兔股骨髁临界性骨缺损动物模型制备及临界骨缺损值

《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research
·研究原著·
徐石庄，男，1986年生，江苏省连云港市人，汉族，徐州医科大学在读硕士，主治医师，主要从事骨关节疾病研究。

通讯作者：赵凤朝，博士，副教授，徐州医科大学，江苏省徐州市 221000
文献标识码:B
投稿日期：2019-09-09 送审日期：2019-09-10 采用日期：2019-10-19 在线日期：2020-01-04
Xu Shizhuang, Master candidate, Attending physician, Department of Orthopedics, Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, Xuzhou 221000, Jiangsu Province, China
Corresponding author: Zhao Fengchao, MD, Associate professor, Department of Orthopedics, Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, Xuzhou 221000, Jiangsu Province, China
兔股骨髁临界性骨缺损动物模型制备及临界骨缺损值
徐石庄1，王 进2，潘文振1，刘 磊1，杨冠杰1，赵凤朝1 (1徐州医科大学附属医院骨科，江苏省徐州市 221000；2苏州大学附属张家
港医院，江苏省苏州市 215000)
DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2614 ORCID: 0000-0002-1257-965X(徐石庄)
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文题释义：
临界性骨缺损：首先定义为自然状况下骨缺损不进行任何处理无法自愈的最短的骨缺损尺寸。

随后考虑到观察实验动物完整的生命周期是非常困难的，将临界性骨缺损值定义为在实验期间物种不能自行愈合的最短骨缺损尺寸。

动物模型：是在医学研究中建立的模拟人类疾病表现的动物，骨组织工程中建立临床相关的测试动物模型来研究材料的生物相容性、降解、力学性能以及与宿主组织的相互作用，是体外实验和人体临床试验之间的关键一步。

摘要
背景：兔股骨远端骨缺损模型被研究者们广泛用于骨缺损替代骨组织工程材料的测试，但对于兔股骨髁圆柱形骨缺损模型的大小文献报道不一，直径分布在5-9 mm ，深度8-12 mm ，目前尚无统一的标准。

目的：建立兔股骨髁不同尺寸骨缺损模型，确定兔股骨髁临界性骨缺损尺寸。

方法：6月龄雄性新西兰白兔18只，随机分为3组，每组各6只，分别建立骨缺损模型，骨缺损直径依次为5，6，7 mm ，深度均为10 mm ，双侧手术，共计12侧。

分别于术后第1天及术后第4，8，12周行CT 扫描及三维重建，CT-Hedberg 评分评价骨缺损愈合情况；于术后12周处死新西兰白兔，取出股骨髁缺损样本，通过大体观察和苏木精-伊红染色分析缺损区愈合情况。

实验方案经徐州医科大学实验动物道德伦理委员会批准。

结果与结论：①术后所有兔均存活，术后12周大体观察示：直径5 mm 组缺损由新生骨组织充填，股骨髁塑形良好，骨缺损基本完全修复；直径6 mm 组、直径7 mm 组骨缺损区可见明显凹陷，新生骨组织较少，骨缺损未修复；②CT 图像示：术后第4，8周，直径5 mm 组缺损区逐渐减小，断端桥接；直径6 mm 、直径7 mm 组缺损区仅周边有少量新生骨长入，缺损面积较前稍减小；术后第12周可见直径5 mm 组皮质骨结构完整、连续，骨缺损基本完全修复；直径6 mm 组骨缺损部分修复；直径7 mm 组缺损未修复，仍可见明显缺损空腔存在；③CT-Hedberg 评分显示，术后各时间点直径6 mm 组评分显著低于直径5 mm 组(P < 0.05)；与直径7 mm 组比较差异无显著性意义(P > 0.05)；④组织学结果示：术后12周直径5 mm 组缺损区出现排列不规则的骨小梁结构，并可见大量新生骨组织填充，其他2组在骨缺损周边可见部分新生骨小梁存在，但缺损区新生骨组织填充较少；⑤结果说明，在12周的实验观察期内，在缺损深度同为10 mm 的条件下，直径>6 mm 的股骨髁缺损未能自行愈合，而直径<6 mm 的股骨髁缺损基本完全修复。

