甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量

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氨基酸总量测定

氨基酸总量测定蛋白质经水解或酶解可由大分子变成小的蛋白质成分，如水解后的产物经月示、陈、肽等最后变成为氨基酸，氨基酸是构成蛋白质最基本的物质。

水解后的蛋白质和水解前的蛋白质在物理特性、化学结构以及被吸收消化的程度上是很不相同的，其差别与水解的程度有密切关系，分析氨基酸的含量就可以知道水解的程度，也就可以评价食品的营养价值。

氨基酸不是单纯的一种物质，用氨基酸分析仪可直接测定出17种氨基酸（仪器价格昂贵，不能普便使用），很多氨基酸可以同时存在于一种食品中，所以需要测定总的氨基酸量。

它们不能以氨基酸的百分率来表示，只能以氨基酸中所含的氨（氨基酸态氮）的百分率来表示。

当然，如果食品中只含有一种氨基酸，如味精中的谷氨酸，就可以从氮量计算出氨基酸的含量。

在评价蛋白质的营养价值时，除了测定蛋白质的含量，氨基酸氮量，还需要对各种氨基酸进行分离、鉴定，尤其对8种人体必需氨基酸进行定性定量分析。

1.1单指示剂甲醛滴定法原理氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有一CooH基显示酸性，又含有一NH2基显示碱性。

由于这两个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。

当加入甲醛溶液时，一NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就用碱来滴定一COOH基，以间接方法测定氨基酸的量。

反应式以下而三种形式存在:试剂40%中性甲醛溶液，以麝香草酚醐为指示剂，以mo1/1NaOH 溶液中和0.1%麝香草酚酸乙醇溶液；0.100mo1∕1氢氧化钠标准溶液。

操作步骤称取一定量样品（约含20毫克左右的氨基酸）于烧杯中（如为固体加水50毫升）,加2〜3滴指示剂，用O.1OOmo1/1NaOH液滴定至淡蓝色。

加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。

再用0.10OmC）I/1NaOH溶液滴定至淡蓝色，记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算氨基酸氮的含量。

计算氨基酸态氮（％）=MVX0.014><100/W式中：M一氢氧化钠标准溶液摩尔浓度V一氢氧化内标准溶液消耗的总量（毫升）W一样品溶液相当样品重量（克）0.014一氮的毫摩尔质量g/mmo11.2双指示剂甲醛滴定法原理与单色法相同，只是在此法中使用两种指示剂。

中华人民共和国国家标准甲醛值法

中华人民共和国国家标准甲醛值法1 主题内容与适用范围本标准规定了用甲醛值滴定法测定果蔬汁饮料中氨基态氮含量的方法。

本标准适用于浓缩果蔬汁、果蔬原汁、果蔬汁饮料及果蔬汁固体饮料。

2 引用标准GB 601 化学试剂标准溶液制备方法GB 604 化学试剂指示剂pH变色域制定法GB 685 化学试剂甲醛溶液HG 3-1082 30%过氧化氢3 原理氨基酸为两性电解质。

在接近中性的水溶液中,全部解离为双极离子。

当甲醛溶液加入后,与中性的氨基酸中的非解离型氨基反应,生成单羟甲基和二羟甲基诱导体,此反应完全定量进行。

此时放出氢离子可用标准碱液滴定,根据碱液的消耗量,计算出氨基态氮的含量。

其离子反应式如下：NH2NH2│ │R─CH─COO→←R─CH─COO-+H+ (1)NH2 NHCH2OH│ │R─CH─COO-+HCHO R─CH─COO- (2)NHCH2OH HOH2CNCH2OH│ │R─CH─COO-+HCHO→←R─CH─COO- (3)4 试剂所用试剂均为分析纯,使用的水为蒸馏水或同等纯度的水。

4.1 0.1mol/L氢氧化钠标准溶液：按GB 601配制与标定。

4.2 0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液：用0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液当天稀释。

4.3 中性甲醛溶液：量取200mL甲醛溶液(GB 685)于400mL烧杯中,置于电磁搅拌器上, 边搅拌边用0.05mol/L氢氧化钠溶液调至pH8.1.4.4 30%过氧化氢(HG 3-1082).4.5 pH 6.8缓冲溶液：按GB 604中“缓冲溶液的制备”配制。

