HPLC仪器使用注意事项
高效液相色谱仪使用说明书
高效液相色谱仪使用说明书序言高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography, HPLC）是一种常用的分离技术，广泛应用于药物分析、食品安全监测、环境检测等领域。
本说明书旨在提供关于高效液相色谱仪的基本操作原理、使用方法和注意事项等信息，以帮助用户正确、高效地使用该仪器。
一、仪器概述高效液相色谱仪主要包括进样系统、色谱柱、泵液系统、检测器和数据处理系统等基本组成部分。
1. 进样系统进样系统用于将待测样品引入色谱柱中进行分离。
常见的进样方式包括自动进样器、手动进样器和微量注射器等。
2. 色谱柱色谱柱是分离相和固定相组成的圆柱体，是进行样品分离的关键组件。
用户应根据待测样品的特性选择适当的色谱柱型号和填充物。
3. 泵液系统泵液系统通过输送流动相将样品送入色谱柱中，并提供足够的压力以保持流速和流动相性质的稳定。
泵液系统可根据实际需求配置恒压、梯度或等压梯度等控制方式。
4. 检测器检测器用于监测和记录样品的化学信号，并将其转化为可读的信号输出。
常见的检测器包括紫外可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
5. 数据处理系统数据处理系统用于采集、处理和分析检测到的信号，通常配备有专业的软件。
用户可根据需要选择合适的数据处理系统，并进行适当的参数设置。
二、操作方法1. 仪器准备（1）保证仪器通电正常并处于稳定工作状态。
（2）检查流动相储液瓶中是否有足够的流动相，并确保其配制符合要求。
（3）检查色谱柱的连接情况，确保柱座和柱连接部位严密无泄漏。
（4）开启数据处理系统，确保与色谱仪的连接正常。
2. 样品准备根据实验要求选择合适的样品，并进行必要的前处理工作，如过滤、稀释等。
3. 进样操作（1）将样品溶液通过合适的进样方式加入进样器中。
（2）设置进样体积和进样方式等参数，并进行进样操作。
4. 流动相系统设置（1）根据实验要求选择合适的流动相，注入流动相储液瓶中。
（2）设置流速、梯度等参数，并进行流动相系统的初始化。
高效液相色谱仪的操作与维护指南
高效液相色谱仪的操作与维护指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、药学、环境科学等领域。
为了保证仪器的正常运行和获得可靠的分析结果，正确的操作和科学的维护是非常重要的。
本指南将详细介绍高效液相色谱仪的操作和维护方法，以帮助用户正确使用该仪器。
一、高效液相色谱仪的操作方法1. 准备工作在操作前，需要先进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否处于稳定的工作环境中，以确保仪器不受外界干扰。
其次，检查所有的连接与密封件是否完好，确保流体不会泄漏。
最后，检查溶剂和样品的储存条件，保证其符合要求。
2. 开机与关闭正确的开机和关闭步骤可以延长仪器的寿命。
开机前，需要检查电源和其他外部连接。
按照仪器的说明书，按顺序打开电源和其他必要的开关。
关闭仪器时，应按照相反的顺序关闭开关，并断开电源。
3. 样品准备与进样在进行进样操作前，需要准备好样品和溶剂。
样品准备时，应遵循相应的样品制备方法，确保样品的准确性和稳定性。
进样时，应根据实验需求设置适当的进样方式，并注意定量准确。
4. 仪器参数设置在进行分析之前，需要设置仪器的参数，以调整流速、温度、检测波长等参数。
仪器的参数设置应根据实验目的和样品特性进行优化调整，确保获得准确的分析结果。
5. 分析运行与数据处理设置好仪器参数后，可以开始进行分析运行。
根据实验要求和样品特性，选择合适的分析方法和梯度程序。
在分析过程中，应定期检查仪器运行状态，注意观察流速、峰面积、保留时间等数据，并记录相关结果。
6. 仪器清洗与维护分析结束后，必须对仪器进行清洗和维护。
首先，关闭流体通道，清除流体残留物和样品残留物。
然后，根据仪器说明书的要求，进行仪器的常规清洗和维护工作。
定期检查和更换液相柱、检测器等易损件，以保证仪器的正常运行。
二、高效液相色谱仪的维护方法1. 液相柱维护液相柱作为HPLC分离的重要组件，需要定期维护和保养。
hplc的注意事项 -回复
hplc的注意事项-回复公式高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生物医药、食品安全和环境科学等领域。
在使用HPLC进行实验时，有一些注意事项需要遵守，以确保结果的准确性和可重复性。
本文将逐步介绍HPLC的注意事项。
第一步：设备准备在进行HPLC实验之前，首先要确保设备的正常运行。
检查液相色谱仪的仪器参数，如流量、温度、压力和检测器的灵敏度等。
确保所有设备和仪器都处于良好的工作状态，并且有足够的试剂和耗材。
第二步：样品准备正确的样品准备是进行HPLC分析的关键。
首先，确定分析的目的和需求。
根据实验目的选择合适的溶剂和样品制备方法。
特别是对于复杂的样品，如生物样品，可能需要进行样品前处理，如蛋白质沉淀、固相萃取等。
第三步：试剂选择选择适当的试剂是确保HPLC实验成功的关键。
根据需要选择合适的溶剂、流动相和内标等。
溶剂的纯度和质量对实验结果至关重要，因此应尽量使用高纯度的试剂。
在选取流动相时，要考虑分离效果、分离时间和方法的可重复性。
选择合适的柱也是确保HPLC分析成功的关键。
柱的选择应考虑分离目标、样品性质和需求。
常见的柱类型有反相柱、离子交换柱和手性柱等。
在选择柱时，还要注意柱的尺寸、填充物和使用寿命等。
