SDS-PAGE凝胶配制试剂盒
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
![SDS-PAGE凝胶制备试剂盒](https://img.taocdn.com/s3/m/e0d83691f90f76c661371a6a.png)
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒货号:P1200-1/P1200-2规格:25块/50块SDS-PAGE凝胶产品内容:P1200-25T P1200-50T保存条件30%制胶液(29:1)100mL100mL×24℃,避光1.5mol/LTris(pH8.8)100mL100mL×2常温1.0mol/LTris(pH6.8)30mL60mL常温PAGE胶凝固剂1g2g干粉4℃;溶液-20℃10%SDS5mL10mL常温PAGE胶促凝剂0.8mL 1.5mL4℃,避光产品简介:本公司生产的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒是按照经典方法配制而成。
本试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制PAGE胶。
本试剂盒可配制不同规格、不同聚合度的PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)约25/50块。
注意事项:1.PAGE胶促凝剂和10%PAGE胶凝固剂最后加,在加入前需混匀前面所加试剂。
10%PAGE胶凝固剂溶液在4℃有效期为一周;PAGE胶促凝剂易挥发,使用后请盖紧瓶盖。
在常温下胶30分钟内可以凝固,如温度过低,可放37℃温箱凝固。
灌完分离胶后,轻轻的加1mL ddH2O封上层,胶凝固后可见到分界线。
灌浓缩胶前,先倾去水层,再用吸水纸吸干。
浓缩胶灌好后立刻插入梳子。
浓缩胶凝固后,放入电泳液中(让电泳液漫过加样孔),轻轻的拨出梳子,可防加样孔变形。
2.配制量可按上表等比加减。
如果所用胶浓度与上面不同,可自行调整,主要是调整30%制胶液的量(需要浓度×总体积/30%),最后用水补足总体积。
配胶说明:1.先在PAGE胶凝固剂干粉中加入蒸馏水或去离子水(每克PAGE胶凝固剂需加水10mL)配置成10%溶液,将溶液分装成小体积后冻存于-20℃,制备凝胶时融化后使用。
4℃保存有效期为一周。
检测SDS溶液是否澄清,若出现絮状物或沉淀可放37℃片刻至溶解,不影响效果。
SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒-
![SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒-](https://img.taocdn.com/s3/m/a6ce089da21614791611287a.png)
SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂盒
背景介绍:
在 westernblot 实验中,总是少不了蛋白电泳这一环节。最早的蛋白胶需要自己先配制 各种组分的 stock solutions,然后再根据分离胶浓度吸取不同体积的多达 6 个组分配制。 不仅耗费时间和精力,而且组分中 TEMED 有强烈的神经毒性且易挥发。后来很多供应商把这 些传统的组分罗列在一起组成试剂盒,但却没有实质性的改进。
产品简介
本产品现已配套提供改良型过硫酸铵催化剂溶液,提高了过硫酸铵溶液的稳定性和催 化效能。请将此过硫酸铵溶液保存于-20℃。为方便吸取使用,已开盖使用中的过硫酸铵溶 液可置于 4℃保存。
使用本产品凝胶制备试剂无需加入有极臭异味且有毒的 TEMED 试剂,只需加入过硫酸 铵即可凝胶,使研究人员可避免因操作 TEMED 而带来的不快和对健康的影响。配制一块或多 块凝胶最少只需 2 分钟的动手操作时间。特有颜色配方的浓缩胶预混液,使点样孔清晰易 辨,方便点样。多种颜色设计,更能轻易区分含不同样品的凝胶。所含颜色配方不影响电泳。
为了解决上述问题,北京博泰斯生物技术有限公司研制出 SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂 盒,该试剂盒具有组分简单,不含 TEMED,浓缩胶带颜色等优点(详见下面产品特点一栏), 而且具有很高的性价比,价格是传统自行配胶的 1.5 倍左右。但却可以节省很多时间,不受 TEMED 困扰。
货号规格
WB1100: 可制备 125 个 6%的 mini 胶(0.75 mm) WB1101: 可制备 125 个 7.5%的 mini 胶(0.75 mm); WB1102: 可制备 125 个 10%的 mini 胶(0.75 mm); WB1103: 可制备 125 个 12.5%的 mini 胶(0.75 mm); WB1104: 可制备 125 个 15%的 mini 胶(0.75 mm);
一步法SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒
![一步法SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒](https://img.taocdn.com/s3/m/59369ace3c1ec5da50e270d0.png)
本产品现已配套提供改良型过硫酸铵催化剂溶液,提高了过硫酸铵溶液的稳定性和催 化效能。请将此过硫酸铵溶液保存于-20℃。为方便吸取使用,已开盖使用中的过硫酸铵溶 液可置于 4℃保存。
使用本产品凝胶制备试剂无需加入有极臭异味且有毒的 TEMED 试剂,只需加入过硫酸 铵即可凝胶,使研究人员可避免因操作 TEMED 而带来的不快和对健康的影响。配制一块或多 块凝胶最少只需 2 分钟的动手操作时间。特有颜色配方的浓缩胶预混液,使点样孔清晰易 辨,方便点样。多种颜色设计,更能轻易区分含不同样品的凝胶。所含颜色配方不影响电 泳,染色及转膜等后续应用。本试剂盒灌制的凝胶也可用于非变性 PAGE 凝胶电泳。
产品内容:
分离胶缓冲液(2×)250ml 分离胶溶液(2×)25)80ml 改良型过硫酸铵溶液 8 ml
产品特点:
◎一步法制胶—上下层胶可同时配制,下层胶配完可及时配制上层胶,无需用水或醇封胶 ◎快速制备凝胶—最少只需 2 分钟的动手操作时间即可灌制多块凝胶,无需计算所需溶液 量,无需稀释 ◎彩色上层胶—可制备红颜色的上层胶,为点样和区分不同凝胶提供最大便利 ◎避免有异味的试剂—无需使用 TEMED,避免恶臭气味
北京博泰斯生物技术有限公司
一步法 SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂盒
背景介绍:
一步法 SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂盒是在 SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂盒的基础上优 化而成。
该试剂盒除了具有组分简单,不含 TEMED,浓缩胶带颜色等优点以外,灌制完下层胶 后不需要水或者醇封胶和等待凝固即可直接灌制上层胶。
大大减少了操作和等待的时间。
货号规格:
WB2101: 可制备 125 个 7.5%的 mini 胶(0.75mm) WB2102: 可制备 125 个 10%的 mini 胶(0.75mm) WB2103: 可制备 125 个 12.5%的 mini 胶(0.75mm) WB2104: 可制备 125 个 15%的 mini 胶(0.75mm)
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明书
![SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/5bddaa7d6c85ec3a86c2c559.png)
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明书产品货号:SK6010储存条件:Acr-Bis溶液2-8℃储存,其它常温储存。
有效期2年。
产品组成:Components SK6010-50SK6010-250保存条件30%Acr-Bis(29:1)100ml500ml2-8℃分离胶缓冲液100ml500ml RT浓缩胶缓冲液50ml250ml RTAPS(过硫酸铵)5×0.1g5×0.5g RT TEMED1ml5ml RT/避光说明书1份注意:过硫酸铵(APS)为固体粉末,使用前配制成10%APS溶液(0.1g APS加1ml双蒸水;0.5g APS 加5ml双蒸水)。
APS溶液最好现配现用,通常4℃可保存两周,-20℃能保存半年。
产品简介:本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全部试剂,只需自备蒸馏水,即可制备各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶,方便、快捷、安全、实惠。
本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS,使用时无需另外加入,分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液放置2-8℃可能出现絮状,为SDS析出,常温下放置一会溶液恢复澄清,可继续使用。
因为制备凝胶浓度不同,本品只给出大概制胶数量。
操作步骤:根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,最佳胶浓度请参考附表1。
一、灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表3)1.参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
注:加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2.将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。
3.加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层,使凝胶表面保持平整。
凝胶配制试剂盒介绍
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SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 (SDS-PAGE Gel kit) B1027描述:本产品提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制高质量的各种浓度的变性PAGE胶,方便,快捷。
本试剂盒至少可以配制30块常规大小的PAGE 胶,并且其中的分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS,使用时无需另外加入。
产品名称包装保存条件30%Acr-Bis(29:1)100 ml 2-8℃避光分离胶缓冲液80 ml 室温浓缩胶缓冲液25 ml 室温APS(过硫酸铵)0.5 g 室温TEMED1 ml 室温、避光*试剂盒中提供的APS(过硫酸铵)为固体粉末,使用前加入双蒸水溶解即配制成10%APS(0.5 g APS加入5 ml双蒸水),将溶液分装后置于-20℃保存,通常半年内有效。
操作步骤:根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度,不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围参考附表1。
1.灌制分离胶(试剂使用量参考附表2)(1)参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
(2)将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯中混合。
(3)加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌混匀,避免产生气泡。
(4)将分离胶溶液灌入凝胶玻璃槽中,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层,用于压平液面。
(5)静置30-60min,至分离胶凝固。
2.灌制浓缩胶(试剂使用量参考附表3)(1)去除覆盖在分离胶上的水层,并用滤纸吸干,水份吸不干,可能会导致浓缩胶和分离胶分开。
(2)将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯中混合。
(3)加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌混匀,避免产生气泡。
(4)将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,插入样品梳,避免产生气泡,静置20-30min,直至浓缩胶聚合。
(5)待凝胶聚合后,小心拔下梳子,以免破坏加样孔。
凝胶配制
![凝胶配制](https://img.taocdn.com/s3/m/43420bef6294dd88d0d26b90.png)
使用说明:
1. 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶):
不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围:
SDS-PAGE分离胶浓度
最佳分离范围
6%胶
50-150kD
8%胶
30-90kD
10%胶
20-80kD
12%胶
12-60kD
15%胶
10-40kD
0.15
0.2
0.05
0.1
0.15
0.2
0.3
0.5
0.3
0.5
TEMED 成分
12%胶 蒸馏水
0.002
0.004
0.006
0.008
0.012
0.02
配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
5
10
15
20
30
50
1.0
2.0
3.0
4.0
6.0
10.0
30%Acr-Bis(29:1)
配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
5
10
15
20
30
50
0.5
1.0
1.5
2.0
SDS-PAGE配胶试剂盒使用说明书
![SDS-PAGE配胶试剂盒使用说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/65485018c5da50e2524d7f21.png)
SDS-PAGE配胶试剂盒使用说明书Cat.No:Lot No:原理:本技术中,待分离的样品在有SDS-PAGE和还原剂的存在下通过加热而变性并被去污剂所包被。
SDS可使蛋白质带上大量的负电荷,其带电荷的多少正好与多肽的长度成正比。
聚丙烯酰胺凝胶上样后,在高电压的作用下,蛋白组分向正极(阳极)迁移。
由于所有的蛋白所带的负电荷与其分子大小成正比,因而蛋白就仅仅根据其分子量的大小不同而被分离—凝胶的分子筛效应。
蛋白质的分子量就可以通过与标准蛋白的凝胶迁移率进行比对而得到。
凝胶电泳后,特定的凝胶条带可以通过染色而观察到,并且可通过被动扩散或电洗脱从凝胶上进行回收。