5 仪器设备实验室常用玻璃仪器及下列各项：5.1 酸度计：直接读数,测量范围0～14pH,精度±0.1pH.5.2 电磁搅拌器。

5.3 玻璃电极和甘汞电极。

6 试样的制备6.1 浓缩果蔬汁在浓缩果蔬汁中,加入与在浓缩过程中失去的天然水分等量的水,使其成为果汁,并充分混匀,供测试用。

关于氨基酸的定量分析

• 吸取该溶液25.0 mL于碘量瓶中,加溴液 50.00 mL ,加盐酸10 mL ,立即加盖,摇匀，于暗处放置10 min
• 再在冰浴中冷却3 min 以上,加碘化钾5mL , 立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡黄色,加入淀粉溶液2 mL ,继续滴定至蓝色消失为终点,同时做空白试验。
x(v1 v2)c0.02403100 m 25 100
有吸收的衍生试剂。该方法的基本原理是经阳离子交换柱分离出的氨基酸与茚三酮混合,经加热反应后,一级胺与之生成蓝紫色化合物,二级胺与之生成黄色化合物。两种衍生物使用双通道紫外检测器同步检测, 检测波长分别为570nm 和436nm。
C OH
C
C
OH
O
茚三酮
O
C OH
C
C
OH
O
COOH
H 3N
C
关于氨基酸的定量分析
氨基酸的分析方法
化学分析法——甲醛滴定法甲醛滴定法用于氨基氮的
测定, 可以测出样品中总氨基酸的含量,其原理是在中性或弱碱性水溶液中,氨基酸的α—氨基与醛类反应生成
Schiff碱:α—氨基酸与甲醛反应生成亚甲基亚氨基衍生物
H
R C C O O
N H 3
H C H O
O H
H
பைடு நூலகம்
R
O
C OH
C
C
H
NH3
CO2
O
O
C OH C
C OH
O
O C
C C O
O
C
NC
H
C
O
紫色化合物
RCHO
H
O C
CN C O
亮黄色化合物

氨基酸分析的检测方法评述

文章编号:1004-7964(2004)03-0039-05收稿日期:2003-11-05基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)经费资助,课题编号:2001AA647020四川大学青年基金,课题编号:H2002[9-057]第一作者简介:戴红,女,1966年出生,副教授。

主要研究方向:分析检验。

氨基酸分析的检测方法评述戴红,张宗才,张新申(皮革化学与工程教育部重点实验室(四川大学),四川成都610065)摘　要:对氨基酸分析常用的化学方法、电化学方法、分光光度法(包括可见光分光光度法,紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等检测方法进行综述,以期为提高氨基酸分析的灵敏度、准确性,为快速、高效的氨基酸分析方法的建立提供参考。

关键词:氨基酸;检测;分析中图分类号:Q517;Q503 文献标识码:ADetermination M ethods of Amino A cids A nalysisDA I Hong ,ZHA N G Zong 2cai ,ZHA N G Xi n 2shen (Key L aboratory of L eather Chemist ry and Engi neeri ng(S ichuan U niversity ),M i nist ry of Education ,Chengdu 610065,Chi na )Abstract :Determination methods for amino acids ,including chemistry determination ,elec 2tric 2chemistry determination ,spectrophotometer determination and conductivity detection method were reviewed for the sake of improving the analysis sensitivity and accuracy.The paper aimed at providing useful reference to building a fast and effective amino acids aualytic methods.K ey w ords :amino acid ;analysis ;determination 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质,氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义,广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析,并且用于皮革化学鞣革机理的研究中[1,2,3]。

甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量.docx

甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。

甲醛可与氨基酸上的一N%3结合，形成一NH —CH Q OH、一N （CH2—0H）2等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+,测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。

