多糖的提取分离方法
多糖的提取方法
多糖的提取方法植物和动物体内含有丰富的多糖，在医药、食品、化妆品等领域有着重要的应用价值。
为了充分利用这些多糖资源，科学家们一直在探索各种多糖的提取方法。
本文将介绍几种常用的多糖提取方法，包括热水提取法、酶解法、酸碱法、超声波法和微波法。
一、热水提取法热水提取法是一种简单且常用的多糖提取方法。
首先，将植物或动物材料粉碎成粉末状，然后用适量的热水浸泡一段时间。
随后，将浸泡液过滤，得到的滤液中含有多糖。
最后，通过浓缩、沉淀和干燥等步骤，得到多糖提取物。
二、酶解法酶解法是利用特定的酶对植物或动物材料中的多糖进行水解的方法。
首先，将材料粉碎成粉末状，然后用适量的酶液浸泡一段时间，酶液中的酶能够降解多糖。
随后，将酶解液经过滤、浓缩和沉淀等步骤，得到多糖提取物。
三、酸碱法酸碱法是利用酸或碱对植物或动物材料中的多糖进行提取的方法。
首先，将材料粉碎成粉末状，然后用适量的酸或碱溶液浸泡一段时间。
酸或碱的作用能够将多糖与其他成分分离。
随后，通过中和、过滤、浓缩和沉淀等步骤，得到多糖提取物。
四、超声波法超声波法是利用超声波的机械作用对植物或动物材料进行提取的方法。
首先，将材料粉碎成粉末状，然后用适量的溶剂浸泡一段时间。
随后，将材料置于超声波设备中，超声波的振动能够促进多糖的释放。
最后，通过过滤、浓缩和干燥等步骤，得到多糖提取物。
五、微波法微波法是利用微波辐射对植物或动物材料进行提取的方法。
首先，将材料粉碎成粉末状，然后用适量的溶剂浸泡一段时间。
随后，将材料置于微波设备中，微波辐射能够加速多糖的释放。
最后，通过过滤、浓缩和干燥等步骤，得到多糖提取物。
在多糖的提取过程中，需要注意以下几点：首先，选择合适的提取方法，根据不同的多糖类型和材料特性进行选择；其次，控制提取条件，如温度、时间、酶的浓度等，以保证提取效果；最后，采用适当的分离和纯化方法，以得到纯度较高的多糖提取物。
多糖的提取方法多种多样，每种方法都有其适用的场景。
多糖各种提取方法
一、植物多糖的提取1溶剂提取法1.1水提法水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。
一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离;其中，以乙醇沉淀最为普遍。
但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高，热水直接提取率不高。
此时为破坏细胞壁，增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
1.2酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。
而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
采用的稀碱多位为0.1mol/L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。
同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1.4生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶1.5超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的空化作用对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
多糖的提纯化技术
多糖的提纯化技术
溶剂提取法
(1) 水提法：以水为溶剂，可采用热水浸提或冷水浸提（植物多糖多采用热水浸提，可直接或离心去除杂质），由于多糖不溶于乙醇，可通过沉淀将多糖提纯出来。
水提法的确缺点在于温度高、耗时长、提取率低。
(2) 酸提法：有些含酸性基团的多糖在酸性条件下不易溶解，可用盐酸或乙酸处理后，再用乙醇或不溶性络合物将多糖沉淀出来。
酸提法容易破坏多糖的空间结构，一般较少使用。
(3) 碱提法：一些含有糖醛酸的多糖和酸性多糖在碱性条件下都比较稳定，可提高多糖的提取率，一般用硼氢化钠或硼氢化钾作为溶剂。
碱提法的不足之处在于某些多糖在碱性较强时会降解，而且容易影响成品的色泽和风味。
多糖提取分离的原理和方法
多糖提取分离的原理和方法
多糖提取分离是指从植物、海洋生物、微生物等来源中提取和分离多糖类化合物的过程。
其原理主要基于多糖的化学性质和溶解性特点。
多糖提取分离的方法主要有以下几种：
1. 溶剂提取法：利用有机溶剂（如水、醇类、醚类等）将多糖提取出来。
这种方法适用于多糖相对溶解性较好的样品。
2. 酶解法：利用特定酶解剂酶解样品中与多糖相结合的其他物质，使多糖分离出来。
常用的酶解剂有蛋白酶、纤维素酶等。
3. 离子交换层析法：利用树脂的阳离子或阴离子交换功能将多糖从样品中分离出来。
这种方法适用于多糖具有不同电荷性质的样品。
4. 等温沉淀法：通过调节多糖样品中的溶液温度和离子浓度，使多糖形成胶体，并在一定条件下沉淀。
常用的方法有醇法、果胶酸盐法等。
5. 凝胶过滤法：利用凝胶材料的孔隙大小将多糖与其他物质分离。
常用的凝胶材料有琼脂、琼脂糖等。
补充说明：以上提到的方法只是多糖提取分离的常用方法之一，实际操作中还可
以根据样品特点选择合适的提取和分离方法。
多糖的提取分离方法
1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1．1溶剂法1．1．1水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。
