细胞提取与培养,传代

细胞提取：

空气处死动物

扒皮，取骨关节，放在生理盐水中

转移到细胞室内

打开关节腔，修剪关节与软骨，放在新的生理盐水中，自此以后剪刀切勿碰到软骨

转移至超净操作台，剔与收集软骨，于小烧杯中

生理盐水清洗至澄清

剪碎，加入5ml胰酶，转移至50ml的ep管中

37℃，摇床，孵育30min

3000r/min，10min，离心

去掉上清液，加入5ml 0.2%胶原酶（用细胞培养基稀释）

37℃，摇床，孵育1h

吸取清液，铁网过滤到15 ep管，离心（5min，1500r/min）

去掉上清液，加入3ml细胞培养基，吹打，转移至细胞培养皿中

补充至15ml细胞培养基

细胞传代步骤：

1、倒掉培养液，加入4ml PBS缓冲液，冲洗培养液，两次

2、加入2ml 胰酶，放入细胞培养箱5min

3、显微镜下看一看

4、取出，加入3-5ml 混有胎牛血清（fbs）的培养液（比例：1:9 双抗1:100）（作用终止消化）

5、细胞吸取放在离心管中

6、离心（5min，1200r/min），弃上清液

7、向离心管，加入6ml（偶数）的牛胎盘血清的培养液

8、分装到培养瓶中，每个培养瓶3ml，然后再补充培养液至15ml

9、细胞培养箱，每天观察，培养皿变色，可能是细胞旺盛，代谢产物多

10、一般培养2天，即需更换培养液，长的快满的时候，再传代。