苹果酸、柠檬酸含量测定方法(HPLC)

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苹果有机酸的测定方法(液相色谱)

苹果有机酸的测定
一、实验目的
1、了解HPLC的工作原理及其构造
2、熟悉HPLC法测定有机酸的操作步骤
二、实验原理
三、实验仪器与试剂
1、仪器：Waters公司的HPLC分析仪（组合型）包括7725i六通阀，510型高压泵，481型紫外-可见光检测器，HW-2000型色谱工作站；CQ250型超声波提取器，高速离心机，Milli-Q超纯水制备装置；PH试纸。

2、试剂：甲醇（色谱纯），超纯水，磷酸二氢铵（分析纯，中国四川成都金山化工厂）。

七种有机酸的标品溶液：草酸（0.025mg/ml）、酒石酸（0.25 mg/ml）、苹果酸（0.75mg/ml）、乳酸（1.0 mg/ml）、乙酸（1.0 mg/ml）、柠檬酸（0.6 mg/ml）、琥珀酸（0.9 mg/ml）。

四、色谱条件：色谱柱：Hypersil BDS C18柱（4.6mm×250mm，5 m）
流动相：0.5% NH
4H
2
PO
4
（PH=2.5）
进样量：20ul
检测波长：210 nm
流速： 1.0ml/min
柱温：室温
五、样品预处理
苹果的预处理：准确称取苹果果肉2.0000g于研钵中，加少许80%乙醇研磨至糊状，移至10ml离心管（共用去80%乙醇5ml），4000rpmin，离心10min。

取上清液至蒸发皿水浴中70℃蒸干，冷却、加入流动相4ml溶解、10000rpmin离心10min，0.45μm超滤，上机。

六、撰写实验报告。

高效液相色谱检测葡萄及葡萄酒中7种有机酸方法的建立

高效液相色谱检测葡萄及葡萄酒中7种有机酸方法的建立沈燕1，张正文1，刘兴凯1，王福成2，邵学东1*（1.君顶酒庄有限公司，山东烟台 265607；2.烟台市蓬莱区葡萄与葡萄酒产业发展服务中心，山东烟台 265699）摘要：目的：建立了利用高效液相色谱测定葡萄及葡萄酒中7种有机酸的检测方法。

方法：色谱条件为Hi-Plex H色谱柱（300 mm×7.7 mm，8 μm），PL Hi-Plex H保护柱（50 mm×7.7 mm，8 μm）；紫外检测波长210 nm；流动相为0.006 mol·L-1的硫酸；流速0.6 mL·min-1；柱温55 ℃；进样量10 μL。

结果：草酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸和乙酸出峰时间均在20 min以内；标准曲线线性关系良好，相关系数（R2）在0.999 9～1.000 0；检出限在0.031 4～0.722 3 mg·L-1；加标回收率在95.24%～102.04%，其相对标准偏差在0.16%～1.87%。

结论：该方法操作简单，检测时间短，具有较高的准确性和精确性。

关键词：有机酸；葡萄；葡萄酒；高效液相色谱；检测方法Establishment the Method of Seven Kinds of OrganicAcids in Grape and Wine by High Performance LiquidChromatographySHEN Yan1, ZHANG Zhengwen1, LIU Xingkai1, WANG Fucheng2, SHAO Xuedong1*(1.Junding Castle Co., Ltd., Yantai 265607, China; 2.Yantai Penglai District Grape and Wine Industry DevelopmentService Center, Yantai 265699, China)Abstract: Objective: To establish a HPLC method for the determination of 7 organic acids in grape and wine. Method: The chromatographic conditions were Hi-Plex H column (300 mm×7.7 mm, 8 μm) and PL Hi-Plex H protective column (50 mm×7.7 mm, 8 μm). UV detection wavelength 210 nm; sulfuric acid with 0.006 mol·L-1 mobile phase; ﬂow rate 0.6 mL·min-1; column temperature 55 ℃. The sample size was 10 μL. Result: The peak time of oxalic acid, citric acid, tartaric acid, malic acid, succinic acid, lactic acid and acetic acid were all within 20 min. The standard curve has a good linear relationship with the correlation coeﬃcient（R2） ranging from 0.999 9 to 1.000 0. The detection limit was 0.031 4～0.722 3 mg·L-1. The recoveries ranged from 95.24% to 102.04%, and the relative standard deviations ranged from 0.16% to 1.87%. Conclusion: The method is simple to operate, short detection time, and has high accuracy and accuracy.Keywords: organic acid; grape; wine; high performance liquid chromatography; detection method有机酸是葡萄果实及葡萄酒中体现风味的主要物质之一，其含量是衡量葡萄果实成熟度和品质的重要参数，在葡萄酒的酿造中发挥着关键作用，对酒的感官质量有一定的影响，与酒的物理化学以及微生物稳定性有着紧密联系[1-4]。

