关于细胞培养基本技术全面知识普及课件
《细胞培养培训》课件
结
1 细胞培养中的安全问题
在进行细胞培养操作时需要注意一些安全问题，如在安全柜操作，穿戴实验外套和化、功能化和量化方向发展，国内企业正加紧提升技术水 平和产业化水平。
细胞培养培训
细胞培养是生物技术和医学研究中不可或缺的重要技术之一。在本次培训中， 我们将全面介绍细胞培养的基本概念、操作流程和常见问题解决方法。欢迎 大家踊跃参与！
介绍
1 定义
2 重要性
细胞培养是指通过在无菌 环境下加入合适的营养液， 使人类或动物细胞在体外 的人工环境中生长和繁殖 的技术。
细胞培养是研究生命科学 和药物研发不可缺少的技 术。它能够帮助我们理解 细胞的生长、分化、凋亡 和信号传导等基本生理过 程。
2
殖，以获得足够的细胞数量用于实验。 细胞传代技术可以使细胞连续繁殖多代
细胞凋亡是指由一系列信号调控的正常
并保持生物学特性。
细胞死亡程序。在细胞培养中凋亡的部
分或全部细胞可能会影响实验结果。因
此，细胞凋亡检测技术成为了细胞培养
3
细胞培养蛋白表达技术
的重要技术方法。
细胞培养蛋白表达技术是指通过转染外
源性质粒或病毒载体进入细胞，使细胞
3 应用场景
细胞培养技术广泛应用于 基础研究、药物筛选、生 物材料研究、环境毒理学 等领域。
细胞培养的基本概念
细胞种类
主要包括原代细胞、细胞株、酶处理细胞等。不 同种类的细胞具有不同的生长要求，因此对于细 胞的选择要根据科学研究的需要作出选择。
细胞培养的条件
温度、CO2浓度和通气等条件对于细胞培养的影 响非常大。合理的培养条件是保证细胞生长和繁 殖的前提。
《细胞培养基本技术》课件
讨论细胞培养在科学研究和 医学应用中的作用。
细胞培养实验步骤
1
细胞培养器具消毒
2
介绍细胞培养器具的消毒方法。
3
细胞培养
4
将细胞放入培养基中并提供适当的生长条件。
5
细胞准备
从组织样本中提取和准备细胞。
培养基制备
制备适合细胞生长的培养基。
细胞观察与维护
观察细胞生长情况，并进行细胞培养的日常 维护。
细胞培养中常见问题及解决方法
细胞污染
讨论细胞培养中的常见污染源 以及如何预防和解决细胞污染 问题。
细胞死亡
探讨细胞死亡的原因以及如何 识别和解决细胞死亡问题。
细胞特性变异
说明细胞特性变异的原因和影 响，并提供相应的解决方法。
细胞培养的应用领域
医学研究
探讨如何利用细胞培养技术进行疾 病研究和药物筛选。
生物技术
介绍细胞培养在生物技术领域的应 用，如基因工程和重组蛋白制备。
《细胞培养基本技术》 PPT课件
这个PPT课件将会介绍细胞培养的基本技术。通过这个课件，您将了解细胞培 养的背景和目的，并掌握其基本原理和实验步骤。
细胞培养的 细胞培养的重要性
了解细胞所需的培养基成分 和培养条件。
探讨细胞分裂机制以及如何 促进细胞增殖。
组织工程学
讨论细胞培养在组织工程学中的重 要性和应用。
细胞培养中的道德和安全问题
1
动物实验伦理
探讨使用动物细胞进行实验的道德与伦理考
实验室安全
2
量。
介绍细胞培养实验中的安全操作方法和注意
事项。
3
数据和结果处理
讨论研究数据和结果处理的道德和科学性要 求。
总结及未来展望
细胞培养技术17577PPT课件
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整个细胞周期可划分为G1 → S → G2 → M → G1，如下图所示：
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细胞生长曲线
体外培养的细胞生长达到一定密度后，都需传 代。传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细 胞数量和细胞增殖速度等有关。接种细胞数量大、 细胞基数大、相同增殖速度条件下，细胞数量增 加与饱和速度相对要快。连续细胞系和肿瘤细胞 系比初代培养细胞增殖快，培养液中血清含量多 时细胞增殖比少时快。细胞增殖一代，一般要经 过以下三个阶段：
凋亡发生的过程表现（细胞缩小→致密染色质 边集→核碎片→凋亡小体） 1、丧失了特殊的表面结构（微绒毛等）和接触 区，形成光滑的轮廓，从周围活细胞中分离出来 2、细胞缩小：①胞浆细胞器集中
②胞膜出芽或起泡 ③细胞皱缩；
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3、保持胞浆细胞器完整性
扫描电镜下，细胞表面呈奇特火山口样外观，① 线粒体不肿胀，内膜不破裂；②短暂滑面内质网 （SEN）扩张，扩张间隙与细胞表面融合；③有 时有聚积排例的半结晶状核糖体；④可有与细胞 表面平行的微丝束。
取材 无菌环境中，从机体取出某种组织（视实验目的
而定），经过一定的处理（如消毒、消化分散等） 后接入培养器血中，这一过程称为取材。取材后 应尽快培养，因故不能马上培养时，置4℃的培养 液中保存，但时间不能超过24h。取组织时应严 格保持无菌，同时也要避免接触其他有害物质。 取病理组织、皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌， 为减少污染，可用500～1000单位/ml青、链霉素 的PBS液漂洗5～10min。 （无论是传代培养还是原代，对细胞进行操作切 记：细心，专心，动作要轻）
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《细胞培养培训》课件
为了获得更多的细胞，可以在传代后进行扩增培 养，使细胞数量增加。
