细胞培养基成分
细胞培养基成分
细胞培养基成分细胞培养基是一种为细胞生长和繁殖提供必要营养和环境的液体或凝胶。
它具有多种成分，包括无机盐、有机物、生长因子等。
下面将以细胞培养基的成分为标题，分别介绍每个成分的作用和意义。
一、无机盐无机盐是细胞培养基中的重要成分，它们提供细胞所需的微量元素和离子平衡。
无机盐包括氯化物、磷酸盐、硫酸盐等。
其中，氯化物提供细胞内外的离子平衡，磷酸盐参与能量代谢和核酸合成，硫酸盐在蛋白质合成中起重要作用。
二、有机物有机物是细胞培养基中的另一个重要成分，它们提供碳源、能量和细胞所需的有机分子。
有机物包括葡萄糖、氨基酸、核酸等。
葡萄糖是细胞的主要能量来源，氨基酸是蛋白质合成的基本单元，核酸是DNA和RNA的组成成分。
三、生长因子生长因子是细胞培养基中的一类特殊成分，它们能够促进细胞的生长和分裂。
生长因子包括细胞因子、激素和血清等。
细胞因子是一类蛋白质，能够通过与细胞表面受体结合来调节细胞的生长和分化。
激素是一类分泌于内分泌腺的生物活性物质，它们能够通过血液循环传递到靶细胞，并调节细胞的生理功能。
血清是从血液中提取的一种复杂的液体，其中含有多种生长因子和细胞因子，能够促进细胞的生长和分化。
四、缓冲剂缓冲剂是细胞培养基中的一类重要成分，它们能够维持培养基的pH 值稳定。
常用的缓冲剂有Hepes、Tris等。
缓冲剂能够吸收或释放氢离子，从而稳定培养基的酸碱度，为细胞提供一个适宜的生长环境。
五、抗生素和抗真菌药物抗生素和抗真菌药物是细胞培养基中的一类添加剂，它们能够抑制细菌和真菌的生长。
常见的抗生素有青霉素、链霉素等，常见的抗真菌药物有氨基甲酸盐、克霉唑等。
在细胞培养过程中，添加适量的抗生素和抗真菌药物可以避免细菌和真菌的污染，保证细胞的纯度和健康状态。
细胞培养基中的这些成分共同作用，为细胞的生长和繁殖提供了必要的条件。
无机盐提供了细胞所需的微量元素和离子平衡，有机物提供了碳源、能量和有机分子，生长因子促进了细胞的生长和分裂，缓冲剂稳定了培养基的酸碱度，抗生素和抗真菌药物防止了细菌和真菌的污染。
细胞培养基的基本要求
细胞培养基的基本要求体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。
营养成分：1.氨基酸：所有细胞都需要12 种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。
2.单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。
细胞对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。
体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。
3.维生素：生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12 都是培养基常有的成分。
4.无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。
5.促生长因子及激素：o 各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分重要的作用。
有些激素对许多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。
有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。
6.渗透压：细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。
人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。
鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。
对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260～320mOsm/kg的范围都适宜。
7.pH、气体：是细胞生存的必需条件之一，所需气体主要是氧和二氧化碳。
氧参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种成分。
一些细胞在缺氧情况下，借糖酵解也可获取能量，但多数细胞缺氧不能生存。
在开放培养时，一般置细胞于95％空气加5％二氧化碳的混合气体环境中培养。
二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，它主要与维持培养基的pH 有直接关系。
动物细胞大多数需要轻微的碱性条件，pH值约在7.2 ～7.4 ，在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH 值发生变化。
细胞培养各种培养基简介
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
细胞培养基
细胞培养基1.概述培养基是培养环境中最重要的成分，可提供细胞生长所必需的营养素、生长因子和激素，并能调节培养体系的pH 值和渗透压。
2.种类（1）基础培养基大多数细胞系均可在基础培养基中生长良好，基础培养基中含有氨基酸、维生素、无机盐和碳源(如葡萄糖),但是这种基础培养基配方中必须添加血清。