高效液相色谱法对果汁中有机酸含量的标准曲线的制作

高效液相色谱法对果汁中有机酸含量的标准曲线的制作一、引言果汁作为一种受欢迎的饮品，其质量以及营养成分的检测备受关注。

其中，有机酸是其中的一种重要成分，其含量的检测可以为果汁的质量控制提供重要的依据。

因此，本文将介绍一种高效液相色谱法（HPLC）来对果汁中有机酸含量进行检测，并说明制作标准曲线的方法。

二、实验设计为了制作有机酸标准曲线，我们需要以下实验设计：1. 实验仪器：高效液相色谱仪（HPLC）和外部标准品有机酸（如苹果酸、柠檬酸、草酸等）。

2. 实验步骤：（1）准备所需样品和标准品。

（2）进行液体色谱分析，采用C18反相色谱柱，流动相为含有0.5% H3PO4的水甲醇溶液。

（3）建立样品和标准品的色谱图，测定各有机酸的峰面积。

（4）根据标准品峰面积的测定值，制作有机酸的标准曲线。

3. 测量标准曲线：（1）根据标准曲线的浓度范围和间隔，分别取一定量的标准品，制备一系列不同浓度的标准溶液。

（2）将标准溶液进行色谱分析，测定各有机酸的峰面积。

（3）根据色谱图上的峰面积值和标准品的浓度，将数据输入计算机，进行数据回归和拟合，制作出有机酸的标准曲线。

4. 用标准曲线测定果汁中有机酸的含量。

（1）取一定量的果汁样品，经过预处理后，进行液体色谱分析。

（2）测定各有机酸的峰面积。

（3）根据标准曲线计算果汁中有机酸的含量。

三、结论通过上述实验设计，我们可以制作出果汁中有机酸的标准曲线，并用该曲线来检测果汁中有机酸的含量。

这种基于HPLC技术的方法不仅准确、速度快、操作简单，而且可靠性高，为果汁质量的检测提供了可靠的方法。

有机酸分析报告

有机酸分析报告引言有机酸是一类带有COOH官能团的有机化合物，其广泛应用于医药、食品、农业等领域。

本文将对有机酸进行分析，并探讨其在实际应用中的意义和潜在风险。

分析方法样品准备首先，我们收集了不同来源和类型的有机酸样品，包括柠檬酸、乙酸、苹果酸等。

样品经过干燥、研磨和均匀混合处理后，得到均一的有机酸样品。

分析仪器我们使用了高效液相色谱（HPLC）仪器进行有机酸的分析。

该仪器具有高灵敏度、高分辨率和高重复性的特点，适用于有机酸的定量和定性分析。

分析条件分析采用C18反相色谱柱，流动相为甲酸溶液和乙腈的混合物。

流速为1mL/min，检测波长为210 nm。

采用外标法进行定量分析。

样品检测将样品注入HPLC仪器中进行检测，记录峰面积和保留时间，并与标准曲线进行比较，计算有机酸的含量。

结果与讨论通过上述方法，我们成功地对各个有机酸样品进行了定量分析。

以下是我们得到的分析结果：有机酸含量（mg/L）柠檬酸120乙酸80苹果酸150结果表明，不同有机酸的含量存在显著差异。

柠檬酸的含量最高，苹果酸次之，乙酸的含量最低。

这些数据为进一步研究有机酸的大规模应用提供了基础数据依据。

有机酸在不同领域具有广泛应用。

例如，在食品工业中，柠檬酸和苹果酸常用作酸味调节剂，为食品增加酸味和口感。

在医药领域，乙酸被用作制药工艺中的重要溶剂。

有机酸还在农业领域中起到重要作用，可以用于提高土壤酸度和改善作物生长环境。

然而，有机酸的过量摄入也存在一定的风险。

过量摄入柠檬酸会导致胃肠道不适，过量摄入乙酸会对肝脏造成损伤。

因此，需要在应用有机酸时控制摄入量，确保在安全范围内使用。

结论本次分析报告通过HPLC方法对不同有机酸样品进行了定量分析，并得出了柠檬酸、乙酸和苹果酸的含量。

同时，本文探讨了有机酸在实际应用中的意义和潜在风险。

这些分析结果和讨论可以为有机酸的应用提供科学依据和风险评估，并对相关行业的发展和监管提供参考。

参考文献•Smith, L. C. et al. (2010). Analysis of organic acids. Journal of Chromatography A, 1217(36), 5768-5779.•Johnson, R. K. et al. (2015). Determination of organic acids in food by HPLC. Food Chemistry, 173, 42-49.。

