厌氧菌的培养方法
厌氧培养方法
厌氧性细菌的分离培养法厌氧菌需有较低的氧化—还原势能才能生长 (例如破伤风梭状芽孢杆菌需氧化—还原电势降低至 0.11V 时才开始生长 )，在有氧的环境下，培养基的氧化—还原电势较高，不适于厌氧菌的生长。
为使培养基降低势，降低培养环境的氧压是十分必要的。
现有的厌氧培养法甚多，主要有生物学，化学和物理学 3 种方法，可根据各实验室的具体情况而选用。
1．生物学方法培养基中含有植物组织 (如马铃薯、燕麦、发芽谷物等 )或动物组织 (新鲜无菌的小片组织或加热杀菌的肌肉、心、脑等 ) ，由于组织的呼吸作用或组织中的可氧化物质氧化而消耗氧气(如肌肉或脑组织中不饱和脂肪酸的氧化能消耗氧气，碎肉培养基的应用，就是根据这个原理 )，组织中所含的还原性化合物如谷胱甘肽也可以使氧化—还原电势下降。
另外，将厌氧菌与需氧菌共同培养在一个平皿内，利用需氧菌的生长将氧消耗后，使厌氧菌能生长。
其方法是将培养皿的一半接种吸收氧气能力强的需氧菌(如枯草杆菌 )，另一半接种厌氧菌，接种后将平皿倒扣在一块玻璃板上，并用石蜡密封，置37恒温箱中培养2~3d 后，即可观察到需氧菌和厌氧菌均先后生长。
2．化学方法利用还原作用强的化学物质，将环境或培养基内的氧气吸收，或用还原氧化型物质，降低氧化—还原电势。
此法系用连二亚硫酸纳 (Sodium hydrosulphite) 和碳酸钠以吸收空气中的氧气，其反应式如下：Na2S204 十Na2C03十O2 一→ Na2SO4十Na2SO3 十C02取一有盖的玻璃罐，罐底垫一薄层棉花，将接种好的平皿重叠正放于罐内 (如系液体培养基，则直立于罐内 )，最上端保留可容纳 1~2 个平皿的空间 (视玻罐的体积而定 )，按玻罐的体积每1000cm3 空间用连二亚硫酸纳及碳酸钠各 30g，在纸上混匀后，盛于上面的空平皿中，加水少许使混合物潮湿，但不可过湿，以免罐内水分过多。
若用无盖玻罐，则可将平皿重叠正放在浅底容器上，以无盖玻罐罩于皿上，罐口周围用胶泥或水银封闭 (如图１－５ )。
厌氧细菌的培养
厌氧细菌的培养厌氧菌的培养方法厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。
通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1．厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2．厌氧袋（Bio-bag）即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管（有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3．厌氧手套箱（Anaerobie glove box）是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气（H2，CO2，N2）达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4．厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5．生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物（多是植物），消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
污水处理培养菌种方法
污水处理培养菌种方法一、引言污水处理是保护环境和人类健康的重要措施之一。
在污水处理过程中，菌种的使用起着至关重要的作用。
本文将详细介绍污水处理中常用的菌种培养方法。
二、菌种的选择在污水处理中，常用的菌种包括厌氧菌、好氧菌和兼性厌氧菌。
厌氧菌可在缺氧条件下生长，好氧菌需要氧气进行代谢，而兼性厌氧菌则可在缺氧和有氧条件下生长。
根据不同的处理需求，选择合适的菌种进行培养。
三、菌种培养方法1. 厌氧菌培养方法（1）制备培养基：将适量的蛋白胨、葡萄糖、硫酸铵等溶解于蒸馏水中，加热煮沸后冷却，加入适量的硫酸镁、氯化钠等，调整pH值至7.0左右。
（2）接种培养基：将污水样品取适量加入培养基中，摇匀后封闭。
（3）培养条件：将培养基置于恒温培养箱中，温度控制在35℃左右，保持缺氧状态。
（4）观察和收获：培养一段时间后，观察菌落的生长情况，根据需要收获菌种。
