碘化丙啶PI染色液(1mgml)
100PI染色液使用说明书
100×PI染色液使用说明书货号：SL7091规格：1ml保存条件：-20度保存，有效期1年。
产品内容：产品内容SL7091100×PI染色液（1mg/mL）SL7090-1ml说明书1份产品简介：碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基之间实现与DNA结合。
这种结合没有或者几乎无序列倾向性，大约每4-5个DNA碱基对结合一个染料。
PI也能与RNA结合，需要用核酸酶处理来区分DNA和RNA染色。
水溶液中PI的最大激发/发射波长是493/636nm。
一旦与核酸结合，荧光信号明显增强20-30倍，最大激发波长向红色波段迁移~30-40nm，最大发射波长向蓝色波段迁移~15nm，从而使其最大激发/发射波长变为535/617nm。
PI的摩尔吸光系数相对比较低，但是其具有足够大的斯托克司频移来同时检测核酸DNA和荧光标记抗体，只需要使恰当的滤片。
PI适用于荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪以及荧光计分析。
PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。
利用这一特性，通常与Calcein-AM、Hoechst33258或Hoechst33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定，用于细胞凋亡相关的研究。
也可以用作多重荧光染色的复染剂，兼容于各种细胞标记技术，包括直接或者间接的荧光抗体检测，mRNA原位杂交，细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。
PI 的单独染色也可以进行细胞周期的检测。
使用说明：可以用PBS稀释到1×使用，或与细胞悬液按照1:100的比例使用。
PI染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm,5min，弃上清液。
2、加入PBS1ml离心洗涤1次，弃上清。
3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。
PI染色检测细胞周期
PI染色检测细胞周期1)细胞样品的准备：（1）对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。
用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。
再次收集到离心管内。
1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。
对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。
加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。
再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。
轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
（2）对于悬浮细胞：1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。
对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。
加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。
再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。
轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
2)细胞固定：将细胞加入到1毫升冰浴预冷70%乙醇中，快速轻轻吹打混匀，4℃固定2小时或更长时间。
固定12-24小时可能效果更佳。
1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。
对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
小心吸除上清，可以残留约50微升左右的70%乙醇，以避免吸走细胞。
加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞。
再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。
轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
3)碘化丙啶染色液的配制4)染色：每管细胞样品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30分钟。
随后可以4℃或冰浴避光存放。
-FDA-PI双色荧光法检测藻细胞活性的研究实验方案.doc
FDA-PI双色荧光法检测藻细胞活性的研究实验方案一、藻培养二、细胞悬液的配制在10ml藻细胞液中加入1ml鲁哥氏溶液[8]，于黑暗中放置48h，使细胞固定。
固定后的细胞已全部失去活性，但细胞个体没有破碎分解。
固定后的藻细胞液在3000 r~min-1转速下离心，用培养基重悬3-4次，直到将鲁哥氏溶液清洗干净，溶液变成无色。
重悬后的细胞作为死亡细胞染色检测。
三、单染色法-FDA (双醋酸荧光素) 染色（1）配制溶液：将FDA溶于丙酮中，配成浓度为5 mg.ml-1的溶液，置于4℃冰箱中保存。
染色时将FDA加入到藻细胞液中，使其终浓度为100 μg.ml-1。
（2）活细胞染色：取处于对数增长期的藻细胞液，离心浓缩，蒸馏水清洗1次，加入FDA，在室温黑暗处放置5 min染色；染色后离心，蒸馏水清洗1-2次，最后用蒸馏水悬浮细胞，涂片观察。
（3）死亡细胞胞染色：取上面鲁哥氏溶液固定的死亡细胞按活细胞相同的方法进行染色。
（4）观察：用荧光显微镜观察和拍照（明场和荧光分别拍照，物镜使用20×）。
活细胞被FDA染成亮绿色，当细胞膜受损，荧光素无法在细胞内累积，而使细胞无法发出荧光。
活性高的细胞发出强烈的绿色荧光，活性弱或死亡的细胞发光较弱或不发光。
（5）计数：对（2）、（3）中的发荧光活细胞的数量和总细胞数量进行统计，计算细胞的染色效率。
活性率=染色细胞/观察总细胞个数×100%。
（6）实验重复三次。
四、单染色法-PI (碘化丙锭) 染色（1）配制溶液：PI用DPBS缓冲溶液(Dulbecco’s phosphate buffered saline，Hyclone) 配成浓度为400 μg.ml-1溶液，置于4℃冰箱中保存，染色时终浓度为60 μg.ml-1。
（2）活细胞染色：取处于对数增长期的藻细胞液，离心浓缩，蒸馏水清洗1次，加入PI，在室温下放置5 min染色；染色后离心，蒸馏水清洗1-2次，最后用蒸馏水悬浮细胞，涂片观察。
组织中的细胞周期和凋亡检测方法之一--PI法
组织中的细胞周期和凋亡检测方法之一－－PI法schoman无论是肿瘤或其它正常新鲜组织均可用PI（碘化丙啶）的方法来检测，这是一种常见而且便宜的方法。
主要操作步骤如下：1、组织块用0.25%胰酶消化30min－1h。
2、200－400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。
3、75％乙醇（－20度预冷）固定细胞1h。
4、加入PI（终浓度50ug／ml）和无DNA酶污染的RNA酶（终浓度50ug／ml）1ml染色30min－1h。
5、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。
注意事项：1、组织消化后使细胞形成单个细胞悬液是本检测方法的关键。
如组织难以消化，可加入适量胶原酶。
另外，消化前，用剪刀将组织剪成小块也不要忘了。
2、细胞可尽量的多准备（at least 100 thousand），这样流式检测方便，结果可靠。
3、每次消化的时间等条件应尽量一致，否则使实验结果CV值偏大。
4、细胞用乙醇固定后可以访置48小时（4度保存）后检测，便于无法立即检测的实验者，对实验结果基本没有影响。
其它也有一些检测凋亡的方法，均有商品化试剂盒。
在此不赘述。
yanzishenyang：我看相关的说明：碘化丙啶（propidium iodide,PI）检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞凋亡和坏死的一个重要指标，凋亡细胞在进入最终溶解阶段前，胞膜通透性无明显改变，相对分子质量大的与DNA 结合的荧光染料（如PI）不能时入凋亡细胞内，而相对分子质量小的荧光染料（如Hoechest 3342或33258等）仍能被细胞摄取。
应用流式细胞仪或荧光显微镜可区分和坏死细胞，细胞内DNA出现Hoechest 3342标记而不出现PI标记的为凋亡细胞。
偶得细胞是用PI染色的，经过流氏细胞仪检测出现一个亚二倍体峰，是否能和坏死区别？因为偶用的作用细胞的蛋白本身可以造成细胞膜的损伤，所以PI可以进入细胞，这是否意味着我检测的结果无法区分凋亡和坏死？hdhdhd0000：用PI法识别凋亡时，有一种方法叫SUB-G1法，这种方法需要在染PI前加入适量的破膜剂（磷酸盐－枸橼酸盐缓冲盐），我们称之为PC液，它会让晚期凋亡所形成的DNA小碎片部分出膜而使胞内的DNA总含量减少，从而使流式上的DNA直方图的G0/G1峰前出现一个亚二倍体峰，也就是SUB－G1峰（凋亡峰）！用荧光2的面积做直方图可以清楚的看见凋亡峰，但是要区分APo和Nec需要少量的经验，而在荧光2高度图上，因为是用的是对数，所以可以把凋亡和坏死拉开，凋亡峰在不同的细胞周期特异性细胞凋亡时，都特异性的出现在10的2次方荧光道数处，坏死在10的1次方处，从而可以清楚的分清它们。
碘化丙啶染色步骤
碘化丙啶染色步骤
碘化丙啶染色是一种常见的核酸染色方法，在细胞和组织学研究中广泛应用。
其步骤如下：
1.取一定量的细胞或组织标本，用生理盐水或PBS洗涤去除表面杂质。
2.将样本固定在载玻片上，可以使用多种固定剂，如4%聚乙烯醇（PVA）、95%乙醛等。
3.用1%碘化丙啶溶液覆盖标本，染色时间一般为5-10分钟。
4.洗去碘化丙啶染色液，用70%乙醇洗涤10-20秒钟，可重复洗涤2-3次。
5.再用绝对乙醇洗涤10-20秒钟，可重复洗涤2-3次。
6.最后用苯酚溶液清洗数秒钟，然后用苯酚-乙醇（1:1）复制剂液备用。
7.用显微镜观察、拍照或判定分析。
注意事项：
1.碘化丙啶染色液颜色应呈鲜红色，如色泽变深则需要更换新液。
2.在染色前要保证标本充分固定，避免细胞或组织形态失真。
3.洗涤过程中应注意避免样本干燥和爆裂，避免对标本造成损害。
hoechst PI染色
2008/11/09 09:55PI、Hoechst33342均可与细胞核DNA（或RNA）结合。
但是PI不能通过正常的细胞膜，Hoechst则为膜通透性的荧光染料，故细胞在处于坏死或晚期调亡时细胞膜被破坏，这时可为PI着红色。
正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核的Hoechst着色的形态呈圆形，淡兰色，内有较深的兰色颗粒；而调亡细胞的核由于浓集而呈亮兰色，或核呈分叶，碎片状，边集。
故PI着色为坏死细胞；亮兰色，或核呈分叶状，边集的Hoechst着色的为调亡细胞。
电子天平准确称取1mg 碘化丙啶（propidium iodide，PI）溶于10ml PBS（PH 7.2），成100ug/ml 的储备液，用前等量混合（注意避光）protocol:1、收集细胞，数量需1－2×10E6个（悬浮细胞直接吹起即可，对于贴壁细胞用胰酶消化时，最好用DMEM+胰酶消化,且消化过程中不要去移动瓶子，防止消化所形成的细胞团影响后面的染色及分析），离心，11,000rpm，5min。
2、用1ml 冰冷的PBS重悬后，离心：11,000rpm，5min。
