植物生物学实验_二_2根系活力的测定—a-萘胺氧化法
试验一植物根系活力的测定
植物生理学实验指导书指导老师马红亮福建师范大学地理科学学院生态系实验一植物根系活力的测定（α-萘胺氧化法）植物根系的作用，主要有(1)对地上部的支持和固定；(2)物质的贮藏；(3)对水分和盐类的吸收；(4)合成氨基酸、激素等物质。
因此根系的活力是植物生长的重要生理指标之一。
一、实验目的通过实验，掌握用α－萘胺法测定植物根系活力的原理和技术。
二、实验原理植物的根系能氧化吸附在根表面的α─萘胺，生成红色的α—羟基—1—萘胺，沉淀于有氧化力的根表面，使这部分根染成红色，其反应如下：根对α-萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切关系。
日本人相见、松中等认为α-萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的催化作用，该酶的活力愈强，对α—萘胺的氧化力也愈强，染色也愈深。
所以，可根据染色深浅定性地判断根的活力；也可测定溶液中未被氧化的α-萘胺量，计算已被氧化的α-萘胺量确定根系活力的大小。
在酸性环境中对氨基苯磺酸与亚硝酸盐先反应，再和α-萘胺作用生成红色的偶氮染料，可在510nm比色测定α-萘胺含量。
其反应如上。
三、实验仪器药品分光光度计，分析天平，烘箱，三角烧瓶，量筒，移液管，刻度试管Α-萘胺溶液：称10mg α-萘胺，先用2ml左右的95%酒精溶解，然后加水到200ml，成50μg/ml的溶液。
0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0（见附表2）A液：0.2mol/L磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O 27. 8g配成1000ml）。
B液：0.2mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O53.65g或Na2HPO4·12H2O71.7g 配成1000ml）。
用时取A液39ml，B液61ml混合，稀释至200ml即成。
1%对氨基苯磺酸：将1g对氨基苯磺酸溶解于100ml 30%的醋酸溶液中。
亚硝酸钠溶液：称10mg亚硝酸钠溶于100ml水中。
四、实验操作步骤定量测定(1) 挖出水稻植株，并用水洗净根系上的泥土，剪下它的根系，再用水洗，待洗净后用滤纸吸去根表面的水分，称根称2g根放在100ml三角烧瓶中。
根系活力的测定（–萘胺氧化法）target=_blank
根系活力的测定（–萘胺氧化法）target=_blank根系活力的测定(α-萘胺氧化法) 与过氧化物酶活性的测定09050321 孙蕾蕾 09050322 余浣莎一、实验目的1、掌握α-萘胺法测定根系的活力2、观察重金属胁迫对根系活力的影响3、掌握比色法测定过氧化物酶活性的原理和步骤二、实验原理1、植物根系能氧化α-萘胺,可通过测定溶液中未被氧化的α-萘胺的量,定量测定根系活力。
2、在有过氧化氢情况下过氧化物酶能使愈创木酚氧化生成茶褐色物质，该物质在470nm处有最大吸收，可用分光光度计测OD470的变化来测定活力。
三、实验步骤1、取50ug/mL的α-萘胺和磷酸缓冲液各25mL,于三角瓶中混匀,须根系洗净吸干,取0.5g浸入三角瓶,同法处理无根系对照组,5min后从两瓶中各取2mL,按步骤3做第一次测定。
2、将两三角瓶置于25度恒温瓶避光保存60min后,各取2mL,按3做第二次测定。
3、取2mL培养液加10mL水混匀,再依次加入1mL对氨基磺酸与1mL亚硝酸钠,混匀,观察溶液颜色变化,再定容至25mL。
室温25min 后,于510nm处测定吸光度(OD)值。
4、标准曲线的制备：以50ug/mL的α-萘胺溶液为母液，配制40、30、10、5、0ug/mL的溶液各10mL。
各取2mL，按照步骤3分别反应，并测定OD值。
以OD值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制α-萘胺溶液的标准曲线，或者根据浓度与OD值关系直接计算回归方程。
5、分别查对标准曲线，或利用回归方程直接计算出实验组与对照组溶液实验前后对应的α-萘胺溶液浓度。
6、提取野菱叶片（去主脉）的酶液。
7、现配反应混合物，即50m LpH6.0磷酸液+28ul愈创木酚+19ul H2O2(30％)8、取两只比色杯，1只加3mL反应液+0.2mL磷酸缓冲液，调零。
另一只加3mL反应液，加0.2mL酶液，立即开始计时，每隔10s读数1次。
直至OD470≥1.00。
实验二根系活力的测定a萘胺氧化法研究报告
6．换算浓度
• 分别查对标准曲线，或利用回归方程直接 计算出实验组与对照组溶液实验前后对应 的α-萘胺浓度（ C、C’与 C0、C’0 ）。
2. 测定根系活力时最好选择根的哪个部位？ 为什么？
3. 3. 简述分光光度计使用过程及注意事项。
4、在使用分光光度计时，为什么每改变一次 波长，就需要重新调零和调透光率100%？
5、为什么在测定时需要洗净比色皿？洗净的 比色皿在倒入提取液时为什么还要用提取 液洗2-3遍？
4、a-萘胺含量测定
• 取2 mL培养液加10 mL水混匀，再顺次加入1 mL 对氨基苯磺酸溶液与1 mL亚硝酸钠溶液，混匀， 观察溶液颜色变化，再定容至25 mL。
• 室温25min后，于510nm处测定吸光度（OD）值。
5．标准曲线制作：
• 以50 μg/mL的α-萘胺溶液为母液，配置40、 30、20、10、5、0 μg/mL的溶液各10 mL。
与植物生长势比较，分析植物生长势与
根系活力之间的关系。
（二）定量测定
1、实验处理
• 取50 μg/mL 的α-萘胺溶液和0.1 mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液各25 mL，置于三角瓶中， 混匀。
