蛋白溶解度的测定

蛋白质溶解度

分析结果计算
15/75=x/1.5g=0.3gx ps%=0.3g原样中粗蛋白含量/原样中粗蛋白含量×100%
注意事项
不同样品的粒度应相同。不同样品在氢氧化钾溶液中的搅拌时间应一致。
Over 谢谢观看
试剂
a) 氢氧化钾（分析纯），无水硫酸钾、五水硫酸铜、氢氧化钠、硼酸、甲基红、溴甲酚绿、硫酸铵； b) 浓硫酸、盐酸（分析纯）、95%乙醇、蒸馏水。
仪器和设备
a) 感量为0.0001 g分析天平； b) 磁力搅拌器； c) 离心机； d) 样品粉碎机； e) 60目分析筛； f) 电炉； g) 100 mL或250 mL凯氏烧瓶； h) 凯氏蒸馏装置； i) 250 mL锥形瓶； j) 1000 mL容量瓶； k) 微量滴定管。
试样处理
称取试样1.5 g（准确至0.0002 g）置于 250 mL烧杯中，准确移入 0.042 M氢氧化钾溶液75 mL，磁力搅拌20 min，然后将试样转移至离心管中，以2700 r/min的速度离心10 min。
测定
吸取上清液 15 mL, 放入消化管中, 按照 GB/T 6432-1994凯氏定氮法测定试样中可溶性蛋白质的含量。同时，按照GB/T 6432-1994凯氏定氮法测定试样中粗蛋白质的含量。
蛋白质溶解度
在一定的氢氧化钾溶液中溶解的蛋白质质量占试样中总蛋白质量的百分数。 NSI 通常采用氮溶解指数（NSI）和蛋白通常采用氮溶解指数（NSI）和蛋白质分散指数（(PDI)来表示。质分散指数（(PDI)来表示。
原理
用一定浓度的氢氧化钾溶液提取试样中的可溶性蛋白质，在催化剂作用下用浓硫酸将提取液中可溶性蛋白质的氮转化为硫酸铵。加出试样中可溶性蛋白质含量；同时，测定原始试样中粗蛋白质含量，计算出试样的蛋白溶解度。

蛋白质的起泡性测定方法

一．蛋白质的起泡性测定方法1.配制l0ml 1%蛋白分散液（pH 8. 05的0.05mo1/L Tris-HC1缓冲液），在室温的条件下，利用高速分散机均质l min，快速转移到25m1的量筒中，，每30min记录一次泡沫体积。

每个样品重复三次，取平均值。

2.采用搅打发泡测定法[29]：将蛋清蛋白溶于pH7.0的磷酸盐缓冲溶液中，配成3%的蛋清蛋白溶液。

取200ml3%的蛋清蛋白溶液，在A-88组织捣碎匀浆机中，以8000r/min的转速打泡3min,测其泡沫体积，记录为V0，按下式计算起泡度（FAI）： FAI(%)=(V0-200/200) ×100静置30分钟后，测泡沫体积，记录为V1，按下式计算泡沫稳定性（FS）：FS(%)= (V1-200/200 )×1003.参照Hammershoj 等介绍的方法[36]。

首先将全蛋液稀释到5%（v/v），然后取100mL的稀释液，10000r/min速度搅拌1min。

记录均质停止时和停止后30min的泡沫体积与液体体积，起泡力与泡沫稳定性分别用OR与FS表示，计算公式如下：起泡性（OR）=Vf0 /Vli 2-3泡沫稳定性（FS）=Vf30/Vf0 2-4式2-3 与2-4中：Vf0—零时刻时泡沫的体积（mL）；Vli—初始阶段的液体体积（100mL）；Vf30—静置 30min后的泡沫体积。

Hammershoj, M., Qvist, K. B. Importance of hen age and egg storage time for egg albumen foaming [J]. Lebensmittel-Wissenschaft-Technologie, 2001, 34: 118–120.4.二．乳化性及乳化稳定性的测定方法用0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）配制1%的蛋白样品，取1 mL色拉油与3 mL待测溶液于均质机中均质剪切1min，分别于0min和10min时从底部取50 μL用0.1% SDS 25 mL稀释后测OD500乳化活性指数(EA I)=(2.303 × 2 × OD500)/(C × Φ ×L)乳状液稳定指数(ES)=OD500× Δt/ΔOD500式中：EAl ——每克蛋白质的乳化面积，m2/g；Φ——油相所占的分数，在本实验中油相占1/4；C——蛋白质的浓度，1%；L——比色池光径，10mm。