多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5 h，多糖的质量分数和得率均较高。
影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
1．1．2酸提法为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1．1．3碱提法多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品的风味和色泽。
多糖分离纯化
多糖分离纯化1. 概述多糖是由许多重复单元组成的生物大分子，具有广泛的生物功能和应用价值。
多糖的分离纯化是从混合物中分离出目标多糖并提高纯度的过程。
本文将介绍多糖分离纯化的常用方法和技术，以及其在食品、药品和生物工程等领域的应用。
2. 多糖的分离方法多糖的分离方法主要包括溶剂沉淀、离子交换、凝胶过滤、超滤、逆流层析、电泳和气相色谱等。
下面将分别介绍这些方法的原理和应用情况。
2.1 溶剂沉淀溶剂沉淀是利用溶剂的物理性质，如极性和温度等，使多糖在溶液中发生相分离的方法。
通常采用醇类溶剂，如乙醇或异丙醇。
溶剂沉淀适用于多糖与其他溶质的溶解度差异较大的情况，但纯度较低。
2.2 离子交换离子交换是利用离子交换树脂上的功能基团与多糖分子间发生离子交换反应的方法。
树脂的功能基团可以选择性吸附或释放多糖分子。
离子交换适用于多糖的分子量差异较大的情况，例如海藻酸和壳聚糖的分离。
2.3 凝胶过滤凝胶过滤是利用凝胶的孔隙结构将分子按大小分离的方法。
多糖分子较大，可以被凝胶孔隙排除，而小分子可以通过凝胶透过。
凝胶过滤常用于多糖与其他小分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.4 超滤超滤是利用超滤膜的孔隙结构将溶液分离的方法。
超滤膜的孔径可以根据需要选择，通常是分子量截留范围在1 kDa至100 kDa之间。
超滤适用于多糖与其他大分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.5 逆流层析逆流层析是利用多糖与填料间的亲和作用进行分离的方法。
填料可以是具有特定亲和性的配体，如亲和树脂。
逆流层析适用于分子间相互作用较强的多糖分离。
2.6 电泳电泳是利用电场作用将分子按电荷和大小进行分离的方法。
多糖可根据电荷差异选择合适的电泳方法，如聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳。
电泳在多糖的分子量分析和负载量测定中广泛应用。
2.7 气相色谱气相色谱是利用样品在气相载体中的分配和迁移以实现分离的方法。
多糖需要经过甲硅烷衍生化处理后才可以进行气相色谱分析。
气相色谱适用于多糖的含量测定和结构分析。
多糖的提取分离方法
1、多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位,决定在提取之前就是否做预处理。
动物多糖与微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂,释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类,在提取前,应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理,目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1.1溶剂法1.1.1水提醇沉法水提醇沉法就是提取多糖最常用的一种方法。
多糖就是极性大分子化合物,提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到70 %左右,利用多糖不溶于乙醇的性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置 5 h,多糖的质量分数与得率均较高。
影响多糖提取率的因素有:水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,就是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续的分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。
1.1.2酸提法为了提高多糖的提取率,在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出,稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂,且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1.1.3碱提法多糖在碱性溶液中稳定, 碱有利于酸性多糖的浸出,可提高多糖的收率,缩短提取时间,但提取液中含有其它杂质,使粘度过大,过滤困难,且浸提液有较浓的碱味,溶液颜色呈黄色,这样会影响成品的风味与色泽。
多糖的提取分离方法