（2）减血清培养基减少血清对细胞培养实验不良效应的另一种策略是使用减血清培养基。
减血清培养基是一种补充了营养素和动物来源因子从而降低了血清需要量的基础培养基配方。
（3）无血清培养基无血清培养基 (SFM) 通过用适当的营养和激素成分代替血清，避免了使用动物血清带来的问题。
无血清培养基配方可用于多种原代细胞和细胞系，包括：用于重组蛋白生产的中国仓鼠卵巢(CHO) 细胞、各种杂交瘤细胞系、Sf9和Sf21 昆虫(草地贪夜蛾)细胞系以及用于病毒生产宿主细胞系(例如：293、VERO、MDCK、MDBK)等。
使用无血清培养基的一大优势是可通过适当的生长因子组合使培养基对特定细胞种类具有选择性。
3.常用细胞系培养基许多哺乳动物连续细胞系均可采用相对简单的培养基(例如添加了血清的 MEM 培养基)进行培养，而采用MEM培养基培养的细胞同样也可采用DMEM或199培养基进行培养。
但是，如果细胞表达某种特殊功能，则可能需要使用较为复杂的培养基。
有关为某种细胞选择合适培养基的信息通常可通过发表的文献以及提供细胞的机构或者细胞库获得。
如果无法找到细胞该选择何种培养基的信息，您可根据经验选择生长培养基和血清，或者测试几种不同的培养基，以获得最佳结果。
一般而言，贴壁细胞可首先考虑MEM培养基，而悬浮细胞可首先考虑RPMI-1640 培养基。
细胞培养基种类与基本成分
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20C-70C低温冰箱中。4C冰箱中保存 时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入 低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(5)切勿将血清在37C放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成 分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物絮状物：主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维
蛋白造成，这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm,5分钟去
除，也可不用处理。
显微镜下 小黑点”经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀 物在显微镜下观察象 小黑点”常误认为血清受污染。一般情况下，此小黑点不 会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批号的血 清。
(2)一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物，则 可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20C至-70C低温冰箱中的血清放入4C冰箱中溶解1天。然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不 断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切
2、MEM细胞培 养基
又称低限量Eagle培养基 (Minimal Essential Medium) ，1959年在Eagle's基础 培养基(BME)上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多 种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基， 但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时， 并不一定是使用效果 最佳或者最经济的培 养基。
细胞培养各种培养基简介
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基如MEM和添加剂如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子组成,培养基的配方一直在改进,其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等;一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液BSS基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质;最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素;而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂例如核苷酸;MEM/F12 