纯化水中需氧菌总数检测方法

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纯化水微生物限度检查记录表

纯化水微生物限度检查记录
检验日期
年月日
报告日期
年月日
检验依据《中国药典》2015 年版二部、四部通则微生物检查法
需氧菌总数检查：取纯化水 50ml，用薄膜过滤器（0.45±0.02um，50MM 直径）过滤，减
压抽干。取出滤膜，将滤膜放入制备好的 R2A 培养基平板上，在 30～35℃培养 3 天，计数。
需氧菌阴性对照：取 50ml 已灭菌的纯化水按供试品同法处理，作为阴性对照。
R2A 琼脂培养基配制批号
培养温度
放入培养时间年月日时培养 / 时间
取出培养时间年月日时
取样点编号
累计培养时间 h
阴性对照
1 24h
2
□长菌 □未长菌
1 48h
2
□长菌 □未长菌
1 72h
2 菌数报告 CFU/ml
标准规定
项目结论
检验人：
□符合规定
□不符合规定
□长菌 □未长菌
/
需氧菌总数每 1ml 不得过 100CFU。
□符合规 □符合规 □符合规 □符合规 □符合规
定
定
定
定
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
定
/
□不符合 □不符合 □不符合 □不符合 □不符合
规定
规定
规定
规定
规定
复核人：

水质化学需氧量(COD)怎么检测

水质化学需氧量（COD）怎么检测试剂选用区分点1.预制试剂预制管检测，无需自备硫酸等药剂、烧杯等器皿2.固体试剂比色皿检测，需自备硫酸、烧杯、试剂瓶等耗材，用以配制试剂COD预制试剂操作流程01）依据水样预判值选择合适量程的试剂；02）依据水样数量准备试剂管，一支作为空白，其余作为水样管；03）空白管加入2mL纯水，水样管加入2mL水样04）消解仪165℃消解20分钟05）冷却后上机检测COD固体试剂操作流程01）水样预判值选择合适量程的试剂；02）依据水样数量准备试剂管，一支作为空白，其余作为水样管；03）空白管加入2.5mL纯水，水样管加入2.5mL水样04）依次加入A、B试剂05）消解仪165℃消解15分钟06）冷却后再于每支试管中加入2.5mL纯水07）冷却后转入30mm玻璃比色皿中08）上机检测仪器使用注意事项1.请认真阅读手册，在把握了仪器的各个功能及注意事项后，再进行操作.2.假如电源线已损坏（导线外露或断裂）请勿再使用，以免引起触电.3.在仪器进行比色时，勿将比色溶液溢漏到仪器中，以防导致光路系统的腐蚀损坏.4.用比色管比色时，需将比色管外壁的水渍及残留溶液擦拭干净.5.在试验过程中必需做好个人防护工作（试验服、手套、眼罩、口罩），使用硫酸时注意个人安全.6.在对水样进行分析时，水样中加入试剂后必需混匀再进行比色.7.仪器中配带的试剂，应在干燥、密封、避光、低温条件下储存.8.使用结束后，用于比色的废液，应集中储存并处理，不要任意搁置或倾倒.9.使用过程中比色溶液假如沾到皮肤上或衣裳上，立刻用大量清水清洗，以免对皮肤造成损害仪器使用安全警示1.请勿在高湿、高温或灰尘多的地方存放或工作，以免造成仪器硬件故障.2.仪器及设备不具备防水功能，应防止被水淋湿等情况发生.3.避开猛烈碰撞、震动，否则可能导致仪器光路损坏.在搬运过程中建议使用仪器原包装.4.禁止仪器在有腐蚀性气体的空间中工作，以免造成电路系统的损坏.5.请勿在湿手时拔插仪器电源线，以防止触电.6.请勿在强光直射的情况下使用该仪器.7.请勿擅自拆开仪器进行维护和修理或更改其内部结构，以防事故及故障的发生.8.仪器使用过程中，假如显现硬件异常情况软件操作故障时，应尽快与厂家技术部门联系.9.请勿擅自对仪器进行维护和修理、拆装.10.当水或其他液体不慎进入仪器时，请立刻关闭仪器，并将电源插头从插座中拔出.。