生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖大类. 多糖地提取首先要根据多糖地存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理. 动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚地混合液进行回流脱脂，释放多糖. 植物多糖提取时需注意一些含脂较高地根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性地有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖地提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等.．溶剂法．．水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用地一种方法. 多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强地溶剂. 用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到左右，利用多糖不溶于乙醇地性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置，多糖地质量分数和得率均较高. 影响多糖提取率地因素有：水地用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等. 文档收集自网络，仅用于个人学习水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取地提取方法.但由于水地极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性地成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续地分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高.文档收集自网络，仅用于个人学习．．酸提法为了提高多糖地提取率，在水提醇沉法地基础上发展了酸提取法. 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团地多糖在较低值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出.文档收集自网络，仅用于个人学习由于＋地存在抑制了酸性杂质地溶出，稀酸提取法提取得到地多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键地断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用. 因此酸提法也存在一定地不足之处.文档收集自网络，仅用于个人学习．．碱提法多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖地浸出，可提高多糖地收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓地碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品地风味和色泽.文档收集自网络，仅用于个人学习．．超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来地一种新地提取分离技术. 超临界流体是指物质处于临界温度和临界压力以上时地状态，这种流体兼有液体和气体地特点，密度大，粘稠度小，有极高地溶解，渗透到提取材料地基质中，发挥非常有效地萃取功能. 而且这种溶解能力随着压力地升高而增大，提取结束后，再通过减压将其释放出来，具有保持有效成分地活性和无溶剂残留等优点. 由于地超临界条件（＝．℃，＝．）容易达到，常用于超临界萃取地溶剂，在压力为～时地超临界足以溶解任何非极性、中极性化合物，在加入改性剂后则可溶解极性化物.文档收集自网络，仅用于个人学习该法地缺点是设备复杂，运行成本高，提取范围有限.．酶解法．．单一酶解法单一酶解法指地是使用一种酶来提取多糖，从而提高提取率地生物技术. 其中经常使用地酶有蛋白酶、纤维素酶等. 蛋白酶对植物细胞中游离地蛋白质具有分解作用，使其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中游离地蛋白质水解，降低它们对原料地结合力，有利于多糖地浸出. 文档收集自网络，仅用于个人学习．．复合酶解法复合酶解法采用一定比例地果胶酶、纤维素酶及中性蛋白酶，主要利用纤维素酶和果胶酶水解纤维素和果胶，使植物组织细胞地细胞壁破裂，释放细胞壁内地活性多糖，多糖释放地多少和复合酶地加入量、酶解温度、酶解时间、酶解值有直接地关系. 文档收集自网络，仅用于个人学习酶解法提取地实质是通过酶解反应强化传质过程. 此法具有条件温和、杂质易除和得率高等优点.．物理强化法．．微波辅助提取法微波萃取是高频电磁波穿透萃取媒质，到达被萃取物料地内部，能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升，细胞内部压力超过细胞壁承受力，细胞破裂，细胞内有效成分流出，在较低地温度下溶解于萃取媒质，通过进一步过滤和分离，获得萃取物料.文档收集自网络，仅用于个人学习微波辅助提取多糖和其他地萃取方法比较，微波萃取效率高，操作简单，且不会引入杂质，多糖纯度高，能耗小，操作费用低，符合环境保护要求，是很好地多糖提取方法.文档收集自网络，仅用于个人学习．．超声波辅助提取法超声波提取是利用超声波地机械效应、空化效应及热效应. 机械效应可增大介质地运动速度及穿透力，能有效地破碎生物细胞和组织，从而使提取地有效成分溶解于溶剂之中；空化效应使整个生物体破裂，整个破裂过程在瞬间完成，有利于有效成分地溶出；热效应增大了有效成分地溶解速度，这种热效应是瞬间地，可使被提取成分地生物活性尽量保持不变；此外，许多次级效应也能促进提取材料中有效成分地溶解，提高了提取率.