实验结束后的处理
清洗与整理
实验结束后，对实验室进行清洗和整理，确保实验室的清洁和整 洁。
数据整理与分析
对实验数据进行整理和分析，得出结论并撰写实验报告。
废弃物处理
按照实验室规定对废弃物进行处理，确保实验室的安全和环保。
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细胞培养的注意事项与安 全防护
洁度和无菌条件等。
细胞接种与培养
细胞计数与稀释
根据实验需求，对细胞进行计数 并稀释到适当的密度。
接种细胞
将稀释后的细胞接种到细胞培养皿 或培养瓶中，确保细胞贴壁良好。
培养条件
将接种后的细胞放置在适宜的温度 、湿度、CO2浓度和培养基中，并 定期进行观察和记录。
细胞观察与检测
形态观察
定期观察细胞的形态变化，包括 生长状态、贴壁情况、分裂情况
总结词
通过分裂和增殖来维持的细胞培养。
详细描述
传代细胞培养是通过细胞的分裂和增殖来维持的，这些细胞在培养过程中会逐渐 适应环境并失去其原始特性。传代细胞培养广泛应用于实验室研究，用于生产疫 苗、抗体和药物筛选等。
干细胞培养
总结词
用于培养干细胞的细胞培养技术。
详细描述
干细胞培养是指用于培养干细胞的细胞培养技术，干细胞具有自我更新和多向分化的能力，可以分化 成不同类型的细胞。干细胞培养在再生医学、药物筛选和疾病模型建立等方面具有广泛的应用前景。
VS
详细描述
癌细胞传代培养是研究癌细胞生长、增殖 、侵袭和转移等特性的重要手段，通过传 代培养可以获得大量癌细胞用于药物筛选 、基因组学和蛋白质组学等方面的研究。
案例三：癌细胞的传代培养与观察
第三章细胞培养的基本方法PPT课件
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消化培养法
• 采用前述的组织消化分散法。将妨碍细胞 生长的细胞间质去除，使细胞分散，形成 悬液，按不同浓度接种培养瓶培养。
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密度抑制（Density inhibition）或 接触抑制（Ccontact inhibition）
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四、无菌培养操作
1、首先点燃酒精灯，所有操作均在火焰近处 并经过烧灼进行；冷却后才能使用； 2、操作时，打开试管盖，要进行烧灼灭菌， 但是时间要短。在火焰上烧瓶口。保证容器 倾斜。 3、进行操作时动作要准确敏捷，但是不宜太 快，防止空气流动，增加污染的机会；
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• 4、超净工作台上的器具和用品要摆放合理； • 5、操作时器具不能触及瓶口以防止污染； • 6、不要说话、咳嗽、打喷嚏等，头发、首
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三、洗手和着装
原则上和外科手术相同。平时仅做观察不 做培养操作时，可穿着细胞培养室内紫外线照 射30min的清洁工作服。在利用超净台工作时， 因整个前臂要伸入箱内，应着长袖的清洁工作 服，并于开始操作前要用75％酒精消毒手。如 果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培 养室都要重新用消毒液洗手。进入培养室需彻 底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。
第三章 细胞培养的基 本方法
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主要内容
第一节 无菌操作技术 第二节 培养细胞的观察 第三节 细胞培养中常用的染色方法 第四节 细胞培养的污染和检测
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教学目的和要求
• 重点和难点： • 掌握细胞培养中无菌操作技术及操作过程
中需要注意哪些问题； • 预防污染是无菌操作的关键。
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细胞培养基本技术(课件)
细胞培养基本技术1665年英国学者Robert Hooke，第一次发现植物的细胞结构，并首次借用拉丁文Cella（小室）词.1983-39德国植物学家施莱登和动物学家施旺确立了“细胞学说”的基本原则。
（１）细胞是有机体，动植物都是由细胞发育来的；（２）每个细胞都作为一个相对的独立单位，有自己的“生命”。
（３）新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生。
进化论，遗传学和细胞学说定为现代生物学的三大基石，而细胞学说又是后二者的"基石"。
主要内容一、细胞培养的基本概念二、细胞培养的基本条件三、细胞培养用液的配制四、细胞培养的基本方法五、培养细胞活力测定六、细胞冻存和复苏七、细胞培养的污染和检测一、细胞培养的基本概念细胞培养：是指从体内取出组织，分离细胞；或使用细胞系，在体外模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，使之生存和生长，并维持其结构和功能特性。
组织培养：把活体的一小片组织（O.5～1立方毫米）置于底物上孵育，细胞自其周围移出并生长。