3、用200μl冰冷的PBS重悬后，用加样器混匀后，缓慢的加入含有4ml冰冷的70％乙醇的10ml离心管中，边加边摇匀。
－20℃，过夜。
（或者置4℃，1h后进行下一步）4、1,500rpm，10min，小心弃上清后，用1ml冰冷的PBS重悬，1,500rpm，5min。
小心弃上清。
5、加入含有40μg/ml 的PI，100μg/ml的RNase的PBS溶液500μl，37℃，培养30min －1h。
混匀。
溶液配方：PBS 910μlPI 80μlRNase 10μl共1ml6、过滤，供流式检测。
Hoechst 33342/PI双染色法紫外光激发, Hoechst-PI双染在荧光显微镜下可见4 种细胞形态:活细胞(VN) ,染成蓝色,核呈正常结构;早期凋亡细胞(V A) ,染成蓝色,核呈固缩状或圆珠状;晚期凋亡细胞(NV A) ,也被染成红色,但可见明显的染色质凝集。
碘化丙啶 PI溶液的使用方及注意事项
碘化丙啶PI溶液的使用方及注意事项
货号：C0080
规格：1ml/1ml×10
保存：-20℃，有效期至少2年
产品说明：
碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂。
它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。
PI不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。
PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。
PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。
常用于流式细胞仪分析和显微镜观察，检测细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)。
本产品为PI水溶液，浓度为1mg/ml。
使用时根据实验不同直接将本产品用相应溶液稀释到工作浓度。
使用方法：（仅供参考）
培养细胞染色
1、取适量PI水溶液加到PBS中，制备成10-50µM（6.7-33.4µg/ml）的PI溶液。
2、将1/10培养基体积的PI溶液加入到细胞培养基中。
3、在37℃培养细胞10-20分钟。
4、用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
5、置于荧光显微镜下观察，激发波长为535nm，发射波长为615nm。
注意事项：
1.PI被普遍认为具有致癌性，操作时应戴手套，并避免交叉污染。
2.本产品需避光，并尽量避免反复冻融。
细胞凋亡(apoptosis)的检测
细胞凋亡（apoptosis）的检测细胞凋亡（apoptosis）是一种由基因控制的细胞自主性死亡方式。
其发生诱因及形态学特征均有别于坏死，与人类免疫系统的发生发展、神经组织发育、器官的形成、肿瘤的发生发展等诸多生物学现象之间有着密切联系，并且是免疫应答过程中免疫细胞的杀伤机制之一。
细胞凋亡的检测技术已成为免疫学检测的一个重要内容。
凋亡细胞具有典型的形态学、生物化学及分子生物学变化，从这些特点出发发展起来的检测方法有形态学鉴定、电泳法、免疫学方法、流式细胞术、原位末端转移酶标记技术、靶细胞DNA片段的定量等。
(一)放线菌酮制备大鼠淋巴细胞凋亡模型【原理及意义】放线菌酮（CHX）是一种蛋白合成抑制剂，可诱导小鼠和大鼠的脾、粘膜免疫系统及淋巴结的淋巴细胞发生凋亡。
此实验旨在体外研究淋巴细胞凋亡的生物学特征。
【材料】１动物：昆明种小白鼠，大鼠。
２试剂：PBS缓冲的4%多聚甲醛或2.5%的戊二醛，放线菌酮（用PBS或生理盐水配成1m g/mL的浓度，除菌过滤，4℃冰箱保存）。
３器材：眼科镊，眼科剪，剪刀，玻片。
【方法】１大鼠用乙醚麻醉后，从腹腔（静脉或皮下）给大鼠注射3mg/kg体重CHX。
２注射2h后，取大鼠脾脏（肠或子宫亦可）等组织，剪成一定大小的组织块，固定于固定液中。
３固定组织经HE染色作光镜检查或电镜检查。
【结果】一般在注射后不久就可在脾及其它粘膜免疫系统出现大量凋亡的淋巴细胞（以Ｂ淋巴细胞为主）。
经HE染色后在光学显微镜下细胞核呈蓝黑色，胞浆呈淡红色。
凋亡细胞在组织中单个散在分布，表现为核染色质致密浓缩，核碎裂等。
坏死组织则呈均质红染的无结构物质，核染色消失。
【注意事项】由于机体内巨噬细胞对凋亡细胞的清除作用，凋亡细胞形成的高峰期在3h左右，在5h后组织内凋亡细胞已经很少，所以取材最好不要超过4h。
另外，放线菌酮的剂量要控制在2～5 mg/kg体重。
制备成功的模型一般比较稳定。
(二)活化诱导的淋巴细胞凋亡检测【原理及意义】活化诱导的淋巴细胞凋亡（AICD）是免疫调节的重要途径之一。
Hoechst-PI双染检测细胞凋亡
Hoechst/PI双染检测细胞凋亡PI、Hoechst33342均可与细胞核DNA（或RNA）结合。
但是PI不能通过正常的细胞膜，Hoechst则为膜通透性的荧光染料，故细胞在处于坏死或晚期调亡时细胞膜被破坏，这时可为PI着红色。
正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核的Hoechst着色的形态呈圆形，淡兰色，内有较深的兰色颗粒；而调亡细胞的核由于浓集而呈亮兰色，或核呈分叶，碎片状，边集。
故PI着色为坏死细胞；亮兰色，或核呈分叶状，边集的Hoechst着色的为调亡细胞。
电子天平准确称取1mg 碘化丙啶（propidium iodide，PI）溶于10ml PBS（PH 7.2），成100ug/ml的储备液，用前等量混合（注意避光）protocol:1、收集细胞，数量需1－2×10E6个（悬浮细胞直接吹起即可，对于贴壁细胞用胰酶消化时，最好用DMEM+胰酶消化,且消化过程中不要去移动瓶子，防止消化所形成的细胞团影响后面的染色及分析），离心，11,000rpm，5min。
2、用1ml 冰冷的PBS重悬后，离心：11,000rpm，5min。
3、用200μl冰冷的PBS重悬后，用加样器混匀后，缓慢的加入含有4ml冰冷的70％乙醇的10ml离心管中，边加边摇匀。
－20℃，过夜。
（或者置4℃，1h后进行下一步）4、1,500rpm，10min，小心弃上清后，用1ml冰冷的PBS重悬，1,500rpm，5min。
小心弃上清。
5、加入含有40μg/ml的PI，100μg/ml的RNase的PBS溶液500μl，37℃，培养30min－1h。
混匀。
溶液配方：PBS 910μlPI 80μlRNase 10μl共1ml6、过滤，供流式检测。
Hoechst 33342/PI双染色法紫外光激发, Hoechst-PI双染在荧光显微镜下可见4 种细胞形态:活细胞(VN) ,染成蓝色,核呈正常结构;早期凋亡细胞(VA) ,染成蓝色,核呈固缩状或圆珠状;晚期凋亡细胞(NVA) ,也被染成红色,但可见明显的染色质凝集。
碘化丙啶PI染色液(1mgml)
碘化丙啶PI 染色液(1mg/ml)简介：碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA 和RNA 的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。
碘化丙啶与双链DNA 结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA 的含量成正比。
细胞内的DNA 被Propidium Iodide 染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA 含量测定，然后根据DNA 含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。
碘化丙啶PI 染色液(1mg/ml)主要由PI 、破膜剂等组成，经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测， 亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、细胞样品的制备：⑴贴壁细胞：① 收集上述细胞悬液到离心管内。
② 4℃离心，使细胞沉到管底。
小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。
③ 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。
④ 4℃离心，使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS ，以免吸走细胞。
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
⑵悬浮细胞：① 4℃离心，使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。
③ 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。
④ 4℃离心，使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS ，以免吸走细胞。
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
2、细胞的固定：加入1ml 冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h 或更长时间。
4℃固定12～24h 可能效果更佳。
编号 名称 DA0028 Storage PI Stain(1mg/ml) 1ml -20℃ 避光 使用说明书 1份3、细胞的清洗：①4℃离心，使细胞沉到管底。
②小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl溶液，以免吸走细胞。
DNA含量检测试剂盒( 细胞周期 )使用说明
DNA含量检测试剂盒（细胞周期）使用说明DNA Content Quantitation Assay(Cell Cycle)货号：CA1510规格：20T/50T保存：-20℃避光保存，一年有效。
产品说明：细胞周期是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。
在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。
细胞周期又可以分为间期和有丝分裂期，细胞间期常划分为休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整个周期可表示为G1→S→G2→M。
DNA周期检测可用来反应细胞周期的各个期的状况，即细胞增殖状况。
利用细胞内DNA能够和荧光染料（如碘化丙啶PI）结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样。
细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩，核裂解，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。
在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对90°角光散射的能力增加或没有变化。
在细胞凋亡的晚期，前向角和90°角光散射的信号均降低。
因此可以通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化来观察凋亡细胞。
用PI对细胞进行染色，凋亡细胞由于总DNA 量降低，于正常G0/G1细胞群前出现DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰（sub-G1）,即细胞凋亡群。
本试剂盒可应用于培养细胞（悬浮、贴壁）的DNA含量（细胞周期）检测。
试剂盒组成：试剂名称CA1510-20T CA1510-50T保存条件RNase A 2.0mL 5.0mL-20℃PI染色液8.0mL20.0mL-20℃避光使用方法：（仅供参考）1、用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组，并收集细胞。