此结果符合临界骨缺损的标准，故直径6 mm 可作为兔股骨髁临界骨缺损值。

关键词：
兔；股骨髁；临界性骨缺损；缺损尺寸；动物模型 中图分类号：R446；R496；R318
Preparing an animal model of critical femoral defect in rabbit femoral condyle and the critical bone defect size
Xu Shizhuang 1
, Wang Jin 2
, Pan Wenzhen 1
, Liu Lei 1
, Yang Guangjie 1
, Zhao Fengchao 1 (1
Department of Orthopedics, Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, Xuzhou 221000, Jiangsu Province, China; 2
Zhangjiagang Hospital of Soochow University, Suzhou 215000, Jiangsu Province, China)
徐石庄，王进，潘文振，刘磊，杨冠杰，赵凤朝. 兔股骨髁临界性骨缺损动物模型制备及临界骨缺损值[J].
中国组织工程研究，2020，24(20):3191-3195. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2614
Abstract
BACKGROUND: Rabbit model of distal femoral bone defect has been widely used to test bone tissue engineering materials for bone defects. However, there is no uniform standard for the size of the cylindrical bone defect model of the rabbit femoral condyle, which ranges 5-9 mm in diameter and 8-12 mm in depth.
OBJECTIVE: To establish the bone defect model of adult rabbit femoral condyle with different sizes and to determine the critical bone defect size of the femoral condyle
METHODS: Eighteen male New Zealand White rabbits aged 6 months were randomly divided into three groups according to the diameter of bone defect: 5 mm diameter group, 6 mm diameter group, and 7 mm diameter group. The defect depth was 10 mm. These rabbits underwent bilateral radial surgery, a total of 12 sides. Computed Tomography (CT) scan and three-dimensional reconstruction were performed at 1 day, 4, 8, 12 weeks after surgery. The CT-Hedberg score was used to evaluate the healing of bone defects. The rabbits were sacrificed at 12 weeks after surgery, and the femoral condyle specimens were taken out. Healing of the defect was analyzed by gross observation and hematoxylin-eosin staining. The study protocol was approved by the Animal Ethics Committee of Xuzhou Medical University.
RESULTS AND CONCLUSION: All rabbits survived after surgery. The gross observation showed that the defect of 5 mm diameter group was filled with new bone tissue, the femoral condyle was well shaped, and the bone defect was completely repaired. In 6 mm and 7 mm diameter groups, depressed deformation was obviously observed in the defect area, with less new bone tissue, and the defect was was not repaired. The CT images showed that the defect area of 5 mm diameter group gradually decreased, and the broken ends of the defect were bridged. In the defect area of 6 mm and 7 mm diameter groups, only a small amount of new bone tissue was implanted, and the defect area was slightly reduced. At the 12th week after surgery, the cortical bone structure of 5 mm diameter group was intact and continuous, the femoral condyle was well shaped, and the bone defect was completely repaired. The defects of 6 mm and 7 mm diameter groups were partially or not repaired, and the defect cavity was still visible in the 7 mm diameter group. The CT-Hedberg scores of 6 mm diameter group were significantly lower than those of 5 mm diameter group at different time points (P < 0.05), and there was no significant difference in the CT-Hedberg scores between 6 mm and 7 mm diameter groups (P > 0.05). Histological results showed that there were irregular trabecular structures in the defect area of 5 mm diameter group, with a large amount of new bone tissue. In the other two groups, there were some new bone trabeculae around the bone defect, but the defect area was less filled with new bone tissue. During the 12-week observation period, the femoral condyle defect with a diameter of > 6 mm and a depth of 10 mm could not heal spontaneously, while the defect with a diameter of < 6 mm could be completely repaired, which met the criteria of critical bone defect. Therefore, the diameter of < 6 mm could be used as the critical bone defect size of rabbit femoral condyle.
Key words: rabbit; femoral condyle; critical bone defect; defect size; animal model
0 引言Introduction
在全膝关节翻修或者复杂初次膝关节置换中经常会遇
到股骨远端骨缺损的情况，如果股骨远端骨缺损得不到处理
将会导致膝关节翻修和置换手术的失败[1]。

传统治疗方法是
根据骨缺损的大小选择包括骨水泥+螺钉技术、自体骨移植、同种异体骨移植、金属垫块、袖套等方法处理，近年来随着
材料学、工程学、生命科学的快速发展，骨组织工程用于骨
缺损修复的研究受到广泛关注[2-4]。