纯化水微生物限度检查方法验证方案

纯化水微生物限度检查方法验证方案产品名称：纯化水验证类型：验证部门：质量部目录1、概述2、验证目的3、适用范围4、验证小组成员及职责5、验证项目6、验证内容7、验证总结论8、偏差处理情况9、再验证周期10、结果审批及综合评价11、参考文献验证方案签字表1、概述纯化水作为我公司的一种用于产品生产的原辅料及清洁用水，为保证产品的质量，应对纯化水进行微生物限度检查方法的确认，参照《中国药典》2015年版二部纯化水微生物限度的要求，重新建立微生物限度检查的试验，以确认改产品在该试验条件下所采用的方法适合于该产品的微生物限度检查。

2、验证目的按照《中国药典》2015年版规定对纯化水微生物限度检查采用薄膜过滤法进行试验，在现有检验程序、检测条件及培养条件下，通过试验以确认所采用的方法适合于纯化水需氧菌总数的测定；3、适用范围本验证方案适用于本公司 QC 实验室，对纯化水微生物限度检查方法（薄膜过滤法）适用性的验证。

4、验证小组成员及职责5、验证项目及描述5.1项目：需氧菌总数检查方法的验证5.2 描述取三个不同批号的纯化水用薄膜过滤法检测微生物限度，通过比较试验菌的恢复生长结果评价整个检验方法的准确性、有效性，通过计算回收率来判断检查方法是否有影响，通过验证来确认薄膜过滤法适合于纯化水需氧菌总数的测定。

三次试验中，稀释剂对照回收率应在 50%～200%范围内，试验组回收率也应在 50%～200%范围内。

进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证时，所有的平皿和稀释剂都应该严格灭菌消毒、灭菌，确保对试验结果没有影响。

6、验证内容：6.1 人员培训、仪器设备、培养基、菌种及相关文件的确认6.1.1人员培训6.1.2验证用仪器设备的确认6.1.3相关文件确认6.1.4 试验用菌株的确认6.1.5培养基及冲洗液的确认6.2试验步骤6.2.1.菌液的制备取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌工作用菌种挑取少量培养物接种至10ml胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24小时。

纯化水检验操作规程

纯化水检验操作规程《纯化水检验操作规程》一、检验目的纯化水是在工业、实验室和医疗等领域中广泛使用的一种水质。

为了确保纯化水符合相关要求，需要进行定期检验。

本规程旨在规范纯化水检验操作，确保检验结果准确可靠。

二、检验仪器与设备1. 电导率计2. pH计3. 紫外可见分光光度计4. 各类试剂及耗材5. 符合纯化水检验所需的其他仪器与设备三、检验项目与方法1. 电导率检验：使用电导率计测量纯化水的电导率，确保其在规定范围内（通常为18.2 MΩ/cm）。

2. pH值检验：使用pH计测量纯化水的pH值，确保其在规定范围内（通常为6.5-8.5）。

3. TOC检验：使用紫外可见分光光度计测量纯化水中的总有机碳含量，确保其在规定范围内。

4. 其他检验项目：根据具体需求，可以进行微生物检验、有害物质检验等。

四、样品采集与处理1. 样品采集：从纯化水系统中取样，并尽量避免样品受到外界污染。

2. 样品处理：需要根据检验项目的需要，进行必要的预处理，确保检验结果准确可靠。

五、质量控制1. 日常质量控制：定期对检验仪器进行校准和验证，确保其准确性和可靠性。

2. 质量评价：对检验结果进行定性和定量评价，确保检验结果符合要求。

六、记录与报告1. 记录：对每次检验的操作过程、结果和质量控制情况进行详细记录。

2. 报告：根据实际需要，出具检验报告，并及时通知相关部门。

七、安全操作1. 全程佩戴实验室防护用具，避免接触有害物质。

2. 操作过程中注意安全，避免事故发生。

通过执行上述规程，可以确保纯化水的检验过程准确可靠，为生产和实验提供稳定的水质保障。

纯化水需氧菌总数计数用培养基适用性检查验证方案

纯化水需氧菌总数计数用培养基适用性检查验证方案纯化水需要氧菌总数计数，是用来检查水中的氧需求微生物的数量。

这项检测可以确认水样品的纯度和卫生质量，以确保水可以安全使用。

本文将介绍一种用于验证纯化水需氧菌总数计数用培养基的适用性的方法，包括准备培养基、验证培养基的选择以及验证培养基性能的实验方案。

1.准备培养基首先，需要选择适用于需氧菌的培养基。

通常使用含有可溶性碳源和其他适当营养物质的培养基。

常用的培养基有碳水化合物培养基、富含氨基酸的培养基等。

可以根据具体需求来选择合适的培养基。

2.培养基选择验证为了验证培养基的选择是否适用于需氧菌的计数，可以进行以下实验验证。

2.1.培养基对需氧菌的支持能力验证：将需氧菌接种在待验证的培养基上，并进行恒温（通常在30-37°C 之间）和恒氧（使用压力式培养器或其他适当方法）条件下的培养。

