基因工程
什么是基因工程
什么是基因工程
一、什么是基因工程
基因工程（Gene Engineering）是一种技术，它可以改变物质基础的构造，使其形成新的基因组合，从而获得有意义的生物。
基因工程可以
让完全不同的物种合成出新物种，或者将不同物种的基因强行混合，
成功地让一些被认为在自然过程中不可能出现的新物种出现。
二、基因工程的基本原理
基因工程的基本原理是人工合成、改造、替换或者删除染色体的基因，在生物体的内部，精心操控它们来改变特质。
比如，可以用基因工程
在生物体内引入新基因，从而改变它们的某些性状，从而形成新物种、新性状或新能力。
同样，也能改变基因中某种成分，形成新物种。
三、基因工程在实践中的应用
（1）改性个体：基因工程可以调整体内基因水平，以便让体内特定的
特质性状得到发挥。
（2）编辑特质：基因工程可以根据所需改变，精确定位到特定的基因
的特定位点，再改变基因位置，最终让细胞发生变化。
（3）基因治疗：基因治疗是改变患有基因性疾病的患者的基因的技术，以改善疾病情况。
（4）转基因：转基因技术指的是将一种物种中的基因流入到另一种物
种中，从而改变或添加某种性质，如抗病性等。
四、基因工程的好处与弊端
（1）好处：基因工程可以帮助改变鉴定动物和植物的性能，用来生产
食物、药物、精馏植物等产品，帮助解决营养、病症，使物种在极端
环境发展。
（2）弊端：大量的基因重组可能引发不可预料的问题，产生致命的疾病，甚至影响人类基因。
有时，新基因对导入到一个物种中的其他生
命细胞产生负面影响。
什么是基因工程
什么是基因工程基因工程：改变生命的未来引言：人类一直在不断探索、改造和利用自然的力量，以满足我们的需求和向前迈进。
基因工程作为生物技术的一个重要分支，具有巨大的潜力，可以为人类带来许多福祉和进步。
本文将深入探讨什么是基因工程，它的原理和应用，以及相关的伦理和道德问题。
一、基因工程的定义和原理：基因工程，又称遗传工程，是一种利用重组DNA技术改变生物基因组的过程。
它主要包括三个步骤：选取目标基因、将目标基因导入目标生物体的基因组中、使导入基因能够在生物体中正常表达。
基因工程的原理主要包括DNA分子的切割、连接和重组。
科学家通过具有特定功能的限制酶将DNA切割成片段，然后将这些片段重新组合，以获得具有所需特性的DNA序列。
最后，将重组的DNA导入目标生物体中，通过细胞的自然复制过程使其在细胞和整个生物体中被表达。
二、基因工程的应用：1. 农业领域：基因工程在农业领域的应用非常广泛。
通过转基因技术，科学家们可以改良农作物，使其具有抗虫、抗病、耐旱等特性，提高产量和抗逆性，有力地支持全球粮食安全。
例如，转基因玉米可以抵抗玉米螟的侵袭，转基因水稻可以抗盐碱、耐旱。
2. 医学领域：基因工程在医学领域的应用正逐渐发展。
通过基因工程技术，科学家可以将外源基因导入体内，用于治疗一些遗传病、免疫系统疾病和癌症等疾病。
例如，基因工程药物可以治疗某些带有缺陷基因的遗传性疾病，如血友病和囊性纤维化等。
3. 环境保护：基因工程还可以用于环境保护。
通过改良某些细菌或植物的基因，可以使其具有降解有害化学物质的能力，从而清理油污和其他污染物。
基因工程在生物修复、环境治理中的潜力巨大，为解决环境问题提供了新的思路和方法。
三、伦理道德问题：虽然基因工程有着广阔的应用前景，但也涉及一些伦理和道德问题需要慎重考虑。
1. 遗传多样性：转基因作物的广泛种植可能导致农作物遗传多样性的丧失，降低农作物的抵抗能力。
我们应该保留自然界的遗传资源，同时加强监管和管理，确保基因工程的可持续发展。
基因工程的主要内容
基因工程的主要内容一、基因工程的概述基因工程是一种通过改变生物体遗传物质的结构和组成，以实现对其性状和功能进行调控的技术。
它涉及到生物学、化学、计算机科学等多个领域，是当今生命科学领域中最为重要的技术之一。
二、基因工程的主要内容1. 基因克隆基因克隆是指将特定基因从一个生物体中分离出来，并将其插入到另一个生物体中。
这样可以使得目标生物体具有某种特定性状或功能。
常用的基因克隆技术包括PCR扩增、限制酶切割、电泳分离等。
2. 基因编辑基因编辑是指通过CRISPR/Cas9等技术直接对目标基因进行修改，以实现对其性状和功能进行调控。
这种方法可以精确地修改目标DNA序列，从而达到精准治疗的效果。
3. 基因表达调控基因表达调控是指通过改变目标基因的转录和翻译过程，以实现对其表达水平和时间的调节。
常用的方法包括转录因子介导的启动子激活、RNA干扰、CRISPRi等。
4. 基因药物开发基因药物是指通过对特定基因进行调控，以实现治疗某些疾病的药物。
常见的基因药物包括基因表达调控剂、基因编辑剂等。
这些药物可以精准地靶向特定的疾病基因，从而达到更好的治疗效果。
5. 基因检测基因检测是指通过对个体DNA序列进行分析，以了解其患某种遗传性疾病的风险。
常用的基因检测方法包括PCR扩增、DNA测序等。
三、应用前景随着生命科学技术的不断发展和进步，基因工程技术在医学、农业、环境保护等领域中得到了广泛应用。
在医学领域中，基因工程技术可以用于治疗癌症、遗传性疾病等；在农业领域中，可以用于改良作物品种、提高产量和抗逆性能；在环境保护领域中，则可以用于生态修复和污染治理等方面。
四、风险和挑战尽管基因工程技术具有广泛的应用前景，但也存在着一些风险和挑战。
首先，基因工程技术可能会引起生态系统的破坏和生物多样性的丧失；其次，基因工程技术可能会导致人类健康和安全方面的问题；最后，基因工程技术还涉及到伦理和道德问题，需要加强监管和规范。
五、结论总之，基因工程技术是一种非常重要的生命科学技术，具有广泛的应用前景。
第一章 基因工程概述
或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。
因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基
本元件。
基因工程的基本概念
B 基因工程的基本定义
基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，
包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的
是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技