这两种培养基各取1/2,形成神经生物学最通用的培养基;Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍;选择某种培养基,应仔细了解成分表,应知道大多数情形下培养基都有不足;例如,有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸,而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域,但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言,则并非最佳选择,特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时;F12中含有硫酸亚铁,据报道也有神经毒效应;在所有这些培养基中,谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度,这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源;对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸若培养基中这两种物质缺乏时;MEM与F12均要用5%的CO2来平衡,DMEM 含更高浓度的NaCO3,要用10%的CO2来平衡,当然也可以在较低CO2浓度下使用;这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的,但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果;原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐,以解除需要高浓度CO2培养环境的限制;实际操作中并非如此简单;显然,溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的;Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长,该培养基采用了与众不同的BSS作基础,它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力,培养基中使用半乳糖作碳源,以阻止培养基中乳酸形成,少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生;这一培养基的优点是明显的,特别是在保持较高CO2有困难时,例如在长时间的显微操作及生理学研究中;L15培养基已用来成功的培养了外周神经元,但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过;二、血清细胞在单纯的基础培养基中不能存活,在特殊类型的细胞培养中必须提供某些痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态;基础培养基常常要添加血清,血清终浓度多为5~20%;特殊用途的血清来源须用经验确定,广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清;胎牛血清中富含有丝分裂因子,常选其作增殖细胞用的血清,也用于细胞系和原代培养;而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养;然而,很多人也将胎牛血清用于神经型血清；人类的胎盘血清,亦曾用于神经组织的器官类型的培养,也用在一些特殊培养种类中;血清的不同批号含有不同的成分,所以许多人发现,应该在使用前对血清进行测试;大多数试剂商提供样品,所满意的批号即可选用,这样可以一次得到足够一年用量的血清,血清在使用前通常在56℃加热30分钟,这一过程称为灭活;三、无血清培养基1979年神经细胞培养出现了一个重要进展,用化学添加剂即可维持神经细胞存活与生长而不需要在培养基中添加血清;其工作基础是用合适的激素、营养物和促贴壁的物质的组合置换培养基中的成分,最后找到了适合大多数细胞培养的试剂配方,该配方称为N2,专门用于神经细胞培养,最早是用在B104大鼠神经母细胞瘤细胞系的培养;它的基础培养基是1：1的DMEM与H12的混合液,添加了胰岛素、转铁蛋白、黄体酮、腐胺和硒;胰岛素和胰岛素样生长因子对于大多数类型细胞的存活和生长有重要作用,硒是谷胱甘肽产生的合作因子,可能有助于过氧化物和超氧化物的水解,有报道说还能防止细胞的光照损伤;随后的其他配方如N1N3则含有较低浓度的转铁蛋白;未料到的是上述配方构成的培养基可以支持神经母细胞瘤细胞系快速增殖,随后又发展了能支持原代培养的各种神经元生长的培养基,这种培养基在许多实验室里已取代了有血清培养;在某些培养方案中,细胞直接进入无血清培养,这样的培养基可以消除来自血清的不均一性;更为重要的是,它们可用来检测生长因子以及其他促进神经元存活或生长的因子,或者用来检测那些可保护神经元免遭环境毒物损伤的制剂;专用于神经元的培养基在某些培养环境中还可以减低非神经元细胞的增殖,故可使神经元纯化;血清中含有的组分,例如血清蛋白,可作为代谢毒物清除剂使用并能聚集于培养基中;当缺乏这些成分时,如神经元在无血清培养基中生长时,特别容易为过氧化物及自由基伤害,这已被许多研究者注意到了;过氧化物酶以及超氧化物歧化酶可阻止培养基中过氧化物和超氧化物的累积,有报道讲可以促进低密度培养细胞的存活;有学者发现细胞存活可为氧分压的下降而促进;因而,无血清培养基的配方常含有抗氧化剂的试剂;例如,维生素E和丙酮酸,可作为过氧化物清除剂使用;上述这些影响在高密度培养时变小,特别是神经元与胶质共培养时,它们可