2、用PBS洗涤细胞一次，1500rpm，5min离心收集，调整细胞浓度为1×106/ml,取1ml单细胞悬液。
实验操作记录
实验操作记录高压锅灭菌锅的使用1、将所需要的灭菌物品装好，贴上高压指示条，条的尾端要折一下，方便打开，指示条写上灭菌日期、课题组名。
2、提起篮子，检查高压锅底部的水位是否浸过玻璃板，若未达到，需加入单蒸水。
然后将物品放入高压锅，但是不能堆太高3、用力关紧锅盖，把左侧的气阀和安全阀关好，打开电源，把盖子拧紧，直至关门灯灭掉4、按“work”键开始高压5、高压完成后，高压锅显示END，关掉电源，待压力降为D，且温度为在60℃以下，才能取出物品。
常用试剂配方快速查阅表细胞MTT测试原理：检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臢（Zā）（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臢（Zā），用酶标仪在490nm波长处（英文说明书写的是570nm）测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。
准备：96孔板，培养皿、PBS缓冲液，,MTT ，DMSO、不同浓度药物实验步骤：（D1种板，D2给药，D3 染色测试）1、接种细胞取出细胞镜检，加入胰酶消化1min，后加入培养终止消化，充分吹打细胞，取100ul细胞进行计数，调整细胞浓度为1×104个/ml，接96孔板培养。
2、给药3、MTT检测培养24h后，取出96孔板，每孔加入配好的MTT 10ul ，混匀，继续反应4h。
4h后吸干96孔上的培养基，加入DMSO，每孔100ul，振荡10min，酶标仪490nm波长处测定吸收值。
计算IC50：抑制率为Y，加药浓度的对数为X，线性回归，根据得到的方程求得抑制率为50%时的加药浓度，也就是IC50.注意事项（1）选择适当的细胞接种浓度。
细胞太多敏感性降低，细胞太少观察不到差异。
（2）实验时应设置调零孔、对照孔、加药孔。
Propidium Iodide 碘化丙啶
保存条件：
4℃避光保存。
注意事项：
�
�
对人体有刺激性，请注意适当防护。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用本产品的文献 ：
1. Wu G, Liu ZS, Qian Q, Jiang CQ. Effects of Berberine on the Growth of Hepatocellular Carcinoma Cell lines. Medical Journal of Wuhan University.Jan 2008;Vol.29 No.1. 2. Liu Y, Sheng Z, Liu H, Wen D, He Q, Wang S, Shao W, Jiang RJ, An S, Sun Y, Bendena WG, Wang J, Gilbert LI, Wilson TG, Song Q, Li S. Juvenile hormone counteracts the bHLH-PAS transcription factors MET and GCE to prevent caspase-dependent programmed cell death in Drosophila. Development. 2009 Jun;136(12):2015-25. 3. Li DL, Liu JJ, Liu BH, Hu H, Sun L, Miao Y, Xu HF, Yu XJ, Ma X, Ren J, Zang WJ. Acetylcholine inhibits hypoxia-induced tumor necrosis factor-α production via regulation of MAPKsphosphorylation in cardiomyocytes. J Cell Physiol. 2011 Apr;226(4):1052-9. 4. Cao X, Deng W, Wei Y, Su W, Yang Y, Wei Y, Yu J, Xu X. Encapsulation of plasmid DNA in calcium phosphate nanoparticles: stem cell uptake and genetransfer efficiency. Int J Nanomedicine. 2011;6:3335-49. 5. Meng LY, Liu HR, Shen Y, Yu YQ, Tao X. Cochinchina momordica seed extract induces G2/M arrest and apoptosis in human breast cancerMDA-MB-231 cells by modulating the PI3K/Akt pathway. Asian Pac J Cancer Prev. 2011;12(12):3483-8. 6. Zhao Q, Xue Y, Wang JF, Li H, Long TT, Li Z, Wang YM, Dong P, Xue CH. In vitro and in vivo anti-tumour activities of echinoside A and ds-echinoside A from Pearsonothuriagraeffei. J Sci Food Agric. 2012 Mar 15;92(4):965-74. doi: 10.1002/jsfa.4678. Epub 2011 Oct 19. 7. Tu Z, Ma Y, Tian J, Li H, Akers W, Achilefu S, Gu Y Estrogen receptor β potentiates the antiproliferative effect of raloxifene and affects the cellmigration and invasion in HCT-116 colon cancer cells. J Cancer Res Clin Oncol. 2012 Jul;138(7):1091-103. 8. Zhou Z, Wan Y, Zhang Y, Wang Z, Jia R, Fan Y, Nie H, Ying S, Huang P, Wang F Follicular development and expression of nuclear respiratory factor-1 and peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator- 1 alpha i n ovaries of fetal and neonatal doelings. J Anim Sci. 2012 Jun 4. [Epub ahead of print] 9. Jun Fang, Meihu Ma, Yongguo Jin, Ning Qiu, Chan Wang, Guodong Ren and Xin Huang Assessment of Salmonella enteritidis Viability in Egg White during Early Incubation Stages by Fluorescent Staining Method Asian Journal of Animal and Veterinary Advances, 7: 556-567. 10.Zhen-Jun S, Yuan-Yuan Z, Ying-Ying F, Shao-Ju J, Jiao Y, Xiao-Wei Z, Jian C, Yao X, Li-Ming Z β,β-Dimethylacrylshikonin exerts antitumor activity via Notch-1 signaling pathway in vitro and invivo.
植物根系PI染色方法
水稻幼苗根尖PI染色一、原理PI：英文名：Propidium iodide 中文名：碘化丙啶染色原理：碘化丙啶(PI)是一种溴化乙啶（EB）的类似物。
PI在540nm波长（绿色光）的激发下，会在600nm（红色光）处发出明亮的荧光。
PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。
它能与细胞壁上的碳水化合物共价结合，对细胞壁进行标记。
Standard confocal laser microscopy was performed using a Leica SP5laser point scanning microscope. propidium iodide was excited using the 488 nm argon laser, and fluorescence emissions were captured between 580 nm and 640 nm for propidium iodide.二、染色过程1 固定：材料置于固定液（50%甲醇+10%醋酸）中，4℃放置至少12h (最长可放置1个月)2 用水清洗材料，置于1%高碘酸溶液中，室温放置40min。
（使细胞壁上的碳水化合物形成醛基）3 用水清洗材料，置于希夫试剂（含PI）1-2h或直至肉眼可见材料染上红色为止（醛基与PI共价结合）希夫试剂(含PI)：焦亚硫酸100mMHCl 0.15NPI 100μg/ml（现加）4 取出样品置于载玻片上，用水合氯醛溶液覆盖样品，室温放置过夜（置于密闭容器中，防止溶液挥发）水合氯醛溶液：水合氯醛4g甘油1mlH2O 2ml5 除去多余水合氯醛溶液，滴数滴Hoyer’s solution，盖上盖玻片，放置3天后显微镜下观察。
Hoyer’s solution：水溶性阿拉伯胶30g水合氯醛200g甘油20gH2O 50ml三、注意事项：（1）由于PI可能具有致癌性，请小心操作。
（2）保存条件：4℃避光保存（3）对人体有刺激性，请注意适当防护。
PI单染检测细胞周期
PI单染检测细胞周期原理：碘化丙啶(Propidium ，简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。
碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。
细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。
操作步骤：1、对于悬浮细胞，直接离心收集细胞，弃上清，在4 ℃、1200rmp下用预冷的PBS洗细胞两次；对于贴壁细胞，先用不含EDTA的0.25%的胰酶消化再离心收集细胞；2、加入预冷的70%乙醇（PBS配制），于4℃固定过夜，或-20℃长期固定；3、离心收集细胞，以1 mL预冷的PBS洗细胞一次，加入预冷的PBS重悬细胞，调整细胞浓度为1.0×106，取出100 ul细胞悬液，加入RNase A酶，使RNase A终浓度为1 mg/ml，混匀后37 ℃水浴30 min；4、加入PI综合染色液，使PI终浓度为50 ug/mL，混匀，4℃冰箱避光保存；5、300目尼龙网过滤后，上机检测。
注意事项：1、细胞浓度一定要≧1×106/ml，特别是阴性对照管细胞量要大一些，以便样品电压调节；2、必须保证被检测样品为单细胞悬液；3、如果样品细胞为培养的贴壁细胞，将上清转入离心管（其中含有脱落的凋亡细胞），与不含EDTA的胰酶消化的细胞合并后离心收集细胞；4、在细胞固定时一定要将细胞吹开，吹成单细胞悬液；5、RNAse与PI综合染液分开的原因是RNAse的作用最适温度是37℃，而不是4℃，所以与教材有所不同；6、PI综合染液不能用蒸馏水配，否则细胞全部溶解，造成结果不可靠；7、4℃过夜一般隔天就进行检测，如果想推迟几天测，那就保存在-20℃，有资料显示-20℃可以至少保存一个月；8、70%~75%的酒精都可以用于PI单染固定。
