抗生素效价计算过程
抗生素的效价测定方法
抗生素的效价测定方法一、引言抗生素是指能够抑制或杀灭某些细菌的化学物质，被广泛应用于临床医学和兽医学中。
为了保证抗生素的质量和安全性，需要对其效价进行测定。
本文将详细介绍抗生素效价测定的方法。
二、理论基础1. 抗生素效价抗生素效价是指单位体积或单位重量的抗生素所能杀灭或抑制的菌落数量。
通常使用最小抑菌浓度（MIC）或最小杀菌浓度（MBC）来表示。
2. 测定原理抗生素效价测定是通过比较不同浓度的抗生素与一定数量的细菌接触后，确定其最小有效浓度来评估其功效。
通常使用微量稀释法、滤纸片扩散法、管式稀释法等方法进行测定。
三、实验步骤1. 实验前准备（1）准备所需试剂和设备：包括培养基、试管、移液管、显微镜等。
（2）选择适当的细菌株：选取适合该种类药物敏感性测试的细菌株，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
（3）制备细菌悬液：将选定的细菌株接种于含有适当营养成分的培养基中，培养至对数生长期，然后用生理盐水将其稀释到一定浓度。
2. 测定方法（1）微量稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
③ 观察并记录结果：观察每个试管内是否有细菌生长，记录最低有效（2）滤纸片扩散法① 准备不同浓度的抗生素滤纸片：将抗生素溶解于无菌蒸馏水中，然后在无菌平板上放置一张过滤纸片，在过滤纸片上滴入不同浓度的药物溶液。
② 在平板上接种细菌悬液：在已经凝固的无菌平板上均匀涂布一层细菌悬液。
③ 孵育并观察结果：将含有药物滤纸片的平板孵育，观察抑菌圈的大小，记录最小有效浓度。
（3）管式稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
抗生素效价测定操作规程
QCA/QC-SOP-0061.主题内容和适用范围本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2.引用标准《中国药典》2010年版二部。
3.术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
本法采用的是管碟法。
4.操作技术（仪器与用具）4.1操作室：光线明亮，操作间分a.一般操作间b半无菌操作间。
室温控制20-25℃。
注意抗生素的污染。
4.2双蝶：内径90mm高16-17mm.用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min,备用。
4.3陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4.4钢管：内径6.0±0.1mm高7.8±0.1mm或8.0±0.1mm,10.0±0.1mm.重量差异不超±0.05g.用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min或用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗,淋干,PW冲洗3次150-160℃干热灭菌2小时备用.4.5钢管放置器4.6恒温培养箱:隔水式为宜35-37℃4.7灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml），用后立即置5%石碳酸或1:1000苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150-160℃干热灭菌2小时备用.4.8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次4.9称量瓶:具塞,重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW冲3次,置洁净的大平皿中.120℃干热3h,待冷到70-60℃时,取出置干燥器中备用.4.10毛细滴管: 清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次.120℃干燥3h4.11天平:分析天平,感量0.1mg4.12抑菌圈测量仪(多功能微生物自动测量分析仪)4.13超净工作台5.菌悬液制备取短小芽孢杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水1~2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35~37℃培养7天。
抗生素效价测定操作规程
抗生素效价测定操作规程1. 主题内容和适用范围本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2. 引用标准《中国药典》2010年版二部。
3. 术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
本法采用的是管碟法。
4. 操作技术（仪器与用具）4.1 操作室：光线明亮，操作间分 a.一般操作间b 半无菌操作间。
室温控制20-25℃。
注意抗生素的污染。
4.2 双蝶：内径90mm 高16-17mm.用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min,备用。