蛋白质在盐溶液中的溶解度曲线

蛋白质在盐溶液中的溶解度曲线
蛋白质是生物体内非常重要的有机分子，它们在细胞代谢、信号传递、免疫系统等多个生物学过程中发挥着至关重要的作用。

然而，蛋白质在盐溶液中的溶解度问题一直是制约其应用的重要因素之一。

蛋白质在盐溶液中的溶解度通常会受到多种因素的影响，其中最主要的因素之一就是盐的种类和浓度。

一些盐比如硫酸铵和硫酸钠，可以增加蛋白质的溶解度，而另一些盐比如氯化钠则会降低蛋白质的溶解度。

为了研究蛋白质在盐溶液中的溶解度变化规律，科学家们通常会制作蛋白质在不同盐浓度下的溶解度曲线。

这些曲线能够反映蛋白质在不同盐浓度下的相对溶解度，从而帮助科学家更好地理解蛋白质的化学性质和生物学特性。

通过对不同种类、不同浓度的盐对蛋白质溶解度的影响进行研究和分析，科学家们可以为蛋白质的应用和开发提供更加可靠和有效的技术支持，从而推动生物技术和医学领域的发展。

- 1 -。

豆粕蛋白溶解度和尿酶值

大豆蛋白是家禽日粮中最为重要的，也是质量最好的植物蛋白饲料，除蛋氨酸略缺乏外，其它各种氨基酸都接近理想平衡。

如同其它蛋白质饲料一样，豆粕质量受各种营养素含量的影响，如能量、蛋白质、纤维素和氨基酸等，例如普通豆粕与去皮豆粕间在以上指标方面就有很大的差别（见表1）。

去皮豆粕由于纤维素含量低而有较高的能量水平。

但是蛋白质水平高的豆粕不一定保证低纤维和高能量水平，例如某些未去皮中国豆粕的蛋白质含量可高达48%甚至50%，而仍然含有6%至7%的纤维素。

因此高蛋白水平豆粕的代谢能水平仍然可能因纤维素含量高而下降，尚未见到这些高蛋白质“高纤维素”豆粕的代谢能测定值。

但一般可以估计：在去皮豆粕纤维素正常含量3.5%以上时，每增加1%纤维素使每公斤猪饲料的代谢能下降32至42大卡，而每公斤禽饲料则下降将近60大卡。

另一方面，豆粕质量在很大程度上受加工方面问题的影响而使它的氨基酸含量和氨基酸消化率以致于能量受到影响。

本文主要讨论由加工不足或加热过度所引起的豆粕质量变异以及对生产性能的影响，同时介绍目前可行的鉴定豆粕质量的方法—尿酶活性（pH变化值）与0.2%氢氧化钾蛋白溶解度，并加以评估。

一、生大豆——抗胰蛋白酶与尿酶众所周知，豆粕必须经过适度热加工以破坏大豆中所含的数种抗营养物质。

其中对畜禽影响最大者为抗胰蛋白酶（Tripsin Inhibitor），有幸的是这些抗营养因子在加热后都会遭到破坏。

适度加热是豆粕加工的关键，因为加热不足或过度都会降低豆粕的营养价值。

抗胰蛋白酶是生大豆中的一种蛋白酶抑制物，它在消化道内能使胰蛋白酶和凝乳酶失活，从而降低蛋白质的消化率，并引起胰脏代偿性增大，由于胰酶富含硫氨基酸，因此，大量分泌消化酶可能加剧大豆蛋白含硫氨基酸的缺乏现象。