以吸收和代谢神经元毒性物质如谷氨酸;应该注意,尽管无血清培养基是有化学限定性的,但在培养过程中它仍有变动,培养起始时可能有些物质缺乏,而后细胞的产物可能积累,从而使培养基的成分改变;这其实是有另一方面的好处,即条件培养基已培养过细胞的培养基的形成,条件培养基常常用来增加神经元和胶质细胞的发育;生长因子绝大多数哺乳类胚胎神经元有严格的营养要求,若不能提供适宜的生长因子或合适的因子组分,将会使绝大多数神经元在体外培养的数天中死亡;解决这一问题有两条思路,一是让培养细胞提供自己的营养因子,二是在培养基中加入纯的生长因子;如果细胞混合物能在高密度时生长,所需的生长因子便会积累到可观的数值,尤其当培养基很少变化时;若某种生长因子积累,而最后促使所需要的细胞类型能够生长;但是,这种对营养生长因子自身倚赖性亦有弊端,因为通常在混合细胞群体中细胞很难有同比例增殖,某些细胞会因生长条件的贫乏而受限制;另外,这种方法只能进行相当高密度的细胞培养;因为培养基的条件在细胞的较低密度时变的不够有效;不过某些时候纯化神经元群体的低密度培养可用条件培养基经过了高密度培养进行,或在胶质上生长的神经元所用过的培养基来支持;满足神经元营养需求的第二条途径是向培养基中加入生长因子;通常用于组培的通用适宜因子是神经生长因子NGF;不过,只有少数对这种蛋白质有反应的细胞类型的细胞才能生长;许多PNS类型的神经元在离体状态时表现出简单的营养需求,只需提供单一的营养因子就足以使其在低密度时增殖;例如,大鼠交感神经元仅需NGF即能存活,在其生存期间,这些神经元可在严格局限条件下生长好几个月即在无血清培养基中、或缺乏胶质细胞、或在化学限定基质上;有证据表明NGF是活体中交感神经元存活的生理调节因子;然而,交感神经元也对来自胶质细胞的神经营养因子GDNF有反应,还有NT3、LIF与CNTF也对其有作用;在不产生GDNF 或NT3的动物中,交感神经元会有损伤;在离体与活体营养需求之间的差别或许可以用在不同环境中NGF含量和分布的不同来解释,培养中的NGF弥散在整个环境中,而在活体内,大部分区域的含量是有限的;因此,NGF的重要性在于其合适的浓度;尽管在大多数实验中已经习惯了营养因子的最大效应使用量,其他营养因子的协同效应在亚优剂量下更容易观察到;此外,高浓度的营养因子可使细胞更能抵抗毒剂以及其他压力;相应的,低浓度的营养因子可能用来检查表现型,例如对自由基或氨基酸的毒性刺激剂量的反应;有许多其他的PNS培养系统只需单一营养因子就可使有实用价值的细胞保持在一定比例,广为人知的有雏鸡睫状自主神经节神经元和大鼠背根神经节感觉神经元;不过,这些模型也有局限性;例如,培养中的睫状神经节的神经元加入CNTF时,超过90%的神经元能存活一个很长时期,但并未有迹象表明它属于内源的靶细胞来源的营养因子,而是有争论的相关分子,GPA,扮演了这一角色;大鼠背根神经节含有好几种细胞群体,其中小细胞群、包括nocioceptive cell,对NGF有反应,但其他神经元,例如大细胞群中的proprioception 却对不同的神经营养因子有反应;因此,在大多条件下培养物的生长并不能忠实反映亲代群体的所有特性,这一问题在CNS的细胞培养中特别突出,因为已有的经验表明,没有一种培养基能适合于所有类型及亚类的神经细胞的生长;现有的证据已表明,CNS神经元的营养需求比PNS的更复杂;对脊髓运动神经元与视网膜节细胞神经元的研究表明,这些神经元与外周神经元相比能对更为广泛的营养因子起反应;例如,至少发现了15种不同的分子可在离体条件下增加神经元的存活;而且,已观察到运动神经元与视网膜对任何单独的营养因子的存活反应,与PNS中所观察到的典型反应相比,都要小得多;因此,大多数影响运动神经元及视网膜节细胞的营养因子仅仅只能支持神经元的亚群,而神经元的最佳存活要求诸多因子的结合;在视网膜节细胞的培养中,因子的最佳组合如BDNF、CNTF、IGF、bFGF包括了来自不同生长因子家族的代表;这一结果的普遍性尚待进一步的证实,但敲除单一的营养因子基因之后,没有表现出对CNS大多类群的神经元的存活产生太大影响,这一观察与上述的事实是一致的;现已知少突胶质细胞的长期存活也需要众多营养因子的相互作用;四、抗生素在细胞培养中最常用的抗生素是青霉素常用浓度是25~100ui/ml与链霉素25~100μg/ml;这两种抗生素常混合使用;在一些实验室里,它们常规加入所有的培养基中;庆大霉素10~100μg/ml通常有广谱抗菌效应,并具有溶液稳定性,故也被一些实验室使用,特别是当有低水平的污染存在时更是这样;以上这些试剂对霉菌与酵母菌的污染均无效;尽管很多实验室在细胞系的培养基中常规加入抗生素作继代培养,但仍建议不要在原代培养中加入抗生素,其理由之一是获得的细胞是无菌的,原代培养时的细菌污染很少发生;其次,尽管认为抗生素对细胞代谢的影响可忽略,但最好避免使用它们,以免细胞生长环境的不稳定;最重要的是要意识到培养中主要污染物的类型,它们通常暗示了问题的来源;五、抗有丝分裂剂某些DNA合成抑制剂对分裂细胞有毒,但对没有DNA合成的细胞仅有轻微影响;由于神经元通常缺乏DNA合成能力,因此对抗有丝分裂剂没有多大反应;这样的试剂常常用于神经元的培养,以消除或减少非神经元群体;若要杀死所有的非神经元细胞,可以先加入血清或生长因子来保证有高比例的非神经元细胞进行DNA合成,此时再加入抗有丝分裂剂;但是,某些细胞在它的细胞周期的某些时相时对抗有丝分裂剂是不敏感的;不过,可以重复的将抗有丝分裂剂使用