PI染色的讨论
关于PI（碘化丙啶）的讨论组织中的细胞周期和凋亡检测方法之一－－PI法schoman无论是肿瘤或其它正常新鲜组织均可用PI（碘化丙啶）的方法来检测，这是一种常见而且便宜的方法。
主要操作步骤如下：1、组织块用0.25%胰酶消化30min－1h。
2、200－400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。
3、75％乙醇（－20度预冷）固定细胞1h。
4、加入PI（终浓度50ug／ml）和无DNA酶污染的RNA酶（终浓度50ug／ml）1ml染色30min －1h。
5 、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。
注意事项：1、组织消化后使细胞形成单个细胞悬液是本检测方法的关键。
如组织难以消化，可加入适量胶原酶。
另外，消化前，用剪刀将组织剪成小块也不要忘了。
2、细胞可尽量的多准备（at least 100 thousand），这样流式检测方便，结果可靠。
3、每次消化的时间等条件应尽量一致，否则使实验结果CV值偏大。
4、细胞用乙醇固定后可以访置48小时（4度保存）后检测，便于无法立即检测的实验者，对实验结果基本没有影响。
其它也有一些检测凋亡的方法，均有商品化试剂盒。
在此不赘述。
yanzishenyang：我看相关的说明：碘化丙啶（propidium iodide,PI）检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞凋亡和坏死的一个重要指标，凋亡细胞在进入最终溶解阶段前，胞膜通透性无明显改变，相对分子质量大的与DNA结合的荧光染料（如PI）不能时入凋亡细胞内，而相对分子质量小的荧光染料（如Hoechest 3342或33258等）仍能被细胞摄取。
应用流式细胞仪或荧光显微镜可区分和坏死细胞，细胞内DNA出现Hoechest 3342标记而不出现PI标记的为凋亡细胞。
偶得细胞是用PI染色的，经过流氏细胞仪检测出现一个亚二倍体峰，是否能和坏死区别？因为偶用的作用细胞的蛋白本身可以造成细胞膜的损伤，所以PI可以进入细胞，这是否意味着我检测的结果无法区分凋亡和坏死？hdhdhd0000：用PI法识别凋亡时，有一种方法叫SUB-G1法，这种方法需要在染PI前加入适量的破膜剂（磷酸盐－枸橼酸盐缓冲盐），我们称之为PC液，它会让晚期凋亡所形成的DNA小碎片部分出膜而使胞内的DNA总含量减少，从而使流式上的DNA直方图的G0/G1峰前出现一个亚二倍体峰，也就是SUB－G1峰（凋亡峰）！用荧光2的面积做直方图可以清楚的看见凋亡峰，但是要区分APo和Nec需要少量的经验，而在荧光2高度图上，因为是用的是对数，所以可以把凋亡和坏死拉开，凋亡峰在不同的细胞周期特异性细胞凋亡时，都特异性的出现在10的2次方荧光道数处，坏死在10的1次方处，从而可以清楚的分清它们。
碘化丙啶说明书
Revised: 05/17/99Product Information Propidium Iodide Nucleic Acid StainP-1304propidium iodideP-3566propidium iodide, 1 mg/mL solution in waterIntroductionPropidium iodide (PI) binds to DNA by intercalating between the bases with little or no sequence preference and with a stoichi-ometry of one dye per 4–5 base pairs of DNA.1 PI also binds to RNA, necessitating treatment with nucleases to distinguish be-tween RNA and DNA staining. Once the dye is bound to nucleic acids, its fluorescence is enhanced 20- to 30-fold, the fluores-cence excitation maximum is shifted ~30–40 nm to the red and the fluorescence emission maximum is shifted ~15 nm to the blue.2 Although its molar absorptivity (extinction coefficient) is relatively low, PI exhibits a sufficiently large Stokes shift to allow simultaneous detection of nuclear DNA and fluorescein-labeled antibodies, provided the proper optical filters are used.Propidium iodide is suitable for fluorescence microscopy, confo-cal laser scanning microscopy, flow cytometry and fluorometry.PI is membrane impermeant and generally excluded from viable cells. PI is commonly used for identifying dead cells in apopulation and as a counterstain in multicolor fluorescent tech-niques. The counterstaining protocols below are compatible with a wide range of cytological labeling techniques — direct or indi-rect antibody-based detection methods, mRNA in situ hybridiza-tion or staining with fluorescent reagents specific for cellular structures. These protocols can be modified for tissue staining.MaterialsStorage and HandlingUpon receipt, store the solid (P-1304) at room temperature,protected from light. The solid should be stable for at least a year. Store the solution of PI (P-3566) at 4°C, protected from light. To make a stock solution from the solid form, dissolve PI (MW = 668.4) in deionized water (dH 2O) at 1 mg/mL (1.5 mM)and store at 4°C, protected from light. When handled properly,solutions are stable for at least 6 months.Caution : PI is a known mutagen. Solutions containing PI should be poured through activated charcoal before disposal.The charcoal must then be incinerated to destroy the dye.Fluorescence Spectral CharacteristicsWhen bound to nucleic acids, the absorption maximum for PI is 535 nm and the fluorescence emission maximum is 617 nm (Figure 1). PI can be excited with a xenon or mercury-arc lamp or with the 488 line of an argon-ion laser. Molecular Probes offers high quality Omega Optical filter sets for fluorescence microscopy. Filter sets O-5725 and O-5729 are optimized to match the spectral properties of PI. Generally, PI fluorescence is detected in the FL2 channel of flow cytometers.Protocol for Counterstaining Adherent Cells for Fluorescence MicroscopySample PreparationUse the fixation protocol appropriate for your sample. PI stain-ing is normally performed after all other staining. Note that per-meabilization of the cells is required for counterstaining with PI.RNase TreatmentRNase treatment is required if samples are fixed in paraform-aldehyde, formaldehyde or glutaraldehyde. If samples are fixed with methanol/acetic acid or acetone, RNase treatment is usually not required.1.1 Equilibrate the sample briefly in 2X SSC (0.3 M NaCl,0.03 M sodium citrate, pH 7.0).Figure 1. Absorption and fluorescence emission profiles of propidium iodide bound to dsDNA.1.2 Incubate in 100 µg/mL DNase-free RNase in 2X SSC for20 minutes at 37°C.1.3 Rinse samples 3 times, 1 minute each, in 2X SSC. Counterstaining Protocol2.1 Equilibrate the sample in 2X SSC.2.2 Make a 500 nM solution of PI by diluting the 1 mg/mL (1.5 mM) stock solution 1:3000 in 2X SSC. About 300 µL is usually enough stain for one coverslip preparation. Incubate cells, covered with the dilute stain, for 1–5 minutes.2.3 Rinse samples several times in 2X SSC. Drain excess buffer from coverslip and mount in a medium with an antifade reagent such as provided in Molecular Probes’ SlowFade®Antifade Kit, SlowFade