骨组织工程材料可以促进
骨再生，在缺损处植入骨组织材料作为填充物来修复骨缺损
成为一种理想治疗方法。

为了评价骨缺损修复材料的临床效果，往往需要建立临床相关的测试动物模型来研究材料的生
物相容性、降解、力学性能以及与宿主组织的相互作用。

动
物模型是体外实验和人体临床试验之间的关键一步，因此，
选择一种合适的在体骨缺损动物模型来测试骨缺损修复材
料的疗效是非常必要的。

目前常用的造模动物有鼠、兔、狗、猴、羊、猪等，而兔骨缺损模型是最常用的，对兔股骨髁实
验动物骨缺损模型的研究也日益增多[5-6]。

股骨远端骨缺损是膝关节翻修面临的主要困难和挑
战[7-9]，因此，在进行人体临床试验之前，使用股骨远端骨缺
损动物模型测试替代材料的临床效果具有建设性的意义。

兔
股骨远端骨缺损模型被研究者们广泛用于骨缺损替代骨组
织工程材料的测试[10-12]，但对于兔股骨髁圆柱形骨缺损模型
的大小文献报道不一[13-15]，直径分布在5-9 mm，深度8- 12 mm，目前尚无统一的标准。

因此，建立标准的兔股骨髁
缺损动物模型是进行骨组织工程研究的必要条件。

实验通过构建不同尺寸的兔股骨髁骨缺损模型，并进
行相应的大体、影像学及组织学观察来评估缺损愈合情况，以期在制备兔股骨髁骨缺损模型时，为骨缺损模型的选择提供数据支持，为进一步研究股骨远端骨缺的损修复和股骨远端骨缺损修复后的疗效评价提供参考标准。

1材料和方法Materials and methods
1.1 设计动物模型的制备。

1.2 时间及地点实验于2018年8月至2019年6月在徐州医科大学完成。

1.3 材料
1.3.1 实验动物选取6月龄普通级雄性新西兰白兔18只，体质量为3.0-3.5 kg，购自徐州医科大学实验动物中心[SCXK(苏)2014-0005]。

连续监测动物饲养室内的温度及湿度，维持室温20-25 ℃，相对湿度40%-70%[SYXK(苏) 2015-0025]。

实验过程中对动物的处置符合国家科技部2006年颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》。

1.3.2 实验用主要药品及仪器氯胺酮(福建古田药业有限公司)，氟哌利多(上海旭东海普药业有限公司)，地西泮(济川药业集团有限公司)，青霉素(山东鲁抗医药股份有限公司)，骨科电钻(Smith＆Nephew，美国)，螺旋CT(SIEMENS Definition Flash，德国)，光学显微镜(OLYMPUS，日本)，电钻、持针器、剪刀、2 mm克氏针、手外科拉钩、骨膜剥离器、手术刀柄、止血钳、中空取骨钻、刀片、缝针缝线、注射器等手术器械由徐州医科大学动物实验中心提供。

1.4 实验方法
1.4.1 实验分组及模型制备18只新西兰白兔根据圆柱形骨缺损的直径大小随机分为直径5，6，7 mm 3组，骨缺损直径依次为5，6，7 mm，深度均为10 mm，每组各6只，双侧手术计12侧。

参考邓威等[16]造模方法制备兔股骨髁缺
XU SZ, WANG J, PAN WZ, LIU L, YANG GJ, ZHAO FC. Preparing an animal model of critical femoral defect in rabbit femoral condyle and the critical bone defect
size. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2020;24(20):3191-3195. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2614
损模型。

采用氯胺酮(0.35 mL/kg)加氟哌利多(0.35 mL/kg)耳缘静脉注射麻醉，地西泮(0.35 mL/kg)耳缘静脉注射维持麻醉效果。

麻醉生效后，双侧后肢术区备皮，将兔仰卧位固定于动物手术台上，常规消毒、铺巾，膝关节上方1c m 处，股骨外侧可触及到稍隆起平台结构，确定股骨外侧髁位置，以股骨外侧髁为中心沿关节长轴方向做长约2.5 cm 的纵行手术切口，切开皮肤，逐层分离皮下组织、肌肉至骨膜，拉开肌肉组织，充分显露兔股骨髁部，剥离骨膜，暴露股骨外侧髁。

先使用直径2 mm的克氏针垂直骨面钻孔定位，以保证骨缺损中心距股骨远端0.5-1.0 cm，采用骨科电钻和不同直径的钻头，垂直于骨干长轴、平行于冠状面按照术前分组分别制备直径为5，6，7 mm，深度为10 mm 的圆柱形骨缺损(图1)。