• 称取根系2 g浸没于三角瓶中的溶液中。 • 同样地，取50 μg/mL的α-萘胺溶液和0.1
mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液各25 mL，置于 另一三角瓶中，混匀，不放根系作为对照。
定量测定
对-苯磺酸-偶氮-α-萘胺
•生成的红色偶氮化合物在pH 7.0时在510 nm处有最大吸收峰，可用分光光度法测定 光吸收值，从而利用此反应来间接测定溶液 中α-萘胺的量。
根的活力测定(ɑ—萘胺氧化法)与过氧化酶活性的测定(比色法)
根的活力测定（ɑ—萘胺氧化法）与过氧化酶活性的测定（比色法）09050130 浦荷芳 09050128 徐丽丽 09050129 夏顺翔实验一原理：植物根系能氧化ɑ—萘胺，生成红色的ɑ—羟基-1-萘胺，并沉淀于有氧化能力的根表面，使这部分根染成红色。
根对ɑ—萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切联系。
日本人相见松中认为ɑ—萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的作用，该酶的活力越强，对ɑ—萘胺的氧化力也越强，染色也越深。
所以既可根据根系表面着色深浅，定性观察并判断根系活力大小，也可通过测定溶液中未被氧化的ɑ—萘胺的量，以定量测定根系活力。
ɑ—萘胺在酸性环境中可与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成稳定的红色偶氮染料。
生成的红色偶氮化合物在PH7.0时在540nm处有最大吸收峰，可用分光光度法测定光吸收值，从而利用此反应来简介测定溶液中ɑ—萘胺的量。
反应液的酸度大则增加重氮化作用的速度，但降低偶联作用的速度，颜色比较稳定。
增加温度可以增加反应速度，但降低重氮盐的稳定度，所以反应需要在相同能够条件下进行。
目的：掌握ɑ—萘胺法测定根系活力，观察重金属胁迫对根系活力的影响。
仪器与用品：分光光度计天平三角烧瓶量筒移液管剪刀玻棒试剂：1、ɑ—萘胺溶液：称取10mgɑ—萘胺放在烧杯中，先用2mL左右0.95酒精溶解，然后加水定容到200mL，成50ug/mL的溶液。
另取150mL 50ug/mL溶液加水定容至300mL,成25ug/mL的ɑ—萘胺溶液。
2、0.1mol/L磷酸缓冲液亚硝酸钠溶液,pH7.0。
3、0.01对氨基苯磺酸溶液。
步骤：1、取50ug/ml的ɑ—萘胺和磷酸缓冲液各25ml ，在三角瓶中混匀。
将须根系洗净吸干，取0.5g浸入三角瓶。
同样取ɑ—萘胺与磷酸缓冲液各25ml于另一三角瓶，不放根系作为对照。
5min后，两瓶各取2ml溶液。
然后按照步骤3进行第一次测定。
2、将两个三角瓶置于25℃恒温箱，避光保存60min后，各取2ml，再按照步骤3做第二次测定。
实验二：植物根系氧化力的测定
植物营养学 实验教材何华 主编资源与环境学院植物营养学教研室目录实验一：作物根系阳离子代换量（CEC）的测定 (2)实验二：植物根系氧化力的测定 (4)实验三：作物根系脱氢酶活性测定 (8)实验一作物根系阳离子代换量（CEC）的测定（3学时）1.试验目的：根系是作物吸收养分的重要器官，作物根系阳离子代换量（Cation Exchange Content，CEC）的大小，大体上可反映根系吸收养分的强弱和多少，因此，测定根系阳离子代换量（CEC）对于了解作物吸收养分的能力与指导合理施肥具有一定的意义。
2.原理：根系中的阳离子，在稀盐酸中，能被氢离子代换出来，而根系所吸收的氢离子量与代换出来的阳离子量相等。
在洗去多余的盐酸溶液后，用中性氯化钾溶液将氢离子代换出来，以氢氧化钾溶液滴定至pH 7.0，根据消耗氢氧化钾的浓度和用量，计算出阳离子代换量（每百克干根的毫摩尔数）。
3.试剂和仪器设备试剂配制1）．1 mol/L KCl溶液：称取分析纯氯化钾74.55 g，溶于800 mL蒸馏水中，用氢氧化钾调至溶液pH值到7.0后定容于1 L容量瓶中。
2）．0.01 mol/L KOH溶液：称取分析纯氢氧化钾0.561 g，用蒸馏水溶解后定容至1 L。
3)．0.01mol/L HCl：吸取比重1.19的浓HCl 0.83 mL，用蒸馏水定容至1 L。
4）．酸碱混合指示剂:1份0.1%中性红酒精溶液与1份0.1%次甲基兰酒精溶液混合。
5）．2%的AgNO3溶液：称取2 g AgNO3溶于蒸馏水中，稀释至100 mL。
仪器设备：分析天平、pH计、不锈钢剪刀、0.5-1.0mm土壤筛、漏斗、滴定管等。
4.实验操作步骤：从田间选取具有代表性的植株若干（尽可能不要损坏根系），先用水冲洗根系，再放在筛子上置于水中轻轻振荡，至洗净为止，后再用蒸馏水冲洗数次，然后切去地上部分，置于30℃烘箱中烘干（一般烘8小时以上），将烘干根样取出磨细，过18-25号筛（0.7-1.0 mm），混合均匀，贮于广口瓶中备用。
根系活力测定1
根系活力的测定植物根系的作用，主要有(1)对地上部的支持和固定；(2)物质的贮藏；(3)对水分和盐类的吸收；(4)合成氨基酸、激素等物质。
因此根系的活力是植物生长的重要生理指标之一。
这里介绍两种测定方法，供选用。
Ⅰ.α—萘胺氧化法原理植物的根系能氧化吸附在根表面的α─萘胺，生成红色的α—羟基—1—萘胺，沉淀于有氧化力的根表面，使这部分根染成红色，其反应如下：根对α—萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切关系。
日本人相见、松中等认为α—萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的催化作用，该酶的活力愈强，对α—萘胺的氧化力也愈强，染色也愈深。