两种最常用的染色方法是考马斯亮蓝法和银染法,这两种方法的蛋白条带检测灵敏度可分别达到50ng和5ng。
由于考马斯亮蓝法使用简便,并可以对收集的蛋白带作进一步分析,因而较为常用。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳应用范围:1)蛋白质纯度的分析;2)蛋白质分子量的测定;3)蛋白质浓度的测定;4)蛋白质水解的分析;5)免疫沉淀蛋白的鉴定;6)免疫印迹的第一步;7)蛋白质修饰的鉴定;8)分离和浓缩用于产生抗体的抗体的抗原;9)分离放射性标记的蛋白质。
试剂盒组成:1.30%预制聚丙烯酰胺胶(4℃保存)200ml2.1.5M TrisCl(PH=8.8)200ml3.1.0M TrisCl(PH=6.8)50ml4.10%SDS 30ml5.10%过硫酸铵(4℃保存)30ml6.去离子水250ml7.TEMED(4℃闭光保存!)1ml8.5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液250 ml9.考马斯亮蓝染色剂50ml10. 考马斯亮蓝脱色剂250ml5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液用时以去离子水1:4稀释,配成1×-甘氨酸电泳缓冲液工作液。
凝胶的配制:(1)将玻璃板安装固定好切误把玻璃弄坏(2)进行分离胶的配制(3)加入TEMED后立即混匀内容物倒入到固定好的玻璃板中,同时留出灌注浓缩胶所需空间(梳子的齿长再加0.5cm)再在胶液面上小心注入一层水(约2—3mm高)以排除气泡和阻止氧气进入凝胶溶液。
SDS-PAGE原理、试剂配制和注意事项
![SDS-PAGE原理、试剂配制和注意事项](https://img.taocdn.com/s3/m/68b034fb79563c1ec5da71f8.png)
SDS是阴离子去污剂,能断裂分子内和分子间的氢键,破坏蛋白分子的二、三级结构。
作用有四:去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。
而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。
在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS 胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统,浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶,凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。
分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶,凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。
电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。
2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性,这是样品浓缩的主要因素。
当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。
电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。
蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。
电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成以稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。
过硫酸铵(AP)为催化剂,四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。
在聚合过程中,TEMED 催化过硫酸铵产生自由基,后者引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联,从而形成三维网状结构。
当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logMW=K-bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明书
![SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/5bddaa7d6c85ec3a86c2c559.png)
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明书产品货号:SK6010储存条件:Acr-Bis溶液2-8℃储存,其它常温储存。
有效期2年。
产品组成:Components SK6010-50SK6010-250保存条件30%Acr-Bis(29:1)100ml500ml2-8℃分离胶缓冲液100ml500ml RT浓缩胶缓冲液50ml250ml RTAPS(过硫酸铵)5×0.1g5×0.5g RT TEMED1ml5ml RT/避光说明书1份注意:过硫酸铵(APS)为固体粉末,使用前配制成10%APS溶液(0.1g APS加1ml双蒸水;0.5g APS 加5ml双蒸水)。
APS溶液最好现配现用,通常4℃可保存两周,-20℃能保存半年。
产品简介:本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全部试剂,只需自备蒸馏水,即可制备各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶,方便、快捷、安全、实惠。
本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS,使用时无需另外加入,分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液放置2-8℃可能出现絮状,为SDS析出,常温下放置一会溶液恢复澄清,可继续使用。
因为制备凝胶浓度不同,本品只给出大概制胶数量。
操作步骤:根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,最佳胶浓度请参考附表1。
一、灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表3)1.参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
注:加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2.将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。
3.加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层,使凝胶表面保持平整。
SDSPAGE所有详细试剂配方
![SDSPAGE所有详细试剂配方](https://img.taocdn.com/s3/m/c0ec7b38178884868762caaedd3383c4ba4cb466.png)
SDSPAGE所有详细试剂配方SDS-(聚丙烯酰胺凝胶电泳)是一种常用于蛋白质分析的实验技术。
该技术通常涉及到几种试剂,如胶溶液、缓冲液、电泳缓冲液、染色溶液等。
下面是SDS-常见的试剂配方及其详细说明。