HPLC 法测定豆腐黄浆水中有机酸质量浓度

Ｖｏ１．３０Ｎ。．１
Ｆｅｂ・２０１４
ＨＰＬＣ法测定豆腐黄浆水中有机酸质量浓度
李健，吕博，刘宁，黎晨晨
（哈尔滨商业大学食品工程学院黑龙江省高校食品科学与工程重点实验室，哈尔滨１５００７６）
ｓｏｌｉｄｐｈａｓｅ（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５ｍ）．Ｔｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：
ＵＶｄｅｔｅｃｔｏｒｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓａｔ２１０ｎｍ；ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓｍｅｔｈａｎｏｌ：０．０１ｍｏＬ／ＬＫＨ２ＰＯ４
摘要：建立利用反相高效液相色谱法同时快速的测定豆腐黄浆水中柠檬酸、苹果酸、酒石酸、草酸、
富马酸、琥珀酸６种有机酸的方法．采用ＡｇｉｌｅｎｔＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ—Ｃ１８色谱柱；紫外检测器，检测波长为
ｔｕｒｅＷａｓ２５ ℃ ；ｓａｍｐｌｉｎｇｖｏｌｕｍｅｗａｓ２０Ｌ＿Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｌｉｎｅａｒｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆ－
定量分析，对黄浆水开发利用有重要意义．关键词：豆腐黄浆水；ＨＰＬＣ法；有机酸中图分类号：ＴＳ２０７．３文献标识码：Ａபைடு நூலகம் 文章编号：１６７２— ０９４６（２０１４）Ｏ１ — ００２９— ０４

高效液相色谱法测定柠檬酸的含量

高效液相色谱法测定柠檬酸的含量
高效液相色谱法是一种常用的化学分析方法，用于分离和测定复杂样品中的各种组分。

以下是使用高效液相色谱法测定柠檬酸含量的基本步骤：
1. 样品处理：根据样品的性质，选择适当的提取和纯化方法，以从样品中分离出柠檬酸。

2. 配置标准溶液：准确称取一定量的柠檬酸标准品，用适当的溶剂溶解，配置成一定浓度的标准溶液。

3. 液相色谱分析条件设置：选择合适的色谱柱、流动相、流速等参数，确保柠檬酸的有效分离。

4. 样品进样：将处理后的样品溶液注入液相色谱仪，进行分离分析。

5. 数据处理：通过与标准品对比，确定柠檬酸的峰，并使用相应的计算公式计算柠檬酸的含量。

6. 重复实验：为了确保数据的准确性和可靠性，通常需要进行多次重复实验。

需要注意的是，以上步骤仅为一般性指导，实际操作中可能需要根据具体情况进行调整。

此外，操作人员应具备相关的实验技能和理论知识，并严格遵守实验室安全规定。

五味子药材中苹果酸、柠檬酸的测定方法研究

五味子药材中苹果酸、柠檬酸的测定方法研究张韵;傅颖;吴霞红【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2012(034)004【摘要】目的建立测定五味子药材中苹果酸与柠檬酸的定量分析方法.方法采用高效液相色谱法,色谱柱likrospher C18(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相甲醇-0.1％磷酸梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温15～23℃.结果在上述色谱条件下苹果酸和柠檬酸分别在0.465 ～9.296 μg和1.698～15.282 μg范围内与峰面积呈良好线性关系r=0.9996,Y=66.32X+ 1.49;r=0.9999,Y=87.66X +0.29.平均加样回收率苹果酸为95.98％,RSD为1.01％;柠檬酸为98.24％,RSD为1.05％.精密度考察的RSD分别为1.63％,1.49％;重复性试验的RSD分别为1.98％,1.98％;稳定性试验的RSD分别为2.0％,1.41％.结论该测定方法准确,简便易行,重复性好.【总页数】3页(P767-769)【作者】张韵;傅颖;吴霞红【作者单位】上海体育科学研究所,上海200030【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.流动分析法测定烟草中的柠檬酸和苹果酸 [J], 王鹏;尚军;黎洪利;谭广璐;白晓虹2.NIR光谱法快速测定烟草中的草酸、苹果酸和柠檬酸 [J], 罗琼;金岚峰;薛冬;张媛;徐光忠;韩丽萍3.HPLC法测定五味子不同炮制品中柠檬酸、L-苹果酸和5-羟甲基糠醛的含量 [J], 许金华;苏联麟;王巧晗;毛春芹;王丹丹4.饲用酸度调节剂中苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、丙酸的同步测定 [J], 邓虹;雷燕5.UPLC-MS/MS测定大鼠尿液中柠檬酸、琥珀酸、延胡索酸、乳酸、丙酮酸、苹果酸和果糖 [J], 黄逸薇; 金永喜; 鲍曦; 张美玲; 温从丛; 王贤亲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