Light Antifade Kit or ProLong® Antifade Kit.2.4 View sample using a fluorescence microscope with appropri-ate filters (see Fluorescence Spectral Characteristics).Protocol for Counterstaining Cells in Suspension for Flow CytometrySample PreparationUse the fixation protocol appropriate for your sample, or use the following protocol.3.1 Collect a volume of cell suspension corresponding to 2 × 105 to 1 × 106 cells. Pellet the cells by centrifugation. Discard the supernatant, tap the tube to resuspend pellet in the residual liquid and add 1 mL of phosphate-buffered saline (PBS) at room tem-perature.3.2 Transfer the full volume of resuspended cells to 4 mL of absolute ethanol at -20°C by pipetting the cell suspension slowly into the ethanol while vortexing at top speed. Leave in ethanol at -20°C for 5 to 15 minutes.3.3 Pellet the cells by centrifugation, discard the ethanol, tap the tube to loosen the pellet and add 5 mL PBS at room temperature. Allow cells to rehydrate for 15 minutes. Counterstaining Protocol4.1 Make a 3 µM solution of PI by diluting the 1 mg/mL(1.5 mM) stock solution 1:500 in Staining Buffer (100 mM Tris,pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 0.1% Nonidet® P-40). A 1 mL volume will be required for each cell sample.4.2 Centrifuge the cell suspension from step 3.3, discard the supernatant, tap to loosen the pellet and add 1 mL of PI-Staining Buffer. Incubate for 15 minutes at room temperature and analyze by flow cytometry in the presence of the dye. If the cells are to be viewed by fluorescence microscopy, centrifuge the sample, re-move the supernatant and resuspend the cells in fresh buffer. Apply a drop of the suspension to a microscope slide, cover with a coverslip and view.Protocol for Chromosome FISH Counterstaining Sample PreparationPrepare the specimen according to standard procedures.3,4 Briefly rinse the final preparations in dH2O before counter-staining to remove residual buffer salts from the slide. Air dry. This final rinse will help reduce nonspecific background staining on the glass.Counterstaining Protocol5.1 Make a 1.5 µM PI staining solution by diluting the 1 mg/mL (1.5 mM) stock solution 1:1000 in PBS. Pipet 300 µL of this staining solution directly onto the specimen. If necessary, RNaseA (freshly made) may be added to a final concentration of10 µg/mL. A plastic coverslip can be used to distribute the dye evenly on the slide.5.2 Incubate the specimen in the dark for 30 minutes at room temperature, or at 37°C if RNase is included.5.3 Remove the coverslip and rinse briefly with PBS or dH2O to remove unbound dye.5.4 Remove excess liquid from the slide by gently blotting around the sample with an absorbent tissue. Place a glass cover-slip on the slide, and seal the edges with wax or nail polish. Alternatively, the preparation can be mounted in an antifade re-agent according to the manufacturer’s directions.5.5 View sample using a fluorescence microscope with appropri-ate filters (see Fluorescence Spectral Characteristics).References1. J Mol Biol 13, 269 (1965);2. Meth Cell Biol 30, 417 (1989);3. Meth Enzymol 168, 741 (1989);4. Pardue, M.L. in Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach,. B.D. Hames and S.J. Higgins, Eds., IRL Press, Oxford, England (1985).Product List Current prices may be obtained from our Web site or from our Customer Service Department.Cat #Product Name Unit Size P-7481ProLong® Antifade Kit................................................................................................................................................................ 1 kit P-1304pro pidium io dide........................................................................................................................................................................100 mg P-3566propidium iodide *1.0 mg/mL solution in water*........................................................................................................................10 mL S-2828SlowFade® Antifade Kit............................................................................................................................................................. 1 kit S-7461SlowFade®Light Antifade Kit..................................................................................................................................................... 1 kitContact InformationFurther information on Molecular Probes' products, including product bibliographies, is available from your local distributor or directly from Molecular Probes. Customers in Europe, Africa and the Middle East should contact our office in Leiden, the Netherlands. All others should contact our Technical Assis-tance Department in Eugene, Oregon.Please visit our Web site for the most up-to-date informationMolecular Probes, Inc.PO Box 22010, Eugene, OR 97402-0469Phone: (541) 465-8300 Fax: (541) 344-6504Customer Service: 7:00 am to 5:00 pm (Pacific Time) Phone: (541) 465-8338 Fax: (541) 344-6504 order@ Toll-Free Ordering for USA and Canada:Order Phone: (800) 438-2209 Order Fax: (800) 438-0228 Technical Assistance: 8:00 am to 4:00 pm (Pacific Time) Phone: (541) 465-8353 Fax: (541) 465-4593 tech@ Molecular Probes Europe BVPoortGebouw, Rijnsburgerweg 102333 AA Leiden, The