一、胶溶液配方:1. 30%(w/v)丙烯酰胺(acrylamide)溶液- 在称量瓶中称取30g丙烯酰胺,并用蒸馏水调至100ml。
搅拌溶解直至均匀。
-这是制备聚丙烯酰胺凝胶的基础溶液。
2. 响应稀释液(Response diluent)-用于稀释聚丙烯酰胺溶液以获得不同浓度的凝胶。
-可通过将聚丙烯酰胺溶液与水按1:3体积比混合来制备响应稀释液。
二、缓冲液配方:1. 离子化追踪剂(Tris-Glycine running buffer)-用于凝胶电泳盒中电解质的运行。
-配方为:3g Tris base (pH 8.8)14.4g glycine将固体溶解于1L蒸馏水中,并调整pH至8.8三、电泳缓冲液配方:1. 离子化追踪剂(Tris-Glycine SDS running buffer)-用于在电泳过程中提供离子追踪剂。
-配方为:30g Tris base144g glycine10gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中。
2. 加速剂(stacking gel buffer)- 用于形成凝胶中的聚集堆积层(stacking layer)。
-配方为:30g Tris base (pH 6.8)144g glycine1gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中,并调整pH至6.8四、样品处理缓冲液配方:1. 样品加载缓冲液(sample loading buffer)-用于处理蛋白样品,以便在凝胶上获得良好的分离效果。
-配方为:0.5M Tris-HCl(pH 6.8)20%(v/v)甘油10%(w/v)SDS0.05%(w/v)溴酚蓝(bromophenol blue)旋转混合并加入蛋白样品。
五、凝胶染色溶液配方:1. 吸附性染色剂(Coomassie blue staining solution)-用于染色聚丙烯酰胺凝胶上分离的蛋白质。
SDS-PAGE电泳试剂配制
![SDS-PAGE电泳试剂配制](https://img.taocdn.com/s3/m/890d15875122aaea998fcc22bcd126fff6055d49.png)
SDS-PAGE电泳试剂配制SDSPAGE 电泳试剂配制SDSPAGE 电泳(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)是一种常用的蛋白质分离和分析技术。
在进行 SDSPAGE 电泳实验时,准确配制各种试剂是获得可靠实验结果的关键。
下面,让我们详细了解一下SDSPAGE 电泳试剂的配制方法。
首先,我们来看看分离胶缓冲液的配制。
分离胶缓冲液一般是 15M TrisHCl(pH 88)。
要配制 100ml 的这种缓冲液,我们需要称取 1817g Tris 碱,加入约 80ml 去离子水,用浓盐酸调节 pH 值至 88。
这一步需要耐心和细心,因为 pH 值的准确性对电泳结果影响很大。
调节好 pH 后,将溶液定容至 100ml。
接下来是浓缩胶缓冲液,通常是 10M TrisHCl(pH 68)。
同样配制100ml,称取 1211g Tris 碱,加入约 80ml 去离子水,用浓盐酸调 pH 至68,最后定容至 100ml。
然后是 30%丙烯酰胺溶液。
这是 SDSPAGE 电泳中非常重要的试剂。
配制 100ml 该溶液,需要称取 29g 丙烯酰胺和1g N,N’亚甲双丙烯酰胺,用去离子水溶解后定容至 100ml。
丙烯酰胺是有毒物质,在配制和使用过程中要特别小心,避免接触皮肤和吸入粉末。
SDS 溶液的配制也不容忽视。
一般是 10%(w/v)的 SDS 溶液。
称取 10g SDS,加入适量去离子水搅拌溶解,然后定容至 100ml。
还有 10%过硫酸铵溶液。
称取 1g 过硫酸铵,加入 10ml 去离子水,现配现用。
过硫酸铵溶液容易失效,所以每次使用前都要新鲜配制。
TEMED(四甲基乙二胺)在凝胶聚合过程中起到催化作用。
由于它挥发性强,使用时要注意迅速加入。
电泳缓冲液也是必不可少的。
一般使用的是 Tris甘氨酸缓冲液。
配制 1L 缓冲液,需要称取 303g Tris 碱、1877g 甘氨酸和 1g SDS,用去离子水溶解后定容至 1L。
P0012AC SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒
![P0012AC SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒](https://img.taocdn.com/s3/m/04ffe587d0d233d4b14e697f.png)
SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒
产品简介:
碧云天生产的SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒(SDS-PAGE Gel Quick Preparation Kit)提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制SDS-PAGE胶(即SDS聚丙烯酰胺凝胶)。
本试剂盒中把凝胶配制所需的缓冲试剂、SDS等预混合成下层胶缓冲液(4X)和上层胶缓冲液(4X),简化了凝胶配制的步骤。
下层胶缓冲液中含Tris pH8.8及适量SDS,上层胶缓冲液中含Tris pH6.8及适量SDS。
本试剂盒约可配制30-50块常规大小的PAGE胶。
保存条件:
下层胶缓冲液(4X)、上层胶缓冲液(4X)和Ammonnium persulfate (过硫酸铵)室温保存。
30% Acr-Bis (29:1)和TEMED 4℃避光保存。
过硫酸铵配制成10%溶液后,分装成小管-20℃保存,通常半年内有效。
注意事项:
过硫酸铵配制成10%溶液后,应当-20℃保存。
同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。
TEMED易挥发,使用后请盖紧瓶盖。
另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节TEMED的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
温度较低时,下层胶缓冲液(4X)和上层胶缓冲液(4X)中的SDS可能析出。
此时需水浴温育,并在完全溶解和混匀后使用。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶):。
SDS-PAGE电泳试剂配制
![SDS-PAGE电泳试剂配制](https://img.taocdn.com/s3/m/a31b65f92dc58bd63186bceb19e8b8f67c1cefff.png)
SDS-PAGE电泳试剂配制SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)是一种常用的蛋白质分离技术,可以将蛋白质按照其分子量大小分离出来。
在这个过程中,需要使用一系列试剂来形成凝胶、还原并变性蛋白质样品、以及进行电泳。
下面我们将介绍SDS-PAGE电泳试剂的配制方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制1. 蒸馏水将蒸馏水取2L,通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质,备用。
2. 均聚化溶液将40%(w/v)丙烯酰胺10mL,在干燥器中烘干2小时,然后加入蒸馏水固定容积至50mL。
将10%(w/v)N, N’-二甲基亚硫脲5mL加入均聚化溶液中,搅拌30分钟至完全溶解。