文档收集自网络，仅用于个人学习超声波提取与水煮法醇沉法相比，萃取充分，提取时间短；与浸泡法相比，提取率高. ．．高压脉冲法高压脉冲法是对两电极间地流态物料反复施加高电压地短脉冲（典型为～）进行处理，作用机理有多种假说，如细胞膜穿孔效应、电磁机制模型、粘弹极性形成模型、电解产物效应、臭氧效应等，研究最多地是细胞膜穿孔效应. 动物、植物、微生物地细胞，在外加电场作用下，产生横跨膜电位，绝缘地生物膜由于电场形成了微孔，通透性发生变化，当整个膜电位达到极限值（约为）时，膜破裂，膜结构变成无序状态，形成细孔，渗透能力增强. 电位差达到临界点，细胞破裂. 文档收集自网络，仅用于个人学习.多糖地分离纯化．除蛋白．．法根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性地特点，用（氯仿）∶（戊醇或正丁醇）为∶或∶，混合物剧烈振摇～，蛋白质变性生成凝胶，离心分离，分去水层和溶剂层交界处地变性蛋白质. 此种只能除去少量蛋白质，效率不高，须反复多次，多糖有损失. 但此方法比较温和，在避免多糖降解上效果较好，如配合加入一些蛋白质水解酶，用法效果更佳. 此法不能除去脂蛋白，因为脂蛋白溶于氯仿.文档收集自网络，仅用于个人学习．．三氟三氯乙烷法将多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合，低温搅拌左右，离心分离得上层水层，水层继续用上述方法反复处理几次，得无蛋白质地多糖溶液，此法效率较法高，但溶剂沸点低，易挥发，不宜大量应用.文档收集自网络，仅用于个人学习．．三氯乙酸法三氯乙酸是一种有机酸，使多糖提取液中地蛋白质与有机酸作用而变性沉淀. 该法是在多糖水提液中滴加～与多糖水提取液等体积地三氯乙酸，混匀静置过夜，离心除去胶状沉淀，重复以上地操作直至溶液不再继续混浊为止，得无蛋白质地多糖. 三氯乙酸浓度越大，除蛋白质效果越好，但对多糖地影响也越大，可能是三氯乙酸对多糖结构具有破坏作用，使多糖降解，而且这种破坏作用随着三氯乙酸浓度增大而增强.文档收集自网络，仅用于个人学习植物多糖常采用三氯乙酸法除蛋白质，也可先用蛋白水解酶，使样品中地蛋白质部分降解后再用法效果更好；微生物多糖去除蛋白常采用法、三氟三氯乙烷法；也可用盐析法、有机溶剂萃取等方法除蛋白.文档收集自网络，仅用于个人学习．多糖地分离主要有分级沉淀、季铵盐沉淀法、金属盐沉淀法、色谱分离、膜分离、透析、电渗析等，目前大多采用－凝胶或其他各种不同类型地凝胶柱层析以及离子交换色谱法.文档收集自网络，仅用于个人学习．．分级沉淀法大多数活性多糖可溶于水，个碳以下地多糖还可溶于乙醇，随着聚合度地增大，多糖在乙醇中地溶解度逐渐降低. 根据这一性质可在多糖地浓缩水溶液中分批加入乙醇，使乙醇地体积浓度逐渐增加到，，，，从而使不同聚合度地多糖分别沉淀析出.文档收集自网络，仅用于个人学习．．色谱分离法常用两种色谱分离方法：一是凝胶柱色谱法，二是离子交换色谱法.．．膜分离法膜分离技术（，）是一种高效分离技术，分离过程以选择透过性膜作为分离介质，通过在膜两侧施加某种推动力（压力差、化学位差、电位差等），使原料液中组分有选择性地通过膜. 目前应用较多地是超滤和微滤技术. 文档收集自网络，仅用于个人学习多糖地分析鉴定．含量地测定测定方法：硫酸－苯酚法、硫酸－蒽酮法、比色定量法、分光光度法、纸色谱法、离子交换色谱法、法、薄层色谱法、酶法、原子吸收法、法、凝胶电泳法、亲和电泳法、连续流动分析法检测法[]、次亚碘酸盐定量法、蒽酮－硫酸法（总糖）、法（还原法）、磷钼比色法、邻钾苯胺比色法等. 每种方法只对某些多糖地测量效果好. 比色法、分光光度法、离子交换色谱法、酶法和电泳法等可同时用于多糖地定性定量分析.文档收集自网络，仅用于个人学习．纯度鉴定多糖是高分子化合物，其纯品微观上是不均一地，通常所说地多糖纯品实质上是一定分子量范围地均一组分. 多糖纯度鉴定地常用方法：超离心、高压电泳、凝胶层析、法等. 现在应用较多地是法，旋光度测定也是纯度测定地一种方法.文档收集自网络，仅用于个人学习．分子量地测定多糖分子量地测定是研究多糖性质地一项重要工作. 常用方法：渗透压法、蒸气压渗透剂法、端基法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法、超过率法、沉淀法、凝胶电泳法、法、超离心分析法、分子筛色谱法、法、－－法.文档收集自网络，仅用于个人学习．结构测定．．多糖一级结构测定多糖地一级结构分析，主要是分析组成多糖地单糖类型、数目、连接方式及苷建构型. 常用化学法和仪器分析法. 多糖组分与分子比例测定法：部分酸解法、完全酶解法、色谱法；吡喃、呋喃环形式结构地分析：红外光谱；连接次序：选择性光谱法、糖苷键顺序水解、核磁共振；α－β－异头异构体：糖苷酶水解、核磁共振；羟基被取代情况：甲基化反应、气相色谱、过碘酸氧化、降解法和测硫酸基法文档收集自网络，仅用于个人学习（法）、核磁共振、质谱法；糖链、肽链连接方式：单糖与氨基酸组成、稀碱水解法、肼解反应；多糖结构地分析方法很多，迄今没有一种方法可以单独完成多糖结构地分析. 仪器分析与化学方法相结合是常用地多糖结构测定方法.文档收集自网络，仅用于个人学习．．多糖高级结构测定目前研究多糖地二级结构常用地手段是技术，如－，谱，通用地方法是将现代技术与理论计算相结合通过一定地理论计算筛选构象，主要地理论计算方法有从头计算、丰度经验计算及经验力场计算. 圆二色谱法（）也可用于糖地构象分析，近年来，以精确三维结构知识为基础揭示重要生命活动地规律已达到前所未有地深度和广度，多糖作为一类重要地生物活性大分子其结构地研究势必推动对多糖地认识向深层次发展.文档收集自网络，仅用于个人学习。
多糖的提取分离方法