2. 好氧菌培养方法（1）制备培养基：将适量的蛋白胨、葡萄糖、氯化钠等溶解于蒸馏水中，加热煮沸后冷却，调整pH值至7.0左右。
（2）接种培养基：将污水样品取适量加入培养基中，摇匀后封闭。
（3）培养条件：将培养基置于恒温培养箱中，温度控制在25℃左右，保持有氧状态。
（4）观察和收获：培养一段时间后，观察菌落的生长情况，根据需要收获菌种。
3. 兼性厌氧菌培养方法（1）制备培养基：将适量的蛋白胨、葡萄糖、硫酸铵等溶解于蒸馏水中，加热煮沸后冷却，加入适量的硫酸镁、氯化钠等，调整pH值至7.0左右。
（2）接种培养基：将污水样品取适量加入培养基中，摇匀后封闭。
（3）培养条件：将培养基置于恒温培养箱中，温度控制在30℃左右，保持缺氧和有氧交替状态。
（4）观察和收获：培养一段时间后，观察菌落的生长情况，根据需要收获菌种。
四、菌种培养的注意事项1. 严格控制培养条件：包括温度、光照、氧气浓度等，以保证菌种的正常生长。
2. 选择合适的培养基：不同的菌种对培养基的要求不同，应根据菌种的特性选择适宜的培养基。
厌氧菌的培养方法
1 液体培养基的厌氧培养法
培养基煮沸：驱气后置流水中急速冷却 添加还原剂：
0.03～0.05％L-盐酸半胱氨酸 0.01～0.02％硫乙醇钠 0.5～1％葡萄糖 0.1％抗坏血酸 其它还原剂 添加琼脂
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2 固体培养基的厌氧培养法
厌氧罐法 简易厌氧罐和厌氧袋法 钢丝绒法 焦性没食子酸法 抽气换气厌氧培养法 生物好氧厌氧培养法 转管技术和气体喷射培养法 厌氧手套箱法 （又称厌氧室法）
2.6 生物好氧厌氧培养法
疱肉培养基:
牛肉渣
0.5g
牛肉浸液 7ml
液面上加盖3～4mm厚的融化凡士林，灭菌。
生物好氧厌氧培养方法
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2.7 转管技术和气体喷射培养法
钢瓶进气 除氧气体
微量O2 H2源
铜柱
360℃ （亮黄色）
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CuO （黑色）
2.8厌氧手套箱法
又称厌氧室法
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干燥器容内径（厘米） 容器3
容积（毫升）
容器1
0.2克
柠檬酸0.6克
15cm（约2150毫升）
和
1.5克
碳酸氢钠0.7克
容器2
硼氢钠
氯化钴
或
0.6克
钯粒
18cm（约3500毫升） 1克
硼氢钠
氯化钴0.33克
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柠檬酸
2.2.2 厌氧袋法
聚碳酸酯（复合塑料膜）制厌氧袋 产气袋 厌氧指示剂 触媒
融化的白蜡封边
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2.5 抽气换气厌氧培养法
玻璃干燥罐 混合气钢瓶:
10％二氧化碳、10％的氢气、80％的氮气
三通阀 触媒:钯粒 / 浸泡钢丝绒 / 氯化钴 厌氧指示剂
厌氧菌的培养方法
厌氧菌的培养方法厌氧菌是一类不能在氧气存在下生长和繁殖的微生物。
这些微生物在许多领域都具有重要的应用价值，包括环境保护、生物能源生产等。
因此，为了研究和应用这些厌氧菌，科学家们发展了多种厌氧菌的培养方法。
本文将详细介绍常用的三种厌氧菌的培养方法。
一、利用情境气氛培养厌氧菌情境气氛培养是培养厌氧菌的一种常用方法，其原理是通过调节培养基的气氛来控制氧气浓度。
在培养厌氧菌时，一般会采用以下方法之一来制备情境气氛。
1.预氧化法：将培养容器密封，置于28-37°C的恒温灭菌箱中。
然后通过注入一定比例的高纯度二氧化碳-氧气混合气体，使容器内的气氛变为厌氧情境。
这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较低的情况。
2.双液低压法：将培养基分成两个相隔的容器，分别加入不同的培养液。
然后将两个容器封口并贴膜，用胶带封好。
经过一段时间后，在密封的容器内会形成低压情境。
这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较高的情况。