所以，可根据染色深浅定性地判断根的活力；也可测定溶液中未被氧化的α—萘胺量，以确定根系活力的大小。
α—萘胺在酸性环境中与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成红色的偶氮染料，可供比色测定α—萘胺含量。
其反应如下：仪器药品分光光度计分析天平烘箱三角烧瓶量筒移液管α—萘胺溶液：称10mgα—萘胺，先用2ml左右的95%酒精溶解，然后加水到200ml，成50μg/ml的溶液。
另取150ml 50μg/ml溶液再加水150ml成25μg/ml的α—萘胺溶液。
0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0（见附表2）1%对氨基苯磺酸：将1g对氨基苯磺酸溶解于100ml 30%的醋酸溶液中。
亚硝酸钠溶液：称10mg亚硝酸钠溶于100ml水中。
操作步骤1．定性观察从田间挖取水稻植株，用水冲洗根部所附着的泥土，洗净后再用滤纸吸去附着在水稻根上的水分。
然后将植株根系浸入盛有α—萘胺溶液的容器中（α—萘胺的浓度为25μg/ml），容器的外面用黑纸包裹，静置24梍36小时后观察水稻根系着色状况。
着色深者，其活力较着色浅者为大。
2．定量测定(1) α—萘胺的氧化挖出水稻植株，并用水洗净根系上的泥土，剪下它的根系，再用水洗，待洗净后用滤纸吸去根表面的水分，称根1梍2g放在100ml三角烧瓶中。
然后加50μg/ml的α—萘胺溶液与磷酸缓冲液(pH7.0)等量混合液50ml，轻轻振荡，并用玻璃棒将根全部浸入溶液中，静置10分钟。
测定植物根系活力的方法
测定植物根系活力的方法植物根系活力的测定方法是评估植物根系对环境中水、养分吸收、物质转运和生长发育的能力。
根系活力的好坏直接影响植物的生长和发育，因此了解植物根系活力的方法对于植物科学研究和农业生产具有重要意义。
以下将介绍几种常用的植物根系活力的测定方法。
1.根系生物学特性测定法：通过观察和记录植物根系的形态特征和生物学特性来评估根系活力。
这包括根长、根径、根重等指标的测定，以及根系分布类型的形态观察。
利用这些指标可以判断植物根系的生长速度、形态健康程度和养分吸收能力。
2.根系解剖学测定法：通过对植物根系进行解剖学观察，以评估根系的发育状态和组织结构。
常用的方法包括石蜡切片和酶解法。
石蜡切片可以观察根系的细胞构造、组织分化和结构特点，进而了解根系的生长发育情况。
酶解法则可以通过酶解组织中的细胞壁来观察和测定各种细胞器官的数量和形态特征，进一步了解根系细胞的内部结构和生物化学成分。
3.根系生理生化测定法：通过测定植物根系生理和生化指标来评估根系的活力。
例如，可以测定根系中的ATP含量、蛋白质含量、酶活性等。
这些指标可以反映根系的能量代谢和生化途径的活跃程度，从而评估根系对环境应激的响应和适应能力。
4.根际土壤生态学测定法：通过分析和评估植物根系周围土壤的物理、化学和生物学性质来间接评估根系活力。
例如，可以测定土壤pH值、有机质含量、水分含量、微生物数量和多样性等指标。
这些指标可以反映根际土壤的生态环境和根系与土壤相互作用的程度，进而评估根系的活力和土壤肥力。
5.根系功能测定法：通过测定植物根系的吸收能力和生理功能来评估根系活力。
例如，可以测定根系对不同养分元素的吸收速率和效率，以及对重金属、盐分、毒物和逆境胁迫的耐受能力。
这些指标可以评估植物根系对环境因子的适应和响应能力，从而判断根系的活力和适应性。
综上所述，了解植物根系活力的方法有多种，常用的包括根系生物学特性测定法、根系解剖学测定法、根系生理生化测定法、根际土壤生态学测定法和根系功能测定法等。
植物根系活力的测定(α─萘胺法)及过氧化物酶活性的测定(比色法)_百替生物
植物根系活力的测定（α─萘胺法）及过氧化物酶活性的测定（比色法）薛静23050240宣扬23050230陈鸿飞23050218刘晏23050209【实验目的】1.掌握α─萘胺氧化法测定根系活力方法2.比色法测定过氧化物酶活性的原理和步骤。
【实验原理】植物的根系能氧化吸附在根表面的α─萘胺，生成红色的α—羟基—1—萘胺，沉淀于有氧化力的根表面，使这部分根染成红色，其反应如下：根对α—萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切关系。
日本人相见、松中等认为α—萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的催化作用，该酶的活力愈强，对α—萘胺的氧化力也愈强，染色也愈深。
所以，可根据染色深浅定性地判断根的活力；也可测定溶液中未被氧化的α—萘胺量，以确定根系活力的大小。
α—萘胺在酸性环境中与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成红色的偶氮染料，在中性环境下于540nm处有最大吸收峰，可供比色测定α—萘胺含量。
另一方面，过氧化物酶活性反映某一时间植物体内代谢的变化。
在过氧化氢的存在下，过氧化物酶氧化愈创木酚，生成茶褐色物质，该物质在470nm处有最大吸收，可用分光光度计测量470nm处吸光度变化来测定过氧化物酶活性。
【实验过程】1材料、仪器设备及试剂1.1材料：菹草。
取生长季节的新鲜菹草，洗净，用滤纸吸干表面水分，待用。
水培水稻等植物根系1.2仪器设备：分光光度计；电子分析天平；振荡器；刻度试管（或普通试管）；试管架；移液管（10ml、2ml、1ml）；移液管架；吸水纸；洗耳球；黑纸；100ml三角瓶；100ml量筒。
1.3试剂及配制：50μg/mlα－萘胺母液的配制：精确称取0.1000g分析纯α－萘胺溶于约50ml蒸馏水中（微微加热），冷却后定容至100ml，即为1000μg/mlα－萘胺溶液，保存于棕色瓶中，置低温黑暗处保存。