第五步：方法优化在进行HPLC实验之前，需要进行方法的优化。
优化的主要目标是提高分离效果、减少分离时间和提高方法的可重复性。
优化的关键点包括流量、温度、柱温控制、梯度程序和检测器的选择等。
通过优化方法，可以获得更好的实验结果。
第六步：系统稳定在进行HPLC实验之前，需要进行系统的稳定。
根据设备和方法要求，进行系统预运行和平衡。
确保系统的压力、流量和温度等参数在稳定的范围内。
在进行实验之前，还要做好基线的调整和峰形图的检查。
第七步：实验操作在进行实验操作时，需要注意以下几点。
首先，要准确记录所有的实验条件和参数，如溶剂的选择、柱的类型和条件、流量和梯度程序等。
其次，要严格控制实验过程中的温度，尤其是对于温度敏感的化合物。
高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
高效液相色谱仪的操作流程和注意事项引言：高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
掌握正确的操作流程和注意事项，对保证分析的准确性和结果的可靠性至关重要。
下面将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。
一、仪器准备在开始操作高效液相色谱仪之前，需要进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否正常工作，例如电源是否正常接通，各个模块是否连接牢固等。
其次，确保色谱柱处于良好的工作状态，即没有泄漏和堵塞等问题。
最后，根据需要，选择合适的检测器，并校准相应的参数。
二、样品准备和进样样品的准备是操作高效液相色谱仪的关键一步。
首先，根据样品的性质选择合适的溶剂体系，并将样品完全溶解。
其次，为了提高分析的准确性，通常需要对样品进行预处理，例如磷酸酯酶的样品需要经过脱磷酸处理。
最后，将样品装入进样瓶中，根据仪器的要求设定进样量。
三、流动相的选择和准备流动相是高效液相色谱仪中的关键因素之一。
在选择流动相时，需要考虑样品的性质以及分析的目的。
常见的流动相包括有机溶剂、水以及它们的混合溶液。
在选择后，需要准备流动相，并进行除气处理以去除气泡。
此外，还要注意流动相的质量，例如pH值、浓度等。
四、色谱条件的设置色谱条件是操作高效液相色谱仪的关键之一。
根据分析的目的和样品的性质，需要设置合适的参数，例如流速、温度、梯度等。
在设置前，需要根据样品性质选择合适的色谱柱，并设定相应的温度以优化分离效果。
此外，还需要根据检测器的要求设定相应的参数。
五、数据采集和结果分析在操作高效液相色谱仪时，需要进行数据采集和结果分析。
首先，确保数据采集系统正常工作，并根据仪器的要求进行设定。
其次，启动数据采集并进行监控，及时记录实验过程中的各项指标。
最后，对采集的数据进行处理和分析，例如峰面积的计算、峰形的分析等。
注意事项：1. 严格按照操作流程进行操作，避免任意更改设置。
HPLC使用操作和注意事项
HPLC使用操作和注意事项HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物和环境等领域。
在进行HPLC分析时，操作和注意事项非常重要，可以确保数据的准确性和可靠性。
以下是HPLC使用操作和注意事项：1.仪器准备和检查-在进行HPLC分析之前，确保仪器处于正常工作状态，并进行必要的检查和校准。
-检查并确保溶剂瓶、移液器、混匀器、色谱柱等零件的完整性和安装正确。
2.样品准备-样品应根据需要进行稀释或提纯。
-样品应避免与空气接触，以防止氧化或降解。
-对于固态样品，可以使用溶剂进行提取。
-对于液态样品，应尽量使用无色或低吸光度的溶剂。
-样品必须先过滤，以去除悬浮物和杂质。
3.HPLC系统设置-根据试验要求设置合适的流速、温度和检测方式。
-设置正确的进样量和进样方式，确保准确和稳定的进样。
-检查色谱柱的状态，确保它处于正常工作条件。
4.溶剂和试剂准备-使用HPLC级别的纯溶剂和试剂，以确保分析结果的准确性。
-为了避免测定结果的误差，必须使用纯化的水和有机溶剂。
-按照仪器的要求准备缓冲液。
5.进样与洗脱-采用适当的进样模式，如体积进样或峰进样。
-进样体积应根据样品浓度和检测灵敏度进行优化。
-洗脱条件是决定分析分离效果和峰形的关键因素，应根据实验要求进行优化。
6.数据分析-分析HPLC数据时，应先进行标定，确定峰的保留时间和相对峰面积。
-根据标定峰的结果，进行峰识别和定量分析。
-结果应进行统计分析，并计算相对标准偏差以评估数据的可靠性。
除了上述操作，使用HPLC时还需要注意以下事项：1.安全操作-使用HPLC时，应遵守实验室的安全规定，佩戴个人防护装备，如手套和安全眼镜。
-与高压液体及其设备一起操作时，必须特别小心。
2.色谱柱保养-定期进行色谱柱的保养和洗脱，以确保其性能和寿命。
-使用适当的保护柱，避免杂质和有害物质进入色谱柱。
3.仪器保养-定期清洗和保养仪器零件，如移液器和混匀器。
-定期更换空气过滤器和溶剂瓶，以防止污染。
HPLC使用注意事项
HPLC使用注意事项高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于分析化学和生物化学领域的分离技术。
在使用HPLC时，以下是一些需要注意的事项：1.选择合适的柱：根据样品性质和分离要求选择适当的柱。
不同的柱材料和填料对样品的分离效果有不同的影响。
2.样品准备：样品的准备对于HPLC分析至关重要。
样品应该是纯净的，不含杂质。
如果有需要，可以通过萃取、浓缩或衍生化等方法对样品进行前处理。