培养一段时间（通常为24-48小时），观察生长情况。

如果培养基能够支持需氧菌的生长并产生可见的生长，说明培养基是适合用于需氧菌计数的。

2.2.培养基对其他微生物的选择性验证：将其他非需氧菌或其他微生物接种在待验证的培养基上，并进行相同的培养条件下的培养。

观察生长情况，如果其他微生物能够在该培养基上生长，说明培养基存在选择性差异性，可能不适用于需氧菌计数。

3.验证培养基性能实验方案在验证培养基适用性之后，可以进行以下实验方案来验证培养基性能。

3.1.验证培养基的灵敏度：根据纯化水需氧菌总数预期浓度的范围，使用不同的稀释比例将水样接种在培养基上。

根据菌落形成情况和数量，可以确定培养基的灵敏度。

通常，预期浓度越高，菌落数量越多。

3.2.验证培养基的线性范围：在一定的时间内，使用不同浓度的需氧菌接种培养基，观察菌落数量和接种浓度的关系。

如果菌落数量和接种浓度呈线性关系，则说明培养基的线性范围较好。

3.3.验证培养基的重复性：使用相同浓度的需氧菌接种培养基的多个平行样品，进行培养。

纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案--2015年版药典-上上2018年

纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案--2015年版药典-上上2018年纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案下表用于记录修订/变更主要内容及历史1・概述2.验证目的和范围3.组织及职责4.验证进度计划表5.验证所需要的仪器设备的确认确认6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的7.验证项目和验证方法7. 1试验菌株7.2菌液制备7・3培养基适用性检查7. 4计数方法适用性试验（薄膜过滤法）&偏差与漏项控制9.验证报告会审第 4 页共16 页制药有限公司制药有限公司第5 页共16 页1. 概述我公司自制纯化水微生物限度检查项目为需氧菌总数检查。

参照《中国药典》2015 版四部附录1105：微生物计数法的规定，须对纯化水检查所用的R2A 培养基进行适用性试验。

通过适用性试验以确认所采用的培养基适用于纯化水的需氧菌检查。

本验证方案通过试验菌株的回收率测试，验证R2A琼脂培养基是否适用于本品的需氧菌总数检查。

2.验证目的和范围验证纯化水的需氧菌检查所用R2A 培养基的适用性，对其有效性进行评价，保证检验结果的可靠性。

本验证方案采用1批按GMF要求组织生产的纯化水，并进行R2A培养基适用性检查。

3.组织及职责3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。

验证方案实施完成后，由QC组负责汇总需氧菌检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。

3.2验证方案的培训验证方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。

3.3验证方案实施过程中的变更和偏差验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。

3.4验证工作小组成员表4.验证进度计划表本次R2A培养基的适用性试验的计划安排时间是2015年8月至2015年9月。

5.验证所需要的仪器设备的确认主要检验仪器设备确认表检查人/ 日期复核人/日期：6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认6.1.试验菌种检查表检查人/ 日期复核人/日期：6.2试验所需的培养基检查检查人/ 日期复核人/日期：6.3试剂检查人/ 日期复核人/日期：64试剂及培养基配制pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液（冲洗液）：称取pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。

纯化水微生物限度检查标准操作规程

纯化水微生物限度检查标准操作规程1目的规定纯化水微生物限度检查操作。

2适用范围本文件适用于纯化水微生物限度检查操作。

3职责微生物限度检查操作人员。

4微生物限度检查方法纯化水采用薄膜过滤法进行检查。

滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm。

5内容5.1设备洁净工作台、恒温培养箱（30~35℃）、恒温水浴锅、电热干燥箱（250~300℃）、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果检查并应定期请有关部门检定）。

5.2仪器及器皿5.2.1薄膜过滤器、放大镜、显微镜。

5.2.2玻璃器皿：蓝盖试剂瓶（250ml）、培养皿（90mm）、吸管（l0ml分度0.l）、载玻片、盖玻片。

玻璃器皿用前应洗涤干净无残留抗菌物质。

吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管桶内或用牛皮纸包好。

玻璃器皿，均于高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干备用。

5.3用具5.3.1大、小橡皮胶头（放于干净带盖的容器中，并应定期用75%乙醇溶液浸泡）。

纯化水微生物限度检查标准操作规程5.3.2无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。

也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。

5.3.3酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、试管架、无菌滤杯、无菌滤膜、打火机、记号笔、接种环、灭菌抹布等。