3. 凝胶制备将均聚化溶液加入10%(w/v)的三甲基丙烯酰氨基甲基纤维素,搅拌5分钟后加入0.1%TEMED等待至少1小时凝胶化。
4. 等电聚焦凝胶制备将均聚化溶液加入3.33%(w/v)等电聚焦剂,根据需要调节pH值,搅拌5分钟后加入氨基甲酸1mL,搅拌2分钟至完全溶解。
加入TEMED及APS,混合倒入制好的除尘洞中,并插入梳子。
至少1小时后移除梳子,使凝胶完全凝固。
蛋白样品处理试剂配制1. SDS缓冲液将10%SDS 1.25mL加入pH6.8的磷酸盐缓冲液(1M),加入蒸馏水固定容积至100mL,搅拌10分钟至SDS完全溶解,备用。
2. β-巯基乙醇将β-巯基乙醇400μL加入1mL磷酸盐缓冲液(1M),备用。
3. 样品缓冲液将10%SDS 100μL,β-巯基乙醇50μL加入磷酸盐缓冲液1mL中,加入蒸馏水固定容积至10mL,轻轻搅拌即可。
4. 热变性载入缓冲液将4倍浓度的样品缓冲液加入β-巯基乙醇,于100℃水浴中加热5分钟。
冷却至室温,即可使用。
电泳相关试剂配制1. 电泳缓冲液将磷酸盐缓冲液1L加入SDS 10g进行混合后,加入蒸馏水将其固定至2L,备用。
2. Anode buffer将磷酸盐缓冲液1L加入SDS 5g进行混合后,加入蒸馏水将其固定至2L,备用。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤
![SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤](https://img.taocdn.com/s3/m/0c07587af01dc281e43af00f.png)
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤实验原理:SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。
该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。
SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。
SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。
在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后,电荷因素可被忽略。
蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。
试剂和器材:试剂:1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油,2ml 10%的SDS,0.5ml巯基乙醇,1ml 1%溴酚蓝,0.9ml蒸馏水。
可在4℃保存数周,或在-20℃保存数月。
2. 凝胶贮液:在通风橱中,称取丙烯酰胺30g,甲叉双丙烯酰胺0.8g,加重蒸水溶解后,定容到100ml。
过滤后置棕色瓶中,4℃保存,一般可放置1个月。
3. pH8.9分离胶缓冲液:Tris 36.3g ,加1mol/L HCl 48ml,加重蒸水80ml使其溶解,调pH8.9,定容至100ml,4℃保存。
4. pH6.7浓缩胶缓冲液:Tris5.98g ,加1mol/L HCl 48ml,加重蒸水80ml使其溶解,调pH6.7,定容至100ml,4℃保存。
5. TEMED(四乙基乙二胺)原液6.10%过硫酸铵(用重蒸水新鲜配制)7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液:称取Tris 6.0g,甘氨酸28.8g,加蒸馏水约900ml,调pH8.3后,用蒸馏水定容至1000ml。
置4℃保存,临用前稀释10倍。
8. 考马斯亮蓝G250染色液:称100mg考马斯亮蓝G250,溶于200ml蒸馏水中,慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸,最后补足水到250ml,搅拌1小时,小孔滤纸过滤。
器材:电泳仪,电泳槽,水浴锅,摇床。
Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明
![Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明](https://img.taocdn.com/s3/m/4786ee0ac281e53a5802ffea.png)
Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明货号:P1320规格:25块/50块/100块PAGE凝胶产品内容:25T50T100T保存条件49.5%T3%C15ml30ml60ml2-8℃,避光49.5%T6%C50ml100ml200ml2-8℃,避光凝胶缓冲液70ml140ml280ml2-8℃50%甘油30ml60ml120ml室温APS0.25g0.5g 1.0g室温TEMED400ul750ul 1.5ml室温,避光说明书一份一份一份本产品所提供的APS(过硫酸铵)为固体粉末,使用前加入双蒸水溶解即配制成10%APS 溶液(0.5g APS5ml双蒸水),将溶液分装后置于-20℃保存,通常半年内有效。
溶液在使用中可放置4℃保存两周。
产品简介:常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白,对于相对分子量小的,尤其是10kD以下的蛋白分辨率极低。
而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1-10kD的蛋白及多肽,成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。
本产品包括Tricine-SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂,只需自备蒸馏水,即可制备高质量各种浓度的凝胶,方便、快捷,电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
注意事项:1、10%APS配制后分装-20度保存。
APS溶液不稳定,应尽量减少室温存放时间,每次取用后立即放回冰箱,以防失效;若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换,使用-20度保存的10%APS。
2、在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
3、在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作,加水时速度不能太快。
4、丙烯酰胺具有神经毒性,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
5、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体治疗。
配胶说明:分离胶夹层胶浓缩胶20%/4.5ml16.5%/4.5ml15.5%/4.5ml10%/2ml4%/2ml 49.5%T3%C///0.407ml0.160ml 49.5%T6%C 1.82ml 1.50ml 1.395ml//凝胶缓冲液 1.50ml 1.50ml 1.50ml0.667ml0.496ml 50%甘油0.96ml0.96ml0.96ml//ddH2O0.22ml0.54ml0.645m0.926ml 1.344ml 10%APS40µl40µl40µl20µ|20µ| TEMED5µl5µl5µl3µl3µl根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,凝胶浓度配方参考附表。