通过以上两种情境气氛培养方法，可以模拟出适合厌氧菌生长的条件。
二、利用厌氧培养器培养厌氧菌厌氧培养器是一种专门用于培养厌氧菌的装置，其原理是通过封闭式容器和气氛控制系统，实现在厌氧情境下的培养。
常用的厌氧培养器有以下两种类型：1.商用厌氧培养器：通常有专门的培养室和压力控制系统，可以产生适合厌氧菌生长的气氛。
在这种培养器中，可以根据菌株的特性进行相应的操作和调节。
2.自制厌氧培养器：由于商用的厌氧培养器设备较为昂贵，对于一些实验室来说并不实际。
因此，一些实验室会开发自己的厌氧培养器。
自制培养器的原理和商用培养器类似，只是在设计和制作上有所差异。
利用厌氧培养器进行培养时，需要注意以下几点：1.气氛控制：厌氧培养器应能够调节培养基的气氛，包括氮气、二氧化碳等气体的供应和排除。
2.温度调节：厌氧培养器应能够保持恒定的培养温度，一般为28-37°C。
3.培养基搅拌：适当的培养基搅拌可以增加氧气的溶解度，并促进菌体的生长和分散。
实验十二 厌氧性细菌(1稿)
实验十二厌氧性细菌（厌氧培养方法）厌氧性细菌（Anaerobicbacteria）是一大群必须在无氧或低氧环境中才能生长繁殖的细菌；一般情况下，这类细菌在无氧条件下比在有氧环境中生长好，不能在空气（氧气浓度大于18%）和（或）二氧化碳浓度小于10%以下的固体培养基表面生长。
这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢多以无氧发酵的方式进行。
它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。
（一）无芽胞厌氧菌主要种类及生物学性状无芽胞厌氧菌共有23个属，与人类疾病相关的主要有10个属。
1.革兰阴性厌氧杆菌有8个属，类杆菌属中的脆弱类杆菌最为重要。
形态呈多形性，有荚膜。
除类杆菌在培养基上生长迅速外，其余均生长缓慢。
2.革兰阴性厌氧菌有3个属，其中以韦荣菌属最重要。
为咽喉部主要厌氧菌，但在临床厌氧菌分离标本中，分离率小于1%，且为混合感染菌之一。
其他革兰阴性球菌极少分离到。
3.革兰阳性厌氧菌有5个属，其中有临床意义的是消化链球菌属，主要寄居在阴道。
本菌属细菌生长缓慢，培养需5～7天。
4.革兰阳性厌氧杆菌有7个属，其中以下列3个属为主：（1）丙酸杆菌属：小杆菌，无鞭毛，能在普通培养基上生长，需要2～5天，与人类有关的有3个种，以痤疮丙酸杆菌最为常见。
（2）双歧杆菌：呈多形性，有分枝，无动力，严格厌氧，耐酸。
29个种中有10个种与人类有关，其中只有齿双歧杆菌与龋齿和牙周炎有关。
其他种极少从临床标本中分离到。
（3）优杆菌属：单一形态或多形态，动力不定，严格厌氧，生化反应活泼，生长缓慢，常需培养7天，最常见的是迟钝优杆菌。
（二）微生物学检查要从感染灶深部采取标本。
最好是切取感染灶组织或活检标本，立即送检医.学教育网搜集整理。
1.直接涂片镜检：将采集的标本直接涂片染色镜检，观察细菌形态、染色及菌量，为进一步培养以及初步诊断提供依据。
厌氧菌
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。
通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
厌氧菌的采集、送检、培养、分离鉴定及注意事项
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育（较为推荐）。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
焦性末食子酸与碱反应后耗氧。
水族箱厌氧菌的培养方法
水族箱厌氧菌的培养方法
水晶虾
厌氧菌生存在低氧的环境下，水晶虾、硝化菌都需大量的氧气，水中有充分的氧气，造成培育厌氧菌极为困难，就是有的话也不足需求，所以一般的缸子到硝酸盐氮循环就止，传统下来培养厌氧菌的概念就是铺厚厚的底床，但虾缸用的是土，土不像石或砂，厚土会败坏，不适用来培养厌氧菌。
最佳培养厌氧菌的地方还是在筒子里。
1、Eheim2215串三个（一个马达+二个前置）：用多量的菌类去“消耗”氧气，才能让最后一个筒子有厌氧菌生存的环境。
2、用品质好的滤材：硝化菌越多，最后筒内的氧气会越少。
3、设缸时用品牌好和多量的菌类并维持硝酸盐在最低（太高就换水）
4、处理缸内的有机物质，有机物质的累积会导致硝酸盐过高而无法降低。