5.4消毒液5.4.10.1%苯扎溴铵溶液（供洗手、擦拭操作台面用）。

5.4.275%乙醇溶液5.4.33~5%来苏尔溶液5.5培养基R2A琼脂培养基5.5.1灭菌前后应对培养基的pH值进行校验。

5.5.2配制的培养基不应有沉淀，如有沉淀，应于溶化后趁热过滤灭菌后使用。

5.5.3培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。

包装时，塞子必须塞紧以免松动或脱落造成染菌。

5.5.4培养基配制后应在2h内灭菌，避免细菌繁殖。

5.5.5灭菌后的培养基在2~8℃处保存备用，放置时间不能过长，以免水分散失及染菌。

已熔化的培养基应一次用完，开启后不宜再用。

纯化水检验操作规程

c)测定步骤
取两只25ml纳氏比色管放于试管架上，用100ml量筒量取本品100ml于100ml烧杯中，用20m量筒量取19ml水加入该烧杯，于电炉上加热使蒸发至20ml，放冷，倒入第一只比色管，用1ml移液管量取铅标准使用液1ml于第二只比色管中，用量筒量取19ml水再加入该管，用2ml移液管分别量取醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml加入两比色管中，用滴管加水至25ml刻度线，用2ml移液管分别量取硫代乙酰胺试液2ml加入两比色管中，摇匀，放置2分钟后，置白纸上观察两管颜色。
取上述溶液，照总有机碳分析仪标准操作规程操作，测定完后打印出图谱并注明页码和测定人。响应系数应介于85%～115%之间，蔗糖对照品溶液3次的TOC值的相对标准偏差（RSD）应不大于5.0%。
c)测定步骤：
用50ml量筒量取50ml本品置于50ml烧杯中，用2ml移液管量取碱性碘化汞钾试液2ml加入其中，放置15分钟，如显色，另取一50ml烧杯，加1.5ml氯化铵溶液，48ml无氨水（灭菌注射用水）与碱性碘化汞钾试液2ml制成对照液，颜色比较。
d)结果判定：
样品溶液的颜色比对照溶液的颜色浅（≤0.00003%），即为合格。
1.1.不挥发物
a)仪器及用具
100ml量筒、水浴锅、电热干燥箱、蒸发皿、干燥器、电子天平、坩埚钳
b)实验前准备：
蒸发皿使用前用蒸馏水清洗干净、放在105℃±2℃的烘箱中烘干2小时，放在干燥器内冷却至室温称重，再次烘干，冷却，再称量，直至恒重。每次烘干时间不少于1小时连续两次称量的重量差不超过0.3mg视为恒重，放在干燥器内备用。称量蒸发皿时要求精确到0.0001g。
1.目的
为QC检验人员提供检验依据。
2.适用范围
适用于纯化水的检验操作。

中国药典2020版二部纯化水微生物检查

中国药典2020版二部纯化水微生物检查【原创实用版】目录1.概述2.中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的标准3.微生物检查的方法4.微生物检查的注意事项5.结论正文1.概述纯化水是制药工业中常用的一种水质，其微生物质量对于药品的质量和安全性至关重要。

为了保证纯化水的微生物质量，我国制定了一系列的标准和方法。

本文将介绍中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的相关内容。

2.中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的标准中国药典 2020 版二部对于纯化水的微生物检查有严格的标准。

其中，纯化水的微生物限度要求如下：- 细菌总数：≤10cfu/ml- 霉菌和酵母菌：≤1cfu/ml- 细菌内毒素：≤0.25EU/ml3.微生物检查的方法微生物检查通常包括以下几个步骤：- 采样：在纯化水的生产过程中随机采样，保证样品具有代表性。

- 培养：将样品在适当的培养基中进行培养，以便微生物生长和繁殖。

- 计数：在适当的时间点对培养基中的微生物进行计数，以了解样品中微生物的数量。

- 鉴定：通过显微镜观察和生化试验等方法，对微生物进行鉴定，以确定其种类。

4.微生物检查的注意事项在进行纯化水微生物检查时，应注意以下几点：- 采样时应保证样品的无菌性，避免样品被污染。

- 选择适当的培养基和培养条件，以保证微生物的生长和繁殖。

- 在进行微生物计数时，要保证计数方法的准确性和精度。

- 定期对纯化水微生物检查的设备和方法进行验证，以确保检查结果的可靠性。

5.结论通过对中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的研究，我们可以了解到，我国对于纯化水的微生物质量有着严格的要求。

