土壤微生物数量测定方法整理

土壤微生物的分离鉴定及数量测定

（一）培养基的制备

Ⅰ测定微生物总量培养基：

1. 细菌培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基）

牛肉膏Beefextract 5.0g

蛋白胨Peptone 10.0g

NaCI 5.0g

蒸馏水H20 1000m1

琼脂15～20g

PH 7.2~7.4

制备步骤：

⑴在100 mL小烧杯中称取牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，加50 mL蒸馏水，置电炉搅拌加热至牛肉膏，蛋白胨完全溶解.

⑵向小铝锅中加入500 mL蒸馏水，将溶解的牛肉膏，蛋白胨倒入铝锅中并用自来水洗2～3次.加入

5.0gNaC1，在电炉上边加热边搅拌.

⑶加入洗净的琼脂条，继续搅拌，加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000 mL.

⑷用NaOH或HC1调至pH7.0. 用酸度计或用玻棒沾少许液体用精密pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH 调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。

⑸根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。，塞好棉塞，装入小铁丝筐，然后用旧报纸将棉塞部分包好. 标签表明培养基的名称、配制日期等。

⑹高压蒸汽灭菌，用0.1Mpa（15lb/in2）121℃灭菌（15-20）30min.

2. 放线菌培养基（改良高氏1号琼脂培养基）

可溶性淀粉20g

KNO3 1g

K2HPO40.5g

MgSO4• 7H2O 0.5g

NaCl 0.5g原0.05g

FeSO4• 7H2O 0.01g

pH 7.2-7.4

制备步骤：

（1）计算根据配方计算各种药品所需要的量，然后再分别称量。

（2）称量准确称量各种成分。

（3）溶化配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入少许沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到1000ml，调PH（可不调）。

（4）分装、包扎、灭菌。

注：各成分按配方顺序依次溶解，对于微量成分，可预先配成高浓度的溶液，方便配置时量的控制。配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入少于所需水量的沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到1000ml，调pH。

另：倒平板之前，在溶化的培养基中加重铬酸钾溶液，每300mL培养基加3%重铬酸钾1mL(l00ppm)。

3. 真菌培养基（马丁（Martin）-孟加拉红琼脂培养基）

葡萄糖10.0g

MgSO4.7H2O 0.5g

蛋白胨 5.0g

孟加拉红33.4mg （或者每升加1%溶液3.3mL）

K2HPO41g

蒸馏水H20 1000m1

PH 自然(4-5)

制备步骤：

（1）计算根据配方计算各种药品所需要的量，然后再分别称量。

（2）称量和熔化按培养基配方，准确称取各成分，并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中待各成分完全溶化后，边加边搅拌, 以防糊底,补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的溶液，在1000ml培养液中加入1%的孟加拉红溶液3.3ml，混匀后，加入琼脂加热溶化。

(3) 分装、加塞、包扎、灭菌。

(4) 链霉素的加入由于链霉素受热易分解，所以临用时将培养基溶化后待温度降低至45摄氏度左右时才能加入。

注：⑴灭菌前加卡那霉素20μg/ml，或者倒平板之前加链霉素。

⑵倒平板之前加乳酸，每100mL培养基加0.lmL。

Ⅱ测定功能菌所用培养基：

1.亚硝酸细菌培养基（改良的斯蒂芬逊（Stephenson）培养基A）

(NH4)2SO4 2.0g

NaH2PO40.25g

MnSO4·4H2O 0.01g

MgSO4·7H2O 0.03g

K2HPO40.75g

CaCO3 5.0g

蒸馏水1000ml

PH 7.2

注：CaCO3最后加，不需要溶解，直接调PH，培养基中有这个成分是为了缓冲pH。因为硝化细菌的生长会产生酸化效应，使得氢离子过剩，到了一定程度硝化作用将无法继续，所以要碱性物质平衡酸碱。下同。

2.硝酸细菌培养基（改良的斯蒂芬逊（Stephenson）培养基B）

NaH2PO40.25g

K2HPO40.75g

MgSO4·7H2O 0.03g

MnSO4·4H2O 0.01g

CaCO3 1.0g

Na2CO3 1.0g

NaNO2 1.0g

蒸馏水1000ml

PH 7.2

3. 反硝化细菌培养基

柠檬酸钠 5.0 g

KNO3 2.0 g

KH2PO4 1.0 g,

K2HPO4 1.0 g

MgSO4·7H2O 0.2 g

蒸馏水1000 ml

pH值7.2~7.5

4.好气性自生固氮菌培养基（改良阿须贝(Ashby)无氮培养基）

苯甲酸钠 1.5 g

K2HPO4 0.2 g

MgSO4·7H2O 0.2 g

NaCl 0.2 g

CaSO4·2H2O 0.1 g

PH 7.4—7.6

注：在培养基分装入试管时，每管加入一1cm滤纸长条，要露出液面。

5.氨氧化细菌培养基（蛋白胨氨化培养基）

K2HPO4 0.5 g

KH2PO40.5 g,

MgSO4·7H2O 0.5 g

蛋白胨 5.0 g

蒸馏水1000ml

PH 7.0~7.2

6. 好气性纤维素分解菌培养基（依姆歇涅茨基纤维素分解菌培养基）KH2PO4 1.0 g

FeCl3·6 H2O 0.1 g

MgSO4·7H2O 0.3 g

CaCl2·6H2O 0.1 g

NaCl 0. 1 g

NaNO3 2.5 g

pH 7.2～7．4

注：在培养基分装入试管时，每管加入一1cm滤纸长条，需露出液面。