若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。

若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。

脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。

三、材料、试剂与器具（一）试剂1、1%酚酞酒精溶液称Ig酚酞溶于IOOmI 95%酒精中。

2、0.5%溴麝香草酚蓝溶液取0.5溴麝香草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。

3、氨基酸溶液4、标准0.100mol∕L氢氧化钠溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml ,加1%酚酞指示剂2滴，滴加0.1mol∕L NaoH 溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和（二）实验器具 1、锥形瓶 3、移液管洗耳球 5、容量瓶 7、量筒四、操作步骤1、取3只50ml 锥形瓶，按下表加入试剂(pH8.7~9.0)2、碱式滴定管 4、天平 6、试剂瓶 8玻棒与烧杯3、结果计算氨基酸溶液中含氨基酸的百分比浓度为式中：C=（V1-V2）× C0×氨基酸分子量/（10× V样）C:总酸含量（g∕100ml）V i为滴定样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）; V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；C o :标准氢氧化钠准确浓度（mol∕L）V样：样品体积（ml）4、氢氧化钠标准溶液的标定4 1 κm标准is定落液4.1.1配制⅛⅛ no g⅛S'⅛钠需于IOQmL无二敦化晞⅛水中滞匀琏人聚乙烯容界中•密闭放置至溶液清氐按表1倾定佣酬管量取上翩孰用无二輸斛水解至IQ伽L,齣.表1标定按表2的规定称取于105Γ-110t电烘箱中十煥至国重的工作基准试剂命苯二屮酸爼銅厠无二水溶絹加2⅛≡ao示椒10 XLh用吃制⅛τ⅛s¾⅛⅛溶發滴定至酒液呈粉虹色供保痔30S4同时做零白试蜃。

甲醛滴定法测定氨基酸的原理

甲醛滴定法测定氨基酸的原理嘿，你知道吗？甲醛滴定法测定氨基酸，那可真是个神奇的事儿！咱先说说啥是氨基酸。

氨基酸就像是生命的小砖块，构建起了我们身体的各种重要物质。

没有氨基酸，咱可就没法正常运转啦！那怎么才能准确地测定氨基酸呢？这时候甲醛滴定法就闪亮登场了。

甲醛滴定法到底是咋回事呢？简单来说，就是利用甲醛和氨基酸的特殊反应来进行测定。

这就好比一场奇妙的化学反应舞会，甲醛和氨基酸在这个舞池中相遇，然后发生一系列的变化。

甲醛就像是一个神秘的魔术师，它能和氨基酸发生一些特别的反应。

当甲醛加入到含有氨基酸的溶液中时，会发生什么呢？氨基酸的氨基会和甲醛结合，形成一种新的化合物。

这就像是两个小伙伴手拉手，组成了一个新的团队。

这种新的化合物有啥特点呢？它的碱性会增强。

为啥会增强呢？这就像是给一个原本不太起眼的人穿上了一件闪亮的外套，一下子变得更加引人注目了。

碱性增强后，我们就可以用碱来滴定它了。

滴定的过程就像是一场精准的游戏。

我们小心地滴加碱液，看着溶液的变化。

就好像是在小心翼翼地走钢丝，一步一步都要非常谨慎。

当溶液的酸碱度达到一定的值时，我们就知道了氨基酸的含量。

你想想，这多神奇啊！通过这么一个看似简单的方法，就能准确地测定出氨基酸的含量。

这对于科学家们来说，可真是个了不起的工具。

在实际应用中，甲醛滴定法有很多优点呢。

它操作相对简单，不需要特别复杂的仪器。

这就好比是一个实用的小工具，随时都能拿出来用。

而且，它的准确性也比较高，可以为我们提供可靠的数据。

但是，就像任何方法都不是完美的一样，甲醛滴定法也有一些局限性。

比如说，它可能会受到其他物质的干扰。

这就像是在一场音乐会上，突然出现了一些噪音，会影响我们欣赏音乐的效果。

不过，这并不妨碍甲醛滴定法在很多领域的应用。

在食品工业中，我们可以用它来检测食品中的氨基酸含量，确保食品的质量和营养价值。

在医药领域，它也能帮助我们研究药物的成分和作用。

总的来说，甲醛滴定法测定氨基酸是一个非常有趣且实用的方法。

氨基酸态氮的检验方法

氨基酸态氮的检验方法一﹑原理：根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测液中构成电池，用用氢氧化钠标准溶液滴定后依据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。

二﹑试剂：甲醛（36%）、氢氧化钠标准滴定溶液C=L仪器：酸度计﹑磁力搅拌器﹑10ml碱式滴定管三﹑分析步骤：1.准确称取5g（液体吸取5ml）样品，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取，置于200ml烧杯中，加60ml水（酵母类吸取5ml,加55ml水），开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液C（NaOH）=L滴定至PH=[注：滴定时应先快后慢,如果不小心滴过量可用玻璃棒蘸取少量L盐酸沿烧杯壁流入溶液；开磁力搅拌器时,转速要由慢变快,不要让转子碰到电极]2.加入10ml甲醛溶液,混匀。

