气相色谱法测定药物中有机溶剂残留量

验证性实验

实验二十五 气相色谱法测定药物中有机溶剂残留量

一、目的要求

1.掌握内标法、外标法计算杂质含量。

2.熟悉气相色谱-氢火焰离子化检测器法（GC-FID ）测定原料药中残留有机溶剂的方法。

3.熟悉气相色谱仪的工作原理和操作方法。

4.了解顶空气相色谱仪的作用原理。

二、仪器与试药

气相色谱仪（弱极性或中等极性气相色谱柱，1～5μL 微量注射器）

甲醇 乙腈 二 氯甲烷 三氯甲烷 丙酮 正丙醇 地塞米松磷酸钠原料药

三、实验方法

1.地塞米松磷酸钠（Dexamethasone Sodium Phosphate ）中甲醇和丙酮的检查

（1）色谱条件 色谱柱：3% OV-17 玻璃柱，柱长 2m ，内径 3mm ；检测器：FID ；柱温：50℃；气化室温度：120℃；检测器温度：140 ℃；载气：N 2；流速：30mL/min ；空气：0.5 kg/cm ；灵敏度：102；进样量：2μL 。

（2）溶液制备与测定 精密量取甲醇 10µL （相当于 7.9mg ）与丙酮 100µL （相当于 79mg ）， 置 100mL 量瓶中，精密加 0.1%（mL/mL ）正丙醇（内标物质）溶液 20mL ，加水稀释至 刻度，摇匀，作为对照溶液；另取本品约 0.16g ，精密称定，置10mL 量瓶中，精密加入上述内标溶液 2mL ，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取上述溶液，照气相色谱法，按正丙醇计算的理论板数应大于700。含丙酮不得过 5.0%（g/g ）， 并不得出现甲醇峰。

（3）计算 按下式计算定量校正因子（f ）和检品中丙酮的含量（g/g ）：

A /A /C f C 正丙醇正丙醇甲醇甲醇

校正因子（）＝ 2.顶空气相色谱法测定有机溶剂甲醇、乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷

（1）色谱条件 色谱柱：HP-5 毛细管柱（5% phenyl methyl siloxane, 30m×0.25mm ）；柱温：45℃；气化室温度：180℃；检测室温度：200℃ (FID)；氢气流速：40 mL·min －1；空气：450 mL· min －1，氮气：1mL·min －1；分流比：31׃；样品液：90℃，加热10min ，（自动）顶空进样。

（2）溶液制备

（ⅰ）取甲醇100μL ，乙腈30μL ，二氯甲烷10μL ，三氯甲烷10μL ，分别加无有机物的水至 100mL ，作为定位溶液。

（ⅱ）另取上述同样量有机溶剂，混合，加无有机物的水至 100.0mL ，作为有机残留溶剂的限度试验对照溶液。取1mL 对照溶液，加水至 100.0 mL ，测定有机溶剂的检测限。

（ⅲ）取某药物约 0.3g ，精密称定，加 3.0mL 无有机物的水使溶解[如果样品在水中不溶，可用适当浓度的二甲基甲酰胺（DMF ）水溶液溶解样品]，作为供试品溶液。

（3）分离度与系统适用性试验 取定位溶液在上述色谱条件下测定，记录色谱图和保留时间。取对照溶液重复进样，计算各成分峰的分离度、柱效及色谱峰面积的相对标准差。另取对照溶液的稀释溶液进样，计算药物中各有机溶剂的检测限。参照下列表格式记录各色谱参数：

有机溶剂 t 峰面积（重复进样） RSD 柱效分离度检测限溶液（min） 1 2 3 （%）（n）（R）峰面积

甲醇

乙腈

二氯甲烷

三氯甲烷

（4）样品测定取供试品溶液，在上述色谱条件下进样，记录色谱图，外标法计算含量。

四、注意事项

1.色谱柱的使用温度：各种固定相均有最高使用温度的限制，为延长色谱柱的使用寿命，在分离度达到要求的情况下尽可能选择低的柱温。开机时，要先通载气，再升高气化室、检测室温度和分析柱温度，为使检测室温度始终高于分析柱温度，可先加热检测室，待检测室温度升至近设定温度时再升高分析柱温度；关机前须先降温，待柱温降至50℃以下时，才可停止通载气、关机。

2.进样操作：为获得较好的精密度和色谱峰形状，进样时速度要快而果断，并且每次进样速度、留针时间应保持一致。

3.检测器的使用：为避免被测物冷凝在检测器上而污染检测器，检测器的温度必须高于柱温30℃，并不得低于100℃。FID点火时应关小空气流量和开大H2流量，待点燃后，慢慢调整到工作比例，一般空气与H2的流量比为10：1，载气（N2）与H2的流量比为1：1～1：1.5。用峰高定量时，需保持载气流速恒定。