次乌头碱对心肌细胞Ca_2_调控蛋白mRNA表达的影响

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L - t ype calcium channel 1C, ca lmodulin( CaM ) and Ry R2 in my ocardial cells. Methods P rima ry neonatal rat myo car dial cells w ere generated and cultured. L - type calcium channel 1C, CaM and RyR2 mR N A w ere measur ed by tr anscr ipt ion - polymerase chain r eac t ion( RT- PCR) respectively . Results A fter co - incubating w ith H A fo r 15 min, 60, 120 / L H A can impr ove the expressio n of L type calcium channel 1C mRN A in myo ca rdial cells ( P < 0. 05) , 30, 60, 120 / L H A also can incr ease CaM mR N A in m yocar dia l cells( P < 0. 01) , 60, 120 / L H A incr eased t he ex pr essio n of Ry R2 mRN A in myo ca rdial cells( P < 0. 05) . A fter co - incubat ion with H A for 5, 15, 60 min, 60 M / L H A increased t he ex pression o f L - ty pe calcium channel 1C mR NA of my ocardial cells in 5 min( P < 0. 05) . T he ex pr ession of CaM mR NA of myocar dial cells wer e increased after co - incubating w ith 30, 60 M / L H A fo r 15, 60 m in( P < 0. 01) . Conclusion H A ( 60 M / L) can induce the calcium o ver load in m yocar dial cells, w hich w ill r esult in ar rhyt h mia. T his actio n maybe relates to the incr easing ex pression of L - ty pe calcium channel 1C, CaM and RyR2 mRNA of myocardial cells caused by HA . T he clinical tox ic arrhythmias can be reliev ed throug h interfering these tar get g enes when tox ic r eaction happens. Key words: hy paco nitine; myo cardial cells; calcium regulated pro teins 含有乌头碱、 中乌头碱、 次乌头碱 ( hypaco nitine, H A ) 等生 物碱的 天然药 物主 要包括 附子、 川 乌、 草乌、 雪上 一枝 蒿等 药 材 , 因含有上述毒性成分 在临床 应用中 极易发 生中毒 , 损伤 机 - 4] 体神经系统与心血管系 统 , 最 突出的 体征为 心律 失常 [ 1 。有 研究显示 , H A 在附子炮制品及中成药中都 有存在 [ 5-8] , 且附 子 的毒 - 效表达与乌头碱、 中乌头碱、 H A 在炮制 过程中 的差异 配 比存在相关性 [ 9] , H A 在正 常大 鼠及离 体心 脏、 原代培 养乳 鼠 心肌细胞上都能引发严重心律 失常 [ 10- 11] 。现将 HA 对心肌 细 胞L - 钙通道 1C 亚基、 细胞 内钙调 蛋白 ( CaM ) 及肌 质网上 雷 诺定受体 ( Ry R2 ) mR NA 表达的影响报道如下 。 1 材料与方法 1 . 1 动物与药品 3 d 乳 大鼠 ( 北 京维 通利 华实 验动 物技 术 等于 98% , 用二甲 基亚砜( DM SO ) 溶解 , 制成贮备液。 1. 2 试剂与仪器 达氏修 正依氏培 养基 / F12 ( DM EM / F12) 购自美国 sig ma 公司 , 批号 086K 83521; 胰蛋白酶、 胶原酶 型 ( Co ) 、 四噻唑兰 ( M T T ) 、 乙二胺 四乙酸二 钠 ( EDT A N a2 ) 购 自美国 A mresco 公司 ; 5 -溴 -2 - 脱氧尿核苷购自 BrdU , R oche 公 司 ; 胎牛血 清购 自 杭州 四 季 青生 物 工程 材 料 有限 公 司 , 批 号 071031; F ir st St rand cDN A Synthesis Kit 购 自 F ermentas 公 司 , 批 号 00020634; SY BR G reen PCR M aster M ix 购 自 A p plied Bio sy stems 公司 , 批号 43049155 。 CJT 型 超净 工 作台 购 自北京 昌 平长 城空 气 净化 设备 公 司 ; RCO - 3000T-5V 型 CO2 恒温培养箱购自美国 G. S. 公司 ; DM IL H C 倒置相差显 微镜购 自德国 L eica 公司 ; Y XO GO 2 型电热式蒸 汽消毒器购自山东新 华医疗器械股份有限公司 ; 400R 低 温离心 机购自德 国 H erae us 公司 ; GeneAmp 5700 T aqM AN P CR 仪购自美国 A pplied