3.流动相的选择：选择合适的流动相对于分离效果也是至关重要的。
流动相可以是各种溶剂或它们的混合物。
对于高效液相色谱来说，通常使用的是有机溶剂如甲醇、乙腈等。
还需要注意一些流动相的pH值，应根据样品的性质来选择。
4.流速和梯度条件：选择适当的流速和梯度条件以满足分离的需求。
流速过高可能会导致柱压升高和分离效果下降。
而流速过低则会降低分离效率。
5.注射量：注射量应根据样品和柱的容量来确定。
一般来说，注射量不宜过大，以免超出柱的容量范围。
6.检测器的选择：根据分析目的选择适当的检测器。
常用的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
不同的检测器对不同的化合物有不同的灵敏度和选择性。
7.标定和校准：在进行HPLC分析之前，应该进行标定和校准以确保分析结果的准确性和可靠性。
标准品的选择和制备应严格按照相关的规范进行。
8.维护和保养：定期进行仪器和柱的维护和保养以保证仪器的正常运行。
比如清洗柱、更换柱和检测器的流体以及检查泄漏和杂质等。
9.数据分析和解释：在获得分析数据后，进行相应的数据分析和解释。
对峰进行积分、计算峰面积和峰高度等指标，并与标准品进行比较分析。
10.安全措施：在进行HPLC分析时，应遵守相关的安全操作规程，避免接触有毒和易燃物质。
总之，正确使用HPLC技术需要注意上述方面的事项，以保证分析结果的准确性和可靠性。
通过合理的实验设计和操作，可以获得满意的分离效果和分析结果。
保养维护高效液相色谱仪的要点
保养维护高效液相色谱仪的要点高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种常用的分离和定量分析仪器。
为了保证其正常运行和延长使用寿命，需要进行定期的保养和维护。
下面是保养维护高效液相色谱仪的主要要点：1.保持色谱仪周围环境清洁干燥：色谱仪应该放置在无尘、无水、无振动、无干扰的环境下。
养成定期清理仪器外壳和工作台面的习惯，防止灰尘和异物进入仪器内部。
2.定期检查和更换耗材：液相色谱柱是色谱仪的核心部件，需要定期检查柱子的状况，包括柱液的流量、背压、峰形等参数。
当出现异常时，需要及时检查和更换柱子。
此外，溶剂瓶、垫片、接头和密封件等耗材也需要定期检查和更换。
3.保持良好的进样系统：进样系统是色谱仪样品进入柱子的关键部件。
需要注意致样器、进样针和进样管的清洁和灵敏度。
定期检查进样系统的各个部件，保证样品进入柱子的准确性和稳定性。
4.注意溶剂和流速的选择：溶剂和流速的选择对色谱分离的质量和分析结果有很大的影响。
应该选择优质的溶剂，在使用过程中定期更换，并注意保持合理的流速。
在使用有机溶剂时，要避免过高浓度的有机溶剂对仪器造成损害。
5.定期校准和质控：定期校准色谱仪可以保证分析结果的准确性和可靠性。
常见的校准包括柱液流量校准、波长和检测灵敏度的校准等。
此外，在样品分析过程中应该加入合适的质控标准品，并定期检查质控品的回收率和重复性。
6.注意样品的准备和处理：样品的准备和处理对HPLC分析结果有直接影响。
样品准备过程中应注意去除杂质和颗粒，避免对色谱柱和检测器造成污染或损坏。
对有机样品，要避免过高浓度的有机溶剂对进样系统造成损害。
7.定期维护仪器：除了日常保养，还应定期对仪器进行维护和检修。
定期检查和更换仪器中的各种装置、阀门、泵、检测器等关键部件。
根据仪器厂家的推荐，进行润滑和清洗等维护工作，保持仪器的正常运行。
8.进行严格的记录和文档管理：在使用和维护过程中应该做好记录和文档管理。
超高效液相色谱安全操作及保养规程
超高效液相色谱安全操作及保养规程超高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离、分析化学组分或化合物的重要技术之一。
HPLC技术已广泛应用于各种化学、生物化学、食品、医药、环保等领域。
然而，由于其操作难度大、操作步骤多等特点，HPLC的安全操作和保养工作显得尤为重要。
本文将详细介绍超高效液相色谱安全操作及保养规程，以确保实验人员在操作过程中的安全，并保障设备的正常运行。
安全操作规程1.准备工作在操作前，应认真查看设备的相关操作手册，以熟知设备的基本工作原理、技术参数、管路系统和防护装置等。
另外，操作人员需要穿戴相应的安全防护装备，如实验室常用的实验服、手套、口罩、护目镜等等。
2.试剂、溶液处理试剂、溶液处理也是HPLC操作过程中十分重要的环节，正确处理可有效提高实验结果的精确性。
在此，我们简述一下关于试剂、溶液处理的相关注意事项：•所有的试剂和溶液必须符合相关的国家标准，并应在存储前严格检验其纯度和质量。
•对于不同的试剂和溶液，应在相应的安全操作区进行，保证不同试剂之间不会相互交叉污染。
•试剂、溶液处理时，应使用审查手册所提供的相应的实验方法。
•禁止将试剂或溶液直接倾倒到下水道或其他不安全的区域中，必须遵循正确的环保处理流程。
3.技术操作HPLC操作过程中，技术操作是至关重要的一步，对于实验结果的影响也最大。
因此，在技术操作环节中，操作人员必须掌握与之相关的啤酒定律、浓度计算法、pH值等结合结果、结合实验要求进行操作。
在操作过程中，操作人员必须做到以下几点：•严格按照操作规程操作，确保操作流程的正确性。
•在使用试剂和溶液时，注意超标会对实验结果产生显著影响。
•禁止随意调节设备参数，以免对实验产生影响。
•在技术操作过程中，操作人员必须严格按照标准时间、标准方法进行操作，确保数据精确度。
4.废料处理操作人员在完成实验后，应及时对废液进行处理，防止废液对环境造成污染。