器官培养：将活体中整个器官或一部分器官取出，置于生长并同时保持其一定的结构和功能特征。
原代培养：取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。
原代培养细胞的生命归宿：1. 原代培养期2. 传代期3. 衰退期优点：组织细胞刚脱离机体，生物性状尚未发生较大变化，在一定程度上能够反映体内的状态。
传代培养：原代培养的细胞或细胞系，在生长、繁殖一定时间后，由于空间不足或细胞密度过大，导致营养枯竭，会影响细胞的生长，因此需要进行扩大培养，即传代或称为传代培养。
注意事项：①接种数量为5×10 ～8×10 个/ml。
传代密度太低，细胞容易死亡，表现出细胞在达到增长前有较长的滞留期。
②培养液由于pH下降而呈现黄色，表明细胞已经达到最大密度需要换液或进行传代培养。
③如果是单层贴壁的细胞，等长满培养瓶表面，即可进行传代。
细胞系：传代培养的细胞是细胞系(原代培养物经首次传代成功后即成细胞系)。
《细胞培养医学》课件
《细胞培养医学》课件xx年xx月xx日•细胞培养技术简介•细胞培养的基本原理•细胞培养的实验操作•细胞培养的医学应用目•细胞培养的注意事项与伦理要求•研究展望与未来发展录01细胞培养技术简介细胞培养技术是指将生物或组织的样本置于体外环境中，进行分离、培养、传代、鉴定和分析的一门技术。
细胞培养包括原代细胞培养和传代细胞培养两种类型，其中原代细胞培养主要用于科研和药物筛选，而传代细胞培养则应用于细胞系建立、细胞库建立等。
细胞培养技术的定义细胞培养技术的发展历程细胞培养技术最早可以追溯到19世纪末期，当时科学家们开始尝试在体外环境中培养动物细胞。
到了20世纪50年代，随着组织培养技术的不断发展和完善，细胞培养技术开始广泛应用于生物学、医学、农学等领域。
近年来，随着生物技术的不断发展，细胞培养技术也在不断改进和优化，例如3D细胞培养、微载体细胞培养等新技术的应用，使得细胞培养技术的效率和精度都得到了极大的提高。
细胞培养技术的应用范围细胞培养技术广泛应用于生物学、医学、农学等领域。
在医学领域中，细胞培养技术被广泛应用于药物筛选、疾病机制研究、疫苗研发等方面。
同时，细胞培养技术还在农业、环境保护等领域中得到了广泛的应用，例如用于转基因植物的培育和环境样品的检测等。
02细胞培养的基本原理细胞生命周期分为四个阶段，即G1期、S期、G2期和M期。
细胞周期的调控对于细胞的正常生长和分裂至关重要。
细胞周期细胞分裂是生物体生长和发育的基础，包括有丝分裂和减数分裂两种形式。
有丝分裂是细胞数目的增加，减数分裂是生殖细胞形成过程中染色体的分配。
细胞分裂细胞周期与细胞分裂细胞分化是指由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。
细胞分化是生物发育的基础，对于机体正常功能的维持至关重要。
细胞凋亡是指由基因控制的细胞自动结束生命的过程，又称为程序性死亡。
细胞凋亡是机体清除多余、异常细胞以及消除有害物质的重要机制。
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血清质量好坏是实验成败的关键。
常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血 清、马血清等，其中以胎牛血清质量最好。
细胞培养成功的关键
1. 实验材料的清洗、灭菌。 2. 无菌操作 3. 勤劳
内容
细胞培养的理论背景
设备与器材准备、溶液配制
无菌技术 原代培养 传代培养 细胞计数与生长曲线 冻存、复苏与运送 常见问题及对策
实验设备与器材
CO2培养箱 超净工作台
倒置显微镜
滤器
电动移液器
超纯水仪
需配制的溶液
平衡盐溶液（PBS或D-Hank’s等） 胰酶 培养基
溶液除菌方式
高压蒸汽灭菌：平衡盐溶液
过滤除菌：不能高压的溶液，如培养基、 胰酶等
培养基
培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基 和合成培养基。
天然培养基：
天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。
刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿立即用清水刷洗干净 自来水浸泡过夜，泡酸前用自来水冲洗干净，烘干。 泡酸、清洗：烘干后泡入酸液，12小时后从酸缸内捞出器
皿立即用自来水冲洗10次（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃 上难以清洗），过蒸馏水3次。 烘干、包装 高压灭菌 烘干备用
金属器皿
金属器皿不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂 刷洗，后用自来水冲干净，然后用75％酒 精擦拭，再用自来水，然后用蒸馏水冲洗 ，再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包 装好，高压灭菌，再烘干备用。
概念：原代与传代
原代培养 取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长 的细胞在传代之前称为原代培养。
传代： 细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分 开接种到新的培养器皿中。
培养细胞的生长方式
贴壁生长： 必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实