Effects of hypaconitine on expression of mRNA of calcium regulated proteins in myocardial cells * L i Zhiy ong 1 , T an P eng 2 , Zhao H ui 3 , L i Fei 2 , Sun J ianning 2 ( 1 China M inor ity T r aditional M edical Center of M inz u Univ er s ity of China, B eij ing 100081 China; 2 . School o f Chines e P har macy o f Beij ing Univ er sity of Chinese M edicine, Bei j ing 100102 China; Abstract: Objective 3 . S chool of T CM of Cap ital M edical Univ er s ity , Bej ing 100069 , China) T o o bser ve the effects o f H ypaconitine( H A) o n mRN A ex pr essio n of calcium r eg ulated pro teins such as
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重庆医学 2011 年 9 月第 40 卷第 25 期 表1
名称 - act in 扩增片段 -act in - EP -act in - RP L 钙通道 - 1C L 钙通道 - 1C -E P L 钙通道 - 1C -R P CaM CaM-EP CaM-R P RyR 2 RyR 2 EP RyR 2 RP
有限公 司 ) 雌 雄 不 拘 , 动 物 许 可 证 号 : SCXK ( 京 ) 2002 - 0003。 HA ; ( 中国食品 药品 检定 研究 院 ) , 批号 : 200404, 纯 度大 于 或
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基金项目 : 国家科技部十五科技攻关计 划重大 项目 ( 2004BA 721A 11) ; 国 家 973 计 划资助 项目 ( 2009CB522800) 。
2547 引物序列
引物序列 5-G A G A CC T TC A A C A CC C CA G CC -3 5-A A T GT C A CG CA C G A T TT C CC -3 5-CCT CA G T GC A G A C A C A T T T GC -3 5-CCG TT A CA G CA G C A C CCC A CA -3 5-G G C A TC CTG CT T TA G CCT G A G -3 5-A CA T GC T A T CCC TCT CGT GT G A C -3 5-A CT GCT A A A G T G A CC A A C AG-3 5-T T G CA T CG C TG A A A T CT A G T-3 430 328 253 扩增片段长度 ( b p) 263
摘 要 : 目的 考察次乌头碱 ( H A) 对原代培养乳大鼠心 肌细胞 L - 钙通 道 、 钙 调蛋白 ( CaM ) 、 肌质网雷 诺定受 体 ( RyR2 ) mR N A 表达的影响 。 方法 体外培养乳大鼠心肌细胞 , 采 用 RT- PCR 法测定 L - 钙 通道 1C 亚基 、 CaM 及 RyR2 mRN A 的表 达 。 结 果 HA 作用 15 min 时 , 60 、 120 / L 能提高心肌 细胞膜 L - 钙 1C mRN A 的表达 ( P < 0. 05) ; 30、 60 、 120 / L 能 使 CaM mRN A 的表达增高 ( P < 0. 01) ; 60、 120 / L 能提高 RyR2 mRN A 表达 ( P < 0. 05) ; 60 M / L 作用心肌细胞 5 min 时引发 L - 钙通道 1C mRN A 表达增多 ( P < 0. 05) ; 30、 60 M / L 作用 15、 60 min 时可引起 CaM mRN A 表达增多 ( P < 0. 01) 。 结论 HA ( 60 / L) 可通过增加心肌细胞 L - 钙通道 、 CaM 、 RyR2 mR N A 的表达 , 参与细胞内钙超载及心律失常的发生过程 , 在乌头类天然药物中 毒时 干预上述靶点基因改变可缓解中毒性心律失常的发生 。 关键词 : 次乌头碱 ; 心肌细胞 ; 钙调控蛋白 do i: 10. 3969/ j. issn. 1671 - 8348. 2011. 25. 022 文献标识码 : A 文章编号 : 1671 - 8348( 2011) 25 - 2546 - 03
2546
重庆医学 2011 年 9 月第 40 卷第 25 期
基础研究
次乌头碱对心肌细胞 Ca2+ 调控蛋白 m RNA 表达的影响
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李志勇 1 , 谭 鹏2 , 赵 晖3 , 李 飞2 , 孙建宁2 ( 1. 中央民族大学中国少数民族传统医学研究院, 北京 100081; 2. 北京中医药大学中药学院 , 北京 100012; 3. 首都医科大学中医药学院 , 北京 100069)