栓 • 鉴别有无致病性的重要指标
二、分类
溶血现象 名称 类别 致病性
草绿色溶 溶血 甲型溶血性 多为条件致病 血 链球菌 菌
完全溶血 溶血 乙型溶血性 致病力强 链球菌 不溶血 丙型链球菌 无致病性
Lancefield抗原血清分型 • 根据C抗原将链球菌分为20个群，血清 群与溶血性没有相关性 • A群是主要的致病菌 • D群链球菌——肠球菌 • N群链球菌——乳球菌
凝固酶试验
玻片法：测定结合 型凝固酶，10秒钟 观察结果。
试管法：测定游离 型凝固酶，4小时后 观察结果。
• 乳胶凝集试验(如slidex staph plus)可快 速鉴定金黄色葡萄球菌。基本原理是：在 纸板或玻片上滴加包被有人类纤维蛋白原 和抗金黄色葡萄球菌单克隆IgG抗体的蓝色 胶乳颗粒，然后用接种环挑取待鉴定葡萄 球菌的新鲜培养物与之混匀，出现肉眼可 见凝集现象为阳性。此试验不仅可检测金 黄色葡萄球菌凝固酶，还可检测葡萄球菌A 蛋白。
三、临床意义
• 通过外源性或内源性感染引起： • 1、化脓性感染、局部化脓性炎症 如：皮肤软组织感染：疖、痈、毛囊炎、 中耳炎、蜂窝织炎和伤口化脓性感染；全身 性感染，如败血症、脓毒血症、骨髓炎、心 内膜炎和脑膜炎等；呼吸道感染，如支气管 肺炎、肺炎、脓胸等；医院内感染。 •
• 2、毒素样疾病：食物中毒、急性胃肠炎、 烫伤样皮肤综合征。 • 3、葡萄球菌性肠炎：长期使用广谱抗生素 引起的正常菌群失调所致。
一、生物学性状
1.形态染色 球形，链状排列，触酶试验阴性、革兰染 色阳性(G+)
第二节
链球菌属（Streptococcus）
• 一、生物学性状
• 1.形态染色
• 液体培养基中链状生长，固体培养基 中可成单，成双生长。 • 无鞭毛、无芽胞，某些菌株可形成荚 膜。
2.培养特性：
• 营养要求高：血平板或 含血清培养基 • 最适pH值7．4～7．6， 温度35～37℃，在5％～ 10％CO2环境中生长更好。 • 液体培养溶血性菌株为 沉淀生长，不溶血菌株 则均匀混浊生长。
第一节 葡萄球菌属（staphylococcus）
• 一、生物学性状 • 1.形态与染色 • 球形，葡萄串状，革兰染色阳性 （G+）
第一节 葡萄球菌属（staphylococcus）
• 一、生物学性状 • 1.形态与染色 • 在液体培养基中或脓汁标本中可见成单、成双或 短链状排列。 • 无芽胞，无鞭毛，某些菌株可形成荚膜。 • 当细菌衰老、死亡、被吞噬后或在青霉素等药物 作用下(可形成L型菌)，菌体可呈革兰阴性。 • 细菌L型—G-
临床分类
• • • • • • • • 化脓性链球菌：菌落直径大于0.5mm的A群链球菌 马链球菌：菌落直径大于0.5mm的C群链球菌 似马链球菌：菌落直径大于0.5mm的G群链球菌 米勒链球菌：菌落直径小于0.5mm的A、C、G群链 球菌 无乳链球菌：B群β溶血链球菌 牛链球菌：不溶血D群链球菌 肺炎链球菌 草绿色链球菌群
脓液、创伤分泌物、 穿刺液、咽拭子、 尿液、痰液 直接涂片、 分离培养、 染色镜检 接种血平板 初步报告
脑脊液、 血液
粪便、呕 吐物
增菌培养 （5%CO2） 分离培养， 接种高盐甘 露醇平板
挑选可疑 菌落
药敏试验 鉴定试验
涂片染 色镜检
血浆凝固酶 试验
耐热核酸 酶
乳胶凝集 试验
葡萄球菌 生化鉴定
几种常见葡萄球菌的鉴别：
• 尿标本必要时作细菌菌落计数。粪便、呕吐 物或剩余的食物标本接种于高盐甘露醇平板 或卵黄高盐平板。 • 金黄色葡萄球菌在高盐甘露醇平板上呈淡黄 色菌落；表皮或腐生葡萄球菌呈白色或柠檬 色菌落。 • 金黄色葡萄球菌在卵黄高盐平板上，其菌落 周围形成白色沉淀环，而表皮或腐生葡萄球 菌则无此现象。
• (3)生化反应 • 1)触酶试验阳性。 • 2)血浆凝固酶试验：可用玻片法和试管 法检测。金黄色葡萄球菌阳性，而表皮、腐 生或溶血性葡萄球菌阴性。
葡萄球菌溶素
• α溶素 • 损伤细胞膜的毒素（细胞毒素）
杀白细胞素
• 细胞毒素 • 攻击中性粒细胞和巨噬细胞 • 抵抗宿主吞噬细胞，增强细菌侵袭力
肠毒素
• • • • 约1/3临床分离金黄色葡萄球菌可产生 引起急性胃肠炎，即食物中毒 耐热，抗胃肠液中蛋白酶 作用机制：刺激呕吐中枢导致以呕吐为主要 症状的食物中毒
(2)分离培养 • 1)血液、脑脊液等标本：接种增菌液培 养基进行增菌，如增菌液发生混浊、内有胶 胨样凝块等现象，可进一步转种血琼脂平板 进行分离培养；如无细菌生长，须培养至7 天，再转种血琼脂平板确定有无细菌生长。
• 2)脓汁、咽拭子、尿道分泌物等标本： 可直接分离培养于血琼脂平板。经24～48小 时培养，可形成直径1～3mm或更大、不同色 素的菌落。 • 金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的菌落为 金黄色，周围有明显的β -溶血环；部分菌 落可呈灰白色或柠檬色。
• 金葡菌在血琼脂平板上典型菌落
• 高盐甘露醇平板呈淡 橙黄色色菌落
3.生化反应
• 生化反应活跃，能够分解多种糖类（葡萄 糖、麦芽糖等，产酸不产气，致病性葡萄 球菌可分解甘露醇产酸）和蛋白质 • 触酶试验阳性 • 凝固酶阳性、耐热DNA酶阳性
4.抗原构造
1、蛋白抗原--葡萄球菌A蛋白 （staphylococcal protein A SPA）
6.抵抗力
• 对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥， 耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。 • 能在含有10%～15%的NaCl琼脂中生长 • 对碱性染料（龙胆紫）敏感 • 易产生耐药性，特别对青霉素
二、微生物学检验
• 1．标本 • 根据不同病症和体征采集不同标本。 • 化脓性感染病灶采集脓汁、渗出液、穿 刺液、咽拭子标本； • 菌血症、败血症采集血液标本； • 脑膜炎采集脑脊液标本； • 食物中毒采集粪便、呕吐物或剩余的食 物标本。
• 抗原复杂：多糖抗原和蛋白抗原 根据细胞壁上的多糖抗原（C抗原）将 链球菌分为20个群 蛋白抗原：M蛋白、F蛋白、G蛋白，具 有型特异性 M抗原是A群链球菌的主要致病物质，还 是引起超敏反应的异嗜性抗原。
4.抵抗力
• 多数对干燥和消毒剂敏感，肺链除 外 • 肺炎链球菌易出现耐药性，其他较 少引起耐药