术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模
酶工程
基因工程的基本概念
D 基因工程的基本形式
第一代基因工程 蛋白多肽基因的高效表达 经典基因工程 第二代基因工程 蛋白编码基因的定向诱变 蛋白质工程
第三代基因工程 代谢信息途径的修饰重构 途径工程
第四代基因工程 基因组或染色体的转移
基因组工程
第二节 基因工程的诞生和发展
一、基因
泛基因阶段
孟德尔遗传因子阶段
（如胰岛素）、干扰素、乙肝疫苗等 研制新型疫苗（HIV、霍乱、单纯疱疹病毒等）
生产具有药用价值的生物制剂，如水蛭素等
3. 基因诊断
– 遗传性疾病的分子诊断
– 癌症的分子诊断 – DNA指纹
4. 基因治疗
是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异 常引起的疾病，以达到治疗目的。
3．断裂基因
1个基因被间隔区分成不连续的若干区段，这种编码序列不连续的间断基因被称为 断裂基因。
4．假基因
不能合成出功能蛋白质的失活基因 。
5．重叠基因
不同基因的核苷酸序列有时是可以共用的 即重叠的。
现代对基因的定义是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列， 是遗传物质的最小功能单位。
二、 基因工程的诞生
顺反子阶段
1957 年，本泽尔（Seymour Benzer）以T4噬菌 体为材料，在DNA分子水平上研究基因内部的精细结 构，提出了顺反子（cistron）概念。 顺反子是1个遗传功能单位，1个顺反子决定 1条多肽链。
什么是基因工程
什么是基因工程
基因工程是一种通过改变生物体的遗传物质（DNA）来实现对其性状的改变的技术和方法。
这包括插入、删除或修改基因，以产生具有特定性状或功能的生物体。
基因工程可以应用于微生物、植物、动物和人类等各个领域。
主要的基因工程技术和方法包括：
1. 基因克隆：将感兴趣的基因从一个生物体中复制并插入到另一个生物体中。
这包括DNA的复制、切割和连接等操作，常用于制造重组蛋白、疫苗等。
2. 重组DNA技术：制造重组DNA，即将来自不同来源的DNA 片段组合在一起。
这包括PCR（聚合酶链式反应）、限制酶切割、DNA 连接酶等技术。
3. 基因编辑：利用特定的酶（如CRISPR-Cas9系统）精确地修改生物体的基因。
这使得科学家能够精准地添加、删除或替换基因序列，以改变目标生物体的性状。
4. 转基因：将外源基因导入到一个生物体中，使其表达这个基因。
转基因技术在植物、动物等领域广泛应用，以改善农作物产量、提高抗病性、研究基础科学等。
5. 合成生物学：利用化学合成的方法设计和构建新的生物体，以实现特定的功能。
这包括人工合成基因、合成生物通路等。
应用基因工程的领域包括医学、农业、环境保护、工业等，其应用范围涉及疾病治疗、农作物改良、生物能源生产等方面。
然而，基因工程也引发了一些伦理、安全和法规方面的讨论和关注。
基因工程
作用： 将外源基因送入受体细胞。 利用载体在受体细胞内，对外源基因 进行大量复制。
条件： 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基 因等。 种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。
质
DNA诊断
DNA点杂交 寡聚核苷酸探针杂交分析法
PCR/单链构象多态性分析（SSCP）
(single strand conformation polymorphism, SSCP) 限制性内切酶谱分析法 DNA限制性长度多态性 (restriction fragment length polymorphism, RLFP) 分析
2.基因诊断
基因诊断：采用分子生物学的技术方法来分 析受检者的某一特定基因的结构(DNA水平) 或功能(RNA水平)是否异常，以此来对相应 的疾病进行诊断。是病因的诊断。
基因诊断的原理
DNA诊断----检测相关基因的结构及其 表达功能是否正常。 RNA诊断----对表达产物mRNA的质 和量进行分析。
基因工程为人类开辟新的食物来源。 1）鸡蛋白基因在大肠杆菌和酵母菌中表达获得 成功。这表明，未来能用发酵罐培养的大肠杆菌 或酵母菌来生产人类所需要的卵清蛋白。 2）用基因工程的方法从微生物中获得人们所需 要的糖类、脂肪和维生素等产品。
（三）基因工程与环境保护
基因工程在环保方面有什么应用？
1）用于环境监测。 2）用于被污染环境的净化。
基因治疗就是把基因直接导入人体或先导入人的 细胞然后再输入人体，让这种基因达到治疗目的。 首先是治疗基因的选择。
基因工程
1、基因工程，是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。
（供体基因、受体细胞、载体是重组DNA技术的三大基本元件。
）2、同尾酶：识别的靶序列也各不相同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，这一类限制酶特称为同尾酶。
这两个相同的粘性末端称为配伍未端。
3、同裂酶：有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶子序列，这类酶特称为同裂酶。
同裂酶的切点位置可相同或不同。
4、1酶活性单位（U）：某种限制性核酸内切酶在最适反应条件下，60 min内完全切割1μg λDNA所需的酶活性5、星号（*）活性：如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称星号（*）活性。
6、停滞效应：PCR中后期，随着目的DNA扩展产物逐渐积累，酶的催化反应趋于饱和，DNA扩增产物的增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。
7、PCR扩增引物：是指与待扩增互补的人工合成的寡核苷酸短片段，其长度通常在15～30个核苷酸之间。
8、linker：是指用化学方法合成的一段由8~12个核苷酸组成，具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸片段。