于增殖的细胞群体;在CNS神经元的培养中抗有丝分裂剂常常在星形细胞形成单层后加入,此时,星形细胞由于接触抑制而终止了DNA的合成即细胞停止增殖,它们不会因抗有丝分裂剂的加入而死亡;原代培养中用这种方法阻止成纤维细胞的过度增殖是十分必要的;有两种抗有丝分裂剂常用于神经元的培养：Fluorodexyuridine,是胸苷合成酶抑制剂,一般使用浓度为～10μM;尿苷10μM也常使用,可阻止不分裂细胞的RNA合成;另外,阿糖胞苷也常被使用,其使用浓度为5～50μM;使用任何一种抗有丝分裂剂,都必须考虑它的神经原毒性,应该确定最低效应的使用浓度;阿糖胞苷在很低的浓度下,也会对某些种类的神经元有毒性,可以造成特定神经原的死亡;其他的抗有丝分裂剂尚未表现出这种毒性;六、培养的保持培养物是应该保持在孵箱中的;孵箱可以自动将O2与CO2混合很快达到培养基的设计要求,空气中的氧浓度比血液和脑脊液中要高得多;对于某些细胞的生长,包括神经原,应使氧含量处在一个较低的水平;可以用孵箱达到这个标准,但这样的孵箱并未广泛使用;高湿度可避免培养皿中培养基的蒸发,保持孵箱中的湿度通常是在箱底部放上一大盆水,这水应该经常换,乘水容器应经常消毒以防霉菌生长;若孵箱曾被霉菌孢子严重污染过,那么要想完全去除污染则会非常困难;当培养物必须要长期保持在孵箱中时,应采用较少培养基的瓶、皿,且将盖子盖紧以避免蒸发,或采用相应的按比例供空气的孵箱;温度的精确调节应定期检查,孵箱温度常设置为37℃或较低温度;细胞在低温时可有较长时间的忍耐限度,但当温度升至39℃时,几小时内即死亡;维持培养物的最佳方案常常改变;例如培养胶质细胞时,要经常换液以使其增殖达到最大;而在培养某些神经原时,则要求尽可能少的换液,神经原在两次换液之间的条件下长的最好;大脑皮质的培养要求在不换液的情形下维持一个月以上;另一方面,象海马神经原那样的细胞,倚赖于条件培养基,若换液太频繁细胞就会衰退,此时,可采用1/3或1/2换液的方式;。
各种动物细胞培养基配方
产品名称
产品代码
特点
10×1L
10L
500ml
BME
MD102
含Earle's盐和L-谷氨酰胺 不含碳酸氢钠。
160
120
120
DMEM
MD200
(低葡萄糖)含1000mg/L D-葡萄糖、L-谷氨酰胺和110mg/L丙酮酸钠 不含碳酸氢钠
160
120
120
MD201
(高葡萄糖)含4500mg/L D-葡萄糖和L-谷氨酰胺 不含碳酸氢钠
160
120
120
MEM(HBS)
改良MEM，（可高压灭菌）含Hanks’盐，不含L－谷胺酰胺和碳酸氢钠
240
180
160
RPMI 1640
MD800
含L-谷氨酰胺 不含碳酸氢钠
160
120
120
2．无血清无动物来源成分细胞培养基
产品名称
产品代码
特点
应用
1L
10L
500ml
SAF-CHO-G-001
160
120
120
MD601
含Hanks'盐和L-谷氨酰胺 不含碳酸氢钠
160
120
120
MD603
含Earle's盐、L-谷氨酰胺和非必需氨基酸 不含碳酸氢钠
160
120
120
MD604
含Hanks'盐、L-谷氨酰胺和非必需氨基酸 不含碳酸氢钠
160
120
120
MD605
(可高压灭菌)含Earle's盐 不含L-谷氨酰胺和碳酸氢钠
200
1800
常用细胞培养基配方及缓冲液
常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是为了在体外维持细胞生长和增殖所设计的一种营养液。
细胞培养基的配方要求提供细胞所需的基本营养物质，如氨基酸、糖类、维生素和激素，并提供适当的pH和离子平衡。
同时，缓冲液也是细胞培养过程中不可或缺的一部分，用于稳定细胞培养基的pH，维持细胞正常的生长环境。
下面列举几种常用的细胞培养基配方及缓冲液：1. DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)-细胞培养基配方：-DMEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：无2. RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute Medium) -细胞培养基配方：-RPMI1640培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)溶液，浓度为25mM，用于稳定pH。
3. MEM (Minimum Essential Medium)-细胞培养基配方：-MEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)- 缓冲液：盐酸/NaOH缓冲体系，通常用NaHCO3/N-2-羟乙基piperazine-N'-2-乙磺酸(HEPES)缓冲。
4. Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)-细胞培养基配方：-HBSS培养基粉末-对应体积的无菌水-缓冲液：无5. L-15 Medium (Leibovitz's L-15 Medium)-细胞培养基配方：-L-15培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。