UElandy SDS-PAGE 胶凝固剂试剂盒说明书
![UElandy SDS-PAGE 胶凝固剂试剂盒说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/0d255d6fdc36a32d7375a417866fb84ae45cc3b8.png)
产品说明书凝胶配制试剂盒SDS-PAGE(任意浓度)产品货号:P80111-KIT产品规格:50块胶(0.75mm)产品组分:组分编号试剂A试剂B试剂C试剂D试剂E试剂F试剂G名称上层胶缓冲液下层胶缓冲液30%Acr-Bis(29:1)10%SDSPAGE胶凝固剂PAGE胶促凝剂储存缓冲液(5×)含量50mL100mL100mL5mL0.5g0.6mL100mL储存条件4℃避光保存,有效期见外包装。
PAGE胶凝固剂(粉剂):4℃保存时需拧紧瓶盖注意防潮,受潮后会很快失效。
PAGE胶凝固剂(粉剂)用水配制成10%溶液后,分装成小管-20℃保存,半年内有效;配制好的凝胶请浸没在1×储存缓冲液(凝胶保存液)中,室温保存,6个月保质期。
产品介绍本产品采用Tris-甘氨酸凝胶体系,按照使用说明书操作,只需自备制胶器具和蒸馏水,加入促凝剂即可配成任意浓度的SDS PAGE凝胶。
操作简单,成本低。
本试剂盒约可配制50块常规大小的(0.75mm)SDS-PAGE凝胶。
具体可以配制的凝胶数量与凝胶厚薄、大小有关。
产品特点保质期长:改良配方,制备的SDS PAGE凝胶可在室温下保存半年以上;上样方便:可制备有颜色的上层胶,点样孔清晰易辨,方便点样;效果优秀:跑胶条带清晰,敏锐,蛋白分辨率高。
高效兼容传统的电泳/转膜液。
使用方法1.准备工作PAGE胶凝固剂(粉剂)溶于5mL蒸馏水中,将溶液分装为10管,0.5mL/管,于-20℃长期保存。
10%PAGE胶凝固剂(粉剂)溶液可在4℃保存一周。
2.分离胶的配制(1)根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶):不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范SDS-PAGE分离胶浓度6%胶8%胶10%胶12%胶15%胶最佳分离范围50-150kD30-90kD20-80kD12-60kD10-40kD 如果样品蛋白分子量范围较广,建议使用梯度预制胶。
SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒
![SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒](https://img.taocdn.com/s3/m/a4a82f9cbceb19e8b8f6ba9d.png)
SDS-PAGE 凝胶快速配制试剂盒简介:聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis , SDS-PAGE),其原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。
它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开,主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。
SDS-PAGE 凝胶快速配制试剂盒把所需的缓冲液、SDS 等预混于下层胶缓冲液(4×)(用于配制分离胶)和上层胶缓冲液(4×)(用于配制浓缩胶),分别含有Tris-HCl(pH8.8)、SDS 和Tris-HCl(pH6.8)、SDS ,具体配制的量应根据器具大小决定。
组成:操作步骤(仅供参考):1、 配制10%过硫酸铵:直接在Ammonium Persulfate 中加入蒸馏水,充分溶解,分装成小份储存于-20℃或4℃。
注意:一般用1.5mlEP 管分装成0.5-1ml 每支,-20℃保存,每支使用2-3次即弃用。
短期使用时,可保存于4℃,1周有效。
2、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度,按照下表配制分离胶(下层胶): 不同浓度的SDS-PAGE 分离胶的最佳分离范围:SDS-PAGE 分离胶浓度最佳分离范围 6%胶 50-150kD 8%胶 30-90kD 10%胶 20-80kD 12%胶 12-60kD 15%胶10-40kD成分配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml)编号 名称PE0017 30T Storage 试剂(A): 30% Acr-Bis(29:1) 100ml 4℃ 避光 试剂(B): 下层胶缓冲液(4×) 100ml RT 试剂(C): 上层胶缓冲液(4×) 30ml RT 试剂(D): Ammonium Persulfate 0.5g RT 试剂(E): TEMED 2×1ml4℃ 避光使用说明书1份6%胶 5 10 15 20 25 30 40 50 蒸馏水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%Acr-Bis(29:1) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8 10.0 下层胶缓冲液(4×) 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10 12.5 10%过硫酸铵0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.02 0.024 0.032 0.04成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml)8%胶 5 10 15 20 25 30 40 50 蒸馏水 2.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 18.5 23.2 30%Acr-Bis(29:1) 1.3 2.7 4.0 5.3 6.7 8.0 10.7 13.3 下层胶缓冲液(4×) 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10 12.5 10%过硫酸铵0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.015 0.018 0.024 0.03成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml) 10%胶 5 10 15 20 25 30 40 50 蒸馏水 1.9 4.0 5.9 7.9 9.9 11.9 15.9 19.8 30%Acr-Bis(29:1) 1.7 3.3 5.0 6.7 8.3 10 13.3 16.7 下层胶缓冲液(4×) 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10 12.5 10%过硫酸铵0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml) 12%胶 5 10 15 20 25 30 40 50 蒸馏水 1.7 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16.5 30%Acr-Bis(29:1) 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 16.0 20.0 下层胶缓冲液(4×) 