NetherlandsPhone: +31-71-5233378 Fax: +31-71-5233419 Customer Service: 9:00 to 16:30 (Central European Time) Phone: +31-71-5236850 Fax: +31-71-5233419 eurorder@probes.nlTechnical Assistance: 9:00 to 16:30 (Central European Time) Phone: +31-71-5233431 Fax: +31-71-5233419 eurotech@probes.nlMolecular Probes products are high-quality reagents and materials intended for research purposes only. These products must be used by, or directly under the supervision of, a technically qualified individual experienced in handling potentially hazardous chemicals. Please read the Material Safety Data Sheet provided for each product; other regulatory considerations may apply.Several of Molecular Probes products and product applications are covered by U.S. and foreign patents and patents pending. Our products are not available for resale or other commercial uses without a specific agreement from Molecular Probes, Inc. We welcome inquiries about licensing the use of our dyes, trademarks or technologies. Please submit inquiries by e-mail to busdev@. All names containing the designation ® are registered with the U.S. Patent and Trademark Office.Copyright 1999, Molecular Probes, Inc. All rights reserved. This information is subject to change without notice.。
碘化丙啶溶液(1mg ml)说明书
北京索莱宝科技有限公司
碘化丙啶溶液（1mg/ml）说明书
货号：C0080
规格：1mL×1支/1mL×10支
保存：-20℃，有效期至少2年。
产品说明：
碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂。
它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。
PI不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。
PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。
PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。
常用于流式细胞仪分析和显微镜观察，检测细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)。
本产品为PI水溶液，浓度为1mg/ml。
使用时根据实验不同直接将本产品用相应溶液稀释到工作浓度。
使用方法：（仅供参考）
培养细胞染色
1、取适量PI水溶液加到PBS中，制备成10-50µM（6.7-33.4µg/ml）的PI溶液。
2、将1/10培养基体积的PI溶液加入到细胞培养基中。
3、在37℃培养细胞10-20分钟。
4、用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
5、置于荧光显微镜下观察，激发波长为535nm，发射波长为615nm。
注意事项：
PI被普遍认为具有致癌性，操作时应戴手套，并避免交叉污染。
本产品需避光，并尽量避免反复冻融。
第1页共1页。
碘化丙啶说明书
Revised: 05/17/99Product Information Propidium Iodide Nucleic Acid StainP-1304propidium iodideP-3566propidium iodide, 1 mg/mL solution in waterIntroductionPropidium iodide (PI) binds to DNA by intercalating between the bases with little or no sequence preference and with a stoichi-ometry of one dye per 4–5 base pairs of DNA.1 PI also binds to RNA, necessitating treatment with nucleases to distinguish be-tween RNA and DNA staining. Once the dye is bound to nucleic acids, its fluorescence is enhanced 20- to 30-fold, the fluores-cence excitation maximum is shifted ~30–40 nm to the red and the fluorescence emission maximum is shifted ~15 nm to the blue.2 Although its molar absorptivity (extinction coefficient) is relatively low, PI exhibits a sufficiently large Stokes shift to allow simultaneous detection of nuclear DNA and fluorescein-labeled antibodies, provided the proper optical filters are used.Propidium iodide is suitable for fluorescence microscopy, confo-cal laser scanning microscopy, flow cytometry and fluorometry.PI is membrane impermeant and generally excluded from viable cells. PI is commonly used for identifying dead cells in apopulation and as a counterstain in multicolor fluorescent tech-niques. The counterstaining protocols below are compatible with a wide range of cytological labeling techniques — direct or indi-rect antibody-based detection methods, mRNA in situ hybridiza-tion or staining with fluorescent reagents specific for cellular structures. These protocols can be modified for tissue staining.MaterialsStorage and HandlingUpon receipt, store the solid (P-1304) at room temperature,protected from light. The solid should be stable for at least a year. Store the solution of PI (P-3566) at 4°C, protected from light. To make a stock solution from the solid form, dissolve PI (MW = 668.4) in deionized water (dH 2O) at 1 mg/mL (1.5 mM)and store at 4°C, protected from light. When handled properly,solutions are stable for at least 6 months.Caution : PI is a known mutagen. Solutions containing PI should be poured through activated charcoal before disposal.The charcoal must then be incinerated to destroy the dye.Fluorescence Spectral CharacteristicsWhen bound to nucleic acids, the absorption maximum for PI is 535 nm and the fluorescence emission maximum is 617 nm (Figure 1). PI can be excited with a xenon or mercury-arc lamp or with the 488 line of an argon-ion laser. Molecular Probes offers high quality Omega Optical filter sets for fluorescence microscopy. Filter sets O-5725 and O-5729 are optimized to match the spectral properties of PI. Generally, PI fluorescence is detected in the FL2 channel of flow cytometers.Protocol for Counterstaining Adherent Cells for Fluorescence MicroscopySample PreparationUse the fixation protocol appropriate for your sample. PI stain-ing is normally performed after all other staining. Note that per-meabilization of the cells is required for counterstaining with PI.RNase TreatmentRNase treatment is required if samples are fixed in paraform-aldehyde, formaldehyde or glutaraldehyde. If samples are fixed with methanol/acetic acid or acetone, RNase treatment is usually not required.1.1 Equilibrate the sample briefly in 