使用前吸取1000μg/mlα－萘胺溶液50ml加蒸馏水稀释至1000ml即为50μg/mlα－萘胺母液。
1％对氨基苯磺酸溶液配制：称取1g对氨基苯磺酸溶于100ml30％乙酸中。
根的活力测定
根的活力测定（ɑ—萘胺氧化法）与过氧化酶活性的测定（比色法）09050130 浦荷芳 09050128 徐丽丽 09050129 夏顺翔实验一原理：植物根系能氧化ɑ—萘胺，生成红色的ɑ—羟基-1-萘胺，并沉淀于有氧化能力的根表面，使这部分根染成红色。
根对ɑ—萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切联系。
日本人相见松中认为ɑ—萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的作用，该酶的活力越强，对ɑ—萘胺的氧化力也越强，染色也越深。
所以既可根据根系表面着色深浅，定性观察并判断根系活力大小，也可通过测定溶液中未被氧化的ɑ—萘胺的量，以定量测定根系活力。
ɑ—萘胺在酸性环境中可与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成稳定的红色偶氮染料。
生成的红色偶氮化合物在PH7.0时在540nm处有最大吸收峰，可用分光光度法测定光吸收值，从而利用此反应来简介测定溶液中ɑ—萘胺的量。
反应液的酸度大则增加重氮化作用的速度，但降低偶联作用的速度，颜色比较稳定。
增加温度可以增加反应速度，但降低重氮盐的稳定度，所以反应需要在相同能够条件下进行。
目的：掌握ɑ—萘胺法测定根系活力，观察重金属胁迫对根系活力的影响。
仪器与用品：分光光度计天平三角烧瓶量筒移液管剪刀玻棒试剂：1、ɑ—萘胺溶液：称取10mgɑ—萘胺放在烧杯中，先用2mL左右0.95酒精溶解，然后加水定容到200mL，成50ug/mL的溶液。
另取150mL 50ug/mL溶液加水定容至300mL,成25ug/mL的ɑ—萘胺溶液。
2、0.1mol/L磷酸缓冲液亚硝酸钠溶液,pH7.0。
3、0.01对氨基苯磺酸溶液。
步骤：1、取50ug/ml的ɑ—萘胺和磷酸缓冲液各25ml ，在三角瓶中混匀。
将须根系洗净吸干，取0.5g浸入三角瓶。
同样取ɑ—萘胺与磷酸缓冲液各25ml于另一三角瓶，不放根系作为对照。
5min后，两瓶各取2ml溶液。
然后按照步骤3进行第一次测定。
2、将两个三角瓶置于25℃恒温箱，避光保存60min后，各取2ml，再按照步骤3做第二次测定。
根系活力的测定实验报告
根系活力的测定实验报告根系活力的测定实验报告引言：植物的根系是其生长发育的基础，根系的健康与否直接影响着植物的生长状况和产量。
因此，测定根系活力对于了解植物的生长状态和优化栽培管理具有重要意义。
本实验旨在通过测定根系活力的方法，探究植物根系的健康状况，并为植物栽培提供参考依据。
实验材料与方法：实验材料：小麦种子、培养皿、滤纸、蒸馏水、酒精、石蜡、显微镜等。
实验方法：1. 将小麦种子浸泡在蒸馏水中，放置于室温下孵化24小时，使种子发芽。
2. 准备培养皿，将滤纸铺在底部，加入适量的蒸馏水。
3. 将发芽的小麦种子均匀分布在滤纸上，盖上培养皿盖。
4. 将培养皿放置于光照适宜的环境中，保持适宜的温度和湿度。
5. 在培养过程中，观察小麦根系的生长情况，并记录观察结果。
6. 在观察结束后，将小麦根系取出，用酒精进行固定处理。
7. 将固定后的根系进行染色，常用的染色剂有苏丹红、伊红等。
8. 在染色后，使用显微镜观察并记录根系的形态特征，并进行测量。
实验结果与分析：通过实验观察发现，小麦种子在适宜的温度和湿度条件下，经过一段时间的孵化，根系开始生长并逐渐发展。
根系的生长速度与健康状况密切相关，健康的根系生长迅猛，根系长度较长，根毛丰富，根尖呈白色或浅黄色。
而受到环境不良条件或病害侵袭的根系生长缓慢，根系长度较短，根毛稀疏，根尖呈暗色或变形。
根系的形态特征也是评估根系活力的重要指标之一。
正常生长的根系呈分枝状，根毛发达，根尖锐利。
而受到逆境影响的根系则呈现出畸形生长的特点，如根系弯曲、根毛退化、根尖变形等。
通过实验测量根系的长度、根毛的密度等参数，可以进一步定量评估根系活力。
根系长度的测量可以通过显微镜下的目测或图像处理软件进行，根毛的密度可以通过计数单位面积内的根毛数目来确定。
根系长度和根毛密度的增加通常表明根系的活力较高，植物对环境的适应能力较强。
结论：通过本实验的测定方法，我们可以对植物根系的活力进行初步评估。
根系活力测定方法精选全文完整版
可编辑修改精选全文完整版实验一根系活性的测定1．原理：植物的根系能氧化吸附在根表面的α-萘胺，生成红色的α-羟基-1-奈胺，沉淀于有氧化力的根表面，使这部分根染成红色。
根对α-萘胺氧化能力与其呼吸强度有密切关系，日本人相见、松中等人认为α-萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的作用，该酶的活力愈强，对α-萘胺的氧化力也愈强，染色也愈深。
所以，可以根据染色深浅定性的判断根的活力。
α-萘胺在酸性环境中与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成红色的偶氮染料，可供比色测定α-奈胺含量。
2.药品：（1）40ppm（ug/ml）α-萘胺溶液：精确称取0.10g分析纯α-萘胺，先用2ml95%酒精溶解，加约50ml蒸馏水移入100ml容量瓶中，然后稀释至刻度，保存于棕色瓶中，置于低温暗处保存。
用前稀释25倍（40ml稀释至1000ml）即为40ppm溶液。
（2）１％对氨基苯磺酸溶液：称1ｇ对氨基苯磺酸溶于100ml30%乙酸（醋酸）中。
（3）100ppm亚硝酸钠溶液：称0.10g亚硝酸钠溶于1000ml蒸馏水中。
