糖尿病大鼠指标

实验流程

1、末次灌胃后，大鼠禁食不禁水12h，与麻醉前进行称重，行腹腔注射3%戊巴

比妥钠，0.3ml/100g

2、腹主动脉取血，留取全血标本。

3、取肝、脾、肾、胃、心脏及脑。

4、称肝、脾、肾、胃、心脏及脑组织，并分装各个组织，放入-80℃冻存。其中

肝组织剪取1g肝脏，送至肝均浆；肝10%甲醛固定做HE染色，每组5只；

肝4%戊二醛固定做电镜，每组一只；

5、小肠10%甲醛固定做HE染色，每组5只；小肠4%戊二醛固定做粪便电镜，每

组1只；其余肠组织-80℃冻存。

6、肝；制成肝均浆，1g肝脏加入9ml冰生理盐水，制成肝均浆液，离心后，取

上清液，于-80℃冻存。

7、全血标本静置30min后，进行离心，分离血清，血清和血浆均放入-80℃冻存。检测指标：

1、肝脏组织

1.1HE染色观察肝脏组织的病理学改变。

1.2透射电镜观察肝脏超微结构变化

1.3电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）

1.4试剂盒测肝均浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化酶

（GSH-Px）、ROS活性氧水平

1.5检测肝脏组织中Western blot、NF-kB、COX-2表达情况，计算其阳性表达

率

2、血清（血浆）

2.1全自动化分析仪测谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、谷氨转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶TG

2.2酶联免疫吸附法检测血浆中肠结合脂肪酸蛋白（FABp2）、D-乳酸（D-LA）及二胺氧化酶（DAO）水平评价大鼠大肠粘膜损伤

2.3试剂盒测血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）、4-HNE（羟基壬烯醛）、

谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）评价大鼠氧化应激水平

2.4酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠血浆中α肿瘤坏死因子（TNF α）、肿瘤坏死因子β（TNF-β）、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)浓度

3、肠道菌群

采用实时荧光定量PCR技术对粪便大肠杆菌、粪肠球菌、双歧杆菌和嗜酸乳杆菌、脆弱拟杆菌和柔嫩梭菌16SrDNA V3 可变区进行定量分析

4肾脏组织

4.1超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（ GSH）、过氧化氢酶（ CAT）及内皮素（ ET-1）和肿瘤坏死因子（ TNF-α）的影响