4.3 陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4.4 钢管：内径 6.0±0.1mm 高7.8±0.1mm 或8.0±0.1mm,10.0±0.1mm.重量差异不超±0.05g.用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h 以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min 或用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗,淋干,PW 冲洗3次150-160℃干热灭菌2小时备用. 4.5 钢管放置器4.6 恒温培养箱:隔水式为宜35-37℃4.7 灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml 、20ml ），用后立即置5%石碳酸或QCA/QC-SOP-006山东良福制药有限公司起草人 日 期 抗生素效价测定操作规程审核人 日 期 批准人 日 期 第五版实施日期总页数共5页1:1000苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150-160℃干热灭菌2小时备用.4.8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡,水洗、PW冲3次4.9称量瓶:具塞,重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW冲3次,置洁净的大平皿中.120℃干热3h,待冷到70-60℃时,取出置干燥器中备用.4.10毛细滴管: 清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次.120℃干燥3h4.11天平:分析天平,感量0.1mg4.12抑菌圈测量仪(多功能微生物自动测量分析仪)4.13超净工作台5.菌悬液制备取短小芽孢杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水1~2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35~37℃培养7天。
抗生素效价测定操作规程
QCA/QC-SOP-???1.主题内容和适用范围本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2.引用标准《中国药典》2010年版二部。
3.术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
本法采用的是管碟法。
4.操作技术（仪器与用具）4.1操作室：光线明亮，操作间分a.一般操作间b半无菌操作间。
室温控制20-25℃。
注意抗生素的污染。
4.2双蝶：内径90mm高16-17mm.用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min,备用。
4.3陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4.4钢管：内径6.0±0.1mm高7.8±0.1mm或8.0±0.1mm,10.0±0.1mm.重量差异不超±0.05g.用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min或用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗,淋干,PW冲洗3次150-160℃干热灭菌2小时备用.4.5钢管放置器4.6恒温培养箱:隔水式为宜35-37℃4.7灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml），用后立即置5%石碳酸或1:1000苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150-160℃干热灭菌2小时备用.4.8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次4.9称量瓶:具塞,重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW冲3次,置洁净的大平皿中.120℃干热3h,待冷到70-60℃时,取出置干燥器中备用.4.10毛细滴管: 清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次.120℃干燥3h4.11天平:分析天平,感量0.1mg4.12抑菌圈测量仪(多功能微生物自动测量分析仪)4.13超净工作台5.菌悬液制备取短小芽孢杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水1~2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35~37℃培养7天。
抗生素效价计算过程
USP Cylinder-plate assay 美国药典 管碟法---（标准曲线法）1、美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述：首先制备5个标准溶液浓度（U/ml ），分别为S1、S2、S3、S4和S5，其中S3为中间浓度。
除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，其中不相连的三个分别加入Si （i 为1、2、4或5），另外三个不相连的加入S3。
待检样品（Unknown ）加样方式如Si ，具体放置方法如下图1：图1：标准及样品管碟放置方式图例2、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例： 下表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组测量结果：表2：抗生素效价检测测量结果表Replicate1Replicate2Replicate3Set S1 Set S2 Set S4 Set S5 Sample U1备注：Zone1、3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值；Zone2、4、6表示每个平皿中不相连的三个S i的直径值；U1表示待测样品1。
2.1 进行初始计算：对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9 个Si和U1直径的平均值。