（4）0.067mol/L pH7.0磷酸缓冲液分子量0.067mol PH7.0(1000ml磷酸缓冲液)所需量（ｇ）Ｎa2HPO4.2H2O 178.057.1184gＮa2HPO4.12H2O 358.22 14.4004gKH2PO4136.09 3.6292gＮa2HPO4.2H2O 7.1184g (或Ｎa2HPO4.12H2O 14.4004g)+ KH2PO4 3.6292g定容到1000ml容量瓶中。
3.方法与步骤：(1)α-萘胺标准曲线的绘制：用40ppmα-萘胺溶液配制成0、5、10、20、30、40ppm各浓度α-萘胺的配制：用40ppm溶液配制混匀，置室温（20~25度）下５分钟使之显色，最后加入蒸馏水，使整个容积为25ml, 摇匀，在20-60分钟内用510nm波长进行比色，以对照光密度为０，读取光密度，以α-萘胺含量作横坐标，光密度作纵坐标绘制标准曲线。
根系活力测定方法
实验一根系活性的测定1．原理：植物的根系能氧化吸附在根表面的α-萘胺，生成红色的α-羟基-1-奈胺，沉淀于有氧化力的根表面，使这部分根染成红色。
根对α-萘胺氧化能力与其呼吸强度有密切关系，日本人相见、松中等人认为α-萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的作用，该酶的活力愈强，对α-萘胺的氧化力也愈强，染色也愈深。
所以，可以根据染色深浅定性的判断根的活力。
α-萘胺在酸性环境中与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成红色的偶氮染料，可供比色测定α-奈胺含量。
2.药品：（1）40ppm（ug/ml）α-萘胺溶液：精确称取0.10g分析纯α-萘胺，先用2ml95%酒精溶解，加约50ml蒸馏水移入100ml容量瓶中，然后稀释至刻度，保存于棕色瓶中，置于低温暗处保存。
用前稀释25倍（40ml稀释至1000ml）即为40ppm溶液。
（2）１％对氨基苯磺酸溶液：称1ｇ对氨基苯磺酸溶于100ml30%乙酸（醋酸）中。
（3）100ppm亚硝酸钠溶液：称0.10g亚硝酸钠溶于1000ml蒸馏水中。
（4）0.067mol/L pH7.0磷酸缓冲液分子量0.067mol PH7.0(1000ml磷酸缓冲液)所需量（ｇ）Ｎa2HPO4.2H2O 178.057.1184gＮa2HPO4.12H2O 358.22 14.4004gKH2PO4136.09 3.6292gＮa2HPO4.2H2O 7.1184g (或Ｎa2HPO4.12H2O 14.4004g)+ KH2PO4 3.6292g定容到1000ml容量瓶中。
3.方法与步骤：(1)α-萘胺标准曲线的绘制：用40ppmα-萘胺溶液配制成0、5、10、20、30、40ppm各浓度α-萘胺的配制：用40ppm溶液配制α-萘胺标准曲线的绘制混匀，置室温（20~25度）下５分钟使之显色，最后加入蒸馏水，使整个容积为25ml, 摇匀，在20-60分钟内用510nm波长进行比色，以对照光密度为０，读取光密度，以α-萘胺含量作横坐标，光密度作纵坐标绘制标准曲线。
a-萘胺法测定植物根系活力及过氧化物酶活性的测定
a-萘胺法测定植物根系活力及过氧化物酶活性的测定顾莎莎09050135 顾亚东09050134 薛烨21051138摘要：植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和代谢水平即根系活力直接影响植物地上部分的生长和营养状况以及产量，是植物生长的重要生理指标之一。
过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢变化。
关键词：根系活力；a-萘胺；过氧化物酶；愈创木酚植物根系能氧化a-萘胺，生成红色的a-羟基-1-萘胺，并沉淀于有氧化能力的根表面，使这部分根染成红色。
根对a-萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切联系。
日本人相见、松中等认为a-萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的作用，该酶的活性越强，对a-萘胺的氧化力也越强，染色也越深。
a-萘胺在酸性环境中可与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成稳定的红色偶氮燃料，其在pH7.0时在540nm处有最大吸收峰，可用分光光度法测定光吸收值,从而利用此反应来间接测定溶液中a-萘胺的量。
在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量470nm处的吸光度变化来测定过氧化物酶活性。
⒈材料与方法1.1 实验材料野菱须根系，a-萘胺溶液，0.1mol/L磷酸缓冲液，1％对氨基苯磺酸溶液，亚硝酸盐溶液，野菱的叶，愈创木酚，30％过氧化氢，100mmol/L磷酸缓冲液pH6.0，反应混合液1.2 实验方法1.2.1 a-萘胺法测定植物根系活力①取50ug/ml a-萘胺和磷酸缓冲液各25ml，于三角烧瓶中混匀，须根系洗净、吸干，取1~2克，浸入瓶中，同样取a-萘胺和磷酸缓冲液各25ml于另一三角瓶，不放根系作对照，5min 后两瓶各取2ml，按步骤③作第一次测定。
②将两瓶置于25℃恒温箱保存60min后，各取2ml，按步骤③作第二次测定。
根系活力与过氧化物酶活性的测定
根系活力与过氧化物酶活性的测定丁丽20050301 喻若颖20050337 彭婵娟20050339一实验目的掌握α-萘胺法测定根系活力.观察重金属胁迫对根系活力的影响.掌握比色法测定过氧化物酶的活性的原理和步骤.二实验原理植物根系能氧化α-萘胺，可通过测定溶液中未被氧化的α-萘胺含量，定量测定根系活力。
在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm处有最大吸收，可用分光光度计测量OD470nm变化来测定其活性。