9、衔接头：它是一类人工合成的一头具有某种限制酶切的粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。
10、粘性末端：因酶切位点在两条DNA单链上不同（对称），酶切后形成得具有互补碱基的单链末端结构。
酶切后产生两个粘性末端很容易通过互补碱基的配对而重新连接起来。
11、平末端：因酶切位点在两条DNA单链上相同，酶切后形成的平齐的末端结构，这种末端不易重新连接起来。
12、基因克隆载体：通过不同途径将承载的外源DNA片段（基因）带入受体细胞且能在其中维持的DNA分子。
也称DNA克隆载体。
13、cos位点：λDNA两端各有12bp的粘性末端，粘性末端形成的书暗恋区域称为~~14、受体细胞:又称为宿主细胞或寄主细胞(host cell)等，从实验技术上讲是能摄取外源DNA并使其稳定维持的细胞；从实验目的上讲是有应用价值和理论研究价值的细胞。
基因工程的名词解释
基因工程的名词解释
基因工程是一种利用生物技术手段改变生物体内遗传信息的技术,包括利用DNA分子作为工具来切割、重组、连接和修饰DNA分子,从而改变生物的性状和功能。
在基因工程中,通常会使用一些特定的工具和技术来操作DNA分子。
这些工具和技术包括:基因编辑技术,如CRISPR/Cas9、Taq酶、文库筛选等;DNA片段的制备,如扩增、剪切、合成等;DNA连接技术,如基因连接酶、基因转化技术等;以及基因转化材料,如植物、细菌、酵母等。
基因工程的应用范围非常广泛,包括生物医学研究、农业改良、食品加工、药物开发等。
在生物医学研究中,基因工程可以用于治疗疾病、开发新药物和改变生物体的性状。
在农业改良中,基因工程可以用于提高作物产量、改善作物品质、降低生产成本等。
在食品加工中,基因工程可以用于改变食品的口感、味道和营养价值等。
除了传统的生物学方法外,基因工程还采用了一些现代技术手段,如基因芯片、基因组学、蛋白质结构预测等。
这些技术的发展使得基因工程的研究和应用更加高效和精准。
基因工程也有一些伦理和法律问题需要解决,如基因隐私、基因歧视、遗传信息保护等。
因此,在基因工程的研究和应用中,需要遵循伦理和法律规定,确保其安全性和合法性。
基因工程的概念
基因工程的概念基因工程是一种利用基因技术改变生物体遗传特征的技术手段。
基因工程包括对基因的分离、克隆、修饰和转移等步骤，通过改变生物体的基因组来获得特定的性状或功能。
基因工程可以在不同的生物体中引入外来基因，实现基因的重组、修改和转移，从而改变其遗传特征并赋予其新的性状。
基因工程的应用范围非常广泛，包括农业、医学、生物工业等领域。
在农业领域，基因工程可以用于改良作物，提高作物的产量和抗性，使其更适应恶劣的环境条件。
通过异种基因转移，可以使作物具有抗虫、抗病、抗逆境等性状，提高作物的品质和经济效益。
在医学领域，基因工程可以用于治疗遗传性疾病。
通过基因修饰和转移，可以校正异常基因或增加缺失的基因，从而纠正遗传疾病的发生机制。
例如，通过基因工程技术可以生产蛋白质药物、基因疫苗和基因诊断试剂，用于预防和治疗多种疾病。
此外，基因工程还可以用于生物工业，如生产酶、药物和生物农药等。
通过基因工程技术可以改变微生物的代谢途径和菌株特性，使其具有高效、高产的产物合成能力。
这对于提高生物工业产品的产量和质量具有重要意义。
基因工程的发展离不开基因技术的进步。
现代基因工程技术主要包括DNA重组技术、基因克隆技术、基因表达技术和基因转导技术等。
这些技术的不断改进和创新，使得基因工程在各个领域的应用更加广泛和深入。
然而，基因工程也面临着一些争议和挑战。
一方面，基因工程技术可能带来一些潜在的风险，如基因突变、基因污染等。
另一方面，基因工程技术的应用也引发了伦理和道德方面的争议，如人类基因编辑是否合乎伦理规范等。
综上所述，基因工程作为一种利用基因技术来改变生物体遗传特征的技术手段，在农业、医学、生物工业等领域都具有重要的应用价值。
随着基因技术的不断发展和完善，基因工程有望为人类社会带来更多的福祉，但也需要在应用中严格控制和规范，以确保其安全和可持续发展。
基因工程定义
基因工程定义基因工程是一种人类利用先进的生物技术手段，对基因进行人为干预、改造和调控的科学技术。
其目的是通过对生物体DNA序列的直接操作，以达到改变生物性状、增强生物功能、提高生产效率等目的。
基因工程可以应用于农业、医学、环境保护等领域，被广泛认为是21世纪最具前景和潜力的科学技术之一。
一、基因工程的背景和历史1.1 基因发现20世纪初期，孟德尔遗传学理论得到了广泛应用，但其机制并未被完全揭示。
1953年，沃森和克里克发现了DNA分子结构，并提出了“双螺旋模型”，揭示了遗传信息在DNA中的存储方式。
1.2 基因工程起源1972年，美国科学家保罗·伯格首次成功地将外源DNA导入细菌中，并使其在宿主细胞内繁殖。
这标志着基因工程技术正式诞生。
二、基因工程技术原理2.1 基本原理基因工程技术主要包括三个步骤：DNA分离、DNA重组和DNA转化。
其中，DNA分离是指将目标生物的DNA从细胞中提取出来；DNA重组是指将所需的基因片段插入到载体DNA中，形成重组DNA；DNA 转化是指将重组后的DNA导入宿主细胞中。
2.2 基因工程技术分类基因工程技术可以分为两类：直接改变基因序列和间接改变基因表达。
直接改变基因序列包括基因敲除、点突变、插入和替换等技术，可以精确地修改目标基因序列。
间接改变基因表达包括RNA干扰、CRISPR/Cas9等技术，可以通过调控目标基因的转录和翻译过程来实现对生物性状的控制。
三、应用领域3.1 农业基因工程技术在农业领域的应用主要包括抗虫、抗病、耐旱、耐盐等方面。
通过对植物进行遗传改造，可以增强其抗性和适应性，提高农作物产量和质量。
3.2 医学在医学领域，基因工程技术被广泛应用于药物研发、基因诊断和基因治疗等方面。
通过对人类基因进行修饰和调控，可以有效地治疗遗传性疾病和癌症等重大疾病。
3.3 环境保护基因工程技术在环境保护领域的应用主要包括生物降解、污染物检测和生态修复等方面。
对基因工程的认识
对基因工程的认识什么是基因工程基因工程是一种通过改变生物体的遗传物质，以达到人类特定需求的技术。
通过对DNA的操作和改变，基因工程可以创造新的基因组合，改变生物体的遗传特性。
