超氧阴离子自由基和过氧亚硝酸根离子荧光测定法的研究

山东农业大学硕士学位论文

是常用的化学发光剂。在有氧、Ｈ２０２、Ｏｚ＇－以及其它过氧化物存在下，化学发光可以被氧化，产生电子激发态的中间产物，当其返回基态时，即产生化学发光（李益新等，１９８６）。

Ｇｌｅｕ和Ｐｅｔｓｅｈ两人（ＢｕｒｒＪＧ１９８５）在碱性条件下，光泽精与０２·。等氧化物作用生成激发态Ｎ．甲基吖啶（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌａｃｒｉｄａｎ）并发出波长５２３ｎｎｌ的微弱光。它对活性氧的测定选择性比较高，许多报道（ＧｏｔｏＨｅｔａ１．，１９９８；ＨｉｐｌｅｒＵＣｅｔａ１．，）光泽精只有在超氧自由基存在下发生发光现象。Ｃｈｏｉ等（ＣｈｏｉＨＹ，２００１）在黄嘌呤．黄嘌呤氧化酶体系产生０２·‘的基础上，建立了流动注射化学发光法测ＳＯＤ活性，流动相为含有５岬ｏｌ·Ｌ－１光泽精和Ｏ．３ｍｍｏｌ·Ｌ－１黄嘌呤的５０ｍｔｏｏｌ·Ｌ－１磷酸钾缓冲溶液（ｐＨ７．４）。牛血清蛋白在１．１０００ｇ．ｍＬｏ的范围内不影响测定，可在３０ｓ内测定一份样品。但样品中抗坏血酸等还原性物质会影响ＳＯＤ活性的测定。Ｙａｏ等（ＹａｏＤｅｔａ１．，２００２）用ＤＭＳＯ和氯化四丁基铵（ＤＭｓ０一ＴＢＡＣ）溶液提取鼠不同组织中的超氧自由基，用鲁米诺加强化学发光反应检测。由于其它的活性氧物质反应（ＲＯＳ）引起的背景干扰被降到了最小，实验达到了最佳检测条件。用此体系评估了在中国用大量干腌肉喂养的鼠体内的超氧自由基的水平，评估结果在１０一．１０。１ｔｏｏｌ·Ｌ．１之间，表明喂养干腌肉的鼠体内的超氧自由基的量比正常组的鼠要高的多，会引起组织损伤。孙涛等（孙涛等，２００６）采用流动注射化学发光技术，在邻苯三酚自氧化体系体系中，优化了检测超氧阴离子自由基的方法，通过对测定条件的研究，得到了测定的最佳方案，证明了方法的可行性和重现性。刘绪峰等（刘绪峰等，２００６）用化学发光法检测了Ｃ６０与吡咯烷衍生物对邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子的清除效果。结果表明，其中的一种Ｃ６０羧酸衍生物能有效地清除０２·‘，并且有明显的量效关系。

（４）分光光度法

用捕获剂来捕获自由基，利用捕获剂的颜色发生变化，是光度法的基本原理。计量吸光度的变化值而间接测得自由基的含量。常用的自由基捕获剂有茜素紫、溴邻苯三酚红、ＭＴＴ、甲基紫、邻菲罗啉、胭脂红酸等。

光度法测定０２·‘可分为直接测定和间接测定两类。常用的邻苯三酚自氧化法就是直接测定的一种，国内外多采用此法，也可简称为Ｍａｒｋｌｕｎｄ法。Ｍａｒｋｌｕｎｄ法是采用４２０ｎｉ＇ｌｌ处光吸收测定。酶活力定义为：在一定条件下１ｍＬ的反应液中，每分钟控制邻苯三酚在４２０ｎｌＴｌ波长的自氧化速率达到５０％

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