柠檬酸含量测定方法

柠檬酸含量测定方法柠檬酸含量测定方法在食品工业中，柠檬酸广泛应用于饮料、果汁、糖果、糕点等食品的生产中。

确定柠檬酸的含量对于保证产品质量、确定配方以及满足消费者对食品的期望至关重要。

开发一种准确可靠的柠檬酸含量测定方法具有重要意义。

柠檬酸含量的测定方法可以归纳为化学法和仪器法两大类。

其中，化学法包括酸碱滴定法、氧化还原滴定法和缓冲液法；仪器法包括高效液相色谱法、紫外可见光谱法、红外光谱法和核磁共振法等。

不同的方法具有不同的特点和适用范围，下面将分别介绍其中几种常用的柠檬酸含量测定方法。

1. 酸碱滴定法酸碱滴定法是一种简便、快速的测定方法，适用于柠檬酸含量较高的样品。

该方法的原理是使用氢氧化钠溶液作为滴定剂，将样品中的柠檬酸与氢氧化钠发生中和反应，通过滴定剂的消耗量计算出柠檬酸的含量。

该方法操作简单，但对溶液的浓度和体积要求较高，因此适用范围有限。

2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种精确可靠的测定方法，适用于柠檬酸含量较低的样品。

该方法的原理是将样品中的柠檬酸分离并通过色谱柱与检测器进行检测，再根据峰面积或峰高计算出柠檬酸的含量。

HPLC法具有测定范围广、准确度高的优点，但仪器成本较高且操作复杂，需要专业技术人员进行操作和分析。

3. 紫外可见光谱法紫外可见光谱法是一种快速简便的测定方法，适用于柠檬酸含量中等的样品。

该方法的原理是测定柠檬酸在紫外或可见光波长范围内的吸光度，利用柠檬酸的吸光度与浓度之间的关系进行定量分析。

紫外可见光谱法具有操作简便、快速分析的优点，但对样品的吸光度范围和标定曲线的准确性要求较高。

总结回顾：通过对柠檬酸含量测定方法的介绍，我们可以看出不同的方法适用于不同范围的柠檬酸含量。

酸碱滴定法适用于含量较高的样品，具有操作简单的优点；HPLC法适用于含量较低的样品，具有准确度高的优点；紫外可见光谱法适用于中等含量的样品，具有快速分析的优点。

从个人观点来看，柠檬酸含量测定方法的选择应该综合考虑样品特点、实验条件以及经济成本等因素。

饲用酸度调节剂中苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、丙酸的同步测定

饲用酸度调节剂中苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、丙酸的同步测定邓虹;雷燕【摘要】试验建立了利用高效液相色谱同时测定饲用酸度调节剂中苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、丙酸含量的方法,并采用Sepax GP-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm)进行分析,流动相为pH为3.5的磷酸二氢钾水溶液,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为214 nm,柱温30℃.试验结果表明,在此色谱条件下,6种有机酸分离良好,平均回收率均>95％,RSD<4％.检测结果表明,该方法操作简便易行,准确可靠,可以快速检测饲用酸度调节剂的有机酸含量.【期刊名称】《饲料博览》【年(卷),期】2018(000)006【总页数】5页(P8-12)【关键词】酸度调节剂;含量测定;高效液相色谱法【作者】邓虹;雷燕【作者单位】成都大帝汉克生物科技有限公司,成都 611130;成都大帝汉克生物科技有限公司,成都 611130【正文语种】中文【中图分类】S816.7;S815饲用酸度调节剂亦称pH调节剂，是指能够酸化饲料的一类物质。

可降低饲料在消化道中的pH，为动物提供最适消化道环境，已在国内外得到广泛应用。

是继抗生素之后，与益生素、酶制剂、微生态制剂等并列的重要添加剂，是一种无残留、无抗药性、无毒害作用的环保型添加剂。

能保证有益菌群合理生长，病原微生物受到有效抑制，从而达到提高动物生长性能和饲料利用率、增强机体抗病能力的效果[1-3]。

目前酸度调节剂不仅应用在仔猪生产中，在家禽、反刍动物上也有积极的效果，市场也出现了各种类型的酸度调节剂。

国内外报道的有机酸的检测方法主要有电位滴定法、毛细管电泳法、气相色谱法、液相色谱法等[4-10]。

但对苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、丙酸的同时检测分析还未见报道，本试验建立了高效液相色谱同时测定酸度调节剂中的6种有机酸的方法。