生理盐水彻底冲洗缺损处碎骨屑及积血，4-0可吸收缝线逐层缝合切口，敷料包扎固定，单笼饲养，自由进食、饮水。

术后每日肌肉注射青霉素80万U，连续注射3 d，预防感染。

1.4.2 大体观察术后观察新西兰白兔精神状态、饮食活动等一般情况，以及切口有无开裂、感染等表现。

术后第12周麻醉后处死所有动物，取出股骨髁缺损样本，大体观察各组骨缺损修复情况及缺损区纤维组织增生情况。

1.4.3 CT观察术后第1天及术后第4，8，12周采用氯胺酮(0.35 mL/kg)加氟哌利多(0.35 mL/kg)耳缘静脉注射麻醉，地西泮(0.35 mL/kg)耳缘静脉注射维持麻醉效果，在麻醉下行CT扫描及三维重建。

CT扫描参数：电压80 kV，电流180 mA，螺距0.8，旋转时间1.0 s。

根据CT信号值变化，观察不同时间段骨缺损区新生骨生成量，并完成CT-Hedberg评分定量分析骨缺损修复情况。

CT-Hedberg 评分根据新生骨量占缺损区域的比值不同，将0%-25%计为1分；26%-50%计为2分；51%-75%计为3分；76%-100%计为4分。

1.4.4 组织学观察术后第12周，麻醉后采用耳缘静脉推注20-50 mL的空气处死新西兰白兔，将取出的股骨髁样本用体积分数10%甲醛溶液固定48 h，然后EDTA脱钙至标本软化，梯度乙醇逐级脱水，石蜡包埋，骨组织切片，苏木精-伊红染色，观察骨缺损区愈合情况。

1.5 主要观察指标①术后兔大体观察，骨髁缺损样本大体观察；②骨缺损区CT观察，CT-Hedberg评分定量分析；
③骨缺损区组织学观察。

1.6 统计学分析采用SPSS 19.0统计软件进行统计学处理，计量资料以x_±s表示，对各组骨缺损CT-Hedberg评分进行单因素方差分析，检验水准α值取双侧0.05，以P < 0.05表示差异有显著性意义。

2结果Results
2.1 实验动物数量分析实验选用新西兰白兔18只，分为3组，实验过程中无脱失，全部进入结果分析。

2.2 一般情况各组新西兰白兔麻醉清醒后，精神萎靡，少量觅食饮水。

术后第1天，新西兰白兔精神状态好转，活动自如，可正常觅食饮水。

术后兔下肢切口周围有不同程度肿胀，四五天肿胀基本消退，术后2周左右切口愈合良好，未出现切口开裂或感染征象，所有新西兰白兔均如期存活。

2.3 大体观察术后第12周大体标本观察，直径5 mm组缺损由新生骨组织充填，缺损区与周围骨组织界限不清，股骨髁塑形良好，骨缺损区基本完全修复；直径6 mm组骨缺损区可见缺损空腔变浅，有部分新生骨组织，骨缺损不完全修复；直径7 mm组骨缺损区可见明显缺损空腔，新生骨组织较少，缺损部位由白色纤维包膜覆盖，骨缺损未修复(图2)。

2.4 CT三维重建结果术后第1天CT三维重建可见各组圆柱形缺损造模准确，缺损区域未见骨屑残留；术后第4，8周各组均有不同程度的骨膜反应，直径5 mm组缺损区逐渐减小，断端桥接；直径6 mm组、直径7 mm组缺损区仅周边有少量新生骨长入，缺损面积较前稍减小；术后第12周可见直径5 mm组皮质骨结构完整、连续，股骨髁塑形良好，骨缺损基本完全修复；直径6 mm组骨缺损部分修复，空腔减小；直径7 mm组缺损未修复，仍可见明显缺损空腔存在(图3)。

术后CT-Hedberg评分显示：直径5 mm组与直径6 mm 组、直径7 mm组不同时间点评分之间比较差异有显著性意义(P=0.000)；直径6 mm组与直径7 mm组不同时间点评分之间比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见表1。

2.5 组织学观察建模后第12周取材行苏木精-伊红染色，结果显示直径5 mm组缺损区出现排列不规则的骨小梁结构，骨小梁连续性好，中间可见大量新生骨组织填充，直径6 mm组在骨缺损周边可见部分新生骨小梁存在，骨小梁连续性欠佳，中间可见部分新生骨组织填充；直径7 mm 组缺损区可见极少量骨小梁，连续性欠佳，中间可见极少量新生骨组织填充(图4)。