微生物检查的方法和注意事项也需要我们在实际操作中严格遵守，以保证药品的质量和安全性。

纯化水检验

十、微生物限度检查法
1.标准要求：需氧菌总数＜50 cfu/ ml。
2.操作方法：取本品2 ml，经薄膜过滤法处理，采用R2A琼脂培养基，30~35℃培养不少于5天。 3.原理：将适当孔径的滤膜放入滤器，过滤样品，由于滤膜的作用而将微生物保留在膜的表面上。然后，将滤膜放在培养基上
培养，营养物和代谢物通过滤膜的微孔进行交换，在滤膜表面
九、电导率检查
1.标准要求：25℃时，＜5.1us/cm 2.操作方法：将电导率仪电极棒放入被测水样，读数
3.原理：在两金属间施加一定的电压，在电场的作用下，溶液中
的阴阳离子便向与本身极性相反的金属板方向移动并传递电子。 4.注意事项： A、电极棒易破，应轻拿轻放。 B、长久不用的电极应泡在乙醇溶液中浸泡半小时。
4.注意事项： A、煮沸前先放入玻珠。
B、ห้องสมุดไป่ตู้沸时控制电炉温度。 C、建议冷却后观察(离开加热器)。
七、不挥发物
1.标准要求：遗留残渣≤ 1mg
2.操作方法：取本品100ml，置105℃恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重。 3.原理：水中含有挥发物与不挥发物，当水浴时，挥发物将在加热时随水蒸汽挥发，剩余不挥发物留在蒸发皿中。
4.注意事项：
A、碱性碘化汞钾试液取上清液使用 B、使用无氨水
六、易氧化物
1.标准要求：粉红色不得完全消失
2.操作方法：取本品100ml，加稀硫酸10ml，煮沸后，加高锰酸钾滴定液 (0.02mol/L)0.10ml，再煮沸10分钟，粉红色不
得完全消失。
3.原理：高锰酸钾(粉红色)氧化性强，极易被氧化物氧化，若含易氧化物时，高锰酸钾在稀酸的条件下被分解，则粉红色退色。

水样化学需氧量的测定方法

水样化学需氧量的测定方法水样化学需氧量（Chemical Oxygen Demand, COD）是指在酸性条件下，水中可被氧化成二氧化碳和水的有机物质的总量。

COD是评价水体有机污染程度的重要指标，其测定方法有多种。

下面将介绍几种常用的COD测定方法。

1. 全氧消耗法（Dichromate Method）全氧消耗法是目前最常用的COD测定方法之一、该方法将水样与过量的含有硫酸和铬酸钾的消耗溶液进行加热反应，在溶液中发生的化学反应将有机物氧化为二氧化碳和水。

