荧光原位杂交技术原理

荧光原位杂交技术原理

荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）

是一种用于检测和定位靶标DNA序列的方法。其原理是利用

荧光标记的DNA探针与靶标DNA特异性结合，通过荧光显

微镜观察细胞核内荧光信号的强度和位置，从而确定目标

DNA序列在细胞核中的位置和数量。

荧光原位杂交技术的步骤包括标记DNA探针、固定细胞样品、使细胞核开放透明化、探针与目标DNA杂交、洗涤去掉无特

异连接的探针、显微镜观察和分析。

在标记DNA探针的过程中，将目标DNA序列特异性引物和

荧光标记的核苷酸引物结合，通过聚合酶链反应使DNA探针

荧光标记。标记DNA探针可以选择性地与目标DNA序列进

行互补结合。

固定细胞样品后，可以通过化学方法将细胞膜破裂并使细胞核透明化，使DNA探针能够更好地进入细胞核。随后将标记好

的DNA探针加入样品中，在适当的温度下进行DNA杂交反应。如果目标DNA序列在细胞核中存在，则DNA探针与目

标DNA序列结合，形成探针-目标DNA复合物。

在杂交反应后，需要进行洗涤步骤以去除无特异连接的DNA

探针。这样可以提高荧光信号的特异性和强度。

最后，利用荧光显微镜观察样品中的荧光信号。荧光探针与目标DNA序列结合后会发出特定颜色的荧光信号，可以通过观

察荧光信号的位置和强度来确定目标DNA序列在细胞核中的位置和数量。

荧光原位杂交技术可以应用于医学诊断、基因定位等领域，成为研究细胞遗传学和基因组学的重要工具。