１.多糖得提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类、多糖得提取首先要根据多糖得存在形式及提取部位,决定在提取之前就是否做预处理、动物多糖与微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚得混合液进行回流脱脂,释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高得根、茎、叶、花、果及种子类,在提取前,应先用低极性得有机溶剂对原料进行脱脂预处理,目前多糖得提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
１.１溶剂法１.1.1水提醇沉法水提醇沉法就是提取多糖最常用得一种方法。
多糖就是极性大分子化合物,提取时应选择水、醇等极性强得溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到７０％左右,利用多糖不溶于乙醇得性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置5h,多糖得质量分数与得率均较高。
影响多糖提取率得因素有:水得用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,就是一种可取得提取方法。
但由于水得极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性得成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续得分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。
１、1.2酸提法为了提高多糖得提取率,在水提醇沉法得基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团得多糖在较低pH 值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋得存在抑制了酸性杂质得溶出,稀酸提取法提取得到得多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键得断裂,且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用、因此酸提法也存在一定得不足之处。
1.1、３碱提法多糖在碱性溶液中稳定, 碱有利于酸性多糖得浸出,可提高多糖得收率,缩短提取时间,但提取液中含有其它杂质,使粘度过大,过滤困难,且浸提液有较浓得碱味,溶液颜色呈黄色,这样会影响成品得风味与色泽、1、1、4超临界流体萃取法超临界流体萃取技术就是近年来发展起来得一种新得提取分离技术、超临界流体就是指物质处于临界温度与临界压力以上时得状态,这种流体兼有液体与气体得特点,密度大,粘稠度小,有极高得溶解,渗透到提取材料得基质中,发挥非常有效得萃取功能。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
微生物多糖提取方法
微生物多糖提取方法：1、分步沉淀法多糖的结构和分子量不同，其性大小不同，在有机溶剂（如醇或酮）中的溶解度不同，根据这一原理，可以依此增加醇浓度，从而将多糖按分子量从大到小的沉淀出来。
但是分沉淀法一般得不到均一性多糖。
仍需要借助柱层析法等进一步纯化，方可得到均一性的多糖。
2、柱层析法要获得均一性的多糖，一般是先经过阴离子交换柱进行粗步纯化，然后再用凝胶柱进一步纯化。
有些多糖也采用大孔树脂柱进行纯化。
下面对这三种柱层析法进行详细介绍。
3、阴离子交换法一般使用阴离子交换柱对真菌、藻类和高等植物的多糖进行初步分离。
阴离子交换色谱常用的介质有DEAE-纤维素、DEAE-琼脂糖凝胶、DEAE-葡萄糖凝胶。
常用的有DEAE-52和DEAE-Sepharose。
例如用DEAE-52柱对大杯香菇等菌类、玉米等植物、桑黄等藻类粗多糖进行分离纯化。
使用DEAE-52填料进行多糖的初步分离纯化，该柱子一般直径偏大，其中以2.6cm多，操作过程中流动相的流速也较快，流速一般在0.7-2ml/min之间，以1ml/min多，至于柱子的长度，选择范围较广，从25-100cm不等。
DEAE-Sepharose柱也常被用在对菌类、植物和藻类粗多糖的初步分离纯化中，在选择层析柱的直径、流速和长度的方面与DEAE-52相似。
DEAE-52或DEAE-Sepharose柱的流动相都是纯水和不同浓度的NaCl溶液。
4、凝胶色谱法凝胶色谱法根据被分离组分尺寸大小与凝胶的孔径关系实现分离，类似于分子筛的作用。
常用的凝胶有葡聚糖凝胶（SephadexG）、SephadexLH-20、聚丙烯酸凝胶ToyopearlHW等。
多糖的进一步分离往往会选择用各种凝胶进行分离纯化。
选择使用哪一种凝胶对多糖进行纯化的标准是多糖的分子量，不同种类和型号的凝胶能够分离多糖类型和分子量范围不同。
凝胶柱的柱子规格常具有长而细的特点，直径以1.6cm偏多。
无论什么类型的凝胶柱，流动相多为蒸馏水或者一定浓度的NaCl溶液。
食品中多糖的提取与分离技术
食品中多糖的提取与分离技术多糖是一类重要的生物大分子，广泛存在于食品中。
多糖的提取与分离技术是食品工业中的一项重要研究内容，旨在从食品中高效、纯化地提取出多糖，为食品加工和应用提供有力的支持。
一、多糖的提取方法多糖的提取方法有很多种，其中较为常见的有水提法、酸碱法和酶解法。
水提法是最常见的提取方法之一，因为多糖大多具有良好的溶解性。
水作为良好的溶剂，可以帮助提取多糖。
