血清总胆固醇的测定和血清蛋白分离实验

血清总胆固醇的测定

实验目的：

测量血清中总胆固醇的含量

实验原理：

胆固醇酯加水在胆固醇酯酶的催化下生成游离胆固醇和脂肪酸。游离胆固醇加氧在胆固醇氧化酶作用下生成胆烷4-烯-3-酮和过氧化氢，过氧化氢再加4-氨基安替比林和酚在过氧化物酶的作用下生成醌亚胺，醌亚胺在500nm 有特异吸收峰，吸收的强度与胆固醇含量成正比。反应如下：

胆固醇酯+H 2O 胆固醇酯酶

→ 游离胆固醇+脂肪酸

游离胆固醇+O 2 胆固醇氧化酶→ 胆烷-4-烯-3-酮+H 2O 2

H 2O 2+4-氨基安替比林+酚过氧化物酶→ 醌亚胺染料+H 2O 实验操作：

取干净干燥的小试管3支，标号，按下表操作

混匀，置37℃水浴5-6分钟，以空白管校零，在500nm 波长下比色读取各管吸光度。

实验结果：

As= 0.214 A T =0.143

标准管胆固醇含量mmol/L=5.00mmol/L

测定管胆固醇含量mmol/L=3.34mmol/L

分析讨论：

为保证实验结果准确，滴加液体时可以先滴加量少的液体，再滴加含量较大的

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳

实验目的：

醋酸纤维薄膜电泳把血清蛋白分离，并测定血清蛋白种类

实验原理：

带电颗粒在电场作用下，向着与其所带电性相反的电极移动，称电泳。醋酸纤维薄膜电泳可把血清

蛋白分离为：清蛋白、α

1、α

2

、β、γ-球蛋白5条区带

实验操作：

1.点样：取在缓冲液中浸泡的醋酸纤维薄膜一条（

2.5×8cm），轻轻夹于滤纸中，吸去多余的缓冲液，在薄膜的毛面上距一端约1.0cm～1.5cm处，用点样气沾上血清后迅速压一下，然后将毛面向下使两端紧贴在四层滤纸上，加盖，平衡2～3分钟，通电电泳。

2.电泳：恒压120V，0.6mA/cm，时间50～60分钟。

3.染色：电泳完毕后，关闭电源，将薄膜取出，直接浸入氨基黑染色液中染色，取出用漂洗液浸洗3～4次，至背景完全无色为止。

实验结果:

电泳后出现5条区带，从正极到负极，分别为清蛋白、α

1、α

2

、β、γ，点样线。

分析讨论：

在醋酸纤维薄膜上点血清时要在毛面上点样，点样时要快速且血清量不能过多或者过少。电泳时把点样端放在电泳负极处。染色时间不能过短否则会导致最后得到的结果不够明显。