再用铁铵盐作为指示剂，溶液由橙色转变为绿色。

根据溶液中氧化的有机物质量与溶液中消耗的铬的量之间的关系，计算出水样的COD浓度。

2. 过硫酸盐降解法（Potassium Peroxymonosulfate Method）过硫酸盐降解法是一种在酸性条件下进行水样COD测定的新方法。

该方法将水样与过硫酸钠溶液进行反应，过硫酸盐通过自身降解产生高活性自由基，进而氧化水样中的有机物质。

再用指示剂测算氧化过程中释放的氧气量，根据氧气量反推出水样中的COD浓度。

3. 氧化还原电位滴定法（Potentiometric Titration）氧化还原电位滴定法是一种通过滴定对水样中的COD进行测定的方法。

该方法首先将水样中有机物通过强氧化剂氧化成CO2，然后用还原剂还原回等量氧化剂。

氧化还原反应过程中发生的电位变化被电位滴定仪连续监测，根据滴定曲线寻找反应终点，计算出水样的COD浓度。

4. 光度法（Spectrophotometric Method）光度法是一种通过测定水样中的一些物质对特定波长的光线的吸收能力，间接测定COD浓度的方法。

该方法根据水样中存在的有机物质会在特定条件下与试剂反应生成有色化合物，然后使用分光光度计测定产生的有色产物的吸收值，并与标准曲线对照计算出水样的COD浓度。

以上所介绍的是常用的几种COD测定方法，每种方法都有其适用的情况，根据实际需要选择合适的方法进行测定。

纯化水微生物限度检查方法

纯化水微生物限度检查方法1. 纯化水微生物限度检查方法纯化水是指经过特殊处理后去除了多种杂质和微生物的水，主要用于实验室、制药、电子工业等领域。

为确保纯化水的质量，需要进行微生物限度检查。

以下为纯化水微生物限度检查方法及其详细描述。

2. 样品采集要选择好样品采集点。

在采集前要将取样的操作员的手洗净，然后用70%的酒精或其他消毒剂在取样点上喷洒并擦拭，等待其干燥。

样品可以用无菌的容器，如无菌烧杯或无菌注射器采集。

3. 检查项目常规情况下，对于纯化水的微生物限度检查主要包括大肠杆菌、菌落总数和霉菌的检测。

4. 大肠杆菌检测大肠杆菌是一种重要的致病菌，其检测可以反映样品是否受到粪便污染。

根据GMP规定，1毫升纯化水中的大肠杆菌不应超过10个。

5. 菌落总数检测菌落总数是指在一定条件下，菌落形成的总数。

对纯化水进行菌落总数检测，可以评估其细菌含量及其污染情况。

普遍认为，1毫升纯化水中的细菌菌落总数不应超过100CFU （菌落形成单位）。

6. 霉菌检测霉菌是一种常见的微生物，常常伴随着水污染。

过多的霉菌会对人体健康造成危害。

对于纯化水，检测霉菌可以评估其存在程度和可能的污染源。

GMP规定，1毫升纯化水中的霉菌不应超过10CFU。

7. 检测方法目前，常用的检测方法有培养法、分子生物学方法和流式细胞仪法。

培养法是一种较为传统的方法，通常通过在培养基上进行菌落总数检测，可以获得较为准确的结果。

分子生物学方法则是一种新兴的技术，可以通过检测DNA、RNA或蛋白质，进行微生物的检测。

流式细胞仪则是一种高通量的技术，可以进行密集的细胞计数和分类。

8. 注意事项在进行微生物限度检查时，要特别注意以下几点。

所有的操作应当严格按照GMP要求进行，确保检测的结果准确可靠。

其次要加强检测设备的维护及保养，确保设备的准确性和稳定性。

最后需要注意的是，纯化水的质量与检测方法密切相关，应根据不同领域的需求，选择相应的检测方法和标准。

纯化水微生物限度检验记录

生产单位：水系统编号：
取样日期：检验日期：
「微生物限度」（需氧菌总数）：
1.1培养基和设备室温：℃；相对湿度：%RH
A.R2A培养基供应商：配制批号：有效期至：
B.生化培养箱型号：编号：有效期至：
C.立式蒸汽灭菌器型号：编号：有效期至：
D.净化工作台型号：编号：
E.集菌仪型号：编号：
F.滤膜孔径：直径：
1.2供试液的制备
取纯化水10ml，加至50ml已灭菌的纯化水中，混匀，用薄膜过滤器（0.45±0.02um，50MM直径）过滤，减压抽干。

1.3需氧菌总数检查
1.3.1需氧菌总数：取出滤膜，将滤膜放入制备好的R2A培养基平板上，在30～35℃培养5天，计数。

1.3.3阴性对照
1.3.3.1需氧菌阴性对照：取50ml已灭菌的纯化水按供试品同法处理，作为阴性对照。

1.4结果记录
1.4.1需氧菌培养
检验者/日期：校对者/日期：
审核结论：该检验记录原始、真实，内容完整、齐全，书写清晰，所有检测项目全部符合规定。

□是□否审核者/日期：。

纯化水需氧菌总数计数方法的验证2015

目录一、引言1、概述2、验证的目的二、验证方法合格标准三、主要材料确认1、仪器设备确认2、辅助材料确认3、人员确认4、商品培养基及灭菌培养基确认5、菌种及菌液的制备四、样品制备1、稀释液2、供试液制备3、操作方法五、方法验证1、需氧菌总数的计数方法验证2、计算菌回收率公式六、验证结果及评价七、再验证周期八、验证结论批准一、引言1、概述：根据《中国药典》2015年版三部通则“1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”（以下简称《药典》）的要求，对内控标准中有“微生物限度”检查项的产品进行该项验证。

根据《中国药典》2015年版三部纯化水进行方法学确认。

2、验证目的：确保药品微生物限度检查实验的准确性，在建立药品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌总数计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该样品的需氧菌总数的测定。