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10 12.5 10%过硫酸铵0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml) 15%胶 5 10 15 20 25 30 40 50蒸馏水 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.9 9.2 11.5 30%Acr-Bis(29:1) 2.5 5 7.5 10 12.5 15.0 20.0 25.0 下层胶缓冲液(4×) 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10 12.5 10%过硫酸铵0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.023、按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)成分配制不同体积SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积(ml)5%胶 2 3 4 6 8 10蒸馏水 1.17 1.75 2.33 3.5 4.7 5.830%Acr-Bis(29:1) 0.33 0.5 0.67 1.0 1.3 1.7上层胶缓冲液(4×) 0.5 0.75 1.0 1.5 2.0 2.510%过硫酸铵0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1 TEMED 0.002 0.003 0.004 0.006 0.008 0.01注意事项:1、过硫酸铵配制成10%溶液后应当-20℃保存。
碧云天SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 P0692说明书
![碧云天SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 P0692说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/d8910eaf80c758f5f61fb7360b4c2e3f572725d8.png)
12% SDS-PAGE 凝胶超快速配制试剂盒产品简介:碧云天生产的12% SDS-PAGE 凝胶超快速配制试剂盒(12% SDS-PAGE Gel SuperQuick Preparation Kit)提供了简单而又超快速地配制12% SDS-PAGE 凝胶(即SDS 聚丙烯酰胺凝胶)所需的所有试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制12% SDS-PAGE 凝胶。
碧云天生产的SDS-PAGE 凝胶超快速配制试剂盒系列产品有6%、8%、10%、12%和15%共5种常见浓度供您选择,也可以考虑选购可以配制各种不同浓度SDS-PAGE 凝胶的P0012AC SDS-PAGE 凝胶快速配制试剂盒。
本试剂盒把SDS-PAGE 凝胶配制所需的Tris-HCl 、Acr-Bis(29:1)、SDS 等预混合成下层胶预混液和上层胶预混液,使用前仅需加入适量10%凝胶聚合催化剂和TEMED 即可简单快速地完成下层胶(分离胶)和上层胶(堆积胶)的配制。
本试剂盒约可配制30-50块常规大小的12% SDS-PAGE 凝胶。
具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。
保存条件:4ºC 保存,一年有效。
两种预混液及TEMED 均需4ºC 避光保存。
凝胶聚合催化剂更宜室温保存,4ºC 保存时需拧紧瓶盖注意防潮,受潮后会很快失效。
凝胶聚合催化剂用水配制成10%溶液后,分装成小管-20ºC 保存,通常半年内有效。
注意事项:凝胶聚合催化剂用水配制成10%水溶液后,应当-20ºC 保存。
同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。
推荐凝胶聚合催化剂每次均少量配制,并尽量使用较新鲜配制的10%凝胶聚合催化剂溶液。
下层胶预混液和上层胶预混液中含有Acr-Bis ,对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
TEMED 易挥发,使用后请盖紧瓶盖。
SDS-PAGE凝胶电泳操作
![SDS-PAGE凝胶电泳操作](https://img.taocdn.com/s3/m/8ca19be4caaedd3383c4d3a8.png)
SDS-PAGE凝胶电泳操作一、常规试剂的配制1. 30% 聚丙烯酰胺贮液:丙烯酰胺150g,甲叉双丙烯酰胺4g,双蒸水500ml,滤纸过滤后,棕色瓶避光4℃保存;2. 1.5mol/L,pH 8.8 Tris-HCl分离胶缓冲液:18.15g Tris,用1mol/L HCl定容至100ml,棕色瓶避光4℃保存;3. 1.0mol/L,pH 6.8 Tris-HCl分离胶缓冲液:12g Tris,用1mol/L 调pH至100ml,棕色瓶避光4℃保存;4. 10% SDS溶液:10g SDS加水定容至100ml,完全溶解室温保存;5. 10% AP溶液:0.1g AP(过硫酸铵)加水定容至1ml,用前新鲜配制;6. 1×SDS-PAGE电泳缓冲液:25mM Tris(3.0285g/L),192mM甘氨酸(14.41g/L),0.1%SDS (1g/L),pH 8.30;7. 染色液:0.25g 考马斯亮蓝R-250溶解于45ml甲醇,45ml水,10ml冰醋酸,过滤除去杂质;8. 脱色液:45ml甲醇,45ml水,10ml冰醋酸;9. 固定液:50ml甲醇,40ml水,10ml冰醋酸;10. 2×SDS-PAGE上样缓冲液:10% SDS 0.4ml,0.375M Tris-HCl(pH 6.8)0.333ml,甘油0.2ml,1% 溴酚兰10μL,β-疏基乙醇100μL,加水定容至1ml,分装后-20℃保存。
二、样品的处理1. 蛋白含量较低的酶制剂或原料样品(1)粉剂(或颗粒)样品称取样品1g,加入3-5ml蒸馏水进行搅拌溶解1h(搅拌时间可根据实际情况进行增减),4000rpm离心10min,取离心上清液等体积加入20%的三氯乙酸聚沉30min,离心,弃去离心上清液,用70%的丙酮溶液洗涤沉淀,4000rpm离心10min,重复洗涤3-5次,将丙酮洗涤液吹干,加入适量(1-3ml)PBS溶解沉淀,溶解液即可用于电泳实验。
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SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒
简介:
聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis , SDS-PAGE),其原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。
它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开,主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。
SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE 凝胶,也可配制非变性(native)PAGE 凝胶,具体配制的量应根据器具大小决定。
组成:
操作步骤(仅供参考):
1、 配制10%过硫酸铵:直接在Ammonium Persulfate 中加入蒸馏水,充分溶解,分装
成小份储存于-20℃或4℃。