实验动物造模过程的相关问题
造模目的：建立兔股骨髁不同尺寸骨缺损模型，确定兔股骨髁临界性
骨缺损尺寸
借鉴已有标准实施
动物造模：
参考邓威等[16]造模方法制备兔股骨髁缺损模型
动物来源及品系：新西兰白兔购自徐州医科大学实验动物中心
造模技术描述：暴露股骨外侧髁，先使用克氏针垂直骨面钻孔定位，采用
骨科电钻，垂直于骨干长轴、平行于冠状面分别制备直径
为5，6，7 mm，深度为10 mm的圆柱形骨缺损，生理
盐水冲洗，缝合切口
动物数量及分组方法：18只新西兰白兔随机分为3组：分别为直径5，6，7 mm 组，每组6只
造模后实验观察指标：①术后兔大体观察，骨髁缺损样本大体观察；②骨缺损区CT观察，CT-Hedberg评分定量分析；③骨缺损区组织学观察。

造模后动物处理：术后第12周麻醉后处死所有动物后，取出股骨髁缺损样
本待检测
伦理委员会批准：实验方案经徐州医科大学实验动物道德伦理委员会批准
徐石庄，王进，潘文振，刘磊，杨冠杰，赵凤朝. 兔股骨髁临界性骨缺损动物模型制备及临界骨缺损值[J]. 中国组织工程研究，2020，24(20):3191-3195. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2614
3讨论Discussion
不同原因造成的不同部位的骨折和骨缺损是临床修复的一大难题，建立标准的实验动物骨缺损模型是进行后续各项相关实验的重要基础。

1986年，SCHMITZ等[17]研究表明自然状况下骨缺损有一个不能自行愈合的临界值，首次提出了临界性骨缺损(CSD)这一概念，并将其定义为缺损后不进行任何处理无法自愈的最短的骨缺损尺寸。

随后考虑到观察实验动物完整的生命周期是非常困难的，GOSAIN等[18]将临界性骨缺损值定义为在实验期间物种不能自行愈合的最短骨缺损尺寸。

国内学者周芳等[19]研究指出物种、机体状态、解剖位置、软组织环境等各种因素与临界性骨缺损的愈合相关。

因兔和人类具有相似的骨密度和抗骨折的韧性，在所有用于骨骼肌肉研究的动物中，兔子是最常用的动物模型[20]。

目前关于兔股骨髁骨缺损动物模型的标准尚未统一，直径分布在5-9 mm，深度8-12 mm。

因此，建立一个标准的兔股骨髁临界性骨缺损模型对进行各种骨组织工程研究来说是非常必要的。

由于兔的股骨外髁层次清楚而且周围没有重要的神经血管等解剖结构，有利于手术操作，兔的股骨髁部外侧是皮质骨，内侧是松质骨，混合有骨髓组织，内外径大约15 mm，前后径大约12 mm，有骨量充足，能够有效避免个体差异对实验结果的干扰[21]。

PAN等[22]实验证实在兔股骨外髁部利用组织工程材料开展骨缺损修复的研究，可以获得理想的实验效果，所以作者选择兔的股骨外髁部作为建模部位。

目前国内将兔股骨髁缺损模型用于实验研究已有不少报道，但就股骨髁临界性骨缺损值进行相关的探讨文章较少，大多直接根据既往文献中大多的模型制备方式制备股骨髁骨缺损模型，且缺损尺寸大小不一。

如黄鑫等[23]制备的股骨髁松质骨缺损模型尺寸为6 mm(直径)×10 mm(深度)；LIU等[24]则在实验中选择了7 mm(直径)×10 mm(深度)作为股骨髁缺损模型的值。