抗胰蛋白酶的测定方法很耗时也很昂贵，因此需要寻找一种简易而快速的测定方法。

生大豆中含不等量尿酶（Urease）。

尿酶本身无营养意义，但它与抗胰蛋白酶的含量接近，而且遇热变性失活的程度与抗胰蛋白酶相似（图1），因此可用尿酶活性作为豆粕加工适宜度的间接估测指标。

可溶性蛋白质质谱分析

百泰派克生物科技
可溶性蛋白质质谱分析
可溶性蛋白质质谱分析，指的是利用质谱技术对特定条件下的生物细胞或组织中的可溶性蛋白质进行分析。

百泰派克生物科技提供质谱分析可溶性蛋白质的服务。

可溶性蛋白质
蛋白溶解度是指样品中溶解到溶液中的蛋白质含量。

蛋白质的溶解度通常是蛋白质新成分开发和测试过程中首先要确定的功能性质。

在一定的溶液中，根据溶解性，可以把蛋白质分为可溶性的和非可溶性的。

对于可溶性蛋白质，没有一定的标准，因为蛋白质的生化特性非常不同，在一定条件下溶于特定溶剂中的蛋白质都可以叫可溶性蛋白质。

可溶性蛋白质质谱分析
可溶性蛋白质质谱分析，指的是利用质谱技术对特定条件下的生物细胞或组织中的可溶性蛋白质进行分析。

在提取时，注意将可溶性蛋白与非可溶性蛋白分开即可。

分析可溶性蛋白质主要是对其种类、含量和功能等进行分析。

质谱可以测定蛋白质的含量，并通过测定蛋白质的一级结构来实现蛋白质种类和功能的分析。

不同细胞中的可溶性蛋白有所不同，例如衰老细胞分泌的可溶性蛋白包括炎性细胞因子、趋化因子、生长因子和基质修饰酶，分析它们有助于了解衰老相关的分泌表型。

蛋白质溶解度的测定

法方定测的�等 elaD� �SP�度解溶质白蛋
定测的度解�间期拌搅的液溶 HOK%2.0 在制控意注应还。的较比可是应小大粒颗的们它意注要 �时本样粕饼豆大同不较比当�此因。响影有度解溶质白蛋对小大度粒�明表究研经�意注 %001�量含质白蛋粗的本样原÷质白蛋粗的中本样 g3.0=�%�度解溶质白蛋算计果结.3 。 �g3.0=X�g5.1/X=57/51�本样原的 g3.0 于当相量其�量含质白蛋的中其定测法氮定氏凯用�夜清上 lm51 取吸 �3� 。nim01 心离�r0072 速转 nim 每用�管心离至移转体液 lm05 将�后 nim02 拌搅在 �2� 。nim02 拌搅上器拌搅力磁在�液溶 HOK%2.0 的 lm57 入加�中杯烧 lm052 于粉粕饼豆大 g5.1 取称 �1� 骤步定测.2 。度纯的 HOK 意注。lm0001 至释稀中瓶解溶于置。HOKg063.3 取称。剂试准标的需所氮定氏凯为剂试它其。5.21HP�L/lom240.0 于当相�%2.0�HOK�钾化氧氢剂试.1 。熟过为则�时%07<SP�生过为�时%58>SP 当出提步一进并。系关的能性产生鸡与粕、饼豆大的理处热过了映反地切密加更度解溶白蛋 �明表验实�0991�elaD。零近接未也值 SP�理处热过的重严使即�低降值 SP�长延的间时理处热随但�%001 到达可值 SP 的粕、饼豆生。一之标指制控量质入列�SP�度解溶质白蛋将已业禽养的西巴及司公料饲些一美北。足不的上作工价评性活酶素尿述上了服克才这 �量质的粕饼豆大价评来法方的度解溶质白蛋定测液溶 HOK%2.0 用采了现发 trahenlR 。熟过是还质优是粕、饼豆大定肯能不时此但�熟过经已能可粕、饼豆大�时零近接值酶素尿当�3� �度敏灵了去失标指该时此�值负没又值酶素尿而�零了到降快很已就值酶素尿�时热加度过有没还或能可粕、饼豆大为因�量质的粕、饼豆大了害损理处热是明表定一非不并它�时零到降性活酶素尿�2� �关有降下能性产生的鸡与定一不它�时性活酶素尿的平水底在�1� 。题问本基个三在存会时粕、饼豆大的度过热加价评�AU�性活酶素尿用 �此因。果结的存储期长粕、饼豆大的足不热加为因是能可有 �时底值酶素尿粕饼豆大当。量质的粕饼豆大的理处热重严映反能不就值酶素尿 �后性活去失全完万酶素尿当出指 �1791� 等 naharbA 。义意何任有没却粕饼的度过热加对而 � 标指价评的度程合适至热加为作能只性活酶素尿出指等 nuollaB�标指学化一这性活酶素尿用采多在现故。用使泛广被未而贵昂�时费其因但�粕饼豆大的度过热加定测来用可法方�LBD�酸氨赖合结料染和性活酶白蛋胰抗。法方的量质粕饼豆大价评外体的靠可、议建、速快种一求寻在直一门人来年多