2X SSC (0.3 M NaCl,0.03 M sodium citrate, pH 7.0).Figure 1. Absorption and fluorescence emission profiles of propidium iodide bound to dsDNA.1.2 Incubate in 100 µg/mL DNase-free RNase in 2X SSC for20 minutes at 37°C.1.3 Rinse samples 3 times, 1 minute each, in 2X SSC. Counterstaining Protocol2.1 Equilibrate the sample in 2X SSC.2.2 Make a 500 nM solution of PI by diluting the 1 mg/mL (1.5 mM) stock solution 1:3000 in 2X SSC. About 300 µL is usually enough stain for one coverslip preparation. Incubate cells, covered with the dilute stain, for 1–5 minutes.2.3 Rinse samples several times in 2X SSC. Drain excess buffer from coverslip and mount in a medium with an antifade reagent such as provided in Molecular Probes’ SlowFade®Antifade Kit, SlowFade Light Antifade Kit or ProLong® Antifade Kit.2.4 View sample using a fluorescence microscope with appropri-ate filters (see Fluorescence Spectral Characteristics).Protocol for Counterstaining Cells in Suspension for Flow CytometrySample PreparationUse the fixation protocol appropriate for your sample, or use the following protocol.3.1 Collect a volume of cell suspension corresponding to 2 × 105 to 1 × 106 cells. Pellet the cells by centrifugation. Discard the supernatant, tap the tube to resuspend pellet in the residual liquid and add 1 mL of phosphate-buffered saline (PBS) at room tem-perature.3.2 Transfer the full volume of resuspended cells to 4 mL of absolute ethanol at -20°C by pipetting the cell suspension slowly into the ethanol while vortexing at top speed. Leave in ethanol at -20°C for 5 to 15 minutes.3.3 Pellet the cells by centrifugation, discard the ethanol, tap the tube to loosen the pellet and add 5 mL PBS at room temperature. Allow cells to rehydrate for 15 minutes. Counterstaining Protocol4.1 Make a 3 µM solution of PI by diluting the 1 mg/mL(1.5 mM) stock solution 1:500 in Staining Buffer (100 mM Tris,pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 0.1% Nonidet® P-40). A 1 mL volume will be required for each cell sample.4.2 Centrifuge the cell suspension from step 3.3, discard the supernatant, tap to loosen the pellet and add 1 mL of PI-Staining Buffer. Incubate for 15 minutes at room temperature and analyze by flow cytometry in the presence of the dye. If the cells are to be viewed by fluorescence microscopy, centrifuge the sample, re-move the supernatant and resuspend the cells in fresh buffer. Apply a drop of the suspension to a microscope slide, cover with a coverslip and view.Protocol for Chromosome FISH Counterstaining Sample PreparationPrepare the specimen according to standard procedures.3,4 Briefly rinse the final preparations in dH2O before counter-staining to remove residual buffer salts from the slide. Air dry. This final rinse will help reduce nonspecific background staining on the glass.Counterstaining Protocol5.1 Make a 1.5 µM PI staining solution by diluting the 1 mg/mL (1.5 mM) stock solution 1:1000 in PBS. Pipet 300 µL of this staining solution directly onto the specimen. If necessary, RNaseA (freshly made) may be added to a final concentration of10 µg/mL. A plastic coverslip can be used to distribute the dye evenly on the slide.5.2 Incubate the specimen in the dark for 30 minutes at room temperature, or at 37°C if RNase is included.5.3 Remove the coverslip and rinse briefly with PBS or dH2O to remove unbound dye.5.4 Remove excess liquid from the slide by gently blotting around the sample with an absorbent tissue. Place a glass cover-slip on the slide, and seal the edges with wax or nail polish. Alternatively, the preparation can be mounted in an antifade re-agent according to the manufacturer’s directions.5.5 View sample using a fluorescence microscope with appropri-ate filters (see Fluorescence Spectral Characteristics).References1. J Mol Biol 13, 269 (1965);2. Meth Cell Biol 30, 417 (1989);3. Meth Enzymol 168, 741 (1989);4. Pardue, M.L. in Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach,. B.D. Hames and S.J. Higgins, Eds., IRL Press, Oxford, England (1985).Product List Current prices may be obtained from our Web site or from our Customer Service Department.Cat #Product Name Unit Size P-7481ProLong® Antifade Kit................................................................................................................................................................ 1 kit P-1304pro pidium io dide........................................................................................................................................................................100 mg P-3566propidium iodide *1.0 mg/mL solution in water*........................................................................................................................10 mL S-2828SlowFade® Antifade Kit............................................................................................................................................................. 1 kit S-7461SlowFade®Light Antifade Kit..................................................................................................................................................... 1 kitContact InformationFurther information on Molecular Probes' products, including product bibliographies, is available from your local distributor