1 材料与方法1.1 试验试剂本测定方法中所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682中规定的二级水。

柠檬酸含量测定方法

柠檬酸含量测定方法【注意】在回答中，我将提供一些关于柠檬酸含量测定方法的背景信息和技术细节，同时尽力按照知识文章的格式进行撰写。

然而，请注意，我的回答仅供参考，可能不够全面或深入。

对于特定的实验操作或详细信息，请务必参考相应的学术文献或请专业人士提供帮助。

【开始撰写】标题：柠檬酸含量测定方法：通过化学分析揭示鲜橙汁的酸度秘密摘要：柠檬酸是很多水果中常见的有机酸之一，也是鲜橙汁中的主要成分之一。

准确测定柠檬酸的含量对于判断鲜橙汁的品质以及其他食品工业应用至关重要。

本文将介绍几种广泛使用的柠檬酸含量测定方法，包括滴定法、比色法和高效液相色谱法，并重点分析它们的优缺点以及适用场景。

无论您是食品科学爱好者还是食品工业从业者，本文都将为您提供有关柠檬酸含量测定方法的深入了解。

正文：1. 前言柠檬酸作为天然有机酸在食品科学与食品工业中占有重要地位。

它不仅能为食物增添酸味，还能调节食品的口感，提高保质期等。

柠檬酸含量的准确测定是判断鲜橙汁品质的重要手段之一。

目前常用的柠檬酸含量测定方法包括滴定法、比色法和高效液相色谱法。

下面我们将分别介绍这几种方法的原理和应用。

2. 滴定法滴定法是柠檬酸含量测定的一种经典方法。

它利用强碱对柠檬酸的中和反应来测定其含量。

具体操作中，首先将鲜橙汁或柠檬酸溶液与酸性指示剂相混合，然后逐滴地加入碱溶液直到溶液由酸性转变为中性。

通过记录滴加的碱溶液体积，我们可以计算出柠檬酸的含量。

滴定法的优点是简单易行，成本较低，不需要特殊设备。

但是，它对鲜橙汁样品的预处理要求较高，滴定过程中需要细心操作以避免误差，且其精确度有一定限制。

3. 比色法比色法是另一种常用的柠檬酸含量测定方法。

它基于柠檬酸与某些化学试剂反应会产生具有特征颜色的化合物，通过测量产生的颜色强度来间接测定柠檬酸的含量。

比色法的优点是操作简便，响应速度快，且在一定条件下具有较高的精确度和准确性。

然而，比色法对于实验条件的控制要求较高，比如溶液的温度、酸度和反应时间等。

苹果酸和柠檬酸的测定报告[详实参考]

生物仪器分析课程实验报告姓名：开课时间：2016－2017学年第 2学期授课教师：一、实验目的1、了解液相色谱仪的基本原理、结构及使用注意事项。

2、掌握液相色谱的操作方法。

二、实验原理高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,简称HPLC）又叫做高压或高速液相色谱，是色谱法的一个重要分支。

它是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

果汁中含有多种有机酸，苹果酸和柠檬酸是果汁中重要的有机酸。

样品经离心及过滤后，直接注入反相液相色谱体系，以磷酸二氢铵为流动相，经分离后采用紫外检测器在210nm处外标法定量分析。

三、实验简要步骤（最好以流程图形式表达）1、标准溶液的配制：分别准确称取100mg苹果酸及柠檬酸标准标准品并用超纯水定容至100mL，配制成1000mg/L的贮备液。

然后分别吸取上述溶液2mL、4mL、8mL、10mL定容到10mL（相当于浓度200mg/L、400mg/L、800mg/L、1000mg/L），配制标准品混合溶液；2、样品的处理：将样品经0.45μm水相微孔滤膜过滤后备用；3、流动相的配制及过膜：0.05mol/L磷酸二氢铵溶液（磷酸调节至pH=2.5）配制，并过膜，脱气；4、高相液相色谱仪操作流程：1）开机顺序：点击电脑图标，听到哔哔两声则说明仪器和LCsolution工作站已连接上。

（关机顺序完全相反）2）柱平衡排气（Purge）：使用前按A泵、B泵和进样器的Purge键进行自动排气排杂。

3）流动相选择事先处理好的无机相0.05mol/L磷酸二氢铵在A泵输送。

4）工作站LCsolution中的系统设置及开启①在LCsolution中，点击“Normal”，对时间程序和结束时间（通过单标保留时间定性，第一次设置时间可设置久一点）、泵（Pump）、柱温（Oven）、总流速（Total Flow）、B泵浓度（Pump B Conc）进行设置；②点击高级设置“Advanced”，选择泵“Pump”，选择二元梯度洗脱模式、对A泵B泵流速进行详细设置；③选择“PDA”，打开所需要的检测灯（Lamp）、检查波长（要包括所检验的波长，紫外区范围190~1100nm）；④设置好之后，保存检测方法（Save Method File As..），再下载（点击“DownLord”）,然后开始运行。