厌氧性细菌的分离培养法
厌氧性细菌的分离培养法厌氧菌需有较低的氧化—还原势能才能生长(例如破伤风梭状芽孢杆菌需氧化—还原电势降低至0.11V时才开始生长)，在有氧的环境下，培养基的氧化—还原电势较高，不适于厌氧菌的生长。
为使培养基降低势，降低培养环境的氧压是十分必要的。
现有的厌氧培养法甚多，主要有生物学，化学和物理学3种方法，可根据各实验室的具体情况而选用。
1．生物学方法培养基中含有植物组织(如马铃薯、燕麦、发芽谷物等)或动物组织(新鲜无菌的小片组织或加热杀菌的肌肉、心、脑等)，由于组织的呼吸作用或组织中的可氧化物质氧化而消耗氧气(如肌肉或脑组织中不饱和脂肪酸的氧化能消耗氧气，碎肉培养基的应用，就是根据这个原理)，组织中所含的还原性化合物如谷胱甘肽也可以使氧化—还原电势下降。
另外，将厌氧菌与需氧菌共同培养在一个平皿内，利用需氧菌的生长将氧消耗后，使厌氧菌能生长。
其方法是将培养皿的一半接种吸收氧气能力强的需氧菌(如枯草杆菌)，另一半接种厌氧菌，接种后将平皿倒扣在一块玻璃板上，并用石蜡密封，置37恒温箱中培养2~3d后，即可观察到需氧菌和厌氧菌均先后生长。
2．化学方法利用还原作用强的化学物质，将环境或培养基内的氧气吸收，或用还原氧化型物质，降低氧化—还原电势。
（１）李伏夫(B．M．JIbbob)法此法系用连二亚硫酸纳(Sodium hydrosulphite)和碳酸钠以吸收空气中的氧气，其反应式如下：Na2S204十Na2C03十O2一→Na2SO4十Na2SO3十C02取一有盖的玻璃罐，罐底垫一薄层棉花，将接种好的平皿重叠正放于罐内(如系液体培养基，则直立于罐内)，最上端保留可容纳1~2个平皿的空间(视玻罐的体积而定)，按玻罐的体积每1000cm3空间用连二亚硫酸纳及碳酸钠各30g，在纸上混匀后，盛于上面的空平皿中，加水少许使混合物潮湿，但不可过湿，以免罐内水分过多。
若用无盖玻罐，则可将平皿重叠正放在浅底容器上，以无盖玻罐罩于皿上，罐口周围用胶泥或水银封闭(如图１－５)。
厌氧培养方法
厌氧培养方法
厌氧培养方法啊，这可真是个有趣又重要的领域呢！大家都知道，有些微生物啊，它们就喜欢在没有氧气的环境里生活，那怎么才能给它们创造一个舒适的家呢？
先来说说厌氧罐吧，这就像是一个专门为厌氧菌打造的小城堡。
把样本放进去，然后通过一些特殊的手段，比如加入一些能吸收氧气的物质，让里面的氧气变得极少极少，几乎可以忽略不计。
这样，厌氧菌们不就可以欢快地生长繁殖啦！这就好像给它们准备了一场专属的派对，它们肯定开心得不得了！
还有厌氧手套箱，这简直就是个神奇的存在呀！它就像是一个密封的大盒子，人可以把手伸进去操作，而里面一直保持着无氧的状态。
想象一下，在这个小空间里，厌氧菌们自由自在地活动着，不用担心氧气这个“大坏蛋”来捣乱，多棒啊！
再讲讲培养基的选择，那可真是有讲究的呢！得选择适合厌氧菌生长的培养基，就像给它们准备了最爱的美食一样。
要是选错了，它们可能就不乐意生长啦。
厌氧培养可不像在公园里散步那么简单哦！需要我们细心、耐心，还要有一些小技巧。
就好像照顾一个特别挑剔的小朋友，得时刻关注它的需求。
但当你看到厌氧菌们茁壮成长，那种成就感啊，简直无法用言语来形容！
厌氧培养方法对于很多领域都有着至关重要的作用。
在医学上，它可以帮助我们研究一些特殊的病菌；在科研中，更是能让我们深入了解厌氧菌的世界。
它就像是一把钥匙，能打开一个充满神秘和惊喜的大门。
所以啊，我们一定要好好掌握厌氧培养方法，让它为我们的生活和科学研究带来更多的惊喜和发现呀！。
厌氧菌的培养方法
厌氧菌的培养方法厌氧菌是一类不能在氧气环境下生长的微生物，其培养方法与其他菌种有所不同。
为了成功培养厌氧菌，我们需要采取特殊的培养条件和方法。
下面我将详细介绍厌氧菌的培养方法。
一、厌氧培养条件的建立1. 气氛控制：培养厌氧菌的关键是防止氧气的进入。
常用的气氛控制方法包括密封法、气体置换法和用稀有气体混合气体置换法。
其中，密封法是最常用的方法。
我们可以将培养基置于密封的容器中，并注入一定量的气体，如氮气、氩气或二氧化碳等，从而构建无氧环境。
2. pH控制：厌氧菌对pH值较为敏感，一般要求pH值在6.8至7.4之间。
所以，在培养厌氧菌时，我们需要对培养基的pH进行调节。
3. 温度控制：不同的厌氧菌对温度的要求各有不同，一般在25至37之间。
在培养过程中，应根据具体菌株的要求进行控制。
4. 无氧条件维持：在培养过程中，需要保持无氧条件，避免氧气的进入。