注意:一般用1.5mlEP 管分装成0.5-1ml 每支,-20℃保存,每支使用2-3次即弃用。
短期使用时,可保存于4℃,1周有效。
2、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度,按照下表配制分离胶(下层胶): 不同浓度的SDS-PAGE 分离胶的最佳分离范围:
SDS-PAGE 分离胶浓度
最佳分离范围 6%胶 50-150kD 8%胶 30-90kD 10%胶 20-80kD 12%胶 12-60kD 15%胶
10-40kD
成分
配制不同体积SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml)
编号 名称
PE0018 30T Storage 试剂(A): 30% Acr-Bis(29:1) 100ml 4℃ 避光 试剂(B): 1.5M Tris-HCl(pH8.8) 100ml RT 试剂(C): 10% SDS
5ml RT 试剂(D): Ammonium Persulfate 0.5g RT 试剂(E): TEMED 2×1ml
4℃ 避光 使用说明书
1份
6%胶 5 10 15 20 25 30 40 50 蒸馏水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%Acr-Bis(29:1) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8 10.0 1.5M Tris,pH8.8 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10 12.5 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.02 0.024 0.032 0.04
成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml)
8%胶 5 10 15 20 25 30 40 50 蒸馏水 2.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 18.5 23.2 30%Acr-Bis(29:1) 1.3 2.7 4.0 5.3 6.7 8.0 10.7 13.3 1.5M Tris,pH8.8 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10 12.5 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.015 0.018 0.024 0.03
成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml) 10%胶 5 10 15 20 25 30 40 50 蒸馏水 1.9 4.0 5.9 7.9 9.9 11.9 15.9 19.8 30%Acr-Bis(29:1) 1.7 3.3 5.0 6.7 8.3 10 13.3 16.7 1.5M Tris,pH8.8 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10 12.5 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02
成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml) 12%胶 5 10 15 20 25 30 40 50 蒸馏水 1.7 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16.5 30%Acr-Bis(29:1) 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 16.0 20.0 1.5M Tris,pH8.8 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10 12.5 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02
成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(ml) 15%胶 5 10 15 20 25 30 40 50 蒸馏水 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.9 9.2 11.5
30%Acr-Bis(29:1) 2.5 5 7.5 10 12.5 15.0 20.0 25.0 1.5M Tris,pH8.8 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10 12.5 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 注:如果配制非变性胶,参考上述配方,不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。
3、按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)
成分配制不同体积SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积(ml)
5%胶 1 2 3 4 6 8 10
蒸馏水0.68 1.4 2.1 2.7 4.1 5.5 6.8
30%Acr-Bis(29:1) 0.17 0.33 0.5 0.67 1.0 1.3 1.7
1M Tris,pH6.8 0.13 0.25 0.38 0.5 0.75 1.0 1.25
10%SDS 0.01 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
10%过硫酸铵0.01 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1 TEMED 0.001 0.002 0.003 0.004 0.006 0.008 0.01
注意事项:
1、过硫酸铵配制成10%溶液后应当-20℃保存。
应尽量减少室温存放时间以防失效。
有效
避免失效的方法是分成小份,-20℃保存,用2~3次,剩余的弃用,亦可4℃保存几天。
2、TEMED易挥发,使用后请盖紧瓶盖。
另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可
通过适当调节TEMED的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3、配制聚丙烯凝胶的过程中,如果室温较低,可以置于37℃放置,加速凝固。
4、30%Acr-Bis(29:1)有轻微神经毒性,请小心操作。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:12个月有效。
附录:SDS-PAGE、Western原理:
相关:
编号名称
PE0025SDS-PAGE蛋白加样缓冲液(5×)
PE0080Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH6.8)
PE0081Tris-HCl缓冲液(1.5mol/L,pH8.8)
PE0092Tris-甘氨酸电泳缓冲液(5×)
PE0103Acr-Bis(30%,29:1)
PT0001BCA蛋白定量试剂盒
PT0013考马斯亮蓝快速染色液
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。