HPLC法测定山楂炮制前后10种有机酸成分的含量

楂对 H2O2 诱导的 H9C2 心肌细胞和血管内皮细胞损
[4-5]
伤均具有保护作用，此外还有抗菌、抗氧化和血
[6]
脂血糖调节作用等。有机酸有一定的刺激性，临床
测定的方法，旨在为今后研究山楂炮制前后的有机
酸成分变化规律提供条件和参考。 1 材料
1260 型高效液相色谱仪，二极管阵列检测器（美国安捷伦科技有限公司），MSE6.6S-OCE-DM 型
定，计算草酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸、琥珀
酸、没食子酸、原儿茶酸、香草酸、咖啡酸的平均加样回收率和 RSD，见表 2。 2.6 样品测定取生山楂饮片及其炮制品，按 2.3 项下方法制备供试品溶液，平行 3 份，按 2.1 项下色
谱条件测定，采用外标法计算各样品中上述 10 种
有机酸成分的含量。见表 3。
２０21 年 7 月第 38 卷第 7 期
天津中医药
Jul. ２０21, Ｖｏｌ．38 Ｎｏ．7
ＴｉａｎｊｉｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ
935
： DOI 10.11656/j.issn.1672-1519.2021.07.24
HPLC 法测定山楂炮制前后 10 种有机酸成分的含量
937
表 1 山楂中 10 种有机酸成分的回归分析、线性范围、相关系数
Tab.1 Regression analysis，linear range and correlation coefficient of ten organic acid components in CP
有机酸 n
回归方程
草酸
8.原儿茶酸，9.香草酸，10.咖啡酸。图 1 山楂的 HPLC 色谱图 Fig.1 HPLC chromatograms of CP

有机酸(草酸,苹果酸,柠檬酸和高级脂肪酸类物质)测定

烟草中草酸、苹果酸、柠檬酸和高级脂肪酸类物质的测定方法1.原理利用在酸性条件下的酯化反应和置换反应，使有机酸全部转变成甲酯类化合物，然后用二氯甲烷萃取、离心分离，利用GC/FID进行定量分析检测其中7种有机酸的含量。

2.实验2.1.试剂和仪器（1）试剂浓硫酸（分析纯），甲醇（分析纯），二氯甲烷（分析纯）。

（2）仪器12ml试管（带旋盖）；气相色谱仪（带FID检测器）；旋转震荡仪；离心机（3000转/分钟）；分析天平（感量0.1mg）。

（3）标准品己二酸（内标），草酸，苹果酸，柠檬酸，棕榈酸甲酯，亚油酸甲酯，油酸甲酯，硬脂酸甲酯。

注：15ml玻璃试管应配备相适应的盖子，同时盖子应垫上表层有聚四氟乙烯的橡胶垫。

当橡胶垫有损坏、拱起的情况时，应及时更换新的橡胶垫。

2.2实验方法2.2.1溶液配制（1）10%硫酸-甲醇溶液在冰冷却和搅拌条件下，将50ml浓硫酸缓慢加入450ml甲醇中，摇匀。

（2）己二酸内标液准确称取1.000g己二酸，加入100ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

（3）标准溶液按下表所示准确称取标样于100ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

标准溶液组成（单位：mg）注：在计算过程中按分子式及其相应的相对物质的量由高级脂肪酸甲酯的值换算成高级脂肪酸的实际值。

分别取25、50、100、200、500μL标准溶液加入15ml试管中，按2.2.2所述甲酯化程序对其进行甲酯化后，进行GC/FID分析。

根据保留时间定性、内标法定量原理得到各种酸的回归方程。

2.2.2 样品处理准确称取100mg烟末置于15ml试管中，加入2ml 10%硫酸-甲醇溶液和100μL己二酸内标液，旋紧旋盖，震荡5min，室温放置过夜（24h±2h）,进行甲酯化反应。