一般可以选择在无氧罐中进行培养，该罐内有还原剂（如碘化钠、甲酚等）与氧气发生反应，将氧气消耗掉。
二、厌氧菌的预培养方法在真正进行厌氧培养之前，我们需要进行预培养，以提高成功培养的几率。
1. 培养基制备：根据具体菌株的不同要求配制培养基。
2. 保护性缓冲层：在培养基上覆盖一层液体密度较高的液体，如厌氧缓冲液、灌封液等。
这层液体可以形成一个保护层，避免氧气的进入。
3. 器具处理：将要使用的器具（如培养瓶、移液管等）经过高温高压灭菌或用灭菌包装。
4. 预培养条件：在厌氧罐或无氧条件下，将培养基接种菌种。
一般预培养时间较短，一般为12至24小时。
5. 初代接种：将预培养的菌种移植到新的含有适宜的培养基的无氧培养容器中。
三、厌氧菌的分离和纯化为了获得纯种的厌氧菌，我们需要对菌落进行分离和纯化。
常用的方法包括传代分离法和稀释分离法。
1. 传代分离法：将初代接种中的菌落进行分离。
一般使用无菌的毛细管或环陆法将菌落划入含有适宜培养基的无氧培养容器中。
2. 稀释分离法：将菌落分散在适宜培养基中，再将分散液进行稀释，以期获得稀释液中只有一个菌落的稀释液。
厌氧菌固体培养实验报告
一、实验目的1. 熟悉厌氧菌的培养方法。
2. 掌握厌氧菌在固体培养基上的分离和纯化技术。
3. 观察并记录厌氧菌的生长特征。
二、实验原理厌氧菌是一类在无氧或低氧环境下生长繁殖的微生物。
由于厌氧菌的代谢过程对氧气非常敏感，因此在培养过程中需要采取严格的厌氧条件。
本实验通过在无氧环境中培养厌氧菌，观察其在固体培养基上的生长情况，以达到分离和纯化的目的。
三、实验材料1. 菌种：选择一种已知的厌氧菌作为实验材料。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基。
3. 无氧设备：厌氧箱、厌氧袋、厌氧手套、厌氧操作台等。
4. 工具：接种环、接种针、酒精灯、培养皿、显微镜等。
四、实验方法1. 培养基制备：按照牛肉膏蛋白胨固体培养基的配方，将各成分混合，加热溶解后，调整pH至7.2-7.6，高压灭菌后备用。
2. 无氧环境制备：将厌氧箱、厌氧袋、厌氧手套、厌氧操作台等设备准备好，并按照无氧操作规程进行操作。
3. 接种：将厌氧菌接种于无菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上，用接种环或接种针进行划线接种。
4. 培养过程：将接种后的平板放入厌氧箱中，调节温度至适宜范围（一般为37℃），培养一定时间（如24小时）。
5. 观察与记录：观察厌氧菌在固体培养基上的生长情况，记录其菌落形态、颜色、大小等特征。
6. 鉴定：采用显微镜观察厌氧菌的菌落形态，必要时进行生化鉴定。
五、实验结果与分析1. 培养基制备：成功制备了牛肉膏蛋白胨固体培养基，无杂菌污染。
2. 无氧环境制备：厌氧箱、厌氧袋、厌氧手套、厌氧操作台等设备均达到无氧要求。
3. 接种：厌氧菌成功接种于固体培养基平板上。
4. 培养过程：厌氧菌在固体培养基上生长良好，形成明显的菌落。
5. 观察与记录：菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐，颜色为白色。
6. 鉴定：通过显微镜观察，发现厌氧菌菌落形态与已知厌氧菌相似，生化鉴定结果也相符。
六、实验结论本实验成功培养了一种厌氧菌，并对其生长特征进行了观察和记录。
厌氧菌的培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉厌氧菌的微生物学特性。
2. 掌握厌氧菌的分离和纯化方法。
3. 学习使用厌氧培养箱进行微生物培养。
4. 了解厌氧菌在生物工程和医学研究中的应用。
二、实验原理厌氧菌是一类在无氧或低氧环境中生长繁殖的微生物。
它们不能进行有氧呼吸，其能量代谢主要通过无氧发酵的方式进行。
厌氧菌在自然界中广泛存在，与人类的健康和疾病密切相关。
本实验旨在通过厌氧菌的分离和培养，了解其生长特性，为后续研究提供基础。
三、实验材料1. 厌氧菌样品：土壤、水体、粪便等。
2. 培养基：厌氧肉汤培养基、血琼脂平板、液体石蜡。
3. 器械：厌氧培养箱、接种环、接种针、无菌试管、锥形瓶、移液器、酒精灯、高压蒸汽灭菌器等。
四、实验方法1. 样品处理- 取一定量的厌氧菌样品，用无菌生理盐水进行稀释。
- 取适量稀释液，分别接种于厌氧肉汤培养基和血琼脂平板。
