结核杆菌特异性细胞免疫反应监测

2021/1/12
14
A.TBTM 报告单
姓名
年龄
性别
ID号
Байду номын сангаас
科别
诊断
样本
样本号
检测项目
测定结果 单位
混合淋巴细胞培养 + 干扰素（P） 9.86 混合淋巴细胞培养 + 干扰素（T） 2.34
IU/ml IU/ml
计算公式 参考范围 提示 T/P
0.24 ＜ 0.6 阴性（-）
N值体现的是机体的本底干扰素水平 P 值体现的是整体的机体免疫水平是否正常
2011年7月6日，获中华人民共和国食品药品监督管理局（SFDA）批准上市
生 产 企 业： 海口维瑅瑷生物研究院
注 册 号： 国食药监械（准）字2011第3400801；
产品标准编号： YZB/国 2442-2011，
项 目 类 别： 体外三类诊断试剂
2021/1/12
6
原理与技术背景
• γ-干扰素释放实验（IGRA） （IGRA，interferon- gamma release assay）
13
A.TBTM 操作过程
第一步：样本的刺激
16小时内运输 常温
样本采集：3ml新鲜全 血，肝素钠抗凝
NP T
37 ℃
阴性 阳性 A.TB 刺激剂 刺激剂 刺激剂
样本的刺激和孵育
37 ℃ 22-24小时
第二步：ELISA定量IFN-γ
约3小时
0.5小时
NPT
血浆收获
标准曲线制备、 样品检测
450nm读数
2021/1/12
3
-干扰素释放分析技术 （Interferon-gamma Release Assay,简称IGRA）
应用现状： IGRA技术是国际最新的用于结核杆菌感染的体外免疫诊断方法； 在北美、欧洲和日本已被广泛应用于结核杆菌感染的检测，包括
➢结核病辅助诊断； ➢高危人群筛查； ➢公共卫生突发事件； ➢健康人群体检等； 美国和日本已经将该技术写入该国用于结核防治的指导原则中。
1(7.7%) 1(20%)
7(77.8%) 31(88.6%)
2(22.2%) 4(11.4%)
2021/1/12
12
样本要求
1. 新鲜采集的肝素钠抗凝全血 2. 每份样本不得少于3 ml 3. 样本常温（15-25℃）保存，不得冷冻或冷藏 4. 样本采集后 16 小时内进行前处理（抗原刺激）
2021/1/12
结核杆菌特异性细胞免疫反应监测
结核病疫情
感染人数：全球人口的1/3，中国的感染率为44.5%；感染者 一生中会有约10%的风险发展成为结核病； 年新发病例数：
✓全球每年报告新病例约800-1000 万； ✓中国每年报告新病例约150万； 死亡人数：全球每年死亡病例约300万；其中中国约13万； 中国是全球22个结核病高负担国家之一。
• 酶联免疫技术（ELISA） （ELISA，Enzyme-Linked ImmunoAssay）
• 结核杆菌特异抗原 早期抗原靶6（ESAT-6） early secreted antigenic target 6 培养滤液蛋白10（CFP 10） （culture filtrate protein 10 ）
备注：T 值体现的是机体内T淋巴细胞对结核杆菌特异性抗原刺激的反应 患者样本经结核分枝杆菌RD1区编码的全抗原刺激后，特异性释放的γ-干扰素水平
为 2.34 IU/ml；非特异释放的γ-干扰素水平为 9.86 IU/ml；两者的比值为： 0.24 ；
是否为活动性结核，请结合临床进行判断。
2021/1/12
2021/1/12
4
全球现有的三个IGRA产品
T.SPOT-TB ✓ 细胞IGRA；
QuantiFERON TB Gold (in tube)：简称 QFT-IT ✓ 全血IGRA； ✓ 尚未获得中国SFDA批准进入中国；
A.TB：国内第一家 ✓ 全血IGRA；
2021/1/12
5
结核杆菌特异性细胞免疫反应检测
Proteosome 蛋白酶体
exocytosis
抗原呈递细胞
结核杆菌特异 性T细胞
-干扰素
2021/1/12
8
产品特点
高灵敏度
○ 结核感染引起的细胞免疫反应早于细菌学及影像学表现； ○ 无需带菌标本，适用于“菌阴肺结核”及“肺外结核” 的鉴别 ○ 受个体免疫功能低下影响小；
高特异性 不受卡介苗与绝大多数环境非结核分枝杆菌影响 安全快速 只需患者提供 3ml 静脉全血，次日可出报告
5.8[4.8-7.1] 0.2[0.16-0.24]
2021/1/12
11
A.TB临床诊断数据-2
疾病类型
艾滋病感染者合并活动性结核 糖尿病合并活动性结核 类风湿合并活动性结核
结核性胸膜炎同时服用免疫抑制剂 合计
例数
8 13 5 9 35
A.TB
阳性
阴性
8(100%)
0(0%)
12(92.3%) 4(80%)
2021/1/12
2
9
A.TB临床性能指标
国内临床数据——1085 例样本
● 试验组 472 例：
菌阳结核 菌阴结核
● 对照组 613 例：
健康志愿者 非结核其它肺部疾病
2021/1/12
10
临床诊断性能
诊断性能指标 敏感性 特异性 准确度
阳性预测值 阴性预测值 阳性似然比 阴性似然比
结果（95%CI） 83.3%[79.9%-86.7%] 85.6%[82.8%-88.4%] 84.6%[82.5%-86.7%] 81.7%[78.2%-85.2%] 86.9%[84.2%-89.6%]
2021/1/12
7
γ-干扰素释放实验（IGRA）
基本原理1
机体感染结核杆菌后产生的T淋巴细胞在体外受到特异性抗 原刺激时会释放γ-干扰素，通过对 γ-干扰素的定量分析可判 断是否具有结核杆菌的特异性T细胞反应。
LFnESAT6 / LFnCFP10
脱毒的炭疽毒素致死因子片段LFn，可以起到分子 注射器的作用
2021/1/12
2
结核病诊断和辅助诊断方法现状
影像学方法：特异性较差，与医师的经验有关，主观性强。 培养：结核病诊断金标准，敏感性为30-50%且耗时2-8周； 抗酸染色法（俗称涂片）：敏感性为30-40%； 血清结核抗体定性检测：敏感性在0-100%，特异性约为47-100%； 分子诊断方法（如PCR）：重复性较差，需要痰标本； 结核菌素试验（TST）：受卡介苗干扰，特异性差，在肺结核病人中存在1025%的假阴性。
15
阴性结果
A.TBTM 结果解释