浅谈凯氏定氮法测定豆粕中氢氧化钾蛋白质溶解度的不确定度评定

0.01
0.100 63
0.01
0.100 72
0.01
0.100 66
0.01
0.100 68
0.01
0.100 72
0.01
0.100 62
0.01
0.100 7
98 食品安全导刊 2021年5月 Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
Technology 科技分析与检测
浅谈凯氏定氮法测定定豆豆粕粕中中氢氢氧氧化化钾钾蛋蛋白白质质溶溶解解度度的的不不确确定定度度评评定定
□ 高高敬敬芳芳刘刘广广刘刘云云中中粮粮东东海海粮粮油油工工业业（（张张家家港港））有有限限公公司司
摘摘要要：：凯凯氏氏定定氮氮法法测测定定豆豆粕粕中中氢氢氧氧化化钾钾蛋蛋白白质溶质解溶度解，度会，受会到受不到同不因同素因的素影的响影导响致检导测致结检果测存结在果误存差在，误为了差提，为高了检提测高结果检的测可结靠果性的和可准靠确性性和，本准文确依性据，本相关文标依准据对相豆关粕标中准氢对氧豆化钾粕蛋中白氢质氧溶化解钾度蛋进白行质不确溶定解度度评进定行。不确定度评定。
（感量 0.000 1 g）；滴定管，50 mL 数显偏差表示标准不确定度为 u（c1），则 u
滴定仪（A 级）；离心机，奥豪斯 FC5714；（c1）的计算公式见式（3）。
移液管：15 mL。
1.3 数学模型粗蛋白质含量 W2 =
（V1 - V0） × c × 0.014 × K × 100 m （1）
∑ u(c1) =
n i=1
(ci - cˉ)2
n(n - 1)
= （3）
0.27 × 10-4 mol /L 式中：n-测定次数；c-每次测定的盐酸标液的结果，mol/L；cˉ 为盐酸标液检

豆粕蛋白溶解度测定方法的研究_刘桂宾

. 37 .
ＩＮＳＰＥＣＴＩＯＮＡＮＤＱＵＡＲＡＮＴＩＮＥＳＣＩＥＮＣＥ检验检疫科学
美国大豆协会提供的方法，要求ＫＯＨ溶液的浓度为０．２％，相当于０．０４２当量、ｐＨ值为１２．５。以配制１０００ｍＬ０．２％ＫＯＨ溶液为例，应称取ＫＯＨ２．３５６ｇ，但市售的分析纯的ＫＯＨ一般纯度为≥８２％，如以８２％为基准，则折算纯度后实际应该称取ＫＯＨ２．８７３ｇ，故在称量ＫＯＨ时应先对其纯度进行折算。
碱溶蛋白Ｐ１的平行试验允许误差参照粗蛋白的要求（ＳＮ／Ｔ０８００·３－１９９９）。
碱溶蛋白Ｐ及粗蛋白Ｐ均取平行试验结果的算术１
平均值作为结果，保留三位小数，最终蛋白溶解度Ｐｓ的结果保留两位小数。３结果与讨论
在测定豆粕蛋白质溶解度的过程中，有一些因素会对其测定结果产生较大影响，注意对这些关键点加以控制，可获得较好的准确度和精密度。３．１制样粒度
ＩＮＳＰＥＣＴＩＯＮＡＮＤＱＵＡＲＡＮＴＩＮＥＳＣＩＥＮＣＥ检验检疫科学
Ｖｏｌ．１７Ｎｏ．１－２２００７年第１－２期
豆粕蛋白溶解度测定方法的研究
刘桂宾张璐李元郝永忱
（秦皇岛出入境检验检疫局，河北秦皇岛，０６６００２）
摘要：［目的］摸索影响豆粕蛋白质溶解度测定中的关键因素及其控制方法，建立正确评价豆粕加工质量的测定方法。［方法］参考美国大豆协会提供的蛋白质溶解度测定方法，测定蛋白质溶解度，同时测定尿酶活性。［结果］制样粒度及其称量准确性、２％ＫＯＨ溶液浓度准确度及其放置时间、豆粕溶解时的振荡器转速、振荡时间、温度等都会影响测定结果，１０次平行测定的标准偏差为０．０６５，相对标准偏差为０．１７％。［结论］该方法精密度好，准确度高，能满足进出口检验的需要。

测定蛋白质溶解度的方法

测定蛋白质溶解度的方法
以下是 6 条关于测定蛋白质溶解度的方法：
1. 嘿，你知道吗，有一种超简单的方法，那就是盐析法呀！就好像从一堆沙子里把金子筛出来一样，把蛋白质从溶液里分离出来。

比如说，在豆浆里加点盐，就能看到一些蛋白质沉淀出来啦，这就是通过改变溶液的离子强度来测定蛋白质溶解度呢！神奇吧？
2. 哇哦，还有一种叫透析法的呢！可以把蛋白质溶液装到一个特殊的袋子里，就像把小宝贝保护起来一样。

然后放在合适的溶液中，那些杂质啊就会跑出去啦，这样不就能知道蛋白质在这个环境下的溶解度了嘛！比如做豆腐的时候，用纱布过滤不就是类似的道理嘛。

3. 嘿呀，凝胶过滤法也很不错呀！这不就像走迷宫嘛，小分子可以轻松通过，大分子蛋白质就会被留下来。

我们可以观察蛋白质在这个过程中的情况来确定它的溶解度呢。

就像拼图一样，把各个部分都搞清楚了，哈哈。

4. 不得了啦，还有超速离心法哟！让溶液在高速旋转下，蛋白质就会乖乖地分层啦！这就好像给它们来了一场刺激的比赛，谁在什么位置一清二楚，就能知道蛋白质的溶解度情况咯。