再用氢氧化钠标准溶液（L）继续滴定至PH=,记下样品PH从到消耗氢氧化钠标准溶液L)的毫升数。

3.空白试验：将80ml蒸馏水（酵母类为60ml）置于200ml烧杯中滴定，记录加入甲醛后消耗标液毫升数。

四﹑计算：()1230.014100%100V V CXVm-⨯⨯=⨯⨯式中：X——样品中氨基酸态氮的含量，g/100ml1V——样品稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 2V——试剂空白加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 3V——样品稀释液取用量，mlM——样品质量，gC——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L六、备注滴定空白时，由于PH=时的显示值极不稳定，可加一滴氢氧化钠标准液后直接加甲醛，不必待其稳定，然后先预滴，再逐滴滴定至PH=。

参照：GB/谷氨酸钠测定以上操作步骤不变，操作步骤2滴定终点改为滴定至PH=，计算公式系数改为进行计算参照SB/T 10371-2003 鸡精调味料。

氨基酸态氮测定甲醛值法

V1——测定用试样稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升（ml）
V2——试剂空白试验加入甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（ml）
V3——试样稀释液取用量，单位为毫升（ml）
C——氢氧化钠标准溶液的Байду номын сангаас度，单位为莫尔每升（mol/l）
0.014——与1.00ml氢氧化钠标准溶液[C（NaOH）=1.000mol/l]相当的氮的质量，单位为克（g）
计算结果保留两位有效数字。
6精密度
在重复性条件下获得得到两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
吸取10.0ml，置于200ml烧杯中，加60ml水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液[C（NaOH）=0.050mol/l]滴定至酸度计指示pH8.2，记下消耗氢氧化钠标准溶液的毫升数，可计算总酸含量。
加入10.0ml甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液继续滴定至PH9.2，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数。
氨基酸态氮测定甲醛值法
1原理
利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，以酸度计测定终点。
2试剂
甲醛（36%）：应不含聚合物、氢氧化钠标准溶液[C（NaOH）=0.050mol/l]
3仪器
酸度计、磁力搅拌器、10ml微量滴定管
4分析步骤
称取约5.0g已研磨均匀的试样置于100ml烧杯中，加入蒸馏水50ml充分搅拌（必要时加热），移入100ml容量瓶中，用少量水分次洗涤烧杯，洗液并入容量瓶中，并加水至刻度，混匀。
同时取80ml水，先用氢氧化钠标准溶液调节至PH为8.2，在加入10.0ml甲醛溶液，用氢氧化钠标准溶液滴定至PH9.2，同时做试剂空白试验。

氨基酸的定量测定

6、三硝基苯磺酸法
原理：三硝基苯磺酸（TNBS）是定量测定氨基酸的重要试剂之一。 TNBS 在偏碱性的条件下与氨基酸反应，先形成中间络合物。中间络合物在光谱上有2个吸收值相近的高峰，分别位于355nm 和420nm 附近。然而溶液一旦酸化，中间络合物转化成三硝基苯 -氨基酸（TNP-氨基酸），420nm 处的吸收值显著下降，而350nm 附近的吸收峰则移至340nm 处。利用 TNBS 与氨基酸反应的这一特性，可在420nm 处（偏碱性溶液中）或在340nm（偏酸性溶液中）对氨基酸进行定量测定。在 340nm 处，各氨基酸的吸收度大致相近，而在420nm 处的吸光度因 2 氨基酸种类而异；在加入适量 SO3 时，吸收值升高。本法允许的测定范围是 0.05～0.4μmol 氨基酸。
1、甲醛滴定法
计算结果：
氨基酸态氮含量=
(V2 V1 ) c 0.014 100 % m
式中：c——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L V1——用中性红作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积，mL V2——用百里酚酞作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积， mL m——测定用样品溶液相当于样品的质量，g 1 0.014—— N2毫摩尔质量，g/mmol
100%
式中：VHClO ——所消耗的高氯酸标准溶液的体积 cHClO ——所消耗的高氯酸标准溶液的浓度 M——被测氨基酸的摩尔质量 m——被测氨基酸的质量
4
4、非水溶液滴定法
②回滴法（适用于不易溶解于冰醋酸而能溶解于高氯酸的氨基酸）：精确称取氨基酸样品30~40mg 左右，溶解于5mL高氯酸标准溶液中，加2滴甲基紫指示剂，剩余的酸以醋酸钠溶液滴定，颜色变化由黄，经过绿、蓝至初次出现不褪的紫色为终点。氨基酸含量=