2. 厌氧环境制备- 将厌氧肉汤培养基和血琼脂平板放入厌氧培养箱中。
- 在厌氧培养箱中注入液体石蜡，覆盖培养基表面，隔绝空气。
3. 培养- 将厌氧肉汤培养基置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
- 观察菌落生长情况，记录菌落形态、颜色等特征。
4. 分离和纯化- 将生长良好的菌落挑取，接种于血琼脂平板。
- 再次放入厌氧培养箱中培养，观察菌落生长情况。
- 重复上述步骤，直至获得纯化的厌氧菌。
五、实验结果1. 菌落形态- 厌氧肉汤培养基中的菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐、颜色为白色。
- 血琼脂平板上的菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐、颜色为白色，周围有溶血现象。
2. 分离和纯化- 通过多次接种和纯化，成功获得纯化的厌氧菌。
六、实验讨论1. 厌氧菌在自然界中广泛存在，对生态环境和人类健康具有重要意义。
2. 本实验成功分离和纯化了厌氧菌，为后续研究提供了基础。
3. 在厌氧菌的培养过程中，厌氧环境至关重要。
本实验通过使用厌氧培养箱和液体石蜡，成功制备了厌氧环境，保证了厌氧菌的生长。
七、实验结论1. 厌氧菌是一类在无氧或低氧环境中生长繁殖的微生物，其能量代谢主要通过无氧发酵的方式进行。
厌氧菌的分离和培养
实验十厌氧菌的分离和培养（第三篇）实验十厌氧菌的分离和培养1 目的1.1 了解厌氧微生物的生长特性1.2 观察厌氧微生物（双歧杆菌）的形态特征1.3 掌握厌氧微生物的滚管分离、培养与计数技术2 原理目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。
这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。
亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。
以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。
而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。
亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害腐败菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。
3 材料3.1 样品双歧酸奶（液体）、双歧杆菌制剂（固体）。
3.2 培养基改良MRS培养基，PTYG培养基。
3.3 仪器和器具亨盖特厌氧滚管装置一套，厌氧管，厌氧瓶，滚管机，定量加样器。
4 流程铜柱除氧→预还原培养基→稀释用液制备→稀释样品→滚管→培养→计数5 方法5.1铜柱系统除氧铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。
此管的大小为40—400mm，两段被加工成漏斗装，外壁绕有加热带，并与变压器相连来控制电压和稳定铜柱的温度。
铜柱两端连接胶管，一端连接气钢瓶，一端连接出气管口。
由于从气钢瓶出来的气体如N2、C O2和H2等通常都含有O2，故当这些气体通过温度约360℃的铜柱时，铜和气体中的微量O2化合生成CuO，铜柱则由明亮的黄色变为黑色。
当向氧化状的铜柱通入H2时，H2与CuO中的氧就结合形成H2O，而CuO又被还原成了铜，铜柱则又呈现明亮的黄色。
此铜柱可以反复使用，并不断起到除氧的目的。
当然H2源也可以由氢气发生器产生。
口腔厌氧菌的日常培养
科技视界Science & Technology Vision33 ◼科普介绍口腔健康是提高生活质量的关键，也是守护全身健康的大门。
其中牙周疾病和牙髓病是最常见的口腔感染性疾病，两种疾病与厌氧菌相关，厌氧菌是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌，口腔部位腔隙较多，更利于厌氧菌生长。
临床工作中，鉴定口腔中细菌并做药敏实验，防止抗生素滥用对于缺乏先进细菌培养仪器的基层医疗机构是极其困难的，因此，利用简便的仪器培养口腔厌氧菌选择合适的抗生素用于口腔疾病的预防和治疗是必要的。