像提纯牛奶里的蛋白质不就可以用这个方法吗？
5. 嘿嘿，等电聚焦法也很厉害呀！找到蛋白质的等电点，就像给它找到一个专属的位置一样。

在这个点上，蛋白质溶解度会有特别的表现呢。

你想想，是不是很有趣呀？这不就像给它贴个标签一样准确。

6. 哇塞，荧光法也能用上呢！就好像给蛋白质装了个小灯，通过观察这个小灯的变化，就能了解溶解度啦。

比如在一些实验里，用特殊的荧光标记蛋白质，然后去观察，是不是超级酷呀！
我觉得这些方法都各有各的奇妙之处，运用不同的方法可以更准确全面地测定蛋白质溶解度呢！。

对蛋白溶解度作为鉴定豆粕

对蛋白溶解度作为鉴定豆粕过度加工指标的研究1
EVALUATION OF PROTEIN SOLUBILITY AS AN INDICATOR OF OVERPROCESSING SOYBEAN MEAL
M. Araba, N. M. Dale，佐治亚大学家禽科学系
摘要本项研究针对以豆粕的脲酶活性（UA）、橙黄 G 结合力（OGBC)以及
— 63 —
精氨酸和蛋氨酸促进了雏鸡生长。试验 5 是试图确定在本研究条件下哪一种氨基酸最具有限制性。除了含有蒸煮
0min 和 40min 豆粕的两种对照日粮之外，配制了 7 种含蒸煮 40min 豆粕的日粮，即：单独补充 0.2%L—赖氨酸、单独补充 0.2%L—精氨酸、单独补充 0.1%DL—蛋氨酸、补充其中两种、补充全部三种。
本项研究的目的就是评价以豆粕蛋白质在 0.2%氢氧化钾溶液中的溶解度作为鉴定豆粕是否加热过度而营养下降这一方法的价值。此外，本项目对含不同蛋白溶解度的豆粕日粮补充氨基酸，进行动物试验以评价补充氨基酸的效果。
材料和方法
总体设计
— 61 —
试验 1、2、3 的目的是比较各种化学分析方法及其与雏鸡生产性能的关联程度。试验 4 和 5 的目的是考察补充氨基酸以克服低蛋白溶解度豆粕抑制肉鸡生长的效果。从一家当地饲料厂选定 5 批浸提法生产的去皮豆粕。为模拟过度加热，从每批豆粕中采集少量实验材料，摊在浅铝盘（高 2.54cm）中，放进高压蒸煮器内以 121℃蒸煮不同时间。风干之后，将试验材料移出浅盘。
1原发表于《Poultry Science》69:76-83，1990
— 60 —
最常用来鉴定豆粕是否加工过度的指标是脲酶活性。脲酶水平本身对家禽营养没有什么意义，但被用来做为鉴定是否含有抗胰蛋白酶之类有毒因子的指标。然而，Abraham 等人（1971）提到，脲酶完全失活后，脲酶活性测定不能反映热处理对豆粕品质的影响程度。而且，彻底破坏豆粕的脲酶也不一定妨碍雏鸡生长（McNaughton and Reece，1980；Dale 等人，1986）。脲酶活性低至 0.01（pH 变化值）的豆粕与脲酶活性较高的豆粕相比，饲喂雏鸡的效果没有差别（De Schrijver， 1977 ）。再者，加热不足的豆粕经过长时间贮存后，其脲酶活性也会降低（DeSchrijver，1977）。

蛋白的溶解度

1 蛋白质与水的相互作用：蛋白质的水溶性
蛋白质与水之间的作用力主要是蛋白质中的肽键（偶极-偶极相互作用或氢键），或氨基酸的侧链（解离的、极性甚至非极性基团）同水分子之间发生了相互作用。

影响蛋白质水溶性的应素很多：
（1）pH>pI 时，蛋白质带负电荷，pH=pI 时，蛋白质不带电荷，pH<pI 时，蛋白质带正电荷。

溶液的pH 低于或高于蛋白质的pI 都有利于蛋白质水溶性的增加，一方面是加强了蛋白质与水分子的相互作用，另一方面蛋白质链之间的相互排斥作用。

等电沉淀。

（2）离子强度：μ=0.5∑CiZi2，Ci 表示离子强度，Zi 表示离子价数。

盐溶：当溶液中的中性盐浓度在0.5mol/L 时，可增加蛋白质的溶解性，盐作用减弱蛋白质分子之间的相互作用。

对于nacl，质量浓度为3g/100ml
KOH为2.8g/100ml
盐析：当溶液中的中性盐的浓度大于1mol/L 时，蛋白质会沉淀析出，这是盐与蛋白质竞争水分的结果。