or directly from Molecular Probes. Customers in Europe, Africa and the Middle East should contact our office in Leiden, the Netherlands. All others should contact our Technical Assis-tance Department in Eugene, Oregon.Please visit our Web site for the most up-to-date informationMolecular Probes, Inc.PO Box 22010, Eugene, OR 97402-0469Phone: (541) 465-8300 Fax: (541) 344-6504Customer Service: 7:00 am to 5:00 pm (Pacific Time) Phone: (541) 465-8338 Fax: (541) 344-6504 order@ Toll-Free Ordering for USA and Canada:Order Phone: (800) 438-2209 Order Fax: (800) 438-0228 Technical Assistance: 8:00 am to 4:00 pm (Pacific Time) Phone: (541) 465-8353 Fax: (541) 465-4593 tech@ Molecular Probes Europe BVPoortGebouw, Rijnsburgerweg 102333 AA Leiden, The NetherlandsPhone: +31-71-5233378 Fax: +31-71-5233419 Customer Service: 9:00 to 16:30 (Central European Time) Phone: +31-71-5236850 Fax: +31-71-5233419 eurorder@probes.nlTechnical Assistance: 9:00 to 16:30 (Central European Time) Phone: +31-71-5233431 Fax: +31-71-5233419 eurotech@probes.nlMolecular Probes products are high-quality reagents and materials intended for research purposes only. These products must be used by, or directly under the supervision of, a technically qualified individual experienced in handling potentially hazardous chemicals. Please read the Material Safety Data Sheet provided for each product; other regulatory considerations may apply.Several of Molecular Probes products and product applications are covered by U.S. and foreign patents and patents pending. Our products are not available for resale or other commercial uses without a specific agreement from Molecular Probes, Inc. We welcome inquiries about licensing the use of our dyes, trademarks or technologies. Please submit inquiries by e-mail to busdev@. All names containing the designation ® are registered with the U.S. Patent and Trademark Office.Copyright 1999, Molecular Probes, Inc. All rights reserved. This information is subject to change without notice.。
PI染色法
流式细胞仪检测细胞凋亡——PI单染色法碘化丙啶（propidium iodide,PI）检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞凋亡和坏死的一个重要指标，凋亡细胞在进入最终溶解阶段前，细胞膜通透性无明显改变，相对分子质量大的与DNA结合的荧光染料（如PI）不能进入凋亡细胞内，而相对分子质量小的荧光染料（如Hoechest 3342或33258等）仍能被细胞摄取。
应用流式细胞仪或荧光显微镜可区分和坏死细胞，细胞内DNA出现Hoechest 3342标记而不出现PI标记的为凋亡细胞。
基本原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。
这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面：1. 细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。
研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。
许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。
2. 光散射特性：凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。
在流式细胞仪上，前散射光与细胞的大小有关，而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用，与细胞内的颗粒多少有关。
在细胞凋亡时，细胞固缩，体积变小，故前散射光降低，这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。
此外细胞凋亡时由于染色体降解，核破裂形成，细胞内颗粒往往增多，故凋亡细胞侧散射光常增加。
细胞坏死时，由于细胞肿胀，其前散射光增大；侧散射光在细胞坏死时也增大，因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。
但需要注意的是，根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。
因此在某些淋巴细胞凋亡中，用光散射特性检测凋亡的可靠性较好，而在肿瘤细胞凋亡中，其可靠性就较差。
根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来，用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
碘化丙啶PI 染色液(1mg/ml)
简介：
碘化丙啶染色(PI stain)可以对细胞周期与细胞凋亡进行分析。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA 和RNA 的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。
碘化丙啶与双链DNA 结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA 的含量成正比。
细胞内的DNA 被Propidium Iodide 染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA 含量测定，然后根据DNA 含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。
碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA 的G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA 复制的S 期细胞的荧光强度为1～2之间。
碘化丙啶PI 染色液(1mg/ml)主要由PI 、破膜剂等组成，经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测， 亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。
Leagene PI 染色液工作浓度为20～50μg/ml ，不含RNase ，推荐用于RNA 染色，细胞检测含量范围一般为0.1～1×106之间。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、细胞样品的制备：
⑴贴壁细胞：
① 离心使细胞沉到管底。
小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。
② 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。
③ 离心使细胞沉到管底。
⑵悬浮细胞：
① 离心使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。
③ 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。
④ 离心使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS ，以免吸走细胞。
2、细胞的固定：加入1ml 冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h 或更长时间。
4℃固定12～24h 可能效果更佳。
编号 名称 DA0028 Storage PI Stain(1mg/ml) 1ml -20℃ 避光 使用说明书 1份
3、细胞的清洗：
①离心使细胞沉到管底。
②小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl溶液，以免吸走细胞。
③加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。
④离心使细胞沉到管底。
⑤小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞。
⑥轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
4、PI染色：在每个待检细胞样品中加入500μl配制好的PI染色工作液，轻轻重悬细胞沉
淀，置于37℃避光水浴30min。
5、检测与分析：用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。
采用适当分析软件进行细胞DNA或RNA含量分析和光散射分析。
染色结果：凋亡细胞G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型，在光散射谱上，前向光散射低于正常，侧向光散射高于正常。
注意事项：
1、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。
2、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
3、在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当
提高离心力或延长离心时间。
4、PI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。