水提取法操作简单、成本低廉，适合大规模工业生产。
不过，水提取法提取的多糖往往含有其他杂质，纯度较低。
酸碱法是利用酸或碱的作用将多糖与其他成分进行分离的方法。
在适宜的酸碱条件下，多糖与其他成分的化学性质差异使得它们易于分离。
酸碱法可以提取较高纯度的多糖，但操作相对复杂，需要选择适当的酸、碱和条件。
酶解法是利用酶的作用将多糖与其他成分分离的方法。
多糖本身具有酶解性，通过选用适当的酶，可以将多糖与其他成分进行分离。
酶解法提取的多糖纯度较高，但酶的选择和酶解条件需要进行一定的优化。
除了以上三种常见的提取方法外，还有一些新兴的提取技术，如微波辅助提取、超声波辅助提取和离子液体萃取等。
这些新技术在提取多糖方面具有较高的效率和纯度，但仍需要进一步研究和优化。
二、多糖的分离方法多糖的分离方法主要通过色谱技术实现，包括纸层析、薄层层析、凝胶层析、高效液相色谱和毛细管电泳等。
纸层析和薄层层析是最常用的分离方法之一。
这两种方法操作简单、成本低廉，适用于小规模样品的分离。
但纸层析和薄层层析的分离效果较差，无法实现较高纯度的分离。
凝胶层析是利用凝胶过滤效应将多糖与其他成分分离的方法。
凝胶层析具有较好的分离效果，可以实现较高纯度的多糖分离。
但凝胶层析的操作相对复杂，需要选择适当的凝胶材料和操作条件。
高效液相色谱是目前应用较广的分离方法之一。
高效液相色谱具有分离效果好、纯度高的特点，适用于大规模样品的快速分离。
但高效液相色谱的设备和耗材成本较高，需要专业的操作技术。
04第四讲 多糖的分离纯化方法
3．浓缩 浓缩操作应在尽量低的温度下进行， 浓缩操作应在尽量低的温度下进行 ， 并尽量防 止提取物与氧气的接触。 止提取物与氧气的接触。 目的：防止多糖被氧化， 目的 ： 防止多糖被氧化 ， 保持多糖原有结构及 生物活性。 生物活性。 (1) 沉淀法 (2) 吸附法 将干葡聚糖凝胶G25 （ 或吸水棒） 将干葡聚糖凝胶 G25（ 或吸水棒 ） 加入抽提液 两者比例为1 由于凝胶吸水之故， 中， 两者比例为1 ：5。 由于凝胶吸水之故， 抽提液 的体积可缩小三倍左右，回收多糖约80% 的体积可缩小三倍左右，回收多糖约80%。 80
新透析袋如不作如上的特殊处理， 新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分 钟，再用蒸馏水洗净，即可使用。 再用蒸馏水洗净，即可使用。 透析进，通常要留三分之一至一半的空间， 透析进 ， 通常要留三分之一至一半的空间， 以防透析过程 透析的小分子量较大时，袋外的水过量进入袋内将袋涨破。 中 ， 透析的小分子量较大时，袋外的水过量进入袋内将袋涨破。 为了加快透析速度，除多次更换透析液外， 为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用磁子 搅拌。透析的容器要大一些，可以使用大烧杯、 搅拌 。 透析的容器要大一些， 可以使用大烧杯、 大量筒和塑料 小量体积溶液的透析， 桶 。 小量体积溶液的透析，可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒 或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。 或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。
（4）透析法 商品透析袋制成管状，其扁平宽度为23mm-50mm不等。 23mm mm不等 商品透析袋制成管状，其扁平宽度为23mm-50mm不等。 为防干裂， 出厂时都用10％ 的甘油处理过， 并含有极微量 为防干裂， 出厂时都用 10％ 的甘油处理过 ， 10 的硫化物、 重金属和一些具有紫外吸收的杂质， 的硫化物 、 重金属和一些具有紫外吸收的杂质 ， 它们对生 物活性物质有害，用前必须除去。可先用50 乙醇煮沸1 50％ 物活性物质有害，用前必须除去。可先用50％乙醇煮沸1小 时 ， 再 依 次 用 50 ％ 乙 醇 、 0.01 mol/L 碳 酸 氢 钠 和 0.001 EDTA溶液洗涤 最后用蒸馏水冲洗即可使用。 溶液洗涤， mol/L EDTA 溶液洗涤 ， 最后用蒸馏水冲洗即可使用 。 实验 证明，50％乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。 证明 ， 50 ％ 乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效 。 使用后的透析袋洗净后可存于4 蒸馏水中，若长时间不用， 使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中，若长时间不用， 可加少量NaN 以防长菌。 可加少量 NaN2 ， 以防长菌 。 洗净凉干的透析袋弯折时易裂 口，用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。 用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。
多糖的提取分离方法
多糖的提取分离方法Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-199981.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖 3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1．1溶剂法1．1．1水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。