基因工程的应用领域基因工程在许多领域都有重要的应用，如农业、生物医学和工业等。
下面是一些基因工程在不同领域的应用案例：1. 农业•强化作物抗虫能力：通过基因工程，可以向作物中引入抗虫基因，使其获得自身抗虫的能力，降低农药使用量。
•提高作物的耐旱性：基因工程可以帮助作物表达耐旱基因，提高其对水分胁迫的适应能力。
•增加作物的营养价值：通过基因工程，可以使作物表达更多的营养物质，如维生素、矿物质等。
2. 生物医学•生物药物的生产：基因工程技术可以用于生产重要的生物药物，如胰岛素、人血清白蛋白等。
•基因治疗：通过基因工程，可以将健康基因导入患者的细胞中，修复或替代有缺陷的基因，治疗遗传疾病。
•个性化医疗：基因工程可以为患者提供个性化的医疗服务，根据患者的基因信息进行针对性的治疗。
3. 工业•生物质能源生产：基因工程可以改造微生物，使其能够高效利用植物纤维素，生产生物质能源，如生物乙醇、生物柴油等。
•工业酶的生产：通过基因工程，可以大量生产各种工业酶，如纤维素酶、蛋白酶等，用于各种工业生产过程。
基因工程的优点基因工程在许多方面都有着重要的优点，下面是一些常见的优点：1. 进步医疗水平基因工程可以开发出新的治疗方法和药物，帮助治疗许多难以治愈的疾病，为人类的健康提供更好的保障。
2. 提高农业生产效率基因工程可以增强农作物的抗病虫能力、提高产量和质量，帮助解决人口快速增长导致的粮食短缺问题。
3. 降低工业生产成本基因工程可以通过改良微生物，提高酶的生产效率，降低工业生产成本，推动工业发展。
4. 保护环境基因工程可以减少对环境的污染，如利用微生物降解有机废料，减少人类活动对生态环境的破坏。
基因工程的挑战及风险尽管基因工程带来了许多好处，但也存在一些挑战和风险，需要引起足够的重视和保障：1. 遗传多样性的缺失大规模应用基因工程可能导致遗传多样性的缺失，使得物种适应性降低，增加生态系统的脆弱性。
关于基因工程的名词解释
关于基因工程的名词解释引言：基因工程，作为现代生命科学的一个重要分支，旨在通过改变生物体的遗传信息，实现对生物特性的调控和改良。
下面将解释一些与基因工程相关的常见名词，以便更好地理解这个领域的重要概念。
一、基因工程基因工程，又称遗传工程，是一种通过人工方法对生物体的基因进行操作和改造的技术。
它包括对DNA序列的修改、插入和删除，以达到改变生物的表型特征或增强其产物能力的目的。
二、DNADNA（脱氧核糖核酸）是生物体内存储遗传信息的主要分子，它由四种碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和鳟嘧啶）组成，通过特定的序列排列形成基因。
基因工程的核心工作就是对DNA进行修饰和操作。
三、基因基因是DNA中编码一个特定蛋白质或遗传特征的单位。
每个生物体都由大量基因组成，这些基因决定了生物体的特性和遗传信息的传递方式。
基因工程中的目标之一就是对特定基因进行改造，以期望在生物体中产生特定的效果。
四、基因组基因组是一个生物体中包含的所有基因的集合。
它可以分为染色体基因组和质粒基因组。
染色体基因组是生物体核内DNA组成的基因集合，而质粒基因组则存在于质粒中，通常被用于外源基因的插入和传递。
五、重组DNA技术重组DNA技术是基因工程中一项重要的技术手段，它通过将源自不同生物体的DNA片段在体外进行精确拼接，创造出新的重组DNA。
这种技术可以用于插入外源基因、制备重组蛋白质等。
六、基因表达调控基因表达调控是指细胞对特定基因的调控机制，包括转录因子的结合、启动子区域的调控和DNA甲基化等。
通过基因表达调控，科学家可以改变基因的表达水平，进而改变生物的性状和功能。
七、转基因转基因是指将外源基因导入目标生物体中的过程。
通过转基因技术，科学家可以将具有特定功能的基因导入到其他生物体中，从而改变目标生物体的遗传特性。
八、克隆技术克隆技术是基因工程中的一项重要技术，它可以复制生物体的DNA或细胞。
克隆技术主要包括体细胞核移植和DNA克隆。
基因工程概念
基因工程概念一、前言基因工程是近年来科学技术发展的重要成果之一，它在生物学、医学、农业等领域都有着广泛的应用。
本文将从基因工程的定义、历史、技术原理、应用领域等方面进行详细介绍。
二、基因工程的定义基因工程是指利用现代生物技术手段对生物体中的基因进行人为改造和调控，以达到预期目的的一种技术。
它可以通过改变DNA序列，实现对生物体内部结构和功能的调整和修复。
三、基因工程的历史20世纪70年代初期，科学家们开始尝试通过重组DNA技术来改变生物体内部结构和功能。
1972年，保罗·伯格首次成功地将两个不同来源的DNA片段合并成一个新的DNA分子。
这标志着人类进入了基因工程时代。
此后，随着科技水平不断提高，基因工程技术也得到了快速发展。
四、基因工程的技术原理1. DNA分离：从生物体中提取出需要进行改造或调控的DNA片段。
2. DNA剪切：利用限制性内切酶将需要操作的DNA片段剪切成特定的长度和形状。
3. DNA连接：将不同来源的DNA片段通过连接酶进行拼接，并形成新的DNA分子。
4. DNA转染：将新合成的DNA分子送入目标细胞中，使其被细胞吸收并嵌入到细胞核内。
5. DNA复制：通过PCR等技术手段对嵌入到目标细胞中的DNA分子进行复制，以实现基因工程目的。
五、基因工程的应用领域1. 医学领域：基因工程技术可以用于治疗遗传性疾病、癌症等疾病。
例如，利用CRISPR-Cas9技术可以精准地修复人类基因组中存在的错误或缺陷。
2. 农业领域：基因工程技术可以用于改良作物品种、提高农作物产量和抗逆性能。
例如，利用转基因技术可以增强植物对虫害和草害的抵抗力。
3. 工业领域：基因工程技术可以用于生产高效能、低成本、环保型生物制品。
例如，利用酵母菌等微生物进行大规模发酵生产乙醇、乳酸、维生素等化学品和生物制品。
4. 环保领域：基因工程技术可以用于修复环境污染和生态破坏。
例如，利用基因工程技术可以改变植物对重金属的吸收能力，从而达到净化土壤的目的。
基因工程的概述
基因工程的概述定义：狭义的基因工程仅指用体外重组DNA技术去获得新的重组基因；广义的基因工程则指按人们意愿设计，通过改造基因或基因组而改变生物的遗传特性。
如用重组DNA技术，将外源基因转入大肠杆菌中表达，使大肠杆菌能够生产人所需要的产品；将外源基因转入动物，构建具有新遗传特性的转基因动物；用基因敲除手段，获得有遗传缺陷的动物等。