二、验证方法合格标准1.前提条件：培养基适用性实验应符合规定，即：被检R2A培养基上菌落平均数与对照培养基上菌落平均数比值应为0.5~2，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。

2.计数方法适用性试验：在3次独立的平行试验中，若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值与菌液对照组的平均菌落数的比值）均在0.5～2范围内，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的需氧菌总数。

三、主要材料确认1、仪器、设备确认检查结果：检查人：复核人：日期：2、辅助材料确认2.1移液器、接种环、酒精灯、记号笔、酒精棉球、试管架、试管、玻璃平皿、止血钳等2.2需灭菌物品见《微生物限度检查法验证记录》2.3一次性无菌用具见下表检查结果：检查人：复核人：日期：3、人员确认化验员经设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，考核合格后上岗。

4、商品培养基及灭菌培养基4.1 所用培养基均不得有结块、吸潮、异味、颜色发生改变等现象。

培养基检查结果，如下检查结果：检查人：复核人：日期：4.2已灭菌培养基的检查结果及结论见《微生物限度检查法验证记录》。

纯化水中需氧菌总数检测方法

纯化水微生物限度检测计数方法适用性试验1.供试液制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。

供试液制备若需加温时，应均勻加热，且温度不应超过45#C。

供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。

常用的供试液制备方法如下。

如果下列供试液制备方法经确认均不适用，应建立其他适宜的方法。

(1)水溶性供试品取供试品，用PH7.0无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液，或PH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:10供试液。

若需要，调节供试液pH值至6〜8。

必要时，用同一稀释液将供试液进一步1 0倍系列稀释。

水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。

2.接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。

所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。

为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。

(1)试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混勻，使每lm l供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。

(2 )供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。

(3)菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加人试验菌液并进行微生物回收试验。

若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试%液进行进一步的处理。

如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加人试验菌悬液进行方法适用性试验。

供试品检查检验量即一次试验所用的供试品量(g、m l或cm2)。

一般应随机抽取不少于2个最小包装的供试品，混合，取规定量供试品进行检验。

除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml;膜剂为100cm2;贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。

检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂还不得少于4片。

纯化水系统微生物(需氧菌总数)数据如何分析

纯化水系统微生物（需氧菌总数）数据如何分析前段时间，对纯化水系统的电导率数据如何分析，进行描述和讨论；之后，就剩下对纯化水中微生物（需氧菌总数）数据怎么分析了。

而纯化水系统的微生物控制又是十分关键的，应当如何分析呢？以下，是我的一些认识，或有不对，还是抛砖引玉吧。

希望得到大家的批评指正。

首先，微生物数，从原理上，其是泊松分布，因为其是在单位时间/空间/重量内微生物的个数，所以，其应当是泊松分布。

其次，2015版《中国药典》四部的第386页“样品中微生物定量检验方法的验证”中，明确指出菌落数服从泊松分布。

“微生物定量检验一般都涉及菌落计数。

对计数结果进行数据处理时通常需要使用统计的方法。

由于菌落计数服从泊松分布，因此采用泊松分布的统计方法对计数结果进行数据处理优于采用正态分布的统计方法。

检验者往往习惯采用正态分布的统计方法，因此也可以通过对数转换或加1后开方的方法将原始数据转换为正态分布数据后再进行统计分析。

两种统计方法都适用于微生物数据的统计分析。

”影响微生物检测结果的因素很多，所以，其误差较大；而出现异常结果时，查找问题时，也将更加困难，需要的专业知识也更全面，细节要求也更多，对整个检测体系要求较高，这一点，可以从2015版《中国药典》附录后，对微生物检测的要求之多，如下，可见一斑（第386页至第398页）。

9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则9202 非无菌产品微生物限度检查指导原则9023 药品微生物实验室质量管理指导原则9204 微生物鉴定指导原则9205 药品洁净实验室监测和控制指导原则第三，微生物数据，具体分析时，一定要原始数据，不能是最后的报告数，因为报告数是以每ml/g计算的，这样说，不易理解，举例说明如下：在马逢时主编的“六西格玛管理统计指南”中，对泊松分布的性质，是这样定义的，“从泊松分布的概念出发还可以看出下列性质，这就是均值λ的“可分性”，如果每罐稻米中的稗子数服从均值λ为6的泊松分布，那么很容易想到，如果以半罐作为一“小罐”，每小罐稻米中的稗子数应服从均值λ为3的泊松分布；若1000平米布的瑕疵点数的分布是λ＝25，瑕疵点数的分布是P(25),4平米可以缝制1套工作服，每套工作服的瑕疵点数的分布就应该是P(0.1)。