HPLC日常使用和维护事项
HPLC日常使用和维护事项1. 泵1）溶剂过滤器清洗：玻璃的（35%硝酸浸泡1h），不锈钢的（超纯水超声）2）吸液管检查：以超纯水为流动相，2.0ml/min，若吸液管持续产生气泡或有气泡附着于管内壁，则需更换吸液管3）Purge阀:5.0ml/min，压力不超过10bar；更换阀芯4）清洗和更换主动阀阀芯：超纯水和乙醇彻底冲洗；如有必要，在乙醇中超声不超过10s5）清洗出口阀：超纯水和乙醇冲洗6）Seal Wash 清洗组件功能一定打开（工作站设置）7）清洗和检查活塞2. 进样器1）检查转子密封圈：进样针提起时有液体流出，进样重复性差，残留严重2）检查和清洗针座：酒精棉签擦拭或反冲3）恒温器：无需使用时关闭3. 柱温箱1）不使用时关闭4. 紫外检测器1）更换紫外灯2）清洗流通池：系统若有缓冲盐，先用超纯水冲洗系统；10%异丙醇低速冲洗1h，100%异丙醇冲洗1h以上，甲醇冲洗干净5. 其他使用注意事项：1）每次操作完毕，应及时清理所用物品，用柔软的抹布擦拭仪器表面，保持仪器的清洁。
2）系统冲洗完成后，依次关闭工作站软件、仪器。
及时填写仪器使用记录。
3）为了充分利用氘灯，在检测结束后应及时关闭，但短时间内不使用，无需关闭，因为频繁的开关同样会缩短氘灯使用寿命。
4）在仪器使用过程中，检查流动相剩余量，做到及时更换。
更换流动相时务必停泵，防止吸入大量空气，影响仪器正常运作。
5）HPLC系统应保存在甲醇溶液中，若样品分析时为含盐流动相，结束后，应先用高比例的水冲洗：再保存在高比例的甲醇中。
6）更换流动相时，要注意当前流动相与所更换流动相是否互溶，如果两者不能互溶或互溶性较差，需采用与两者互溶性都比较好的流动相进行过渡。
7）管路连接应密封、到位，接头不要拧的过紧，以防螺纹损坏。
更换毛细管要考虑其孔径和长度，避免增加死体积。
8）每周一第一次使用液相前，用50-60℃热水冲洗系统。
HPLC使用注意事项和经验之谈
1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜 过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然 后用甲醇(或甲醇水溶液)冲 洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆 外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
(七)峰拖尾
1.柱超载 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相
2.峰干扰 清洁样品,调整流动相
3.硅羟基作用 加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品
4.同前(四)4 同前(四)4
5.同前(四)3 5.同前(四)3
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
2、流动相流速的选择： 因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。 当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
a．由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。
HPLC仪器使用注意事项
HPLC仪器使用注意事项HPLC（高效液相色谱）是目前广泛应用于分析化学的一种重要技术手段。
然而，在使用HPLC仪器时，需要注意以下几个方面的问题，以确保分析结果的准确性和仪器的良好运行。
1.仪器的日常维护：定期检查和保养HPLC仪器是确保其正常运行和延长使用寿命的重要措施。
这包括清洁仪器表面、更换耗材和消耗品、检查泵的压力以及检查和校准检测器等。
仪器的维护工作应按照仪器提供商的要求进行，并根据实际情况进行适当调整。
2.使用适当的溶剂：HPLC仪器几乎都使用有机溶剂，在选择时需要注意它们的纯度和质量。
使用优质的有机溶剂可以确保分析结果的准确性，并减少对仪器和柱的损害。
此外，应注意将溶剂储存在干燥、清洁、不受阳光直射的地方，以避免溶剂的蒸发和污染。
3.样品的准备和处理：HPLC仪器仅能处理液体样品，因此固体样品需要先进行溶解和过滤。
此外，样品的稳定性也需要考虑。
一些样品可能会在接触空气、光照或高温条件下发生分解，导致分析结果的不准确。
因此，在准备样品时，应尽量避免这些条件，并在分析之前进行适当的保存和封存。
4.柱的选择与维护：柱是HPLC分析的关键部分，其选择需要根据具体样品的性质和分离需求进行。
在选择柱时，应注意柱的尺寸、填料类型和粒径以及柱温设置等因素。
同时，为了保证柱的稳定性和使用寿命，需要定期进行逆洗和再填充等维护工作，以及对柱进行正确的保存和保养。
5.检测器的调整与校准：HPLC仪器使用的检测器包括紫外/可见检测器、荧光检测器和质谱检测器等，这些检测器需要经过适当的调整和校准才能保证分析结果的准确性。
在使用检测器前，需要根据仪器的说明书进行检测器的初始化操作，并根据标准物质进行灵敏度、线性度和准确性等校准工作。
6.数据的处理与解释：HPLC分析产生的数据需要进行适当的处理和解释，才能得出正确的结论。
在数据分析过程中，应考虑样品的稀释、补偿和基线的修正等因素，并结合仪器的性能和分析方法的要求进行结果的计算和解释。
高效液相色谱注意事项