◼引言牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌是口腔厌氧菌的典型代表，其中牙龈卟啉单胞菌是一种革兰氏阴性厌氧菌，被认为是主要的牙周病原菌[1]。
侵入性牙龈卟啉单胞菌具有大量侵入牙周组织和避免免疫清除的特性，例如黏附宿主细胞的菌毛、用于降解细胞外基质的蛋白酶（即牙龈蛋白酶）和引发大量免疫反应的脂多糖。
由于厌氧菌对于定植环境较为挑剔，因此临床上厌氧菌很难分离出来，而且分离后如果不能及时在特定环境下培养，失败率较高，而临床上一旦延迟实施适当的治疗可能会导致失败。
厌氧菌在有氧的情况下不能生长，如果要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。
通常可以在普通培养基中加入还原剂，或用物理、化学的方法去除普通培养环境中的游离氧，以此降低氧化还原电势，主要有疱肉、硫基乙酸钠，牛心脑浸液等培养基[2]。
厌氧菌培养方法有许多，但每种方法均有其利弊。
因此，掌握厌氧菌的分离、运输和培养方法对于口腔医生临床与科研均有好处。
本文主要对口腔厌氧菌的日常培养方法、效果等做一个科普式分析介绍。
◼1 材料与方法1.1试验材料与仪器血平板（广州，环凯）、牙龈卟啉单胞菌（A TCC33277，作者简介：马海绒，硕士，助教，研究方向为口腔医学教学与研究。
通信作者：张华林，博士，教授，研究方向为口腔组织工程与再生修复研究。
基金项目：国家自然科学基金（81560191）。
口腔厌氧菌的日常培养 "马海绒 张华林*（宁夏医科大学，宁夏 银川 750004）摘要：口腔中存在大量的微生物，其中口腔厌氧菌与口腔疾病密切相关，因此，掌握厌氧菌培养的简单方法，对于口腔医生临床与科研均有好处。
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厌氧手套箱培养法
用于要求严格的厌氧培养法的微生态学（正常菌群）的研 究工作
厌氧罐(袋)法结合其它厌氧培养方法
不适用于对氧极其敏感的厌氧菌。但是在临床细菌的检验 工作中，可以充分使用此法分离感染症中的厌氧病原菌。
4 厌氧菌的保存
4.1继代保存：
4.2 冷冻保存：
20％脱脂牛奶0.5ml分注在带螺旋塞的玻 璃瓶中，经110℃、15分钟高压灭菌，冷却后， 先用毛细吸管取半固体高层培养基24～48h生 长茂盛部位的厌氧菌液0.5ml，加入玻璃瓶中， 直接置于－80℃冰库中保存。
厌氧菌较理想的保存方法是液氮保存法。 将108以上浓菌液置脱纤维羊血、脱纤维兔血 或羊血牛奶各半的分散剂中，先在干冰中预 冻，然后连容器一起放入液氮罐中。
培养基煮沸：驱气后置流水中急速冷却 添加还原剂：
0.03～0.05％L-盐酸半胱氨酸 0.01～0.02％硫乙醇钠 0.5～1％葡萄糖 0.1％抗坏血酸 其它还原剂 添加琼脂
2 固体培养基的厌氧培养法
厌氧罐法 简易厌氧罐和厌氧袋法 钢丝绒法 焦性没食子酸法 抽气换气厌氧培养法 生物好氧厌氧培养法 转管技术和气体喷射培养法 厌氧手套箱法 （又称厌氧室法）
0.2
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
卢卡斯固体厌氧指示剂
2％硼砂溶液 9％硫乙醇酸 酚红溶液 0.02％美兰溶液 琼脂
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
5毫升 1毫升 0.1～0.2毫升 10毫升 1％
布鲁氏指示剂
60％羟甲基氨基甲酯
1
4％葡萄糖
1
0.02％美蓝
1
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
二亚硫酸钠（Na2S2O4） 碳酸氢钠 无水硫酸钠
不用触媒
2.3 钢丝绒法
酸性硫酸铜溶液 钢(铁)丝绒
铜和铁的络合物
O2
厌氧指示剂
酸性硫酸铜溶液：
将自来水1升加硫酸铜60g，吐温-80 20ml，加热溶解后，又加入2N的硫酸90ml， 最后加水至6升 ；
方法：
取5～6g钢丝绒/ L，于1～1.5升酸性硫 酸铜溶液浸泡30～60s，钢丝绒变成红铜色， 挤净液体置铝质或玻璃容器中，放入厌氧 罐内。随后将厌氧指示剂放入，密封厌氧 罐，1～4h后可达厌氧状态
2.4 焦性没食子酸法
焦性末食子酸粉末，
NaHCO3 或NaOH溶液
无菌玻片
已接种细菌的平板倒扣在上面
融化的白蜡封边
2.5 抽气换气厌氧培养法