发酵过程主要生化指标的测定氨基氮测定——甲醛滴定法

• 水溶液中的氨基酸并不是以游离的羧基或氨基形式存在，而是兼性离子，既是质子供体（酸），也是质子受体（碱）。
COOH
COO-
COO-
H3N+ C H
H3N+ C H
H2N C H
R
2p左K右1
R
9p左K右2
R
甲醛可与氨基酸上的NH3+结合，生成羟甲基衍生物，释放出H+ R-NH2＋2HCHO→R-N（CH2OH）2
• 为何两种显色剂？
• 6-7.6 溴酚兰变色范围（黄蓝）
• 7.4-10 酚酞变色范围（无色粉红）
• 酚酞终点淡红，不易观察，现在变色范围是从黄色变为紫色，终点为紫色，易观察。
• 用标准碱液滴定羧基，按标准碱的消耗量求出氨基酸的含量。碱完全中和羧基时的pH值约为8.5～9.5。
滴定注意事项：
• 沙伦逊甲醛滴定法(Sorensenformaltitration) 一种测定氨基或氨基氮的方法。氨基酸分子中含有碱性氨基和酸性羧基，在固态或水溶液中以双性离子（内盐）存在，因此不能直接用酸滴定氨基，也不能用碱滴定羧基。
• 沙伦逊提出了将氨基酸（水溶液）用中性甲醛水溶液处理，将氨基“隐蔽”后滴定羧基的方法。
三、大肠杆菌发酵种子的制备
菌种
接种量1-2环
接种量1%
斜面一级种子二级种子
30℃，18h ， 4℃长期保存
14h，32℃，
8h，32℃
按学号，4人一组，3组共用一支斜面种子摇瓶装液量50ml 一级种子种龄在14h±2h内，二级种子7-8h内
时间安排
每一格必须由操作人签名！
一级种子
二级种子
• 甲醛有毒，滴定要快，必要时可戴口罩。 • 现配现滴，滴完盖紧瓶盖。 • 中性甲醛若长时间放置会变酸,滴定前要

实验四甲醛滴定法测定氨基氮含量

试剂和器材
1．试剂：（1）0.1mol/L 标准甘氨酸溶液准确称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL。（2）0.1mol/L 标准氢氧化钠溶液（3）0.5%酚酞指示剂称0.5g酚酞溶于100mL50%乙醇。（4）中性甲醛溶液甲醛溶液（36～37％，分析纯） 50mL，加入0.5％酚酞指示剂1 mL ，用0.1 mol/L的氢氧化钠溶液滴定至微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。
பைடு நூலகம்
2、氨基氮计算：
( V V ) 1 . 4008 对未氨基氮含量（ mg / mL ） 2
公式中： V 未为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。 V 对为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。
※1.4008
为1mL 0.1mol/L标准氢氧化钠溶液相当于氮的毫克数。
试剂和器材 1．试剂：
（5）待测样品未知浓度的甘氨酸溶液。
2．器材：
100mL锥形瓶、25mL微量滴定管、吸量管。
实验四甲醛滴定法测定氨基氮含量甲醛滴定法测定氨基氮甲醛滴定法测定氨基酸氨基氮的测定氨基态氮的测定氨基氮测定氨基氮的测定方法氨基态氮测定甲醛滴定法甲醛滴定法测水解度
实验八甲醛滴定法测定氨基氮含量
一、目的
掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和方法
二、原理
水溶液中的氨基酸为两性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。用甲醛处理氨基酸, 甲醛与氨基结合,可形成羟甲基衍生物，使 NH3+上的H+游离出来，这样就可用碱滴定 NH3+放出的H+，从而计算出氨基氮含量。
四、结果计算
1、回收率计算：
实际测得量甘氨酸氨基氮回收率 % 100 理论加入量

氨氮和氨基氮测定(甲醛法)

3.2 发酵液中氮含量测定（甲醛法）3.2.1 原理：利用甲醛法测定，测定结果是发酵液中氨基氮和氨氮量的总和。

氨氮：一分子铵盐与甲醛作用，生成环六次甲基四胺及二分子无机酸，后者以标准碱滴定，以此算出氨氮的含量。

氨基氮：氨基酸之氨基与甲醛结合后，使氨基酸之碱性消失，再用标准碱液来滴定羧基，算出氨氮的含量。

化学反应及副反应式如下：2(NH4)2SO4 + 6HCHO (CH2)N4 + 2H2SO4 + 6H2OH2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2H2OR-CHNH2CHOOH + HCHO RCN-N=CH2CHOOH + H2ON=CH2 N=CH2R C H + NaOH R C H + H2OCOOH COOH3.2.2 仪器和设备25ml滴定管、5ml吸量管、1000ml容量瓶、250ml三角瓶、100ml量筒。