高效液相色谱注意事项高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于各个领域的分析技术，下面是使用HPLC时需要注意的几点事项。
1. 样品准备：在进行HPLC分析前，需要仔细准备样品。
首先，确保样品是稳定的，不会在分析过程中产生降解或变化，并且准备足够的样品量以避免实验中的误差。
其次，要将样品充分溶解或悬浮于适当的溶剂中，以获得准确和可重复的分析结果。
2. 准备工作：在运行HPLC之前，需要对仪器进行一些准备工作。
首先，根据所需的分析方法，选择合适的柱和流动相，并对其进行装配。
然后，检查仪器的运行状态，如泵的压力和流量、检测器的灵敏度等，确保其正常工作。
最后，对仪器进行校准和标定，以确保分析结果的准确性和可靠性。
3. 流动相控制：在HPLC分析过程中，流动相的选择和控制非常重要。
合理选择流动相的组成和比例，以获得最佳的分离效果。
在分析过程中，要保持流动相的稳定性，避免气泡和颗粒物进入流动相中，以免影响分析结果。
4. 样品注射：样品注射是HPLC分析中关键的一步。
正确地注射样品可以避免样品在进样过程中的损失和变化，并确保准确和可重复的分析结果。
在进行样品注射时，要注意控制注射量和注射速度，以避免过量或不足的样品进入柱中。
5. 分离条件控制：为了获得最佳的分离效果，需要合理控制分离条件。
首先，选择合适的柱和流动相，以达到对于待分析物相容性和选择性的要求。
然后，根据分析方法的要求，调整流速、温度和梯度程度等参数，以优化分离效果。
6. 数据分析：在HPLC分析过程中，要准确记录和分析数据。
首先，记录样品处理、仪器参数和分析条件等操作步骤和参数。
然后，进行数据处理和结果分析，如计算峰面积、定量分析和结果比对等。
最后，对分析结果进行统计学分析，评估分析方法的准确性和可靠性。
总之，使用HPLC进行分析时，需要严格控制实验条件和仪器性能，并进行合理的样品准备和处理。
遵守上述几点注意事项，可以提高HPLC分析的效率和结果的准确性和可靠性。
HPLC仪器使用注意事项
仪器使用注意事项1. 用棕色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液.光照影响瓶中藻类的生长会堵塞溶剂过滤器，从而影响泵的运行。
勿使用多日存放的蒸馏水。
2. 在比例阀的混合点，重力作用使盐颗粒沉淀下来，通常，下面阀A/D接水相/盐溶液，C/B接有机溶剂。
使用盐时脱气机易堵，可将管路入口与出口反接，用60摄氏度的温水反冲，用针筒缓慢吸200mL左右。
3. 流动相瓶中的滤头脏。
压力波动，可将滤头拔下，检查是否与滤头有关。
滤头污染，可用30%-35%的稀硝酸泡1-2h 或过夜，看污染程度，最后用水冲洗干净，重新装好。
4. seal-wash 用10%的异丙醇。
使用缓冲盐时要加seal-wash选项，周期清洗。
5. LAN与CAN不能串联，LAN接仪器，PC。
CAN为模块间通讯。
6. 柱温箱选择3uL，减少死体积，延迟体积。
7. 液相上各种灯颜色。
电源打开后，四个模块左侧灯亮绿色。
状态指示灯位于各自模块的右上方：呈黄色：该仪器在未准备好状态(Not-ready) 或正在自检。
呈绿色：该仪器正在运行，采集数据(Run)。
无颜色：该仪器已准备好等待运行(Pre-run)。
呈红色：该仪器检测到有故障发生，仪器在错误状态,红色多发生于漏液时。
8. 过滤白头位于排气阀内，当系统压力有异常增高时，首先需要检查过滤白头是否阻塞了。
判断的方法是：打开排气阀，以纯水作流动相，将流速设为5mL/min，如果泵压超过10bar，则说明过滤白头需要更换了。
如果过滤芯的颜色发黑，说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的。
9. 毛细管线分类：0.17mm内径------绿色;0.12mm内径-------红；0.25mm内径-------蓝PEEK 管线：内径-----0.18mm。
10. 灯能量测试，先将灯预热，用水平衡系统。
启动Agilent Lab advisor 进行测试。
启动软件connect（界面右上部分）Service&Diagnostics（左侧导航栏）选择G4212B Intensity Test Run 查看结果。
HPLC注意事项
高效液相色谱仪操作注意事项流动相：1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。
样品：1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积为定量管的3～5倍；色谱柱：1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；2、使用符合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。
5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；6、不要高压冲洗柱子；7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；使用过程中注意轻拿轻放。
操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。
hplc实验注意事项
高效液相色谱法（HPLC）是一种在化学分析中常用的技术，但在进行HPLC实验时需要注意一些事项，以确保实验的准确性和安全性。
以下是一些HPLC实验的注意事项：
1. 设备检查：在进行实验前，确保HPLC仪器的各个部件都处于良好状态，包括柱、检测器、流动相、进样器等。