上述文献中所涉及到的6 mm、7 mm空白对照组中的骨缺损模型在实验周期内均未完全愈合，考虑上述实验结果，此次实验在其基础上增加了直
图注：骨缺损直径为5 mm(A)，6 mm(B)及7 mm(C)
图1 兔股骨髁骨缺损制备成功的大体观察图
Figure 1 Gross observation of the rabbit femoral condyle after surgery
图注：图A为5 mm，缺损完全恢复；B为6 mm，缺损不完全恢复；C为7 mm，缺损未恢复
图2 术后12周兔股骨髁大体观察图
Figure 2 Gross observation of the rabbit femoral condyle 12 weeks after surgery
术后1 d 术后4周术后8周术后12周
5 mm组
6 mm组
7 mm组
图注：术后第12周可见，直径5 mm组骨缺损基本完全修复；直径6 mm组骨缺损部分修复，空腔减小；直径7 mm组缺损未修复，仍可见明显缺损空腔存在
图2 兔股骨髁CT三维重建图
Figure 2 Three-dimensional CT reconstruction of the rabbit femoral condyle 表1 术后不同时间点各组兔CT-Hedberg评分表(x_±s) Table 1 CT-Hedberg scores at different time points after surgery
表注：与直径5 mm组比较，a P=0.000
组别术后4周术后8周术后12周
直径5 mm组 2.67±0.65 3.58±0.51 3.92±0.29
直径6 mm组 1.33±0.49a 1.50±0.52a 1.83±0.83a
直径7 mm组 1.17±0.39a 1.33±0.65a 1.58±0.79a
图注：直径5 mm组骨小梁连续性好，中间可见大量新生骨组织填充；直径6 mm组骨小梁连续性欠佳，中间可见部分新生骨组织填充；直径7 mm组缺损区可见极少量骨小梁，连续性欠佳，中间可见极少量新生骨组织填充
图4 术后12周兔股骨髁组织学观察(苏木精-伊红染色)
Figure 4 Histological observation of the rabbit femoral condyle at 12 weeks after surgery (hematoxylin-eosin staining)
×2 ×2 ×2
×4 ×4 ×4
直径5 mm组直径6 mm组直径7 mm组
XU SZ, WANG J, PAN WZ, LIU L, YANG GJ, ZHAO FC. Preparing an animal model of critical femoral defect in rabbit femoral condyle and the critical bone defect
size. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2020;24(20):3191-3195. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2614
径5 mm，深度10 mm的缺损模型，来推测兔股骨髁临界性骨缺损值，从而为后期的研究提供数据支持。

骨缺损愈合是一个渐进性的过程，需要一定的时间支持。

然而完整的观察实验动物的整个生命周期是较为困难的，因此GOSAIN等[18]也将临界性骨缺损值限定为在实验期间不能自行愈合的最短骨缺损尺寸。

LIN等[25]在研究仿生三维羟基磷灰石/胶原蛋白支架对骨再生影响的实验中选择了12周作为实验动物的观察周期，CHANG等[26]在研究中也选择了12周作为实验动物骨愈合的观察周期，而SUN 等[27]则选择了术后8周处死新西兰白兔并取出股骨做进一步实验观察。

结合上述文献中提到的观察周期，作者将实验周期设计为12周，以评价在12周内兔股骨髁缺损的愈合情况，从而确定临界性骨缺损值。

此次实验根据邓威等[16]文献中提到的缺损制备方法，制备了直径分别为5，6，7 mm，深度10 mm的兔股骨髁缺损模型，并发现直径5 mm，深度10 mm的兔股骨髁缺损在12周实验周期内基本愈合，而直径6，7 mm的兔股骨髁缺损在12周观察期内缺损区仍明显可见，表明直径6 mm，深度10 mm的兔股骨髁缺损值可以作为兔股骨髁临界性骨缺损值。

实验在一定程度上填补了兔股骨髁临界性骨缺损研究中数据上的不足，并对直径6 mm，深度10 mm的兔股骨髁缺损作为兔股骨髁临界性骨缺损提供了数据上的支持。

综上所述在制备兔股骨髁缺损模型时，可将直径6 mm，深度10 mm作为兔股骨髁临界性骨缺损值。

作者贡献：第一作者直接参与了实验的酝酿、设计、实施，数据的采集、统计分析和文章的撰写，第二、三作者参与了实验的实施和数据采集，第四、五作者参与了数据的采集和分析，第六作者参与了实验的酝酿、设计并对文章内容进行审阅。

经费支持：该文章没有接受任何经费支持。

利益冲突：文章的全部作者声明，在课题研究和文章撰写过程中不存在利益冲突。

机构伦理问题：实验方案经徐州医科大学实验动物道德伦理委员会批准。

实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。

实验动物在麻醉下进行所有的手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。

文章查重：文章出版前已经过专业反剽窃文献检测系统进行3次查重。

文章外审：文章经小同行外审专家双盲外审，同行评议认为文章符合期刊发稿宗旨。

文章版权：文章出版前杂志已与全体作者授权人签署了版权相关协议。

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