基因工程又被称为基因拼接技术或者DNA重组技术，可分为微生物基因工程、动物基因工程和植物基因工程三种生物转基因技术。
其主要特点是通过人工转移的方式，将一种生物的基因转移到另外一个受体细胞中，并使该转移基因在受体细胞中表达，从而获得全新的具有生物活性的产物。
基因工程技术为遗传物质研究和医药研究提供了重要的技术支撑。
动物基因工程技术利用先进的生物技术手段对动物基因进行编辑和改造，以达到揭示基因功能和利用基因治疗疾病等目的。
常见的动物基因工程技术包括基因敲除、基因敲入、基因编辑和转基因技术等。
通过使用基因编辑工具精确地切割和删除目标基因的特定区域，使该基因在动物个体中的表达缺失，可以揭示该基因在特定生理过程中的功能和调控机制。
基因治疗能够通过修复或替换患有遗传性疾病的动物个体的缺陷基因来达到治疗和预防遗传疾病的目的。
如利用基因编辑技术可以修复猫头鹰视网膜变性等遗传性视网膜疾病，从而改善视力。
微生物具有结构简单、迅速繁殖的特性，在其繁殖发展中应用生物基因工程技术能取得显著的效果。
将外源基因转入微生物中表达，使微生物能够生产人所需要的产品，如抗体和药用蛋白质等。
利用基因工程技术开发的重组亚单位疫苗、重组活载体疫苗及基因疫苗，有利于打破传统疫苗的局限性。
植物细胞具有全能性，在特定环境下，植物组织或者细胞能够生长出完整的植株。
所以，可以将药物基因组合到植物细胞内，通过分别培养，得到具有药物基因的植株。
植物独特的稳定遗传特性为医药领域的发展提供了充足而良好的条件。
目前，借助植物基因工程制造的药物有纯化的血清蛋白、干扰素与脑啡肽等。
基因工程知识点超全
基因工程一、基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的额，因此又叫做DNA重组技术。
二、基因工程的基本工具1、限制性核酸内切酶“分子手术刀”2、DNA连接酶-----"分子缝合针”3、基因进入受体细胞的载体“分子运输车”1．“分子手术刀”计计限制性核酸内切酶（限制酶）（1）存在：主要存在于原核生物中。
（2）特性：特异性，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。
（3）切割部位：磷酸二酯键（4）作用：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
（5）识别序列的特点：瓠腿沛外林蔚黔睫混日龄睫GC G C用处题挪班岫如」「肿第 CCCG 切割后末端的种类醐帆DNA 分子经限珊片段末端通常有两 种形式产产在它识别序列的条链分别切开时，和平末端。
当限制酶中轴线两侧将DNA的两产生的是黏性末端，当限制酶在它识别序列的 中轴线处切开时，产生的则是平末端。
£coRIGAA ｛在G与ACTT 之间切割）TTC AAG中轴线CCC ：GGG CTTAA黏性末端CCC AATTCGGG Sma I（在G 与C 之间切割）GGG|CCCGGGGCC3.分子运输车载体 ⑴载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一个至多个限制酶切点，供外源DNA 片③具有标记基因，供重组DNA 的鉴定和选择。
(2)最常用的载体是质粒，它是能力的双链环状DNA 分子。
⑶其他载体：九噬菌体的衍生物、动植物病毒。
(4)载体的作用：①作为运载工具，将目的基因送入受体细胞。
②在受体细胞内对目的基因进行大量复制。
【解题技巧】(1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。
什么是基因工程
什么是基因工程基因工程（Genetic Engineering），也称为基因改造、基因操作或遗传改良，是指人工干预生物体的遗传物质，以改变其基因组和基因表达方式的技术。
通过基因工程，科学家可以对生物体的基因进行删减、组合和重新排列，以实现特定的目标，包括改良农作物、生产药物、治疗疾病等。
基因工程的基本原理是利用DNA分子的特性进行操作。
DNA是生物体内携带遗传信息的分子，由一系列碱基序列组成。
基因工程的过程主要涉及到以下几个步骤：1. 基因分离：科学家首先需要从生物体中选择目标基因，对其进行分离和纯化。
一般通过PCR技术、限制酶切剪和电泳等方法，将目标基因从整个基因组中提取出来。
2. 基因复制：接下来，将分离得到的目标基因进行复制，使其得到足够数量的拷贝。
这一步骤可以通过PCR技术或者克隆等方法进行。
3. 基因修饰：为了使目标基因在新的宿主生物体中能够正常表达，科学家可能需要对其进行一些修饰。
这包括在基因中插入特定的启动子和终止子，以及进行DNA序列的修饰和优化。
4. 基因导入：经过修饰后的目标基因需要被导入到宿主生物体中。
这可以通过多种方法实现，例如基因枪、化学转化、电穿孔和冷冻法等。
5. 基因表达：一旦目标基因成功导入宿主生物体，科学家会利用生物体的代谢和复制系统，使其在宿主中得以表达。
不同的宿主生物体有不同的表达方式，例如细菌可通过表达蛋白来生产药物，植物可以通过表达特定基因来改良农作物。
基因工程技术的应用非常广泛。
在农业领域，基因工程可以用于改良作物的抗病性、耐旱性和营养价值，提高农作物产量和品质。
在医学领域，基因工程技术已经应用于制造重组蛋白药物，例如重组人胰岛素和重组人生长激素。
此外，基因工程还被用于研究基因功能、揭示疾病的发生机制，以及开发新的治疗方法。
尽管基因工程技术在农业、医学和科学研究中具有广阔的前景，但其也存在一些伦理和安全问题。
例如，基因工程可能导致基因污染和生物多样性的减少；基因改良农作物可能引发环境问题；基因编辑技术可能涉及到人类胚胎的修改，引发伦理问题。
生物技术之基因工程
生物技术之基因工程基因工程是一种利用基因技术改变、操纵生命体系的技术，通过客观事实和科学方法，把从不同生物体中分离和合成的基因序列组合成符合人类需要的代谢途径和生命功能，造福人类。
本文将对基因工程的意义、实现、影响等方面进行介绍。
一、基因工程的意义基因工程的目的是为了利用基因技术改变、操纵生命体系，以实现人类追求健康、节约、生产和保护地球环境的目标。
基因工程的重要意义主要表现在以下三个方面：1、医学领域的应用基因工程在医学领域有着巨大的应用前景，不仅可以创造出治疗疾病和改善人类健康的新药物，还可以创造出实现人体组织和器官的再生和再造的新方法。