2. 溶剂质量：使用优质的溶剂，并确保其纯度和配制的准确性。
不良的溶剂质量可能导致峰形状异常或基线漂移。
3. 柱的适用性：根据分析物性质选择合适的柱，并确保柱的状态良好。
柱的使用寿命有限，需要定期更换。
4. 流动相的准备：严格按照实验方法准备流动相，并使用过滤器或超纯水保证流动相的纯净性。
避免在流动相中引入气泡。
5. 进样器的操作：确保进样器干净，避免交叉污染。
正确设置进样体积和注射速度，以确保样品得到均匀的进样。
6. 检测器设置：根据实验要求选择适当的检测器波长和灵敏度。
在实验过程中，监测峰的形状和基线，确保信号的稳定性。
7. 温度控制：对于某些实验，需要对系统进行温度控制。
确保系统温度稳定，以获得准确的分析结果。
8. 废弃物处理：处理废弃物时，特别是有机溶剂，要按照安全规定进行，避免对环境造成污染。
9. 个人安全：使用适当的个人防护设备，如实验室外套、手套和护目镜。
避免接触有毒或刺激性物质。
10. 实验记录：记录实验条件、参数和结果。
良好的实验记录有助于追溯实验过程和结果。
在进行HPLC实验时，严格遵循实验方法、注意仪器维护和个人安全，能够提高实验的可靠性和准确性。
HPLC操作规程和注意事项
HPLC操作规程和注意事项1.所需的流动相，应该用合适的0.45μm滤膜过滤。
2.样品溶液和标准溶液，也应该用合适的0.45μm滤膜过滤，滤膜也分为水相和有机相。
3.开机顺序：开泵，开检测器，进入色谱工作站。
4.泵的启动：用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。
打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml，设置高流速（9ml/min)或用冲洗键PURGE进行排气，观查出口处流动相呈连续液流后，将流速逐步回零或停止（STOP）冲洗，关闭排放阀。
5.将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏，初始平衡时间，一般约需30分钟。
平衡的标志是泵压不波动和基线平直，说明已经平稳。
6.检测器的开启：开启电源，选择光源（氘或钨）灯，选定检测波长，待预热15分钟方可用于分析测试。
7.压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析，应检查泵中气泡是否已排除，各连结处有无漏液，排除故障后方能进行操作。
如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞，如有堵塞，应该用相应的溶剂清洗。
如果清洗不了，可小心卸下开柱的进口螺帽，挖出被污染填冲剂后，补入同类填充剂，仔细安装好，再进行操作。
8.分析完毕后，先关检测器和色谱工作站，再用适当经过滤和脱气的溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正己烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水然后用甲醇冲洗，再用分析流速冲洗，各冲洗溶剂一般冲洗30-60分钟，特殊情况应延长冲洗时间，粗的柱子流速控制在0.5ml/min以下,细柱控制在0.5ml/min以下。
9.关机顺序：退出化学工作站，接着关检测器，最后关泵。
开机顺序刚好和关机顺序相反。
HPLC使用注意事项1.含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜，最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
2.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
HPLC操作规程和注意事项
HPLC操作规程和注意事项一、操作规程1.准备工作(1)检查设备：检查HPLC仪器的仪表、进样系统、柱室、检测器等是否正常工作。
(2)准备试剂：准备好所需的试剂和溶剂，并按照操作要求进行配制。
(3)准备样品：根据需要分析的样品性质，选择适当的提取和前处理方法，准备好待测样品。
2.仪器操作(1)打开电源：首先接通HPLC仪器的电源，并预热一段时间，确保仪器达到稳定状态。
(2)装填柱子：按照操作说明将柱子正确装填到柱室中，并连接好进样系统和检测器。
(3)刷洗柱子：用纯溶剂将柱子刷洗，至少连续通过10倍柱子体积的溶液，以去除表面的杂质。
(4)进样：按照分析方法中的要求，设置好进样量和进样方式，确保样品能够均匀地进入柱子。
3.参数设置(1) 流速：根据分析方法的要求，设置适当的流速，一般应在0.5-2.0 mL/min之间。
(2)梯度程序：如果需要进行梯度洗脱，按照分析方法中的梯度程序设置好梯度条件和比例。
(3)柱温：根据样品性质和柱子的要求，设置适当的温度，一般应在室温到60℃之间。
4.检测和记录结果(1)检测器选择：根据分析物的性质，选择合适的检测器进行检测，如紫外检测器、荧光检测器等。
(2)检测条件：根据需要测量的物质，设置合适的检测波长、增益和灵敏度等参数。
(3)记录数据：及时记录分析结果和数据，包括进样量、保留时间、峰面积等，以备后续分析和比对。
二、注意事项1.安全操作(1)使用个人防护装备，如实验手套、安全眼镜和实验服。
(2)注意化学品的毒性和腐蚀性，避免接触皮肤和吸入有害气体。
(3)注意防火和爆炸，禁止在实验室中吸烟，并保持实验区域通风良好。
2.样品制备(1)样品的准备应尽量避免污染和氧化，以保证结果的准确性。