玻璃干燥罐 混合气钢瓶:
10％二氧化碳、10％的氢气、80％的氮气
三通阀 触媒:钯粒 / 浸泡钢丝绒 / 氯化钴 厌氧指示剂
1：厌氧培养罐 2：混合气体（CO2：H2：N2=1：1：8）钢瓶 3：压力表 4：三通阀 5：缓冲瓶 6：真空泵
2.1 Gas-pak法
原理
气体发生袋：
柠檬酸和碳酸氢钠 ＋H2O
CO2
硼氢化钠 11＋111H2O
H2
触媒 ：
钯粒
H2O
厌氧罐中的O2
厌氧指示剂
厌氧指示剂
亚甲基兰 指示剂 卢卡斯固体厌氧指示剂 布鲁氏指示剂
亚甲基兰 指示剂
6％葡萄糖水溶液
2
0.1N氢氧化钠水溶液
0.1
0.05％亚甲基兰水溶液
厌氧菌的培养方法
物理方法包括遮断空气法、煮沸法、真空法、空 气置换法、气体喷射法或转管法等
化学方法包括焦性没食子酸法、铁丝绒法、保险 粉法等
生物学方法包括与需氧菌共生好氧法、燕麦发芽 法等
混合法包括厌氧罐（袋）法、厌氧手套箱法或厌 氧室法、空气置换铁丝绒法、空气置换钯粒法等。
1 液体培养基的厌氧培养法
谢谢
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1、有时候读书是一种巧妙地避开思考 的方法 。20.1 2.1020. 12.10Thursday, December 10, 2020
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2、阅读一切好书如同和过去最杰出的 人谈话 。07:2 9:0507: 29:0507 :2912/ 10/2020 7:29:05 AM
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3、越是没有本领的就越加自命不凡。 20.12.1 007:29: 0507:2 9Dec-20 10-Dec-20
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6、意志坚强的人能把世界放在手中像 泥块一 样任意 揉捏。 2020年 12月10 日星期 四上午 7时29 分5秒07 :29:052 0.12.10
15cm（约2150毫升） 0.6克
容器2
容器3
氯化钴 0.2克 柠檬酸0.6克
或
和
钯粒1.5克 碳酸氢钠0.7克
18cm（约3500毫升） 硼氢钠 1克
氯化钴0.33克 柠檬酸1克
或
和
钯粒2克 碳酸氢钠1.15克
2.2.2 厌氧法
聚碳酸酯（复合塑料膜）制厌氧袋 产气袋 厌氧指示剂 触媒
2.2.3 保险粉的厌氧罐培养法
以GAM半固体流动培养基和TEP半固 体培养基作传代培养保存。用毛细吸管吸 菌进行继代培养，使用白金接种环移菌接 种，可以避免有的菌在操作中接触空气或 氧化物而死亡。数周作一次继代培养。新 分离的的菌种，在几个月内，每3～4星期 传代一次。被保存的菌种，放室温下暗处。 最好是不同菌用不同培养基保存。
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4、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的 错儿。 07:29:0 507:29: 0507:2 9Thursday, December 10, 2020
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5、知人者智，自知者明。胜人者有力 ，自胜 者强。 20.12.1 020.12. 1007:2 9:0507: 29:05D ecembe r 10, 2020
2.6 生物好氧厌氧培养法
疱肉培养基: 牛肉渣
0.5g
牛肉浸液 7ml
液面上加盖3～4mm厚的融化凡士林，灭菌。
生物好氧厌氧培养方法
2.7 转管技术和气体喷射培养法
钢瓶进气
360℃
铜柱
除氧气体
微量O2
（亮黄色）
H2源 CuO （黑色）
接种或移植
2.8厌氧手套箱法
又称厌氧室法
3 厌氧培养方法的选择
Gas-Pak罐的使用操作程序
平皿培养基装入平皿架中置厌氧罐内； 打开内盖居中金属网袋，装入触媒钯粒； 打开锡箔纸袋，取出厌氧指示剂片； 剪开气体发生袋一角，注入10毫升水，迅
速紧闭罐盖，置培养箱中培养。 约经5～10分钟后，放入厌氧指示剂片。
2.2.1 简易厌氧罐
干燥器容内径（厘米） 容器1 容积（毫升） 硼氢钠