例如：15.867=（16.1,15.6,15.8,16.0……15.8）9个数据的平均值14.167=（14.6,14.1,13.5,14.5……14.1）9个数据的平均值2.2 变异性的适用性检查：然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差（包括标准对照和样品的），进而计算出其相对标准偏差值（RSD，该值应不超过10%）。
例如：标准偏差0.200 = s(16.1, . . ., 15.8)相对标准偏差1.3% = (0.200/15.867) *1002.3 进行平板间的差异校正：计算公式如下。
X C = X S– (X R– P)X C = 标准品平均值的校正值 X S = 原始的标准品的平均值 X R = 对照值的平均值 P = 校正值 例如：14.022 = 14.167 – (15.867 – 15.722) = 14.167 – 0.145 2.4 建立标准曲线：标准曲线由2.3计算的标准品平均值的校正值Xc 和标准品浓度值的对数值构成。
抗生素效价
用管碟法（2.2）法，测定链霉素活菌剂的效价，估计效价为1 000 000 u/g，供试品最终浓度为1.4u/ml 及0.7u/ml。
链霉素的效价测定抗生素微生物检定法本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效性）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。
第一法管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液的制备枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液取枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。
用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液取短小芽孢杆菌［CMCC(B)63202］的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液取藤黄微球菌［CMCC（B）28001］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26～27℃培养24小时，或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
大肠杆菌（Escherichia coli）悬液取大肠杆菌［CMCC（B）44103］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
31 抗生素效价的测定
A=1u/ml
continue
A B
第一组 0.4u/ml
B
A C A
A B
A B
B
A C A
A
B
A B
B
A
A B
第二组 0.6u/ml
A C
A C
A C
A C
A CБайду номын сангаас
C A
A C
第三组 0.8u/ml
A D
D A
A D
A D
D A
A D
A D
D A
A D
共18个培养皿，分为6组:B、C、D、E、F、G
continue
第四组 1.0u/ml A E
E
A F A G A
A E
A E
E
A
A
E
A E
E
A F A
A E
第五组 1.2u/ml
A F
A F
A F
F A
A F
A F
A F
第六组 1.4u/ml
A G
A G
A G
G A
A G
A G
G A
A G
continue
加好，盖盖，37度培养16~18h，精确测量各个 抑菌圈的直径。 分别求出每组3个培养皿中1U/mL标准品抑菌圈直 径的平均值n1，n2，n3，n4，n5，n6，再求出 6组中1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值a，总平 均值与每组1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值的 差，即为各组的校正值。即： a1=a-n1； a2=a-n2； a3=a-n3； a4=a-n4； a5=a-n5； a6=a-n6；
稀释法 比浊法 管碟琼脂扩散法（中国）
抗生素效价计算过程
Set S1 Set S2 Set S4 Set S5 Sample U1USP Cyli nder-plate assay美国药典 管碟法---（标准曲线法）1、美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述：首先制备5个标准溶液浓度（U/ml ）,分别为S1、S2、S3 S4和S5,其中S3 为中间浓度。
除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，其中不 相连的三个分别加入Si （ i 为1、2、4或5），另外三个不相连的加入S3o 待检样 品（Unknown 加样方式如Si ，具体放置方法如下图1:图1：标准及样品管碟放置方式图例Replicate1Replicate2Replicate3Standard Standard Standard Standard Unknown2、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例:F表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组测量结果:表2:抗生素效价检测测量结果表备注：Zonel、3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值;Zone2、4、6表示每个平皿中不相连的三个Si的直径值;U1表示待测样品1。
进行初始计算：对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9 个Si 和U1 直径的平均值。