(2)样品的提取和前处理方法需根据样品特性和分析要求进行优化，确保提取效率和分析结果的可靠性。
(3)样品的溶解度要适宜，过高或过低的浓度都会影响分析结果。
3.仪器维护(1)定期检查和校准仪器，保证仪器的正常工作和准确性。
液相色谱仪使用注意事项
1岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
HPLC_Agilent1100操作注意事项
效液相色谱仪(Agilent 1100)操作注意事项色谱柱：1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、鞫?2、使用符合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。
5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；6、不要高压冲洗柱子；7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；使用过程中注意轻拿轻放。
操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。
冲洗过程中关闭D灯、W灯；7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。
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仪器使用注意事项
1. 用棕色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液.光照影响瓶中藻类的生长会堵塞溶剂过滤器，从而影响泵的运行。
勿使用多日存放的蒸馏水。
2. 在比例阀的混合点，重力作用使盐颗粒沉淀下来，通常，下面阀A/D接水相/盐溶液，C/B接有机溶剂。
使用盐时脱气机易堵，可将管路入口与出口反接，用60摄氏度的温水反冲，用针筒缓慢吸200mL左右。
3. 流动相瓶中的滤头脏。
压力波动，可将滤头拔下，检查是否与滤头有关。
滤头污染，可用30%-35%的稀硝酸泡1-2h 或过夜，看污染程度，最后用水冲洗干净，重新装好。
4. seal-wash 用10%的异丙醇。
使用缓冲盐时要加seal-wash选项，周期清洗。
5. LAN与CAN不能串联，LAN接仪器，PC。
CAN为模块间通讯。
6. 柱温箱选择3uL，减少死体积，延迟体积。
7. 液相上各种灯颜色。
电源打开后，四个模块左侧灯亮绿色。
状态指示灯位于各自模块的右上方：
呈黄色：该仪器在未准备好状态(Not-ready) 或正在自检。
呈绿色：该仪器正在运行，采集数据(Run)。
无颜色：该仪器已准备好等待运行(Pre-run)。
呈红色：该仪器检测到有故障发生，仪器在错误状态,红色多发生于漏液时。
8. 过滤白头位于排气阀内，当系统压力有异常增高时，首先需要检查过滤白头是否阻塞了。
判断的方法是：打开排气阀，以纯水作流动相，将流速设为5mL/min，如果泵压超过10bar，则说明过滤白头需要更换了。
如果过滤芯的颜色发黑，说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的。
9. 毛细管线分类：0.17mm内径------绿色;0.12mm内径-------红；0.25mm内径-------蓝PEEK 管线：内径-----0.18mm。
10. 灯能量测试，先将灯预热，用水平衡系统。
启动Agilent Lab advisor 进行测试。
启动软件connect（界面右上部分）Service&Diagnostics（左侧导航栏）选择G4212B Intensity Test Run 查看结果。
11. 柱子存放：柱子填充乙腈或甲醇，两端堵头封存，每一个月重新使用乙腈或甲醇，填充封存
11.氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯。
12) 开机时，打开排气阀，100%水，泵流量5ml/min，若此时显示压力>10bar，则应更换排气阀内玻璃料。
13) 流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。
14) 流动相使用前必须进行脱气处理，可用超声波振荡10-15min。
15) 配制90%水+10%异丙醇，以每分2—3滴的速度虹吸排出，进行seal-wash，溶剂不能干涸。
16) 当使用缓冲溶液时，要用水冲洗手动进样器进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。
提问：
1 为什么溶剂和样品要过滤为什么溶剂和样品要过滤为什么溶剂和样品要过滤? ? ? 溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。
色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。
仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。
2 为什么HPLC用缓冲盐时要加在线用Seal--wash选项？？HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。
在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。
缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol 时,必须使用该在线冲洗选项. 清洗液配制: 90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力，不能干涸。
3流动相使用前为什么要脱气？流动相使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体（如O2），以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。
气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。
溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。
若用FLD，可能会造成荧光猝灭。
常用的脱气方法比较：氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高。
加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。
抽真空脱气法：易抽走有机相。
超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡10-15min，此法效果最差。
在线真空脱气法：Agilent1260LC真空脱机利用膜渗透技术，在线脱气，智能控制，无需额外操作，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。
4、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞，以及堵塞后的处理以及堵塞后的处理？溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器，从而影响泵的运行，尤其水溶液或磷酸盐缓冲液（PH=4-7）。
以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞。
A：请严格执行溶剂过滤。
B：请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液C：如果应用许可，可在溶剂中加入
0.0001---0.001M的叠氮化钠. D:在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气,以隔绝空气。
E：避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下，尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液。
5 Agilent 1260LC泵如何维护泵如何维护泵如何维护？Agilent 1260LC泵给色谱柱提供稳定、无脉动、流量准确的流动相，及时合理的维护非常重要。
A：流动相使用前请必须脱气、过滤。
B：使用缓冲盐时，要加在线Seal-wash 选项。
C：关机前，用相应的溶剂充分冲洗系统。
D：及时更换Purge Valve内的过滤芯。
（当打开Purge Valve时，压力高于10bar，表明过滤芯已堵）。
E：使用合适的密封圈。
6如何选择合适的泵头活塞密封圈？泵头活塞的标准密封圈能适合于大多数应用，但使用正相溶剂（如正己烷），不适合使用标准活塞密封圈，特别是长时间使用时，需更换另一种不同的密封圈，我们建议使用聚四氟乙烯密封圈。
（p/n0905-1420 2/pk）***注意：聚四氟乙烯密封圈的压力范围为：0-200bar；建议在泵的压力限制中，将最大压力设为200bar。
7使用梯度比例阀时要注意那些事项？当盐溶液与有机溶剂溶液混合时，盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶，而不会出现沉淀。
但是在比例阀的混合点，重力作用使盐颗粒沉淀下来，通常，阀A接水相/盐溶液，D接有机溶剂，此法连接可有效使盐回落到盐溶液中，并被溶解。
若颠倒过来，盐可能落在有机溶剂中，出现问题。
强烈建议：当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时，推荐将缓冲盐通道接在A通道上，有机溶剂通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水冲洗所有的通道，以除去阀口上可能出现的盐沉淀。
8 更换色谱柱时要注意什么事项? 在使用HPLC时,应特别注意柱外效应对分析结果的影响，由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级，液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。
因此，样品进入色谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效降低。
为使柱外效应减之最小，获得理想的分析结果，仪器的流动相管路连接非常重要,一般Agilent 1260LC 在第一次安装时,均有受过专业培训的安装工程师负责安装,各种接头会处理的非常完美。
客户只需在更换色谱柱时注意接头处理就可以了，一般柱子入口接头为不锈钢卡套接头，柱子出口为不锈钢卡套接头或PEEK管线手拧街头，当完成第一次安张后，不锈钢卡套已固定死，当接不同的柱子时，要注意柱子接头处的形状和长度，否则会产生一个非常大的死体积。