三实验方法1.α-萘胺法测定根系活力(萘胺氧化法)⑴取50ug/mlα-萘胺和磷酸缓冲液各25ml，于三角瓶混匀，须根系洗净吸干，取1～2g浸入三角瓶，取同样α-萘胺、磷酸缓冲液各25ml于另一三角瓶，不放须根系作对照，5分钟后，两瓶各取2ml，按步骤3做第一次测定；⑵将两三角瓶置于25℃恒温箱避光保存60分钟后，各取2ml，按步骤3做第二次测定；⑶取2ml培养液加10水混匀，再顺次加入1ml对氨基苯磺酸与1ml亚硝酸钠，混匀观察颜色变化，再定容至25ml，室温25分钟，于510nm测OD值；⑷作标准曲线：以50ug/mlα-萘胺为母液，配液40、30、20、10、5、0ug/ml溶液各10ml，各取2ml，按步骤3分别反应，测OD值，以OD值为纵坐标、浓度为横坐标作标准曲线，计算回归方程；⑸分别查对标准曲线，或利用回归方程，计算出实验组与对照组实验前后对应的α-萘胺浓度。
2.过氧化物酶活性的测定(比色法)⑴提取酶液⑵现配反应混合液，即30mlpH6.0磷酸缓冲液加28ul愈创木酚加19ul双氧水（30%）⑶取2只比色杯，1只加3ml反应液和0.2ml磷酸缓冲液调零。
另取一只加3ml反应液和0.2ml酶液，立即计时开始测量。
每隔10s读数一次，直至OD470nm≥1.000⑷计算酶活性大小：过氧化物酶活性（u/g FW*min）=△A470*Vt/(W*Vs*0.01*t)四实验结果1.根系活力测定(gFW.h)α-萘胺浓度0 5 10 20 30 OD510nm0.094 0.213 0.431 0.595 0.825实验组对照组5分钟后60分钟后5分钟后60分钟后OD值0.385 0.292 0.383 0.415 α-萘胺浓度18.7 14.2 18.6 20.251015202530354045123456a-萘胺浓度（ug/mL）O D 510n m根系活力测定标准曲线五 误差分析1.α-萘胺法测定根系活力由于标准曲线是由其他组做的，其误差就不在此分析了由公式C α-萘胺=(C1-C2)-(C3-C4)其中C1指实验组5分钟后α-萘胺浓度， C2指实验组60分钟后α-萘胺浓度 C3指对照组5分钟后α-萘胺浓度 C4指对照组60分钟后α-萘胺浓度而由所得数据C3-C4为负值，可能是由人为误差或机器误差引起的。
实验二、根系活力的测定a-萘胺氧化法(精)
实验二、根系活力的测定
——a-萘胺氧化 法
南京师范大学生命科学学院
一、实验目的
• 了解根系活力的生理意义； • 掌握a-萘胺氧化法 测定根系活力的原理与
方法。 • 了解植物生理学实验设计中的一些注意事
项。
二、实验原理
（一）植物根系的生理功能: 吸收：水分、无机盐、CO2。 输导 固着 合成 贮藏
注意：
• OD510越大→α-萘胺剩余越多→根系活力越弱
• 反应液的酸度大则增加重氮化作用的速度，但降 低偶联作用的速度，颜色比较稳定。增加温度可 以增加反应速度，但降低重氮盐的稳定度，所以 反应需要在相同条件下进行。
三、实验材料与仪器设备
（一）实验材料 水稻(Oryza sativa L.)等水生植物的须根系。
• 植物根系中的过氧化物酶能氧化α-萘胺，生成红 色的α-羟基-1-萘胺，并沉淀于根表面，将根系染 成红色。
• 一般来说根呼吸强度越大，即该酶的活力越强， 对α-萘胺的氧化力也越强，染色也越深。
• 可以根据根系表面着色深浅，定性观察并判断根 系活力大小，也可通过测定溶液中未被氧化的α萘胺的量，以定量测定根系活力。
• 各取2 mL，按照步骤4分别反应，并测定 OD值。以OD值为纵坐标，浓度为横坐标， 绘制α-萘胺溶液的标准曲线。或者根据浓 度与OD值关系直接计算回归方程。
6．换算浓度
• 分别查对标准曲线，或利用回归方程直接 计算出实验组与对照组溶液实验前后对应 的α-萘胺浓度（ C、C’与 C0、C’0 ）。
4、a-萘胺含量测定
• 取2 mL培养液加10 mL水混匀，再顺次加入1 mL 对氨基苯磺酸溶液与1 mL亚硝酸钠溶液，混匀， 观察溶液颜色变化，再定容至25 mL。
根系活力的测定(精)
α－萘胺 25ml 磷酸缓冲液 25ml
A处理：各取2g根
吸干
三角瓶中
根浸没
静置10min
加入
B处理： 三角瓶
α－萘胺 25ml 磷酸缓冲液 25ml
静置10min 对氨基苯磺酸 1ml
2. 各取2ml溶液至25ml容量瓶
加水10ml
加 NaNO2 1ml
放置5min
20～60min内
定容至25 ml
5. 绘制α－萘胺标准曲线 用50µg/ml α－萘胺母液配制浓度0，5，10，15，20，25，30 µg/ml的α－萘胺溶液
同步骤2测定
2. 各取2ml溶液至25ml容量瓶 加水10ml 加
对氨基苯磺酸 1ml NaNO2 1ml
放置5min
20～60min内
定容至25 ml
转红色
分光光度计510nm读A值
始点数值 始点数值
终点数值 － 终点数值 ＝ 自动氧化数值
4. 计算
被氧化的α－萘胺 量（µg /g FW· hr) = (始点浓度－自动氧化浓度－终点浓度）×25ml / 2g ·1hr
α －萘胺的标准曲线 1.4 1.2 1
A值
0.8 0.6 0.4 0.2 0 5 10 15 20 25 30 α －萘胺浓度(ug/ml)
转பைடு நூலகம்色
分光光度计510nm读A值（始点数值）
3. 取完2ml后，三只三角瓶立即置25℃氧化1hr后，同2测定 对氨基苯磺酸 1ml 2. 各取2ml溶液至25ml容量瓶
加水10ml
加
NaNO2 1ml
放置5min 20～60min内
定容至25 ml
转红色
分光光度计510nm读A值（终点数值）
根系活力的测定
• 4、在做有根烧杯的同时加做一组无根的空的对照，按步 骤2、3操作，作为α-萘胺自动氧化比值,在结果中减去部 分数值 α-萘胺氧化总量:a初-a终 (c)