例如：=(,,,……)9个数据的平均值=(,,,……)9个数据的平均值变异性的适用性检查：然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差(包括标准对照和样品的)，进而计算出其相对标准偏差值(RSD该值应不超过10%。
例如：标准偏差=s,...,相对标准偏差% = *100进行平板间的差异校正：计算公式如下。
X C = X S - （X R - P）X C =标准品平均值的校正值X S =原始的标准品的平均值X R =对照值的平均值P =校正值 例如：建立标准曲线：标准曲线由计算的标准品平均值的校正值 Xc 和标准品浓度值的对数值构成。
（使用适宜的计算软件或手动计算）（注意----可以使用自然对数或底数为10 的对数建立标准曲线中以确定回归方程，这样可以得到同样的结果） 例如：下表3是针对下列计算中会用到的数据从表2中截出的部分。
抗生素生物效价测定[参考]
![抗生素生物效价测定[参考]](https://img.taocdn.com/s3/m/ed9845a5dc88d0d233d4b14e852458fb770b38f5.png)
抗生素生物效价测定[参考]抗生素生物效价测定是用来测定抗生素杀菌或抑制菌落生长能力的一种方法。
该方法通过对一定菌种进行抗生素浓度递减系列的稀释，然后观察菌落生长情况来测定抗生素的生物效价。
测定结果可以确定出单位药物中所含抗菌物质的含量，并且通过该结果可以明确指导抗生素的使用。
抗生素生物效价测试的操作步骤如下：实验仪器:清洁平板、无菌匙、无菌棉签、培养皿、移液器、蒸气灭菌器、执卡器、点斑枪。
试验材料:抗生素标准品（如青霉素）、待检物（例如新的抗生素类别）、接种菌种、琼脂片。
操作步骤:1.准备琼脂平板，把琼脂熔化后加入相应的接种菌液并充分混合,倒入无菌平板中，等待琼脂凝固。
2.将待检物或标准品分别通过滴定法配制成一系列浓度递减的抗生素溶液,分别置于移液器或执卡器中。
3.在琼脂平板上均匀涂上少量接种菌液,用无菌点斑枪在琼脂平板上进行不同抗生素浓度的斑点法, 每个浓度上进行三个重复点斑法,保证试验的可靠性和精确度,同时在控制组和空板上也进行斑点法，以和实验组对比。
4.在施抗生素后，将琼脂平板放入恒温器中进行培养。
观察24小时后菌落生长的情况并记录下来。
5.统计不同浓度下的抗生素和菌落生长的比率，画出不同浓度与生长抑制之间的关系曲线。
6.计算抗生素的生物效价，通常以最低有效抑制浓度（MIC）为单位。
其计算公式如下：生物效价=标准品浓度/待检样品浓度。
7.将实验结果与临床使用常规剂量比较，如得出实验效价与常剂相近或更高，则证明该抗生素是有效的。
反之，如果效价较低，则应进一步测试，或对该抗生素进行结构修饰或改进。
抗生素生物效价测定是非常重要的实验手段，它可以确定抗生素的药效值并为临床用药提供科学依据。
在新药物的研发和临床实践中，抗生素生物效价测定是不可或缺的方法，也是提高治疗效果和减少药物滥用的重要手段。
抗生素效价测定方法
抗生素效价测定方法抗生素效价测定方法引言：抗生素是一类用于抑制或杀灭细菌生长的药物。
它们的广泛应用已经在医学领域产生了积极的影响，但随之而来的是细菌对抗生素产生的抗药性问题。
为了准确评估抗生素的效力以及制定合适的治疗方案，科学家们研发了多种抗生素效价测定方法。
本文将深入探讨这些方法的原理、应用和局限性。
正文：一、生物学测定法生物学测定法是一种常见的抗生素效价测定方法，它基于抗生素对细菌的抑制或杀菌作用。
主要包括最小抑菌浓度（MIC）测定和最小杀菌浓度（MBC）测定。
1. 最小抑菌浓度（MIC）测定：MIC测定是通过在含有细菌的培养基上逐渐加入不同浓度的抗生素，观察最低的有效浓度，以抑制细菌的生长或形成可见的生长抑制区域。
这个测定方法通常可以定量地测量出抗生素的最低有效浓度。
2. 最小杀菌浓度（MBC）测定：MBC测定是在MIC测定的基础上，进一步通过将培养基转移到不含有抗生素的培养基中培养，观察最低有效浓度，以杀灭细菌生长。
这个测定方法可以提供更准确的抗生素效价评估，因为它考虑了抗生素的细菌杀菌作用。
二、色谱分析法色谱分析法是一种基于抗生素化学性质的效价测定方法。
它通过使用色谱柱将样品中的抗生素分离出来，并测量其峰面积或峰高，以定量分析其浓度。
1. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是一种常用的色谱分析技术，可以有效地分离、定量和鉴定抗生素。
它利用高压泵将样品溶液推入色谱柱，通过样品在固定相和流动相之间的分配系数差异来实现分离。
定量的抗生素效价可以通过峰面积或峰高与标准曲线的关系来计算。
2. 气相色谱法（GC）：GC是一种适用于易挥发性物质的色谱分析方法，在某些情况下可以用于抗生素浓度测定。
样品经过气相柱，抗生素蒸发后进入气相检测器进行分析和定量。
三、生物化学测定法生物化学测定法是一种基于抗生素与生物体或其代谢产物之间的相互作用来评估抗生素效力的方法。
常见的生物化学测定法包括酶抑制测定法和細胞毒性試驗。
抗生素生物效价测定详细参考
---一参照秘斗一一页眉页脚可删除一一实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1.掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2.掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于乂集（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）（式 2.10-1）V=（UH+UL）-（SH+SL）（式2.10-2）式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出① 0=D-antilog（IV/W）（式 2.10-3）式中：。
杯碟法测定抗生素效价的原理
杯碟法测定抗生素效价的原理抗生素是可以破坏或阻止细菌生长的药物，常用于治疗细菌感染。