3.2.3 试剂和溶液3.2.3.1 0.03569mol/L氢氧化钠标准溶液：取0.3569mol/L NaOH标准液100ml于1000ml 容量瓶中，加纯化水稀释至刻度摇匀即可。

3.2.3.2中性甲醛：40%甲醛加二倍水稀释，临用前0.03569mol/L NaOH调至微红色，用酚酞作指示剂。

3.2.3.3 0.5%酚酞指示剂：称2.5g酚酞溶于500ml 95%乙醇中，摇匀即可。

3.2.3.4 0.1%甲基红指示剂：称0.1g甲基红溶于100ml 95%乙醇中，摇匀即可。

3.2.4 操作步骤：吸取发酵液滤液(或离心上清液)2.5ml于250ml三角瓶中，加纯化水约50ml，加0.1%甲基红指示剂2-3滴，加1mol/L盐酸1-2滴。

使其成红色，放置3分钟，然后再以0.03569mol/L的NaOH标准溶液调至橙黄色，加入中性甲醛5-10ml，放置10分钟，再加0.5%酚酞指示剂3-5滴。

用0.03569mol/L 的NaOH标准溶液滴定至微红色半分钟不褪色为终点。

氨基酸总量测定方法

氨基酸总量测定方法咱今儿就来讲讲氨基酸总量测定方法，这可是个很有意思的事儿呢！你想想啊，氨基酸就像是我们身体里的小宝贝，它们的数量和状态对我们可重要啦！要说测定氨基酸总量，那方法可不少呢。

就好像我们要去一个地方，有好多条路可以走。

比如说茚三酮比色法，这就像是走一条大家都比较熟悉的大道，可靠又实用。

把样品和茚三酮试剂一混合，经过一系列反应，就能通过颜色的变化来大致知道氨基酸的量啦。

这多神奇呀！还有甲醛滴定法，这就好比是找到了一个特别的窍门。

利用甲醛和氨基酸的反应，然后通过滴定来确定数量。

是不是感觉很有意思呢？就像解开一个小小的谜题。

再说说电位滴定法吧，这就像是有个特别精准的仪器在帮我们把关，能非常准确地测量出氨基酸的量呢。

那我们在实际操作的时候可得注意一些小细节哦！就像做饭要掌握好火候一样，不能马虎。

比如试剂的选择，一定要挑质量好的呀，不然怎么能得出准确的结果呢？还有操作步骤，一步都不能错哦，不然就像走在路上迷路了一样。

你说，要是我们不认真对待这些方法，那不是就像闭着眼睛走路吗？能走到目的地才怪呢！所以呀，我们得好好琢磨这些方法，就像对待宝贝一样。

在测定的过程中，每一个环节都很关键呢。

从样品的处理到最后的数据分析，都需要我们细心再细心。

这可不是闹着玩的事儿呀！而且呀，不同的样品可能需要不同的方法来测定氨基酸总量呢。

这就好像不同的人穿不同的衣服才合适一样。

你总不能给一个大人穿小孩的衣服吧？总之呢，氨基酸总量测定方法是个很有学问的事儿，我们可得好好研究研究。

只有这样，我们才能真正了解氨基酸的奥秘，才能更好地为我们的健康服务呀！这可不是开玩笑的哦！。

甲醛值滴定法

甲醛值滴定法方法:利用氨基酸的两性特性, 加入甲醛溶液并用标准碱溶液滴定, 通过测定牛奶中蛋白质的游离氨基酸含量, 计算求得牛奶中蛋白质含量。

一．目的：测定牛奶中的蛋白质的含量二．方法原理牛奶中蛋白质含量与游离氨基酸含量呈良好的正相关。

氨基酸为两性电解质, 在接近中性的水溶液中, 全部解离为双极离子。

当甲醛溶液加入后, 与中性的游离氨基酸中非解离型氨基反应, 生成单羟甲基和二羟甲基诱导体, 使氨基酸失去氨基特性, 游离的羧基( - COOH) 可以用标准碱溶液滴定, 根据碱溶液的消耗量得出游离氨基酸含量, 乘以经验常数计算出蛋白质的含量。