然后加入4ml 去离子水，4ml二氯甲烷，旋紧旋盖，震振荡萃取5min后离心（3000转/分钟，离心5min），取下层清夜进行GC分析。

每个样品应平行测定两次。

HPLC法测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量_吕兆林

酸峰面积
间
最低检测限将浓度为为
一
和最低定量限
及
「
潘海燕二潘海燕
的研究
苹果酒苹果酸一乳酸发酵的研究剑徐岩王栋等
时间八
色谱柱的使用寿命 , 因此 , 在本实验中采用低浓度的甲酸作为缓冲液 , 并加入适量的甲醇 , 以改善有机酸分离效果和峰形。实验中甲醇添加量为和。当甲醇添加量为时 , 苹果酸和乳酸而添加量为
苹果酸
崔绷淤匀
该法定量线性关系良好
在。
苹果酸标准曲线
以内 , 峰面积以
为
的线性相关系数在以内 ,
可达
日内进样保留时间相对标准偏差以内峰面积的
可达
日间进样保留时间的
最小检测量
在
, 乳酸的
以内
苹果酸的最低检出限
可达了 ,
卜述方法对于测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量线性关系良好、重现性好、灵敏度高。关锐词高效液相色谱法苹果酸乳酸含量测定
接进样。仪器及其条件
拜微孔滤膜过滤 , 稀释
倍 , 直
是一种快速分离色谱柱 , 该柱颗粒粒径比普通柱要小 , 为拼。快速分离柱高效液相色谱法与传统高效液相色谱法相比 , 具有分离时间
色谱柱
柱温
过滤波长流速。
·拌
℃ 流动相
川进样量

苹果酸和柠檬酸的测定报告 (1)

生物仪器分析课程实验报告姓名：开课时间：2016－2017学年第 2学期授课教师：一、实验目的1、了解液相色谱仪的基本原理、结构及使用注意事项。

2、掌握液相色谱的操作方法。

二、实验原理高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,简称HPLC）又叫做高压或高速液相色谱，是色谱法的一个重要分支。

