家兔DIC实验报告

实验2 急性DIC

实验时间：5月23日

【实验目的】

1、学习复制急性DIC 动物模型的方法。

2、了解实验室诊断DIC 的常用方法及其意义。

3、结合实验和血液学指标测定结果，联系理论知识加深理解DIC 的病因及发生机制。

【实验对象】

家兔1只，雌（未孕）雄均可。体重 1.5～2.0 kg 。

【药品和试剂】

1%普鲁卡因、3.8%枸椽酸钠液、2%兔脑粉浸出液（临用时配制）、饱和氯化钠液、生理盐水、1%鱼精蛋白液。

【实验器材】

兔台、哺乳动物手术器械一套（包括手术刀、普通剪刀、眼科剪刀、止血钳）、电热恒温水浴箱、台式离心机、721分光光度计、秒表、刻度离心管（10ml ）、试管（13×75mm 、15×100mm ）、刻度吸管（2ml 、5ml ）、试管架、微量定量移液器（10µl 、50µl 、500µl ）、橡皮吸球、乳胶滴管、玻片、棉球、纱布、颈动脉插管（硅胶管）2根、动脉夹，注射器。

【实验方法】

1、将家兔仰位固定兔台、颈部剪毛、皮下1%普鲁卡因局部浸润麻醉，作正中纵切口（约3~4cm 左右），常规暴露一侧颈总动脉，结扎其远心端，近心端用动脉夹夹闭；在结扎线下方剪口插入硅胶管并固定，松夹放血7ml 至盛有3.8%枸椽酸钠液2ml 的10ml 刻度离心管中，立即混匀离心（3000rpm ，5分钟），分离血浆，备作纤维蛋白原定量与3P 试验。再松动动脉夹放血2~3滴于洁净玻片上，作凝血时间测定。

2、复制DIC 模型：用10ml 注射器吸取2%兔脑粉浸液，按3ml/kg 的量缓慢（以每分钟2ml 的速度为宜）注入家兔耳缘静脉内，同时观察其反应，如出现呼吸急促、躁动不安，即停止注射，速行第二次采血（方法同1），如未出现反应可注射毕后采血。重复上述各项指标测定。

4、整理并分析实验结果。

【附 录】

1、凝血时间测定（玻片法）：放血2~3滴于洁净玻片上，同时按动秒表，用清洁废针头挑拨血滴，见有明显血丝出现，迅即停表，记录时间。

2、纤维蛋白原含量测定（饱和盐水法）：取15×100mm 试管一支，置0.5ml 样本血浆，加入饱和氯化钠溶液4.5ml ，立即混匀，于37℃水浴中孵育3分钟取出，再混匀后以721分光光度计，520nm 滤光板比浊，读取光密度值；以生理盐水替代饱和氯化钠液作同样操作后为空白对照管调零，测出光密度，按下式计算；

)/(10005

.0dl mg 纤维蛋白原测定管光密度值=⨯ 3、3P 试验：取13×75mm 试管一支，置0.5ml 血浆，加入1%鱼精蛋白液0.05ml ，轻轻摇匀，于37℃水浴中15分钟后取出，于黑色背景下观察，如见絮状沉淀或胶冻状即为阳性，清澈则为阴性。

【实验结果】

【讨论】

1、家兔实验性DIC 的致病原因：

兔脑脊液属于组织因子，大量的兔脑脊液静脉注射后，激活家兔的外源性凝血系统，启动凝血过程，依次激活凝血因子FIX,FVIII,FX 等和凝血酶，从而使血小板聚集，使纤维蛋白原变成纤维蛋白，促进凝血。此外，凝血酶反馈性激活FIX,FX,FXI,FXII 等，扩大凝血反应。此为高凝期，微循环易形成广泛的微血栓。

大量凝血酶的激活和微血栓的形成，大量消耗了血液中的凝血因子和血小板，可能继发性激活纤溶系统，造成凝血系统和纤溶系统不平衡，血液处于消耗性低凝期，有明显出血症状。

DIC 时产生的大量凝血酶和FXIIa 等激活纤溶系统，产生大量纤溶酶，导致纤溶亢进，形成大量纤维蛋白降解产物，抗凝作用明显，为继发性纤溶亢进，此时出血十分显著。（厉彬杰）

2、CT 测定的原理：新鲜血液离体后，因子被异物表面（玻璃）激活，启动了内源性凝血。由于血液中含有内源性凝血所需的全部凝血因子、血小板及钙离子，血液则发生凝固。血液凝固所需时间即为凝血时间（clotting rime ，CT ）。

3、由实验结果分析，

3.1发生DIC 后，凝血时间变长。

机制：凝血物质被消耗而减少：在DIC 发生、发展过程中，大量血小板和凝血因子被消耗，使得血液中纤维蛋白原、凝血酶原、F Ⅴ、F Ⅷ、F Ⅹ及血小板明显减少，使凝血过程发生障碍。

纤溶系统激活：血液中F Ⅻ激活的同时，激肽系统也被激活，产生缓激肽酶，使纤溶酶原变成纤溶酶，激活纤溶系统。纤溶酶除了可使纤维蛋白降解外，还可水解凝血因子，如：F Ⅴ、F Ⅷ、凝血酶、F Ⅻ等，使凝血功能发生障碍，使得凝血时间变长。

纤维蛋白（原）降解产物形成：在凝血过程中，凝血酶使纤溶蛋白原转变为纤维蛋白单体，最终形成交联的纤维蛋白多聚体。纤溶系统激活后，纤溶酶分解纤维蛋白原，裂解出纤维肽A 和纤维肽B ，余下片段为X 片段，继续被分解为D 片段和Y 片段，Y 片段可继续分解为D 和E 片段。如果纤维蛋白原先经凝血酶作用为纤维蛋白，纤溶酶再分解纤维蛋白，则可使其分解为X’、Y’、D’、E’及各种二聚体、多聚体等片段。纤溶酶水解纤维蛋白（原）片段，统称为纤维蛋白（原）降解产物（FDP ）。这些片段有明显的抗凝作用，如：X 、Y 、D 组别

CT(min) 3P test OD 520nm Fbg(mg/dl) OD 520nm Fbg(mg/dl)

正常 注射后 正常 注射后 N 测 D 测 1

/ / / / / / / / 2

1’32 6’18 - - 0.186 372 0.095 190 3

0’22 1’22 - + 0.205 410 0.093 186 4

0’55 0’50/1’40 - +++ 0.248 496 0.112/0.116 224/232 5

1’20 2’20 - +++ 0.120 240 0.102 204 6 0’24 / - - 0.231 462 0.042 84