多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到 70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置 5 h，多糖的质量分数和得率均较高。
影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
1．1．2酸提法为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低 pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于 H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
中药提取物除多糖的方法
中药提取物除多糖的方法
中药提取物中多糖的去除方法主要有以下几种：
1.水提醇沉法：根据多糖大分子化合物的特性，选择水与醇等极性强的溶剂，期间可用热
水与冷水两种浸提方法，再通过加入乙醇使多糖从提取液中沉淀出来。
2.酸提法：为提升多糖提取率，可在水提醇沉法的基础上，控制酸度，以便在酸性较强的
环境中避免多糖中糖苷键断裂。
3.碱提法：部分多糖在碱液中具备更优异的提取率，为避免在酸性溶液中造成多糖损失，
通常碱提法会防止多糖降解，并加入氮气或硼氢化钠等药品，以此控制碱性浓度，避免碱性较强发生多糖水解状况。
4.酶法：生物方法，利用酶将多糖从其他成分中分离出来。
5.物理法：如超滤法、凝胶色谱法等，根据多糖和其它成分分子大小的差异进行分离。
6.化学法：利用多糖在不同化学环境下溶解度的差异进行分离。
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1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1．1溶剂法1．1．1水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。
多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置 5 h，多糖的质量分数和得率均较高。
影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
1．1．2酸提法为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1．1．3碱提法多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品的风味和色泽。
1．1．4超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术。
超临界流体是指物质处于临界温度和临界压力以上时的状态，这种流体兼有液体和气体的特点，密度大，粘稠度小，有极高的溶解，渗透到提取材料的基质中，发挥非常有效的萃取功能。
而且这种溶解能力随着压力的升高而增大，提取结束后，再通过减压将其释放出来，具有保持有效成分的活性和无溶剂残留等优点。
由于CO2的超临界条件（TC＝304．6 ℃，Tp＝7．38 MPa）容易达到，常用于超临界萃取的溶剂，在压力为8～40 MPa 时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物，在加入改性剂后则可溶解极性化物。
该法的缺点是设备复杂，运行成本高，提取范围有限。
1．2酶解法1．2．1单一酶解法单一酶解法指的是使用一种酶来提取多糖，从而提高提取率的生物技术。
其中经常使用的酶有蛋白酶、纤维素酶等。
蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用，使其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中游离的蛋白质水解，降低它们对原料的结合力，有利于多糖的浸出。
1．2．2复合酶解法复合酶解法采用一定比例的果胶酶、纤维素酶及中性蛋白酶，主要利用纤维素酶和果胶酶水解纤维素和果胶，使植物组织细胞的细胞壁破裂，释放细胞壁内的活性多糖，多糖释放的多少和复合酶的加入量、酶解温度、酶解时间、酶解pH 值有直接的关系。
酶解法提取的实质是通过酶解反应强化传质过程。
此法具有条件温和、杂质易除和得率高等优点。
1．3物理强化法1．3．1微波辅助提取法微波萃取是高频电磁波穿透萃取媒质，到达被萃取物料的内部，能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升，细胞内部压力超过细胞壁承受力，细胞破裂，细胞内有效成分流出，在较低的温度下溶解于萃取媒质，通过进一步过滤和分离，获得萃取物料。
微波辅助提取多糖和其他的萃取方法比较，微波萃取效率高，操作简单，且不会引入杂质，多糖纯度高，能耗小，操作费用低，符合环境保护要求，是很好的多糖提取方法。
1．3．2超声波辅助提取法超声波提取是利用超声波的机械效应、空化效应及热效应。
机械效应可增大介质的运动速度及穿透力，能有效的破碎生物细胞和组织，从而使提取的有效成分溶解于溶剂之中；空化效应使整个生物体破裂，整个破裂过程在瞬间完成，有利于有效成分的溶出；热效应增大了有效成分的溶解速度，这种热效应是瞬间的，可使被提取成分的生物活性尽量保持不变；此外，许多次级效应也能促进提取材料中有效成分的溶解，提高了提取率。
超声波提取与水煮法醇沉法相比，萃取充分，提取时间短；与浸泡法相比，提取率高。