6. DMEM/F12 Medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium and Ham's F-12 Medium)-细胞培养基配方：-DMEM/F12培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。
细胞培养基的主要成分及作用
细胞培养基的主要成分及作用
细胞培养基是一种支持细胞生长及保持细胞稳定性的特殊溶液，
是化学、生物和药理科学研究中的重要体系，也是细胞活性和新药开
发的重要基础。
细胞培养基的主要成分有水、营养成分和存在性因子。
其中水的作用是维持细胞的活力，因此水的种类（如淡水、纯净水、盐水）以及单位体积的含量大小都影响细胞的存活性。
营养成分的作用是给予细胞所需的能量，主要包括氨基酸、碳水
化合物等，它们既可以从外部添加，也可以由细胞内提供。
存在性因子主要用于维持细胞的健康，它们可以是细胞膜通透性
的调节因子，也可以是生长因子、激素等，可以促进细胞增殖和分化，也可以用于检测细胞功能。
此外，还有其他一些特殊的物质，如防腐剂和抗生素，可以用来
抑制细菌的生长，同时充当细胞活性的调节因子。
综上所述，细胞培养基的主要成分是水、营养成分和存在性因子，它们分别起着支持细胞生长及维持细胞稳定性的作用，是细胞活性和
新药开发的重要基础。
cma培养基配方
cma培养基配方
CMA培养基配方是一种常用的细胞培养基配方，主要用于植物细胞、真菌和细菌的培养。
其主要成分包括碳源、氮源、磷源、微量元素、维生素和植物生长调节剂等。
以下是CMA培养基的基础配方：
1. 碳源：葡萄糖 20g/L
2. 氮源：硝酸铵 1g/L
3. 磷源：磷酸二氢钾 0.5g/L
4. 微量元素：硼酸、氯化铜、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸镁、钼酸钠各 0.02g/L
5. 维生素：吡哆醇、核黄素、尼克酸、吗啉酸各 0.1mg/L
6. 植物生长调节剂：吲哚丙酸、激素、生长素各 0.1mg/L
以上是基础配方，根据不同细胞的要求，可适当进行调整。
CMA 培养基可在无菌条件下制备，pH值应在 5.8~6.0 之间。
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细胞培养基常用的添加成份及使用注意事项
细胞培养基常用的添加成份及使用注意事项
酚红在细胞培养基中用作pH值的指示剂。
一般情况下，可以通过酚红的指示作用判断培养基的pH值，但低血清或是无血清细胞培养基中酚红的含量与普通细胞培养基中的酚红含量不同，不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值，建议使用pH计进行测定。
酚红通常对含血清的细胞培养基生产的生物制品质量并不会产生明显影响，也可通过纯化技术去除，但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长。
碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统，此外还具有调节渗透压的作用。
通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量，是在科学的基础上根据实践经验所得。
但是由于不同的细胞系（株）不同，同一株细胞适应环境也可能不同（细胞耐受性不同等），且存在的地域性水质差异等，在实际生产过程中也可稍作改动，但使用者需做相应的检测（理化及细胞生产试验等）。
HEPES是一种非离子缓冲液，在pH 7.2 ～7.4范围内具有较好的缓冲能力，在高浓度时对一些细胞可能有毒。
HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（0.34g /L）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。
其安全浓度范围是10～25mmol/L。
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是在没有葡萄糖的条件下，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4 ℃下放置1周可分解50 %，使用中最好单独配制，置-20 ℃冰箱中保存，使用前加入细胞培养液中。
各种培养基的配方
各种培养基的配方培养基是科学研究中用于培养和繁殖细胞、组织和微生物的基础性工具。
不同类型的细胞和微生物需要不同的培养基来提供适宜的环境和营养物质。
下面将介绍几种常用的培养基的配方。
1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）：成分：-蛋白胨：10g-酵母提取物：5g-NaCl：10g-纯水：1L2.