不同盐类对蛋白质的盐析作用强弱不同。

将这种强弱顺序称为感胶离子序：
（3）非水溶剂：有些有机溶剂可引起蛋白质变性沉淀，主要是有机溶剂降低了水的介电常数，蛋白质之间的静电斥力降低。

（4）温度：温度低于40-50℃时，随温度的增大水溶性增大，当温度大于50℃，随温度的增大，水溶性降低。

根据蛋白质的溶解性对蛋白质分类：
（1）清蛋白：可溶于pH6.6 的水中，血清清蛋白，卵清蛋白，α-乳清蛋白；
（2）球蛋白：能溶于pH7 的稀碱溶液，β-乳球蛋白；
（3）醇溶蛋白：能溶于70%的乙醇，玉米醇溶蛋白；（4）谷蛋白：在上述溶剂中都不溶解，但可溶于酸（pH2）或碱（pH12）。

DB13T 812-2006 大豆及其制品蛋白质溶解度的测定

B 46DB13DB13/T 812—2006前言本标准由河北省畜牧兽医局提出。

本标准起草单位：河北农业大学、河北省饲料工业办公室、河北省饲料产品质量监督检验站。

本标准主要起草人：赵国先、王铃、师校军、米振杰、武英利、黄仁录、李艳琴。

大豆及其制品蛋白质溶解度的测定1 范围本标准规定了大豆及其制品中蛋白质溶解度测定的原理、试剂、仪器设备和测定方法。

本标准适用于饲料检测单位、饲料企业、养殖场（户）、大中专院校对大豆及其制品加工质量的检测和监控。

2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 601—2002化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T 6432—1994饲料粗蛋白测定方法3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。

蛋白质溶解度在一定的氢氧化钾溶液中溶解的蛋白质质量占试样中总蛋白质量的百分数。

通常采用氮溶解指数（NSI）和蛋白质分散指数（PDI）来表示。

4 原理用一定浓度的氢氧化钾溶液提取试样中的可溶性蛋白质，在催化剂作用下用浓硫酸将提取液中可溶性蛋白质的氮转化为硫酸铵。

加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定测出试样中可溶性蛋白质含量；同时，测定原始试样中粗蛋白质含量，计算出试样的蛋白溶解度。

5 试剂a）氢氧化钾（分析纯），无水硫酸钾、五水硫酸铜、氢氧化钠、硼酸、甲基红、溴甲酚绿、硫酸铵；b）浓硫酸、盐酸（分析纯）、95%乙醇、蒸馏水。

6 仪器和设备a) 感量为0.0001 g分析天平；b) 磁力搅拌器；c) 离心机；d) 样品粉碎机；e) 60目分析筛；f) 电炉；g) 100 ml或250 ml凯氏烧瓶；h) 凯氏蒸馏装置；i) 250 ml锥形瓶；j) 1 000 ml容量瓶；k) 微量滴定管。

饲料分析与检测实验：饲料蛋白质溶解度测定免费

实验七饲料蛋白质溶解度测定【学习目标】掌握饲料饲料蛋白质溶解度测定方法，并能测定饲料蛋白质溶解度。

一、原理本方法适用于大豆饼、粕的加热处理程度的品质检验。

抗胰蛋白酶活性方法可用来测定加热过度的大豆饼、粕，但因其费时，昂贵而未被广泛使用。

故现在多采用尿素酶活性这一化学指标，但尿素酶活性只能作为加热至适合程度的评价指标，而对加热过渡的饼、粕却没有任何意义。

尿素酶值不能反映受严重热处理的大豆饼、粕的质量。

Rinehart 发现了采用0.2%KOH 溶液测定蛋白质溶解度的方法来评价大豆饼粕的质量，可克服上述尿素酶活性评价工作上的不足。

北美一些饲料公司已将蛋白质溶解度(PS)列入质量控制指标之一。

生豆饼、粕的PS 可达到100%，但随热处理时间的延长，PS 值降低，即使严重的过热处理，PS 值也未接近零。

试验表明，蛋白溶解度更加密切的反映了过熟处理的大豆饼、粕与畜禽生产性能的关系。

并进一步提出当PS>85%时，为过生；PS<70%时，则为过熟。

尿素酶活性检测和蛋白质溶解度已成为评定豆饼、豆粕加工质量的两个重要指标。

二、操作方法（一）试剂配制1.0.2% 氢氧化钾（KOH ），相当于0.042 mol/L ，pH 12.5，称取氢氧化钾约0.2g 加水溶解，并稀释至100.0ml 。

2.其它试剂同凯氏定氮所需的试剂一致。

（1）浓硫酸分析纯,含量为98.0%，无氮；（2）混合催化剂 CuSO 4:无水Na 2SO 4=1:10，分析纯；（3）甲基红-溴甲酚绿混合指示剂 0.1%甲基红酒精溶液与0.5%溴甲酚绿酒精溶液等体积混合，保存期不超过三个月。