三．仪器与试剂1.仪器 :碱式滴定装置。

2.样品: 成品纯牛奶约30ml3.试剂: 饱和草酸钾溶液: 330 g/ L; 酚酞指示液: 5g/ L, 用乙醇溶液配制; 氢氧化钠标准溶液[ c( NaOH)=0 .1 mol/ L] ; 氢氧化钠标准滴定溶液[ c( NaOH) =0.05 mol/ L] ; 中性甲醛水溶液。

四．操作步骤（1）准确吸取奶样 10.0ml 于三角瓶中, 加入0.5 ml饱和草酸钾溶液和 0.5 ml 酚酞指示液（2）约 2 min 后用 0.1 mol/ L氢氧化钠标准溶液滴定至粉红色（3）然后加入 2 ml 中性甲醛溶液, 再用 0.05 mol/ L氢氧化钠标准滴定溶液滴定至粉红色, 记录滴定消耗的0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数。

五．结果处理牛奶中蛋白质的含量式中: C—氢氧化钠标准滴定溶液的浓度, 单位为mol/ L; V1—加入中性甲醛溶液后滴定试样消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积, 单位为 ml; 0.014—1ml 1 mol/ L 氢氧化钠标准溶液相当于氮的克数;6.38—氮换算为蛋白质的系数; 100/ 5.006—经验常数,由本方法实测值与国标法( 凯氏定氮) 测定值相比较计算得出; V—样品的体积, ml 成品。

氨基酸态氮的检验方法

再用氢氧化钠标准溶液（L）继续滴定至PH=,记下样品PH从到消耗氢氧化钠标准溶液L)的毫升数。

3.空白试验：将80ml蒸馏水（酵母类为60ml）置于200ml烧杯中滴定，记录加入甲醛后消耗标液毫升数。

四﹑计算：()1230.014100%100V V CXVm-⨯⨯=⨯⨯式中：——样品中氨基酸态氮的含量，g/100ml——样品稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml ——试剂空白加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml ——样品稀释液取用量，mlM——样品质量，g——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L六、备注滴定空白时，由于PH=时的显示值极不稳定，可加一滴氢氧化钠标准液后直接加甲醛，不必待其稳定，然后先预滴，再逐滴滴定至PH=。

参照：GB/谷氨酸钠测定以上操作步骤不变，操作步骤2滴定终点改为滴定至PH=，计算公式系数改为进行计算参照SB/T 10371-2003 鸡精调味料。

实验二_氨基酸的甲醛滴定报告

• 4、为什么计算氨基酸含量可只计算氨基氮？
• 值日
• 实验报告
H
C
N（CH2OH）2
COO-
COO-
三、试剂
• 1、中性甲醛 • 2、0.5%酚酞乙醇溶液 • 3、标准的氢氧化钠液
• 4、0.01N Gly液
• 5、未知浓度的Gly液
四、主要的器材
如何正确使用滴形瓶3 个，编号，向第 1、2号两瓶内各加入2 毫升0.01N标准甘氨酸溶液及1-2滴酚酞指示剂。向第3号瓶内加入2毫升蒸馏水及1-2滴指示剂作为对照混匀后，用0.01N标准氢氧化钠溶液滴定第1号瓶内的溶液至微红色，并保留作为掌握滴定终点的颜色标准。向第2、3号瓶内加入4毫升中性甲醛溶液混匀，分别用0.01N标准氢氧化钠溶液将它们滴定至第1号瓶颜色，将每个编号都重复操作2次，并求出甘氨酸氨基氮的平均回收率。
•
编号
1 2ml
2 2ml
3 /
试剂
0.01M Gly液
蒸馏水
酚酞 0.01N NaOH液中性甲醛
/
2滴微红（作参照） /
/
2滴 / 4ml
2ml
2滴 / 4ml
0.01N NaOH液
/
滴定（计数）
滴定（计数）
甘氨酸氨基氮回收率=
实际测出量 100 加入理论量
2．取未知浓度的甘氨酸溶液2毫升，按照上述方法进行测定平行做2份，并计算出每毫升该种甘氨酸溶液中含有氨基氮的平均毫克数。
氨基氮(毫克/毫升)=（V2-V3)*0.14008/2
注意事项
• 1、滴定管的清洁与检查 • 2、尽量要求数据准确 • 3、参比颜色
思考题与实验报告
• 1、甲醛滴定时，加入的氢氧化钠溶液滴定的是氨基酸的氨基或羧基？为什么？

