丹参多糖体外抗氧化抗肿瘤研究

丹参多糖体外抗氧化与抗肿瘤研究

焦亚东1杨兴斌2* †

（1•陕西师范大学教育部药用资源与天然药物化学重点实验室，陕西西安710062; 2.陕西师范大学食品工程与营养科学学院，陕西西安710062）

摘要：采用水提醇沉法制备丹参多糖（SMP）。通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP ）柱前衍生化HPLC-UV法表征SMP的单糖组成。通过DPPH •自由基、超氧阴离子、羟自

由基、还原能力体系评估SMP的抗氧化能力。采用MTT法、LDH法和流式细胞术

（FCM ）评价SMP的抗肿瘤活性。结果表明，SMP主要由半乳糖醛酸（GalUA ）、葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gla）组成，其摩尔百分含量分别为 4.36%、31.11%和65.52%。SMP 具有一定的抗氧化活性，且呈现量效关系。同时，SMP对人结肠癌细胞（LoVo ）的生长具

有显著的抑制作用，并且表现出一定的剂量依赖性，流式细胞术的分析结果表明SMP能显

著地诱导LoVo细胞凋亡并能将LoVo细胞抑制在S期。

关键词：丹参多糖；抗氧化；抗肿瘤

Antioxidant, Antineoplastic activity of Polysaccharide

Extract from Salvia miltiorrhiza Bge.

1 2*

JIAO Ya-dong , YANG Xing-bin

（1 Key Laboratory of Mi nistry of Educatio n for Medici nal Pla nt Resource and Natural Pharmaceutical Chemistry, Shaanxi Normal University, Xi'an 710062, China;

2 College of Food Engin eeri ng and Nutriti onal Scien ce, Shaa nxi Normal Un iversity,

Xi'a n 710062, Chi na ）

Abstract: SMP was extracted by the method of water boiling and ethanol precipitation. The mono saccharide compositi ons of SMP was characterized by PMP precolu mn derivatizati on procedure with HPLC-U V. In additi on, the an tioxida nt pote ntial of SMP was evaluated using the method of reducing power, and scavenging DPPH? radical, superoxide radical and hydroxyl radical. Moreover, the antin eoplastic activity of SMP was evaluated by MTT assay, LDH assay and flow cytometry

1作者简介：焦亚东（1985—）,男，硕士生，主要从事天然药物化学方面的研究。

†通讯作者：杨兴斌（1969—），男，副教授，硕士生导师，主要从事食品药品质量标准、食品分子营养学以及生化药理方面的科研工作。Email: xbyang@

（FCM）. The results showed that SMP was composed of galacturonic acid （GalUA）, glucose （Glc） and galactose （Gal） in the mole percents of 4.36%, 31.11% and 65.52%. The antioxidative experiment of SMP indicated that it exhibited various degrees of antioxidant activities in a dose-dependent manner. In addition, SMP exhibited significant antiproliferative activity against LoVo cell line in a dose- and time-dependent manner. Moreover, FCM analysis demonstrated that SMP significantly induced the apoptosis of LoVo cell and caused cell cycle arrest at S phase.

Key words: SMP; Antioxidant activities ; Antineoplastic activity

丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）为唇形科植物丹参的干燥根和根茎⑴，是著名的活血化瘀药，临床广泛用于冠心病、心绞痛、心肌梗塞和脑血管疾病的治疗[2]。人们在研究中发现从丹参根中提取到的多糖，经口服和肌注，用于氨基核苷诱导的实验性肾病模型和四氯化碳引发的肝损伤模型时能减少尿蛋白的排泄，抑制血清胆固醇和脂质过氧化物浓度的提高，降低肝损伤引起的丙氨酸转氨酶ALT 升高，并改善血清白蛋白与球蛋白的比值（A/G）[3]，丹参多糖能降低LPS 诱导的急性肝损伤模型小鼠肝组织中MDA 含量，升高GSH 含量，降低血清ALT 含量[4]，且具有明显的抗免疫性肝损伤的作用[5]。然而，对丹参多糖的抗氧化、抗肿瘤的研究报道较少，本实验通过评估丹参多糖体外抗氧化及抗肿瘤活性，为丹参多糖的进一步开发及临床应用提供依据。

1 仪器、材料与试剂

仪器AL104 电子天平，PL2002 电子天平（Mettler Toledo）; RE-52AA 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；恒温水浴锅，LGJ-10 冷冻干燥机（巩义市予华仪器有限公司）；H2050R-1 高速离心机（湖南湘仪集团）；透析袋（截留分子量为8000-10000）（华美生物工程公司）；723 型可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；LC-2010A 高效液相色谱仪，Class-VP 6.1 色谱工作站

（日本Shimadzu公司）；MILLI-Q 超纯水仪（美国Millipore公司）；RT6000 酶标仪（深圳雷杜生命科学股份有限公司）；FAC SCalibur 流式细胞仪（美国BD 公司）；TS 100 倒置显微镜（Nikon 公司）；IX 71 倒置荧光显微镜

（OLYMPUS 公司）；SW-CJ-2FD 超净工作台（苏净集团）；Megafuge 1.0R冷冻离心机，二氧化碳培养箱（美国Thermo公司）。

材料购买于西安市场，经陕西师范大学田先华教授鉴定为唇形科植物丹

参（Salvia miltiorrhiza Bge.），洗净后在室温下自然风干。

试剂D-甘露糖（Man）, D-核糖（Rib）, L-鼠李糖（Rha）, D-葡萄糖醛酸