此混合指示剂在碱性溶液中呈蓝色，中性溶液中呈灰色，强酸性溶液中呈红色。

在硼酸吸收液中呈暗紫色，在吸收氨的硼酸溶液中呈蓝色。

（4）2.0%硼酸吸收液溶解2.0g 分析纯硼酸于100.0ml 容量瓶中，加蒸馏水至100.0ml ，摇匀备用。

（5）40.0%饱和NaOH 溶液溶解40.0g 分析纯氢氧化钠于100.0ml 容量瓶中，加蒸馏水至100.0ml ，摇匀备用。

脲酶活性&蛋白溶解度测定方法

出口大豆饼粕脲酶活性测定方法pH增值法、盐酸中和法1.适用范围本方法适用于大豆饼粕类脲酶活性的测定。

2.方法一2.1.术语脲酶活性：在规定的操作条件下，使试样中的脲酶分解尿素释放出氨基氮，以溶液pH值的变量表示。

2.2.原理概要将研细的试样与缓冲尿素溶液混合，在30℃作用30min后，测定溶液的pH值。

2.3.主要试剂和仪器2.3.1.主要试剂磷酸缓冲溶液：将3.403g KH2PO4和4.355g K2HPO4溶解并稀释至1000mL。

临用前，以强酸或强碱调节其pH至7.0，其使用期限不超过90d；缓冲的尿素溶液：溶15g尿素（NH2CONH2）于500mL磷酸缓冲溶液中。

加入5mL甲苯，用于防腐和防止霉菌生长。

按上法调节其pH至7.0。

2.3.2.仪器分析天平：感量0.1mg；研磨器：易于清理，研磨过程中不发热，并能达到要求的磨粉细度；恒温水浴：能控制于30±0.5℃；pH计：备有玻璃电极和甘汞电极，灵敏度不低于±0.02pH单位，同时附有温度补偿；试管：直径22mm，长150mm，具橡胶塞；烧杯：容量10mL；单刻度移液管：10mL；精密计时器；标准筛。