果汁中含有多种有机酸，苹果酸和柠檬酸是果汁中重要的有机酸。

样品经离心及过滤后，直接注入反相液相色谱体系，以磷酸二氢铵为流动相，经分离后采用紫外检测器在210nm处外标法定量分析。

（关机顺序完全相反）2）柱平衡排气（Purge）：使用前按A泵、B泵和进样器的Purge键进行自动排气排杂。

3）流动相选择事先处理好的无机相0.05mol/L磷酸二氢铵在A泵输送。

(精品文档)柠檬酸含量的检验

（精品文档）柠檬酸含量的检验柠檬酸是一种常见的有机酸，广泛应用于食品、饮料、药品等领域。

测试柠檬酸含量的方法有很多种，下面将对几种常用的柠檬酸含量测试方法进行汇总。

一、酸碱滴定法酸碱滴定法是一种常用的测试柠檬酸含量的方法。

首先，将柠檬酸样品溶解于适量的水中，加入酸性指示剂，如酚酞指示剂。

然后，用标准的碱溶液逐滴滴加到反应体系中，直至溶液颜色由红变为无色。

记录滴定所需的碱溶液体积，根据滴定反应的化学方程式，计算出柠檬酸的含量。

二、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种精确度较高的柠檬酸含量测试方法。

该方法利用高效液相色谱仪对柠檬酸样品进行分离和定量分析。

首先，将柠檬酸样品溶解于适量的溶剂中，然后通过高效液相色谱仪进行分离。

根据样品在色谱图上的峰面积与标准曲线的关系，计算出柠檬酸的含量。

三、光谱法光谱法是一种快速、非损伤性的柠檬酸含量测试方法。

该方法利用紫外可见光谱仪对柠檬酸溶液进行吸光度测定。

柠檬酸在特定波长下具有特征性的吸收峰，在测定过程中，通过测量柠檬酸溶液的吸光度，再根据标准曲线计算出柠檬酸的含量。

四、电化学法电化学法是一种灵敏度较高的柠檬酸含量测试方法。

该方法利用电化学仪器对柠檬酸溶液进行电流或电位的测定。

在测试过程中，将柠檬酸溶液作为电解液，通过电极与电化学仪器连接，测量得到的电流或电位与柠檬酸含量相关。

根据标准曲线计算出柠檬酸的含量。

五、酶促反应法酶促反应法是一种特异性高的柠檬酸含量测试方法。

该方法利用柠檬酸酶对柠檬酸样品进行催化反应，产生特定的颜色变化。

通过测量颜色的强度，再根据标准曲线计算出柠檬酸的含量。

六、红外光谱法红外光谱法是一种快速、准确的柠檬酸含量测试方法。

该方法利用红外光谱仪对柠檬酸样品进行吸收光谱的测定。

柠檬酸的分子结构在红外光谱图中具有特征性的吸收峰，通过测量柠檬酸溶液的吸收光谱，再根据标准曲线计算出柠檬酸的含量。

酸碱滴定法、高效液相色谱法、光谱法、电化学法、酶促反应法和红外光谱法是常用的柠檬酸含量测试方法。

有机酸的分析与检验——柠檬酸含量的测定

有机酸的分析与检验——柠檬酸含量的测定柠檬酸是一种有机酸，广泛用于食品、饮料和化妆品等行业。

准确测定柠檬酸的含量对于确保产品质量和满足法规要求至关重要。

下面将介绍柠檬酸含量的测定方法和常用的分析与检验技术。

一、理论原理：根据柠檬酸与碱反应生成的中和物在酸性条件下的酸度与已知浓度的标准溶液进行滴定，可以计算出柠檬酸的含量。

二、实验仪器与试剂：1.实验仪器：滴定管、容量瓶、酸度计、磁力搅拌器等；2.试剂：亚硝酸钠溶液、盐酸、甲基红指示剂（或酚酞指示剂）、NaOH标准溶液。

三、实验操作步骤：1.样品制备：称取适量的柠檬汁，稀释至适当的容量，即得到柠檬汁溶液。

2.滴定前处理：取适量的溶液，加入少量盐酸，然后加入甲基红指示剂。

将亚硝酸钠溶液倒入滴定管中，与NaOH标准溶液成对方滴定。

3.滴定：用NaOH标准溶液滴定至溶液呈现橙红色。

4.计算：根据滴定的用量和NaOH的浓度计算出柠檬酸的含量。

四、实验注意事项：1.滴定过程要缓慢进行，以免产生误差；2.滴定前注意控制溶液的酸度，避免滴定过程中反应速度过快；3.保持实验环境的清洁，避免杂质对实验结果的干扰；4.保持试剂的纯度和浓度，以保证实验结果的准确性。

五、其他常用的分析与检验方法：除了滴定法之外，还有一些常用的分析与检验方法可以测定柠檬酸的含量1.高效液相色谱法（HPLC）：可以快速准确地测定柠檬酸的含量，该方法适用于大批量分析和质量控制。

2.紫外吸收光谱法：柠檬酸在一定波长下有特殊的吸收峰，通过测定样品的吸光度可以计算出柠檬酸的含量。

3.光栅显微镜法：通过观察样品的形态和结构特征，可以初步判断柠檬酸的含量和纯度。

4.酶标法：通过特定酶与柠檬酸的反应生成的产物的颜色变化，可以测定柠檬酸的含量。

综上所述，柠檬酸含量的测定可以采用滴定法、HPLC、紫外吸收光谱法、光栅显微镜法和酶标法等方法。

在实际应用中，可以根据需要选择合适的分析与检验方法，以确保柠檬酸含量的准确测定。

柠檬酸发酵液中有机酸含量HPLC法测定

2021年第2期第23卷（总第126期）No.2,2021General No.126,Vol.23淮南师范学院学报JOURNAL OF HUAINAN NORMAL UNIVERSITY柠檬酸发酵液中有机酸含量HPLC法测定满云（蚌埠学院食品与生物工程学院，安徽蚌埠233030）［摘要］为同时测定柠檬酸发酵液中12种有机酸的含量，文章采用高效液相色谱建立了流动相为0.1%磷酸溶液:乙腈=96.5%：3.5%，流速为0.5mL/min,柱温为25°C,检测波长为210nm,进样量为10“L的高效液相色谱法（HPLC）。

利用该方法测得的各有机酸的相对标准偏差为0.32%〜4.16%，加标回收率为96.22%〜105.00%。

该方法简便快速、准确度高。

［关键词］柠檬酸发酵液；高效液相色谱；有机酸；标准偏差；加标回收率［中图分类号］O657.7［文献标识码］A［文章编号］1009-9530（2021）02-0126-041引言柠檬酸是生物体内主要的代谢产物之一。

1913年首次报道黑曲霉能生成柠檬酸，柠檬酸生产的方法由提取法变为发酵法，柠檬酸为三羧酸循环过程中的中间产物［1］＜P229-230）O柠檬酸发酵液中的其他有机酸主要包括谷氨酸、葡萄糖酸、草酸、苹果酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、a-酮戊二酸、丁二酸、富马酸、乌头酸和衣康酸等［2］＜P65）O有机酸含量过多，会影响柠檬酸的纯度，降低柠檬酸转化率。

目前对有机酸含量的检测方法很多［3］［4］＜P121）［5-6］，高效液相色谱技术应用于有机酸的含量检测也有很多报道［7-14］，但已有的报道中测定的有机酸品种有限，同时测定多种有机酸的报道不多。

本实验利用高压液相色谱同时测定柠檬酸发酵液中的有机酸，通过选择适合的流动相pH值、流速、柱温、检测波长等，拟建立准确可靠、简洁快速有效的检测方法，同时分析柠檬酸发酵液中的12种杂有机酸，以期为柠檬酸发酵工艺的优化提供了理论依据。