测定抗生素的效价是指确定一定量的抗生素可以有效抑制细菌生长的最小浓度。
常见的测定方法有杯碟法、肉汤稀释法、滴定法、渐进浓度法等。
杯碟法是测定抗生素效价最为常用的方法。
杯碟法是通过在含有细菌的培养基上放置不同浓度的抗生素溶液，观察不同浓度抗生素在培养基中形成的抑菌区域的大小，来确定细菌抑制最小浓度的方法。
具体操作步骤如下：1. 准备培养基：为了使实验结果更准确，通常采用标准化的稀释培养基，如Mueller Hinton培养基或Tryptic Soy培养基等。
2. 制备细菌悬液：从纯培养物中挑取1-2个菌落，在含有培养基的试管中，通过匀浆、加水稀释等方式制备出一定浓度的细菌悬液。
3. 处理杯和碟：将无菌培养基倒入消毒好的培养皿中，在其表面均匀涂布细菌悬液，再通过光学密度法或草屑法将不同浓度的抗生素液均匀滴入培养皿中的小圆片（碟）或凹坑（杯），形成抗生素浓度逐渐递减的浓度梯度。
注意，应尽量减少气泡形成，以免干扰细菌生长和抑制效果的判定。
为了控制实验条件的统一，通常使用标准的尺寸和厚度的杯或碟。
4. 培养：将已处理好抗生素和细菌悬液的培养皿放入恒温箱中，以维持适宜的温度、通气和湿度条件。
通常培养时间为18-24小时，但根据不同的细菌种类和抗生素特性会有所不同。
需要注意的是，杯碟法虽然是一种简单可行的方法，但对实验条件的控制要求较高，需要熟练的技术和严格的操作流程，否则会影响到实验结果的准确性。
在实际使用中，还应该根据不同细菌种类和抗生素类型选择不同的培养基、抗生素和其浓度等参数，以达到更好的效果。
杯碟法由于操作简单、容易控制，因此在临床医学领域得到了广泛应用。
其主要作用是为临床医生提供了确定正确用药方案的重要依据，可以根据不同细菌种类及其药敏性，选择最合适的抗生素类别，并测定其最低抑菌浓度，为临床治疗提供有效参考依据。
杯碟法也可应用于食品、环境监测等领域。
抗生素生物效价测定
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
抗生素效价单位
抗生素效价单位抗生素效价单位是用来衡量抗生素药物杀菌能力的指标。
抗生素是一类能够抑制或杀死细菌的药物，广泛应用于医疗和兽医领域。
为了评估不同抗生素的杀菌效果，科学家们引入了抗生素效价单位这一概念。
抗生素效价单位的计算方法主要有两种：比例法和二分法。
比例法是通过将一定浓度的抗生素与细菌进行混合培养，然后观察细菌的生长情况来确定效价单位。
二分法则是将一定浓度的抗生素分为两组，一组含有较高浓度，另一组含有较低浓度，然后观察两组细菌的生长情况来确定效价单位。
这两种方法都可以准确地评估抗生素的杀菌能力。
在临床应用中，抗生素效价单位通常表示为国际单位（IU）或微克（μg）。
不同的抗生素具有不同的效价单位，这取决于其杀菌能力和使用方法。
通常情况下，抗生素的效价单位越高，说明其杀菌能力越强。
抗生素效价单位的确定对于正确使用抗生素非常重要。
医生在开具抗生素处方时，会根据患者的病情和细菌感染的类型选择适当的抗生素，并根据其效价单位确定剂量和疗程。
如果使用的抗生素效价单位不合适，可能会导致治疗无效或者产生药物耐药性。
除了临床应用，抗生素效价单位也在药物研发和药物质量控制中起到重要作用。
在新药研发过程中，科学家们需要评估候选药物的杀菌能力，并确定其最佳剂量和疗程。
而在药物质量控制中，抗生素效价单位可以用来评估不同批次药物的质量稳定性和一致性。
然而，随着时间的推移，一些细菌对抗生素产生了耐药性。
这意味着原本有效的抗生素在治疗某些细菌感染时可能无效。
因此，科学家们需要不断研发新的抗生素，并确定其效价单位，以应对细菌耐药性带来的挑战。
总之，抗生素效价单位是衡量抗生素杀菌能力的重要指标。
通过准确确定抗生素的效价单位，可以确保其在临床应用、药物研发和质量控制中发挥最佳作用。
未来，科学家们需要继续研究和开发新的抗生素，并不断优化其效价单位，以应对日益严峻的细菌耐药性问题。
抗生素生物效价测定(详细参考)
实验一抗生素生物效价测定【实验目的】1. 掌握抗生素生物效价测定的原理和方法；2. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。
【实验原理】抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。
管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。
管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。
管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。
常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。
后二法已经列入药典。
二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。
取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入供试品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。
先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
（1）求出W和V：W=（SH+UH）-（SL+UL）(式 2.10-1)V=（UH+UL）-（SH+SL）(式2.10-2)式中：UH：供试品高剂量之抑菌圈直径；UL：供试品低剂量之抑菌圈直径；SH：标准品高剂量之抑菌圈直径；SL：标准品低剂量之抑菌圈直径；（2）求出θ：θ=D·antilog（IV/W）(式2.10-3)式中：θ：供试品和标准品的效价比；D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1；I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
抗生素的生物效价测定法(管碟法)