2.4.试样的制备用研磨器将约10g的样品，在不升高温度的条件下尽可能研细，使其通过60目标准筛的量不少于60％。

收集全部磨碎物于广口瓶中，小心混合并立即进行分析。

2.5.过程简述准确称取试样0.200g，放入试管内，加10mL缓冲的尿素溶液，塞好橡胶塞，混匀。

置于30±0.5℃水浴中，记下时间。

隔5min放入第二个与此相同的试管作重复试验。

另称试样0.200g，放另一试管内，加10mL磷酸缓冲溶液，塞好橡胶塞，混匀，作为空白试验。

与上管间隔5min置于同一水浴中。

在消化过程中，每隔5min将试管内容物都摇匀一次。

每个试管都在消化30min后，从水浴中取出，倒出上清液于小烧杯中。

并在从水浴中取出后恰好5min时，测定pH 值读数。

大豆分离蛋白溶解度企业标准

大豆分离蛋白溶解度企业标准《深度解析大豆分离蛋白的溶解度与企业标准》一、引言大豆分离蛋白作为一种优质植物蛋白，近年来在食品工业中的应用越来越广泛。

然而，其溶解度和企业标准却备受关注。

本文将深入探讨大豆分离蛋白的溶解度与企业标准，以期为相关行业提供一些有价值的思考和借鉴。

二、大豆分离蛋白的溶解度1. 概念和定义大豆分离蛋白的溶解度是指在一定条件下，其在水或其他溶剂中的溶解能力。

通常情况下，溶解度与溶剂、温度、pH值等因素有关。

2. 影响因素分析（1）溶剂选择：水是最常用的大豆分离蛋白溶剂，但在实际应用中，也会涉及到酸碱性溶剂的选择。

（2）温度影响：温度对大豆分离蛋白的溶解度有明显影响，通常情况下，随着温度升高，溶解度也会增加。

（3）pH值影响：大豆蛋白在不同pH值下的溶解度也会有所不同，这需要在实际应用中进行调控和探究。

3. 实际应用和挑战大豆分离蛋白在食品、保健品等领域的应用越来越广泛，但在实际运用中，其溶解度常常成为制约因素。

生产企业需要根据不同产品的特点和需求，合理调节大豆分离蛋白的溶解度，以保证最终产品的品质。

三、企业标准的重要性1. 规范生产和质量保障企业标准在大豆分离蛋白生产中起着至关重要的作用。

明确的企业标准可以规范生产过程，保障产品的质量和安全。

2. 行业认可和国际市场拥有符合标准的产品，将有助于企业在国内外市场上获得更多的认可和信任。

某些国际市场对产品的标准要求非常严格，企业标准的建立和遵循将帮助企业更好地进军国际市场。

四、结论与展望本文对大豆分离蛋白的溶解度和企业标准进行了深入探讨，从概念、影响因素、实际应用和企业标准的重要性等角度进行了分析。

针对大豆分离蛋白在生产过程中可能遇到的问题和挑战，建议企业应该加强对溶解度的研究和调控，同时积极树立和遵循企业标准，以提高产品质量和拓展市场。

期待未来，大豆分离蛋白在各行业的应用会因为对溶解度和企业标准的认真研究和把控而更上一层楼。

五、个人观点大豆分离蛋白的溶解度和企业标准，是未来发展中需要不断探索和完善的方向。

蛋白质的稳定性测定方法

蛋白质的稳定性测定方法
蛋白质的稳定性测定方法有以下几种常用方法：
1. 热稳定性测定：通过暴露蛋白质溶液在高温下的变性和聚集程度来评估蛋白质的热稳定性。

常见的方法包括热失活曲线分析和差示扫描量热法（DSC）。

2. 酸碱稳定性测定：通过在不同pH条件下检测蛋白质的溶解度、聚集和变性情况来评估蛋白质的酸碱稳定性。

常见的方法包括pH扫描和酸碱失活曲线分析。

3. 溶解度测定：通过测定蛋白质在特定条件下的溶解度来评估蛋白质的溶解稳定性。

可以通过高速离心、过滤或浓缩蛋白质样品来测定。

4. 表面和界面性质测定：通过在气液界面或液液界面测定蛋白质的表面活性、表面张力、界面吸附等来评估蛋白质的界面稳定性。

5. 结构性质测定：通过核磁共振（NMR）、X射线晶体学和质谱等技术来研究蛋白质的结构，包括二级结构、三级结构、四级结构等，从而评估蛋白质的结构稳定性。

需要根据具体实验目的和条件选择适当的方法进行蛋白质稳定性的测定。

豆粕氢氧化钾蛋白质溶解度测定影响因素的研究

豆粕氢氧化钾蛋白质溶解度测定影响因素的研究李铭明; 王孟亚; 孙浩; 黄昊; 陈曦【期刊名称】《《化工管理》》【年(卷),期】2019(000)032【总页数】2页(P40-41)【关键词】豆粕; 氢氧化钾蛋白质溶解度; 影响因素【作者】李铭明; 王孟亚; 孙浩; 黄昊; 陈曦【作者单位】中储粮镇江粮油有限公司江苏镇江 212001【正文语种】中文豆粕营养价值主要体现在其丰富的蛋白质含量上，这些蛋白质能溶于0.2%浓度的氢氧化钾溶液[1]，能够被溶解是蛋白质加工过程生熟程度的一个重要特性，因此对豆粕的氢氧化钾蛋溶解度进行测定具有重要意义。

对蛋白质的测定主要分为两大类：（1）利用蛋白质的共性，如含氮量、折射率等[2]。

（2）利用蛋白质中碱性基团、特定的氨基酸等进行测定。

常见的方法有凯氏定氮法、酚试剂法、光度比色法等，目前国际上最常采用的是凯氏定氮法，其优点在于测定方法最为简便、有机氮的测定最准确。

本文也将采用企业测定蛋白质含量的标准方法——凯氏定氮法，研究分析影响豆粕氢氧化钾溶解度测定的影响因素。

1 测定材料及测定方法1.1 试验材料豆粕样品（美国大豆）1.2 仪器与设备全自动凯氏定氮仪、保水磨、20目筛、40目筛、60目筛、80目筛、磁力搅拌器、电子天平（精度0.0001 g）、离心机、98%浓硫酸、40%氢氧化钠、250 mL烧杯、50 mL离心管。

1.3 测定方法粗蛋白质的测定：参照GB/T 6432-2018氢氧化钾蛋白溶解度的测定：参照GB/T19541-2017GB/T19541-2017的要求在室温25±5℃温度条件下进行，因此本文的实验研究将遵循这一要求，在此基础上，探索不同条件对于大豆粕氢氧化钾溶解度测定的影响[3]。

1.3.1 不同转速条件下对豆粕氢氧化钾蛋白溶解度指标进行测定[4]取1g测定样置于250mL烧杯中，加入50 mL0.2%氢氧化钾溶液，在温度25℃、其他条件不变的情况下，分别采用200 r/min.、300 r/min.、400 r/min.、500r/min.、600 r/min.、700 r/min.、800 r/min.、900 r/min的转速，在磁力搅拌器上搅拌20 min，对豆粕的氢氧化钾蛋白溶解度指标进行检测。