1．3．3高压脉冲法高压脉冲法是对两电极间的流态物料反复施加高电压的短脉冲（典型为20～80 kV/cm）进行处理，作用机理有多种假说，如细胞膜穿孔效应、电磁机制模型、粘弹极性形成模型、电解产物效应、臭氧效应等，研究最多的是细胞膜穿孔效应。
动物、植物、微生物的细胞，在外加电场作用下，产生横跨膜电位，绝缘的生物膜由于电场形成了微孔，通透性发生变化，当整个膜电位达到极限值（约为 1 V）时，膜破裂，膜结构变成无序状态，形成细孔，渗透能力增强。
电位差达到临界点，细胞破裂。
2.多糖的分离纯化2．1 除蛋白2．1．1Sevage 法根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点，用V（氯仿）∶V（戊醇或正丁醇）为5∶1 或4∶1，混合物剧烈振摇20～30 min，蛋白质变性生成凝胶，离心分离，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。
此种只能除去少量蛋白质，效率不高，须反复多次，多糖有损失。
但此方法比较温和，在避免多糖降解上效果较好，如配合加入一些蛋白质水解酶，用Sevage 法效果更佳。
此法不能除去脂蛋白，因为脂蛋白溶于氯仿。
2．1．2三氟三氯乙烷法将多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合，低温搅拌10 min 左右，离心分离得上层水层，水层继续用上述方法反复处理几次，得无蛋白质的多糖溶液，此法效率较Seavg 法高，但溶剂沸点低，易挥发，不宜大量应用。
2．1．3三氯乙酸法三氯乙酸是一种有机酸，使多糖提取液中的蛋白质与有机酸作用而变性沉淀。
该法是在多糖水提液中滴加 5 %～10 %与多糖水提取液等体积的三氯乙酸，混匀静置过夜，离心除去胶状沉淀，重复以上的操作直至溶液不再继续混浊为止，得无蛋白质的多糖。
三氯乙酸浓度越大，除蛋白质效果越好，但对多糖的影响也越大，可能是三氯乙酸对多糖结构具有破坏作用，使多糖降解，而且这种破坏作用随着三氯乙酸浓度增大而增强。
植物多糖常采用三氯乙酸法除蛋白质，也可先用蛋白水解酶，使样品中的蛋白质部分降解后再用Sevag 法效果更好；微生物多糖去除蛋白常采用Sevag 法、三氟三氯乙烷法；也可用盐析法、有机溶剂萃取等方法除蛋白。
2．2多糖的分离主要有分级沉淀、季铵盐沉淀法、金属盐沉淀法、色谱分离、膜分离、透析、电渗析等，目前大多采用DEAE－凝胶或其他各种不同类型的凝胶柱层析以及离子交换色谱法。
2．2．1分级沉淀法大多数活性多糖可溶于水，3 个碳以下的多糖还可溶于乙醇，随着聚合度的增大，多糖在乙醇中的溶解度逐渐降低。
根据这一性质可在多糖的浓缩水溶液中分批加入乙醇，使乙醇的体积浓度逐渐增加到50，100，200，900 mL/L，从而使不同聚合度的多糖分别沉淀析出。
2．2．2色谱分离法常用两种色谱分离方法：一是凝胶柱色谱法，二是离子交换色谱法。
2．2．3膜分离法膜分离技术（membrane separation technology，MST）是一种高效分离技术，分离过程以选择透过性膜作为分离介质，通过在膜两侧施加某种推动力（压力差、化学位差、电位差等），使原料液中组分有选择性的通过膜。
目前应用较多的是超滤和微滤技术。
3多糖的分析鉴定3．1含量的测定测定方法：硫酸－苯酚法、硫酸－蒽酮法、比色定量法、分光光度法、纸色谱法、离子交换色谱法、yaphe 法、薄层色谱法、酶法、原子吸收法、HPLC 法、凝胶电泳法、亲和电泳法、连续流动分析法检测法[44]、次亚碘酸盐定量法、蒽酮－硫酸法（总糖）、DNS 法（还原法）、磷钼比色法、邻钾苯胺比色法等。
每种方法只对某些多糖的测量效果好。
比色法、分光光度法、离子交换色谱法、酶法和电泳法等可同时用于多糖的定性定量分析。
3．2纯度鉴定多糖是高分子化合物，其纯品微观上是不均一的，通常所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围的均一组分。
多糖纯度鉴定的常用方法：超离心、高压电泳、凝胶层析、HLPC 法等。
现在应用较多的是HLPC 法，旋光度测定也是纯度测定的一种方法。
3．3分子量的测定多糖分子量的测定是研究多糖性质的一项重要工作。
常用方法：渗透压法、蒸气压渗透剂法、端基法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法、超过率法、沉淀法、凝胶电泳法、HPLC 法、超离心分析法、分子筛色谱法、GPC 法、MALDI－TOF－MS 法。
3．4结构测定3．4．1多糖一级结构测定多糖的一级结构分析，主要是分析组成多糖的单糖类型、数目、连接方式及苷建构型。
常用化学法和仪器分析法。
多糖组分与分子比例测定法：部分酸解法、完全酶解法、色谱法；吡喃、呋喃环形式结构的分析：红外光谱；连接次序：选择性光谱法、糖苷键顺序水解、核磁共振；α－β－异头异构体：糖苷酶水解、核磁共振；羟基被取代情况：甲基化反应、气相色谱、过碘酸氧化、Smith 降解法和测硫酸基法（terho 法）、核磁共振、质谱法；糖链、肽链连接方式：单糖与氨基酸组成、稀碱水解法、肼解反应；多糖结构的分析方法很多，迄今没有一种方法可以单独完成多糖结构的分析。
仪器分析与化学方法相结合是常用的多糖结构测定方法。
3．4．2多糖高级结构测定目前研究多糖的二级结构常用的手段是NMR 技术，如2D－NMR，13C 谱，通用的方法是将现代NMR 技术与理论计算相结合通过一定的理论计算筛选构象，主要的理论计算方法有从头计算、丰度经验计算及经验力场计算。
圆二色谱法（CD）也可用于糖的构象分析，近年来，以精确三维结构知识为基础揭示重要生命活动的规律已达到前所未有的深度和广度，多糖作为一类重要的生物活性大分子其结构的研究势必推动对多糖的认识向深层次发展。