纯化水需氧菌总数计数用培养基适用性检查验证方案

纯化⽔需氧菌总数计数⽤培养基适⽤性检查验证⽅案1. 概述:培养基是微⽣物试验的基础，直接影响微⽣物试验结果。

适宜的培养基制备法、贮藏条件和质量控制是提供优质培养基的保证。

供试品微⽣物限度检查中所使⽤的培养基应进⾏适⽤性检查。

2. 验证⽬的：本次验证的⽬的是确认纯化⽔微⽣物限度检查中需氧菌总数计数⽤⽤的R2A 琼脂培养基的质量，以及其制备程序、保存条件等是否满⾜微⽣物限度检查⽤要求。

3. 验证依据：《中国药典》2015年版四部“⾮⽆菌产品微⽣物限度检查：微⽣物计数法”、“《中国药典》2015年版⼆部纯化⽔质量标准”。

4. 验证项⽬：R2A琼脂培养基的适⽤性检查。

5. 适⽤围：成品培养基、由脱⽔培养基或按处配制的培养基均应进⾏培养基适⽤性检查。

6. 验证期：除另有规定外，在实验室中，若采⽤已验证的配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同⼀批脱⽔培养基的适⽤性检查试验可以只进⾏⼀次。

如果培养基的制备过程未经验证，那么每⼀灭菌批培养基均要进⾏适⽤性检查试验。

7.验证⼩组⼈员及职责:7.2验证⼈员职责及要求7.2.1按验证案及相关⽂件实施验证。

7.2.2认真观察并做好验证原始记录。

7.2.3对实施验证的结果负责。

7.3验证中各部门的职责7.3.1验证领导组职责731.1制订验证总计划，负责全公司验证⼯作的管理7.3.1.2确定验证项⽬及验证项⽬负责⼈。

731.3负责验证案的批准⼯作。

731.4负责验证资料及结果的审核⼯作。

7.3.1.5负责验证报告的批准⼯作。

7.3.2验证项⽬⼩组职责7.3.2.1负责验证案的起草⼯作。

7.322参与验证案的讨论、确认⼯作。

7.3.2.3负责验证案的实施。

7.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告⼯作。

7.3.2.5参与验证结果的评价⼯作。

7.3.3质量部职责7.3.3.1负责公司验证⽇常管理⼯作。

7.3.3.2负责验证案的审核⼯作。

7.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验⼯作。

纯化水需氧菌检查标准操作规程 (2015年中国药典)

GMP文件纯化水需氧菌检查标准操作规程目的：建立需氧菌检查法的标准操作规程，保证正确操作。

范围：本标准适用于纯化水的需氧菌检查。

依据：《中国药典》2015年版二部。

职责：QC检验员对本标准的实施负责。

正文：1.简述微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。

除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检査。

2.环境要求微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。

3.仪器生物安全柜、洁净工作台、微生物限度检查仪、恒温培养箱、电热恒温水浴锅。

4.设备：滤杯、高压灭菌锅、剪刀、镊子、75％酒精棉球。

5.供试品：取纯化水10 mL。

备用。

6.实验前准备6.1. 培养基、冲洗液制备方法6.1.1. R2A琼脂培养基：取本品18.2g，加1L纯化水，加热溶解，分装，121 ℃湿热灭菌20 min。

6.1.2. pH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液：pH 7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液干粉16.09 g，加水1000 ml，微温溶解，滤清，121 ℃湿热灭菌20 min。

6.2.用具的洗刷6.2.1.玻璃器皿：如试管、三角瓶等用清洁液浸泡，用流水洗涤，再用纯化水洗涤4～5次，倒置，晾干。

试管、三角瓶等使用过后，应先消毒倒出内容物后，再清洗晾干。

6.2.2.剪刀、镊子用水及去污粉洗涤，用水冲洗干净，再用纯化水洗涤3次。

6.2.3.洁净服、裤、帽子、口罩等用水洗涤洁净后，晾干。

6.3. 用具的包扎及灭菌6.3.1.洗涤洁净的注射器及适配针头各部件与剪刀、镊子一并入垫有纱布的铝盒内，一层层放好，盖上纱布，将铝盒盖好，用牛皮纸包扎。

6.3.2.试管口塞上胶塞、三角瓶等用8层纱布将瓶口扎紧。