抗生素的生物效价测定法(管碟法)work Information Technology Company.2020YEAR抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。
生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。
抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。
稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。
这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。
所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。
由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。
比浊法原理及操作大致与稀释法相同。
比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。
这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。
这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。
扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。
经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。
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USP Cylinder-plate assay 美国药典 管碟法---（标准曲线法）
1、 美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述：
首先制备5个标准溶液浓度（U/ml ），分别为S1、S2、S3、S4和S5，其中S3为中间浓度。
除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，其中不相连的三个分别加入Si （i 为1、2、4或5），另外三个不相连的加入S3。
待检样品（Unknown ）加样方式如Si ，具体放置方法如下图1：
图1：标准及样品管碟放置方式图例
2、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例： 下表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组测量结果：
表2：抗生素效价检测测量结果表
Replicate1
Replicate2
Replicate3
Set S1 Set S2 Set S4 Set S5 Sample U1
备注：Zone1、3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值；
Zone2、4、6表示每个平皿中不相连的三个Si的直径值；
U1表示待测样品1。
2.1 进行初始计算：
对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9 个Si和U1直径的平均值。
例如：
15.867=（16.1,15.6,15.8,16.0……15.8）9个数据的平均值
14.167=（14.6,14.1,13.5,14.5……14.1）9个数据的平均值
2.2 变异性的适用性检查：
然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差（包括标准对照和样品的），进而计算出其相对标准偏差值（RSD，该值应不超过10%）。
例如：
标准偏差0.200 = s(16.1, . . ., 15.8)
相对标准偏差1.3% = (0.200/15.867) *100
2.3 进行平板间的差异校正：
计算公式如下。
X C = X S– (X R– P)
X C = 标准品平均值的校正值
X S = 原始的标准品的平均值
X R = 对照值的平均值
P = 校正值
例如：
14.022 = 14.167 – (15.867 – 15.722) = 14.167 – 0.145
2.4 建立标准曲线：
标准曲线由2.3计算的标准品平均值的校正值Xc和标准品浓度值的对数值构成。
（使用适宜的计算软件或手动计算）（注意----可以使用自然对数或底数为10的对数建立标准曲线中以确定回归方程，这样可以得到同样的结果）
例如：下表3是针对下列计算中会用到的数据从表2中截出的部分。
表3：标准曲线数据表
图4：线形回归结果
标准曲线：Z = [3.5502* ln(C)] + 9.9794
Z=校正抑菌圈大小
C=浓度
R2 = 0.9968
2.5 待测样品效价：
估算一个待测样品的效价，计算对照抑菌圈和样品抑菌圈的平均值（三个平板的）。
用上面介绍的标准品平均值的校正值Xc以计算待测样品的浓度平均值。
[注意---另一个可以接受的用校正值的方式为，根据标准品中间浓度S3的对数值在估计效价的回归线中进行校正]。
在标准曲线中使用公式用校正平均值计算样品的含量对数值L U。
L U = (Z – a)/b
a = 回归线的截距
b = 回归线的斜率
要得知待测样品的效价，取L U的反对数值乘以适当的稀释因子，该值也可描述为参考值浓度的百分比。
例如：
待测样品校正值(表2中) = 15.522
待测样品效价的ln值：L U = (15.522 – 9.978) / 3.5502= 1.562
待测样品效价值：C U = e1.562 = 4.765
待测样品效价与对照中间浓度的百分比为：(4.765/5.000) *100% = 95.3%
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