硫酸亚铁葡萄糖培养基：成分：-硫酸亚铁：0.2g-葡萄糖：1g-磷酸二氢钠：0.5g-硫酸镁：0.1g-硫酸铵：0.5g-氯化钠：5g-纯水：1L3.TSB培养基（液体肉汤培养基）：成分：-蛋白胨：17g-酵母提取物：3g-NaCl：5g-纯水：1L4.TSB培养基（固体肉汤培养基）：成分：-蛋白胨：30g-酵母提取物：5g-NaCl：5g-琼脂：15g-纯水：1L5.M9盐基培养基：成分：-Na2HPO4：6g-KH2PO4：3g-NaCl：0.5g-NH4Cl：1g-MgSO4：0.1g-纯水：1L6.YPD培养基（酵母精蛋白培养基）：成分：-蛋白胨：10g-酵母提取物：20g-葡萄糖：20g-纯水：1L7. DMEM培养基（Dulbecco's修改Eagle's培养基）：成分：-高糖DMEM：950mL-胎牛血清：50mL- L-谷氨酰胺：2 mmol/L-纯水：1L8.RPMI-1640培养基：成分：-RPMI-1640培养基：950mL-胎牛血清：50mL- L-谷氨酰胺：2 mmol/L-纯水：1L9.MRS培养基（乳酸杆菌选择性培养基）：成分：-蛋白胨：10g-肉汤：10g-葡萄糖：20g-红茶提取物：1g-醋酸钠：5g-硫酸锌：0.5g-纯水：1L10.TSA培养基（肉汤琼脂培养基）：成分：-肉汤：30g-琼脂：15g-纯水：1L这些是常用的一些培养基的配方，不同细胞和微生物所需的培养基配方可能会有所不同。
在实验室中，根据研究的需要，可以根据具体要求对培养基进行调整和改良。
培养基的主要成分
培养基的主要成分培养基是细胞培养和分子生物学研究中最重要的基础材料，主要由水溶性的营养物质和固体物质组成，有助于增殖菌株和抑制细菌的生长。
为了保证培养基的质量，需要了解培养基的主要成分。
培养基的主要成分有能源物质、蛋白质物质、碳源物质、磷源物质、钾源物质、氯与硫酸盐、维生素、酶及平衡剂等。
能源物质是细胞生长、繁殖和维持培养环境的最重要成分，包括葡萄糖和淀粉。
蛋白质物质是宿主细胞中生物有机大分子及营养成分最重要的物质，常用牛血清浓缩液或水溶性卵白物质代替。
碳源物质是培养基中最重要的组成部分，它能使细胞获得足够的能量，可以使用淀粉、乳糖等物质来代替。
磷源物质可以增加培养基的pH值，维持细胞的新陈代谢，常用的物质有磷酸钙及磷酸铵，钾源物质一般使用KCl和K2HPO4来提供细胞内离子平衡，其中KCl的可以抑制和控制细菌的生长。
氯与硫酸盐也是培养基的主要成分，常用的有NaCl和Na2S。
维生素是细胞增殖和新陈代谢不可或缺的物质，使用水溶性维生素可以提高培养基的质量。
酶是细胞生物反应所必需的物质，常常被用来促进和改变细胞新陈代谢及合成，最常用的是谷氨酸脱氢酶和多璧酶。
平衡剂是用来调节培养基的pH值的物质，常用的有NaHCO3、Na2CO3及NaOH等。
培养基是细胞培养和分子生物学研究中最重要的材料，保证培养基的质量需要充分了解其成分。
培养基的主要成分有能源物质、蛋白质物质、碳源物质、磷源物质、钾源物质、氯与硫酸盐、维生素、酶及平衡剂等。
研究人员要在构建培养基时，根据研究的需要合理选择和添加各类成分，以此来促进细胞的增殖和生长。
此外，为了控制培养基的质量，研究人员也要注意培养基的收缩、活性、发酵温度等参数的控制，以确保其质量。
另外，需要定期对培养基进行检查，如检查培养基的pH值、抑制率、溶液显色等，以防止培养基发霉变质。
综上所述，培养基的主要成分有能源物质、蛋白质物质、碳源物质、磷源物质、钾源物质、氯与硫酸盐、维生素、酶及平衡剂等。
细胞工程实验--培养基成分表
附表1 几种常见的培养基配方说明： [1]无机盐含量高，微量元素种类齐全，适用范围广；[2]硝酸钾含量高，适合于愈伤组织和细胞悬浮培养；[3] 中等无机盐含量；[4]低无机盐含量，一般作生根培养。
固体培养基应加入琼脂0.6-0.7%。
表2 用于离体叶肉细胞培养的培养基配方表3 适于低密度下培养原生质体的KM8p培养基（采用过滤灭菌）引自Kao和Michayluk，1975及Kao和Wetter，1977。
表4 原生质体培养的几种常用培养基单位: mg/L 成份NT DPD D2a KM8P V－KM 无机盐KNO3950 1480 1480 1900 1480 NH4NO3825 270 270 600 1444 CaCl2·2H2O 220 570 900 600 735 MgSO4·7H2O 1233 340 900 300 934 KH2PO4680 80 80 170 68 KCl －－－300 －MnSO4·H2O －－－10.0 10.0 MnSO4·4H2O 22.3 7.2 5.0 －－KI 0.83 0.25 0.25 0.75 0.75 CoCl2·6H2O －0.01 0.01 0.025 0.025 CoSO4·7H2O 0.03 －－－－ZnSO4·7H2O 8.6 1.5 1.5 2.0 2.0 CuSO4·5H2O 0.025 0.015 0.015 0.025 0.025 H3BO3 6.2 2.0 2.0 3.0 3.0 Na2MoO4·2H2O 0.25 0.1 0.1 0.25 0.25 Na2-EDTA 37.3 37.3 37.3 －37.3 FeSO4·7H2O 27.8 27.8 27.8 －27.8 Seqestrene 330 Fe －－－28 －糖类和糖醇葡萄糖－－0.4mol/L 68，400 108，900 蔗糖10,000 17,100 17100 250 250 果糖－－－250 250 核糖－－－250 250 木糖－－－250 250 甘露醇127,520 55,000 －250 250 鼠李糖－－－250 250 纤维二糖－－－250 250 山梨醇－－－250 250 甘露糖－－－－250 维生素和有机酸肌醇100 100 100 100 100 盐酸硫胺素VB1 1 4.0 4.0 1 1盐酸吡哆醇VB6 －0.7 0.7 1 －烟酸－ 4.0 4.0 － 1烟酰胺－－－ 1 －抗坏血酸－－－ 2 