通过基因工程，可以创造出具有良好生物学效能的生物药，可大大提高药物的疗效，降低药品的不良反应，改善人类健康水平。
2、农业领域的应用基因工程对农业生产的推动也是巨大的，可以创造出具有适应各种恶劣环境，具有更强的抗病性和耐旱能力的新品种；通过基因工程，可以创造出增强动物生长、提高果树的抗逆性和品质、改善农作物的产量和质量的新品种，以满足人类对食品需要的日益增长的需求。
3、环保领域的应用基因工程也可以在环保方面起到很大的作用，可以创造出绿色环保的新材料，如可以转化降解塑料的生物材料、可以转化对污染物有生物修复作用的生物材料等。
这些新材料能够保护环境和人类健康，从而加强生态文明建设和可持续发展。
二、基因工程的实现基因工程的实现方法主要有以下几种：1、基因克隆技术基因克隆技术是指将一个基因从一个生物体中割取出来，并在另一个生物体中表达出来，使得一个新的生物体拥有新的性状或能力，实现基因的遗传。
2、各种基因检测技术包括PCR反应、电泳、DNA杂交和靶向细胞转染等。
3、转基因技术通过向植物或动物细胞中导入外源基因，使得这个生物体可以具备新的特征，能够让人类乃至整个世界受益，已经成为目前基因工程发展的重头戏。
三、重要的基因工程实践1、转基因食品和作物转基因食品和作物在农业生产上起到重要作用。
什么是基因工程
1.什么是基因工程的定义和概念？基因工程是一门利用分子生物学和遗传学技术对生物体的基因进行操作和改变的科学领域。
它涉及将外源基因导入到目标生物体中，或者对目标生物体的内源基因进行修改，以实现特定的目标。
基因工程的目的是通过改变生物体的基因组来增强其特定性状，或者为人类社会的需要创造新的生物体。
这种改变可以包括插入、删除或修改基因序列，以改变生物体的特征、功能或表达。
基因工程的概念基于对基因的理解和技术的发展。
基因是生物体遗传信息的基本单位，它决定了生物体的遗传特征和功能。
通过基因工程，科学家可以精确操作基因，使得生物体具有特定的性状或功能。
基因工程在农业、医学、工业等领域具有广泛的应用。
在农业上，基因工程可以改良作物，使其具有抗病虫害、耐逆性和提高产量等性状。
在医学上，基因工程可以用于治疗遗传性疾病，生产重组蛋白药物以及开发基因诊断和基因治疗等领域。
在工业上，基因工程可以用于生产生物燃料、酶和其他生物化学品。
然而，基因工程也引发了一些伦理和安全问题，例如对环境和健康的潜在影响，以及基因编辑的道德和法律考量。
因此，基因工程的发展需要平衡科学发展、社会需求和伦理原则之间的关系。
总之，基因工程是一门重要的科学领域，它通过改变生物体的基因组来实现特定目标，具有广泛的应用前景和深远的影响。
2.基因工程的历史和发展背景是什么？基因工程是现代生物技术领域中的重要分支，它的发展可以追溯到20世纪中叶。
以下是基因工程的历史和发展背景的概述：发现DNA结构和基因的本质：在20世纪的早期，科学家们开始对生物遗传的本质进行研究。
1953年，詹姆斯∙沃森和弗朗西西斯∙克里克发现了DNA的双螺旋结构，揭示了基因的分子组成和遗传信息的传递方式。
这一发现奠定了基因工程的理论基础。
重组DNA技术的出现：1972年，保罗∙伯戈和斯坦利∙科恩等科学家首次成功地使用限制性内切酶切割DNA，并将来自不同来源的DNA片段重新组合，形成了重组DNA技术的基础。
基因工程的基本概念
基因工程的基本概念一、基因工程的定义基因工程，又称为遗传工程，是一门通过人工操作来改变生物遗传物质的科学。
它利用现代分子生物学技术，通过对DNA的精确剪切、拼接和重组，实现对生物遗传特性的改造和优化。
基因工程在生物医学、农业、工业和环保等领域有着广泛的应用。
二、基因工程的历史背景基因工程的起源可以追溯到20世纪70年代初期，当时科学家们开始探索DNA的分子结构和功能。
随着限制性内切核酸酶的发现和DNA体外重组技术的建立，基因工程开始得以实现。
1973年，美国斯坦福大学的伯格（Paul Berg）等人成功实现了第一次DNA体外重组实验，标志着基因工程的诞生。
三、基因工程的基本操作流程1.目的基因的获取：基因工程的第一步是获取所需的目的基因。
目的基因可以通过多种方法获得，如从生物体内直接分离、利用聚合酶链式反应（PCR）扩增或者通过化学合成等方法。
2.载体的构建：获取目的基因后，需要构建一个载体，以便将目的基因导入受体细胞。
载体通常是一种质粒或病毒，经过改造后能够携带外源基因并稳定表达。
3.基因的转移：将目的基因导入受体细胞是基因工程的另一个关键步骤。
常用的转移方法包括转化、转导、显微注射和基因枪等。
4.重组与筛选：在目的基因成功导入受体细胞后，需要通过重组技术将外源基因整合到受体细胞的染色体上。
随后，通过特定的筛选方法，如抗性筛选、Southern印迹杂交等，从众多的受体细胞中选育出含有目的基因的克隆。
5.表达与鉴定：最后，通过分子生物学技术和生物化学分析方法，检测目的基因的表达水平，并对重组蛋白进行鉴定和表征。
这一步对于验证基因工程的成功实施以及评估目的基因的功能至关重要。
四、基因工程的应用领域1.生物医学：在生物医学领域，基因工程被广泛应用于疾病诊断、治疗和预防。
例如，利用基因工程技术生产重组蛋白药物、抗体药物和细胞治疗等；同时，基因工程也为遗传病和传染病的研究和治疗提供了有力工具。
2.农业领域：基因工程在农业上的应用主要涉及作物改良、病虫害防治和产量提高等方面。
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参考书1、吴乃虎．基因工程．科学出版社,19982、瞿礼嘉等．现代生物技术导论．高等教育出版社，1998中心法则1958年，Crick提出了分子生物学的中心法则———现代生物学的基石。
DNA RNA蛋白质1970年，Crick修改后的中心法则3.2 技术上的三大突破A. 1970年，Smith、Wilcox在流感嗜血杆菌（harmonphilus influenzae）中分离和纯化限制性内切酶HindII；3.2 技术上的三大突破A. 1970年，Smith、Wilcox在流感嗜血杆菌（harmonphilus influenzae）中分离和纯化限制性内切酶HindII；B. 基因工程载体的构建——质粒和噬菌体的有关研究；3. 2 技术上的三大突破A. 1970年，Smith、Wilcox在流感嗜血杆菌（harmonphilus influenzae）中分离和纯化限制性内切酶HindII；B. 基因工程载体的构建——质粒和噬菌体的有关研究；C. 基因转化技术的确立----Mendel M. 和Higa A.1970年建立大肠杆菌的DNA转化方法。