体组织来源细胞、上皮细胞。 悬浮生长：
于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物 表面。见于各种造血系统肿瘤细胞。
小时以除去脏物、铅、砷等物。 刷洗、烘干：泡盐酸12小时后立即用自来水冲洗，再用洗
涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。 泡酸、清洗：用酸液浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿
用自来水冲洗10次，最后蒸馏水冲洗3-5次。 烘干、包装：移液管和滴管的尾端
要塞入棉花。 高压灭菌 烘干备用
使用后的玻璃器皿的清洗灭菌
液氮罐
培养瓶、培养皿
实验器材的清洗和灭菌
清洗的重要性
1. 除化学污染：盐、油污、蛋白质、重金属等 2. 使培养瓶内表面带负电荷，供细胞附着。
不要让污染了的器皿变干！！
灭菌的重要性
除去微生物污染
酸液配方
新的玻璃器皿的清洗灭菌
自来水刷洗，除去灰尘。 烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12
细胞培养的应用
细胞培养的优点
1.活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构 、生命活动 2.可控制：可选择特定的研究细胞种类、性质、阶段 可控制调节条件：物理、化学、生物等因素 可采用各种研究技术、记录方法： 倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细 胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位 素标记等。
关于细胞培养基本 技术全面知识普及
内容
细胞培养的理论背景
设备与器材准备、溶液配制 无菌技术 原代培养 传代培养 细胞计数与生长曲线 冻存、复苏与运送 常见问题及对策
细胞培养的概念
20世纪初才创立的一种研究动物细胞行为 的方法。
细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体 内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度 和一定营养条件下，使其生长繁殖，并维 持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的应用
1. 药物研究与开发 (1) 新药筛选 (2) 疫苗研究与开发 (3) 基因工程药物研究与开发 (4) 细胞工程药物研究与开发 2. 基础研究 (1) 药物作用机理 (2) 基因功能 (3) 疾病发生机理 3. 生物制药 (1) 疫苗生产 (2) 基因工程药物生产 (3) 诊断用和药用单克隆抗体生产 (4) 细胞工程药物生产
3. 样品均一性：来源于同一组织同一种细胞。 4.经济、规模和机械化
细胞培养的局限性
人工模拟体内环境的技术已经很高, 但人工 所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相 同。缺乏体内的系统作用、失去神经体液 的调节和细胞相互间的影响。 当细胞被置于体外培养后, 生活在缺乏动态 平衡的环境中，必然发生变化。
贴壁细胞
贴壁细胞
贴壁细胞
贴壁细胞
悬浮细胞
细胞培养的环境
1、无污染环境：化学污染、微生物污染 2、温度环境：37℃。偏离这一温度范围，细胞的正
常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温 的耐受力较对高温强， 3、气体环境： 95%空气加5%二氧化碳 4、酸度环境：大多数细胞的适宜PH 为7.2-7.4，细 胞耐酸性比耐碱性大一些。 5、 细胞培养基：合成培养基、天然培养基。
优点：营养成分丰富，培养效果好
缺点：来源受限。
成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结基
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，
用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如 TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物
橡胶和塑料
刷洗、烘干：使用后立即用清水刷洗干净 自来水浸泡过夜，泡酸前用自来水冲洗干净烘干
。 泡入5％盐酸过夜。 自来水冲洗10次，过蒸馏水3次 烘干 高压蒸汽灭菌 烘干备用
滴管胶头可用75％酒精浸泡5分钟，紫外线照射消 毒。
水、溶液、培养基
水：超纯水。 至少为三蒸水或去离子水。
、无机盐和其它一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定。
成本低
缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需
要。
人工合成培养基只能维持细胞生存，
要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量 的天然培养基（如血清）。
血清中含有：
①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子 ； ③激素；