2氯化胆碱－－－ 1 1泛酸钙－－－ 1 1叶酸－0.4 0.4 0.4 0.4对氨基苯甲酸－－－0.02 0.02生物素－0.04 0.04 0.01 0.01维生素A －－－0.01 0.01维生素D3－－－0.01 0.01维生素B12－－－0.02 －柠檬酸－－－40 40苹果酸－－－40 40延胡羧酸－－－40 40丙酮酸钠－－－20 20氨基乙酸－ 1.4 1.4 2 －其他有机添加物椰子乳－－5% 20（ml）20（ml）水解酪蛋白－－－250 250生长调节剂2,4-D － 1.3 －0.2 －6-BA 1.0 0.4 0.6 －0.4NAA 3.0 － 1.5 1.0 1.5IAA －－－－ 1.02,4,5,-T －－0.5 －－玉米素－－－0.5 －pH 5.8 5.8 5.7 5.6 5.7注：NT：Nagata & Takebe，1971；DPD：Durand 等，1973；D2a：李向辉等，1981；KMP8：kao & Michayluk，1975；V-KM：Binding & Nehl，1979。
细胞培养基的主要成分
细胞培养基的主要成分细胞培养基是细胞生长和繁殖的基础。
培养基的能否提供足够的营养物质和条件，是决定细胞生长和繁殖的关键因素之一。
细胞培养基主要包括基础培养基、饮料、添加剂、生物素等组分。
基础培养基基础培养基是细胞培养的核心组成部分。
它包括多种生物学和化学组分，可以提供细胞生长和死亡所需的主要生理条件。
基础培养基中的主要成分包括：1.离子：细胞需要离子来维持细胞内电位、调节蛋白质合成和酶活性。
如钾、钠、镁、钙等。
2.氨基酸：氨基酸是蛋白质的基本单位，是细胞内分子合成的主要原料。
如谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸等。
3.糖类：糖类是细胞的主要能量来源。
如葡萄糖、果糖等。
4.维生素：维生素是生命所必需的有机物质，对细胞的生长和繁殖起着关键作用。
如B族维生素、维生素C等。
5.氧气：细胞需要氧气进行呼吸作用，提供能量及代谢废物处理。
6. pH值控制剂：细胞生长需要适当的环境pH值，不同类型细胞对pH值的要求不同，pH值控有助于培养。
饮料在基础培养基的基础上，需加入足够的特定饮料以提供足够的营养物质和生理微环境。
常见的饮料包括：1.血清：由于血清内含有许多生长因子、细胞黏附因子、调节细胞凋亡等对细胞生长有重要作用的因子，因此在细胞培养的过程中，加入一定比例的胎牛血清或小鼠血清等能够有效提高细胞存活与繁殖率。
2.蛋白质水解产物：各种蛋白质水解产品可作为细胞培养基的替代品，这种低分子量蛋白质水解产品富含淀粉酶、蛋白酶和肝胰酶等，能够丰富细胞营养。
添加剂除了基础培养基与饮料以外，还需要添加一些辅助剂来调节生理环境、提高细胞生长与代谢能力，主要包括：1.抗生素：可抑制培养细胞中的杂菌、真菌等生物的生长繁殖，提供卫生的培养环境用，如青霉素、链霉素等。
2.细胞营养剂：包括硝基酸、统一锅、玉米油等。
3. pH值调节剂：包括碳酸氢钠、氢氧化钠、氨水等。
4.调节剂：如小分子物质转化物等。
这些物质与已知的生长因子或活化的化学品结合使用，能够改善细胞分泌代谢等方面的缺陷，从而提高细胞的生长和繁殖。
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细胞培养基成分
一、基础成分
细胞培养基的基础成分包括无机盐、氨基酸、糖类和维生素。
无机盐是细胞生长所必需的，它们提供了细胞代谢所需的离子和微量元素。
常见的无机盐有氯化钠、磷酸盐、硫酸盐等。
氨基酸是蛋白质的构成单元，细胞需要氨基酸才能合成新的蛋白质。
糖类是细胞的能量来源，常用的糖类有葡萄糖、果糖等。
维生素是细胞生长所需的有机物质，它们参与了细胞的代谢和生长过程。
二、生长因子
生长因子是细胞培养基中的重要组成部分，它们能够刺激细胞增殖和分化。
常见的生长因子有表皮生长因子（EGF）、基础生长因子（bFGF）、血小板源性生长因子（PDGF）等。
这些生长因子能够与细胞表面的受体结合，通过激活细胞内的信号通路，促进细胞的生长和发育。
三、血清
血清是细胞培养基中的一种复杂液体，它包含了多种生长因子、激素、维生素等。
血清可以提供细胞所需的多种营养物质，促进细胞的生长和增殖。
然而，血清中的成分非常复杂，含有大量的未知因素，因此在某些研究中需要使用无血清培养基来避免血清的干扰。
四、胶原蛋白和基质
胶原蛋白和基质是细胞培养基中的一种重要成分，它们能够提供细胞附着的支持和结构。
胶原蛋白是一种结构蛋白，能够形成纤维状的网络，提供细胞附着的基础。
基质则是一种细胞外基质，它包含了多种细胞黏附蛋白和分泌物，能够模拟细胞所在的体内环境，促进细胞的生长和分化。
五、抗生素和抗菌剂
在细胞培养过程中，为了防止细胞感染和污染，常常向培养基中添加抗生素和抗菌剂。
抗生素能够抑制细胞培养中的细菌和真菌的生长，保证培养基的无菌状态。
常用的抗生素有青霉素、链霉素等。
抗菌剂则能够抑制细胞培养中的细菌的生长，常用的抗菌剂有氨苄西林、庆大霉素等。
细胞培养基的成分非常复杂，它们共同作用，为细胞的生长和发育提供了必要的条件。
在细胞培养实验中，选择合适的培养基成分对于细胞的研究非常重要。
不同类型的细胞可能需要不同的培养基成分，因此研究人员需要根据实际需要进行调整和优化。
通过不断的研究和改进，细胞培养基的成分会越来越完善，为细胞生物学研究提供更好的工具和条件。