此外，在60-70年代确立了多种基本研究技术如琼脂糖电泳、核酸杂交等。
4．基因工程的诞生1972年，P．Berg完成SV40猿猴病毒和λ噬菌体DNA的体外重组1973年，Cohen等把R6-5质粒（具有新霉素抗性基因）与pSC101质粒（具有四环素抗性基因）DNA连接起来，获得杂种质粒，并可以在细菌中繁殖。
基因工程从此诞生。
5.基因工程的应用和主要技术成就5．1基因工程技术在生产实践中的意义A.原核生物基因工程以原核细胞作为外源基因表达的宿主细胞。
主要用于基因工程制药1978年，Gilbert等把小鼠胰岛素基因与大肠杆菌的青霉素抗性基因连接，转化E.coli，生产出了胰岛素。
1982年美国Lilly公司首先将重组胰岛素投放市场，标志着世界第一个基因工程药物的诞生。
肉毒毒素的应用上市重组药物的销售情况B.植物基因工程主要目的是培育高产、抗病虫害、耐除草剂、优质等特性的新品种；生产动物疫苗；改善农产品的使用价值等。
２０１１年仅转基因种子的全球市场价值就达到１３２亿美元（２０１０年,１１７亿美元）商业转基因玉米、大豆以及棉花出售的价值约为１６００亿美元美国加州大学抗病毒西葫芦富含维生素A的“黄金大米”。
富含多种维生素的玉米：西班牙和德国的科学家培育出富含三种维生素——维生素A、维生素C和叶酸的南非白玉米。
玉米粒呈现出胡萝卜的橙红色。
美国中佛罗里达大学教授培育的转胰岛素基因生菜。
在消化道的“旅途”中，胰岛素基因在生菜细胞的保护下一路顺利抵达肠道，并触发和促进人体自身胰岛素的生成。
转花青素基因西红柿花青素的天然色素。
强有力的抗氧化剂，可以抑制癌细胞的生长、抗衰老、缓解糖尿病症状、减轻一些与年龄有关的疾病症状。
C.动物基因工程1981年，R.D.Palmiter和R.L.Brinster把大白鼠的生长激素基因导入小鼠受精卵中获得了比普通小白鼠大得多的转基因小鼠。
分支一：动物器官（乳腺）生物反应器技术：利用体液（如乳汁）生产特殊的药物或蛋白质目前已经成功生产出人组织纤溶酶原激活物（tissue plasminogen activator,tPA）和尿激酶（Urokinase），干扰素等。
2006年6月2日，欧洲医药评价署人用医药产品委员会批准世界上第一个利用转基因动物乳腺生物反应器生产的基因工程蛋白药物——重组人抗凝血酶III，从转基因山羊奶液中生产出来的。
分支二：动物新品种的培育D.人类疾病的基因治疗5．2基因工程技术在生命科学研究中的意义A．彻底打破了生物种属间不可逾越的鸿沟，实现动物、植物、细菌以及人类之间基因的相互交流；B. 突破经典的研究方法和内容，为研究基因的结构、功能、调节开辟了新途径；6.基因工程的安全性早期关于基因工程安全性的争论争论的焦点：可能产生对人类和自然有害的生物．首例DNA重组试验：λ噬菌体＋SV40病毒→重组DNA1976年，美国国立卫生研究院（NIH）制定并公布了：“重组DNA研究准则”。
该准则明确规定了从事基因工程研究的行为规范。
进行基因工程实验必须进行生物防护和物理防护。
物理防护（对实验室的硬件要求）分为四级：P1级实验室：装备良好的普通微生物学实验室；P2级实验室：在P1+负压安全操作柜；P3级实验室：全负压实验室+负压安全操作柜；P4级实验室：具有最高安全防护等级的实验室，保持数百米范围内无其他建筑物，并保持操作者与细菌培养物的隔离。
选择非病原生物体作为外源DNA的载体和宿主。
主要是大肠杆菌及其质粒和病毒。
分为三等：是依据大肠杆菌在自然环境中的存活率而规定的安全防护标准：EK1级：此类菌株在自然环境中一般都要死亡；EK2-3级：此类菌株严格要求人工合成的物质才能存活，而在自然环境中绝对无法存活。
7.我国的基因工程安全管理办法1993年12月科技部发布了《基因工程安全管理办法》。
第一层次：全国基因工程安全委员会，负责基因工程安全监督和协调；第二层次：国务院有关行政主管部门如医药、卫生、农业、化工、环保等部门；第三层次：各级主管部门管理本部门有关基因工程安全工作；第四层次：基因工程工作单位就地进行监督。
7现代关于基因工程安全性的担心关注的焦点：转基因生物对生态环境的影响1、生物技术产品可以繁殖、突变、迁移，一旦释放出去，就不可能收回。
2、目前难以完全准确地预测转基因在受体生物的遗传背景中的全部表现，人们对于转基因生物出现的新组合、新性状及其潜在危险性一无所知。
3、目前大多数转基因农产品中的转入基因来自不能食用的生物如昆虫、细菌及病菌等。
将来是否会因此出现新的可怕的致病菌与病毒，一无所知。
转基因农作物的生物安全等级I级：对人类健康和生态系统不存在危险；II级：存在低度危险III级：存在中度危险；IV级：存在高度危险７．3转基因食品的安全性《农业转基因生物标识管理办法》转基因生物标识的标注方法分为三种：转基因××；转基因××加工品（制成品）；本产品为转基因××加工制成，但本产品已不再含有转基因成分等。
第一批实施标识管理的农业转基因生物目录农业部农业转基因生物安全管理办公室公布:大豆种子、大豆、大豆粉、大豆油、豆粕。
玉米种子、玉米、玉米油、玉米粉。
油菜种子、油菜籽、油菜籽油、油菜籽粕。
棉花种子。
蕃茄种子、鲜蕃茄、蕃茄酱等。
我国发放的转基因作物生产应用安全证书1997年耐贮存番茄、抗虫棉花1999年改变花色矮牵牛和抗病辣椒（甜椒、线辣椒）2006年抗病番木瓜2009年抗虫水稻和转植酸酶玉米共7种转基因植物我国已批准进口用做加工原料的转基因作物转基因棉花、转基因大豆、转基因玉米、转基因油菜4种作物的进口安全证书除批准了转基因棉花的种植外，我国至今没有批准任何一种转基因粮食作物种子进口到中国境内种植。
目前已经报道的转基因安全事件加拿大“转基因油菜超级杂草1995年，加拿大首次商业化种植转基因油菜。
随后其农田便出现了对多种除草剂具有耐抗性的野草化的油菜植株，即超级杂草。
1996年，把一种巴西豆(豆科刀豆属)的基因转入到大豆里面，导致部分人过敏反应1998年美国批准Star link 玉米商业化生产，用作动物性饲料，不是用于人食用，因为它对人体有过敏，可能产生皮疹、腹泻。