利用分光光度计测得: 液变成红色，再用蒸馏水定容到25ml，在20-
对水分和无机盐类的吸收
根对α-萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切关系。
a =0.169 a =0.302 实验仪器 分光光度计，分析天平，量筒，移液管，容量瓶
1有3报3 道认d为=初αb-初萘-胺b终的=氧-0化. 本质就是过氧化物终酶的催化作用。
x/根鲜重×min=0. 初
终
d=b初- b终=-0.179
2、吸取2ml待测液放入25ml容量瓶中，加入10ml蒸馏水，再在其中加入1%对氨基苯黄酸各1ml，室温放置5min，待混合液变成红色，
y=c-d=0.046 代入方程y=0.1446x+0.024 再用蒸馏水定溶到25ml，在20-60min内510nm处比色,读取OD值，在标准曲线上查得相应α-萘胺浓度
吸取2ml溶液,用于测定α -萘胺含量,将剩余的8ml 溶液,置于抽屉中30min
后再进行测定
• 2、吸取2ml待测液放入25ml容量瓶中，加入10ml蒸馏水， 再在其中加入1%对氨基苯黄酸各1ml，室温放置5min，待 混合液变成红色，再用蒸馏水定溶到25ml，在20-60min内 510nm处比色,读取OD值，在标准曲线上查得相应α-萘胺 浓度
实验2-植物根系活力的测定
（三）仪器设备 小烧杯3个，研钵1个，移液管：0.5 mL 1支、10 mL 1支、5 mL 3支，刻度试管6支，分光光度计，分析天 平（感量0.1 mg），电子顶载天平（感量0.1 g）， 温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。
三、实验步骤
1. 定性测定 （1）配制反应液 把1％ TTC溶液、0.4 mol／L的琥珀酸和 磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。 将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃ 左右暗处放1-3 h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以 及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
3. 1％TTC溶液：准确称取TTC 1.0 g，溶 于少量水中，定容到100 mL。用时稀释至需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（1/15 mol/L，pH7.0）。 5. 1 mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55 mL， 边搅拌边加入盛有500 mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀 释至1000 mL。 6. 0.4 mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72 g，溶于水中， 定容至100 mL即成。
（3）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸 乙酯3～4 mL，充分研磨，以提出TTF。把红色提取液 移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次， 皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为10 mL， 用分光光度计在波长485 nm下比色，以空白试验作参 比测出吸光度，查标准曲线，即可求出TTC还原量。
实验二
植物根系活力的测定
郭予琦
实验概要
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，
根的生长情况和活力水平直接影响地上部 的生长和营养状况及产量水平。 本实验练习测定根系活力的方法，为植物 营养研究提供依据。
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步骤4、a-萘胺含量测定
• 取2 mL培养液加10 mL水混匀，再顺次加入1 mL 对氨基苯磺酸溶液与1 mL亚硝酸钠溶液，混匀， 观察溶液颜色变化，再定容至25 mL。
• 室温25min后，于510nm处测定吸光度（OD）值。
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步骤5．标准曲线制作：
植物生物学实验(二) 植物生理学基础与综合实验
实验二、根系活力的测定 ——a-萘胺氧化法
南京师范大学生命科学学院
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一、实验目的
• 了解根系活力的生理意义； • 掌握a-萘胺氧化法, 测定根系活件
二、实验原理
（一）植物根系的生理功能: 吸收：水分、无机盐、CO2。 输导 固着 合成 贮藏
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注意：
• OD510越大→α-萘胺剩余越多→根系活力越弱
• 反应液的酸度大则增加重氮化作用的速度，但降 低偶联作用的速度，颜色比较稳定。增加温度可 以增加反应速度，但降低重氮盐的稳定度，所以 反应需要在相同条件下进行。
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三、实验材料与仪器设备
（一）实验材料
水稻(Oryza sativa L.)等水生植物的须根系。
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7．计算根系活力