氨基酸总量(氨态氮)的测定(甲醛滴定法)

氨基酸总量(氨态氮)的测定（甲醛滴定法）一、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH 基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。

由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。

当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。

（二）试剂(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。

(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。

(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。

加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。

再用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。

记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。

V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。

0.014：氮的毫克当量。

三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。

从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。

PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。

(二)试剂：(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。

(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。

(4) 0.1%中性红(50%乙醇溶液)(三)操作步骤：取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100N NaOH准溶液滴定至淡蓝色。

甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量

甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的掌控甲醛滴定法测量氨基酸含量的原理和操作方式要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。

甲醛可与氨基酸上的―n+h3结合，形成―nh―ch2oh、―n(ch2―oh)2等羟甲基衍生物，使n+h3上的h+游离出来，这样就可以用碱滴定n+h3放出h+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。

若样品中只所含单一的未知氨基酸，则可以由此法电解的结果算是出来氨基酸的含量。

若样品中所含多种氨基酸（例如蛋白质水解液），测无法由此法求出氨基酸的含量。

脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。

三、材料、试剂与器具（一）试剂1、1%酚酞酒精溶液称1g酚酞溶于100ml95%酒精中。

2、0.5%溴麝香草酚蓝溶液挑0.5溴麝香草酚蓝溶100ml20%乙醇溶液中。

3、氨基酸溶液4、标准0.100mol/l氢氧化钠溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml，加1%酚酞指示剂2滴，滴加0.1mol/lnaoh溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。

（二）实验器具1、锥形瓶2、碱式滴定管3、移液管洗耳球4、天平5、容量瓶6、试剂瓶7、量筒8、玻棒与烧杯四、操作步骤1、挑3只50ml锥形瓶，按下表中重新加入试剂。

锥形瓶编号试剂氨基酸溶液或样品（ml）蒸馏水（ml）中性甲醛溶液（ml）0.05%溴麝香草酚蓝溶液（几滴）1%酚酞乙醇溶液（几滴）1.05.05.0221.05.05.022―6.05.022样品1样品2空白2、搅匀后用标准0.100mol/l氢氧化钠溶液电解至紫色（ph8.7~9.0）3、结果计算氨基酸溶液中不含氨基酸的百分比浓度为c=（v1-v2）×c0×氨基酸分子量/（10×v样）式中：c：总酸含量（g/100ml）v1为电解样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）；v2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；c0：标准氢氧化钠精确浓度(mol/l)v样：样品体积(ml)4、氢氧化钠标准溶液的标定五、注意事项（1）利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。

实验九甲醛滴定法测定氨基酸

实验九甲醛滴定法测定氨基酸YUKI was compiled on the morning of December 16, 2020实验九甲醛滴定法测定氨基酸一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。

二、原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：H3N+—R—COO—⇔H2N—R—COO—+H+-NH+3是弱酸，，完全解离时pH为11～12或更高，若用碱滴定-NH+3所释放的H+来测量氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示终点。

常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH+3释放H+，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内(pH9.0左右)。

因此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。

R-CH(COO—)-NH+3⇔R-CH(COO—)-NH2+H+−−→−NaOH中和R-CH(COO—)-NH2−−→−HCHO R-CH(COO—)-NHCH2OH−−→−HCHO R-CH(COO—)-N(CH2OH)2如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量（脯氨酸与甲醛作用生成不稳定的化合物，使滴定mL数偏低。

酪氨酸的滴定mL数偏高）。

如样品是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。

但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。

随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。

三、器材药25 mL 锥形瓶；3 mL 微量滴定管；吸管；0.1 mol ／L 标准甘氨酸溶液300 mL 准确称取750 mg 甘氨酸，溶解后定容至100 mL ；0.1 m01／L 标准氢氧化钠溶液500 mL ；（标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密闭瓶中保存。

不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩余氢氧化钠。

）酚酞指示剂20 mL 0.5％酚酞的50％乙醇溶液中性甲醛溶液400mL 在50 mL 36～37％分析纯甲醛溶液中加入1 mL 0.1％酚酞乙醇水溶液，用0.1 mol ／L 的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。