但是在2000 年，在市场上30多种玉米食品当中发现了这种玉米的成分，所以美国政府下令把所有的这种转基因玉米收回。
转基因的抗虫玉米的花粉撒在了马利筋杂草上面，而北美斑蝶要吃这种杂草，结果吃了这种叶子斑蝶，就毒死了幼虫。
斑蝶蝴蝶是北美一种珍稀濒危动物.墨西哥玉米基因污染事件2001年，美国加利福尼亚州立大学伯克莱分校,Nature在墨西哥南部地区采集的6个玉米地方品种样本中，发现有CaMV35S启动子及与转基因抗虫玉米Bt11中的adhl基因相似的序列。
美国转基因玉米“MON863”事件2005年，孟山都公司的研究报告吃了转基因玉米“MON863”的老鼠，血液和肾脏中会出现异常。
欧盟对安全评价的材料及补充实验报告进行分析后，认为将该玉米投放市场不会对人和动物健康造成负面影响。
转基因玉米品种对大鼠肾脏和肝脏毒性事件2009年，de V endomois等在《国际生物科学杂志》发表论文，称3种转基因玉米“MON 810”、“MON 863”和“NK603”对哺乳动物大鼠肾脏和肝脏造成不良影响。
欧洲食品安全局转基因小组对论文进行了评审，重新分析，认为文中提供的数据不能支持作者的结论Effect of diets containing genetically modified potatoes expressing Galanthus nivalis lectin on rat small intestine.Ewen SW, Pusztai A.Diets containing genetically modified (GM) potatoes expressing the lectin Galanthus nivalis agglutinin (GNA) had variable effects on different parts of the rat gastrointestinal tract. Someeffects, such as the proliferation of the gastric mucosa, were mainly due to the expression of the GNA transgene. However, other parts of the construct or the genetic transformation (or both) could also have contributed to the overall biological effects of the GNA-GM potatoes, particularly on the small intestine and caecum.(16 Oct 1999); Lancet 《柳叶刀》354(9187):1353 (PMID 10533866)）1999,英国Rowett研究所，用转雪花莲凝集素基因的土豆连续喂大鼠之后，大鼠的器官生长异常，体重减轻，免疫系统遭到破坏。
雪花莲血凝素的基因工程马铃薯在老鼠的小肠具有生长因子效果，导致小肠内层增生。
Pusztai A（The Lancet）《柳叶刀》1999:354(9187):1353Effect of diets containing genetically modified potatoes expressing Galanthus nivalis lectin on rat small intestine.Ewen SW, Pusztai A.Diets containing genetically modified (GM) potatoes expressing the lectin Galanthus nivalis agglutinin (GNA) had variable effects on different parts of the rat gastrointestinal tract. Some effects, such as the proliferation of the gastric mucosa, were mainly due to the expression of the GNA transgene. However, other parts of the construct or the genetic transformation (or both) could also have contributed to the overall biological effects of the GNA-GM potatoes, particularly on the small intestine and caecum.第二章基因工程基本技术原理The migration of DNA fragments through an agarose gelDNA银染SYPRO Ruby 1-D stain聚丙烯酰胺凝胶电泳的类型1．2．1?? 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化双链DNA片段和粗略确定ＤＮＡ片段的大小1．2．2变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化单链DNA或RNA、DNA序列测定和需精确确定DNA分子大小的试验4 DNA序列测定4．1Chain termination DNA sequencing双脱氧链终止法4．1双脱氧链终止法4.1.1 原理正常体外DNA合成:dNTP + 模板+ 引物+ DNA聚合酶测序体系:dNTP + 模板+ 引物+ DNA聚合酶+ ddNTP4．1．2双脱氧链终止法的基本试剂模板：需采用各种方法分离单链模板，高质量;引物：特异引物需专门设计；放射性标记：不安全，条带模糊.DNA聚合酶：Klenow片段：价廉，持续合成能力低，较难通过二级结构区，测序长250碱基.测序酶:消除了3’→5’外切酶活性的T7DNA聚合酶TaqDNA聚合酶4．２化学降解法测序4．２．1 原理：首先把欲测序的DNA5’末端进行标记，然后用专一的化学试剂分别对四种碱基进行修饰，使相应的糖苷键因不稳定而随机断裂，得到以特定碱基为3’-末端的4组片段。