• 根据实验结果计算不同植株根系对α-萘胺 的生物氧化强度（mg α-萘胺/gFW·h）， 并与植物生长势比较，分析它们之间的关 系。
• -萘胺生物氧化强度= 48mL×（C-C′）-48mL×（C0-C0′） 2g×1h
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五、思考题
1. 为什么利用a-萘胺氧化法测定植物的根系 活力时需要在5min后作第一次测定？
• 以50 μg/mL的α-萘胺溶液为母液，配置 40、30、20、10、5、0 μg/mL的溶液各10 mL。
• 各取2 mL，按照步骤3分别反应，并测定OD 值。以OD值为纵坐标，浓度为横坐标，绘 制α-萘胺溶液的标准曲线。或者根据浓度 与OD值关系直接计算回归方程。
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6．换算浓度
• 分别查对标准曲线，或利用回归方程直接 计算出实验组与对照组溶液实验前后对应 的α-萘胺浓度（ C、C’与 C0、C’0 ）。
• 植物根系中的过氧化物酶能氧化α-萘胺，生成 红色的α-羟基-1-萘胺，并沉淀于根表面，将根 系染成红色。
• 一般来说根呼吸强度越大，即该酶的活力越强， 对α-萘胺的氧化力也越强，染色也越深。
• 可以根据根系表面着色深浅，定性观察并判断根 系活力大小，也可通过测定溶液中未被氧化的 α-萘胺的量，以定量测定根系活力。
小，并与植物生长势比较，分析植物生
长势与根系活力之间的关系。
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（二）定量测定
步骤1、实验处理
• 取50 μg/mL 的α-萘胺溶液和0.1 mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液各25 mL，置于三角瓶 中，混匀。
• 称取根系2 g浸没于三角瓶中的溶液中。 • 同样地，取50 μg/mL的α-萘胺溶液和0.1
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四、实验步骤
（一）定性观察：
1. 处理：
2.
挖取处
于不同生长状态的须
根系植株（如水稻、
豌豆苗根系等）数株，
洗净根部后再用滤纸
吸去根上附着的水分。
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2.观察
1.
将植株根系浸入盛有25
μg/mL α-萘胺溶液并用黑纸包裹的容
器中，静置24-36小时后观察根系着色情
况。
2.
比较不同植株根系活力大
2. 测定根系活力时最好选择根的哪个部位？ 为什么？
3. 3. 简述分光光度计使用过程及注意事 项。
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4、在使用分光光度计时，为什么每改变一次 波长，就需要重新调零和调透光率100%？
5、为什么在测定时需要洗净比色皿？洗净的 比色皿在倒入提取液时为什么还要用提取 液洗2-3遍？
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定性观察
• 根系表面红色越深，说明根系活力越强。
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定量测定
• 剩余的α-萘胺在酸性环境中可与对氨基苯 磺酸（sulfanil-amide）和亚硝酸盐作用 生成稳定的红色偶氮染料。
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定量测定
对-苯磺酸-偶氮-α-萘胺
•生成的红色偶氮化合物在pH 7.0时在510 nm处有最大吸收峰，可用分光光度法测定光 吸收值，从而利用此反应来间接测定溶液中 α-萘胺的量。
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根系吸收无机盐的过程：
• 部位：根尖，根毛区最 活跃。
• 步骤
1.呼吸释放CO2； 2.形成H2CO3； 3.H+与HCO3 -吸附在根表
面。
4.溶液中阴阳离子分别与
HCO3
、
H+交换。
5.吸收，进入根内部。
6.运输。
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（二）根系活力的意义与测定方法
• 根系活力即根的生长情况和代谢水平。它直接影 响植物地上部的生长和营养状况以及产量。
（二）仪器与用品 分光光度计、天平、恒温培养箱、三角烧瓶、量筒、移
液管、剪刀、玻棒。 （三）试剂
α-萘胺溶液：先用少量的95%酒精溶解，然后加水定容。 分别配制50 μg/mL、25 μg/mL溶液。 • 0.1 mol/L磷酸缓冲液，pH 7.0。 • 1%对氨基苯磺酸溶液：溶解于30%的醋酸溶液中。 • 0.01%亚硝酸钠溶液。
mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液各25 mL，置于 另一三角瓶中，混匀，不放根系作为对照。
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步骤2、实验初始值测定
• 5min后，分别从两瓶中各取2 mL溶液，按 照步骤4作第一次测定。
• 记录OD（实验组）与OD0（对照组）。
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步骤3、实验终了值测定
• 将两三角瓶置于25℃恒温箱中避光保温 60min后，各取2 mL ，按照步骤4作第二次 测定。